及到的含量或配比是指 重量含量或重量配比。
[0056]根据本发明的上述技术方案，现通过以下实施例对本发明的内容作进一步地解释 和说明。
[0057] 实施例1
[0058] 一种用于修复应激性肠道粘膜损伤的生物制剂的制备方法，包括：
[0059]第一步:菌种的培养:将从中国农业微生物菌种保藏管理中心购买的酿酒酵母菌 种（Saccharomyces cerevisiae，ACCC20065)接入马铃薯液体培养基的维形瓶中，在28°C， 180-220rpm振荡培养48小时，待培养基浑浊后取出；将嗜酸乳杆菌菌种（Lactobacillus acidophilus，ACCC10637)、植物乳杆菌菌种（Lactobacillus plantarum，ACCC11118)，分别 接入MRS液体培养基的锥形瓶中，在37°C条件下培养48小时，待待培养基浑浊后取出，然后 放入4 °C冰箱保存待用；
[0060] 第二步:按照酿酒酵母35份、嗜酸乳杆菌30份、植物乳杆菌35份的重量配比混合得 到混合菌，按照1:100的重量比例将其添加到红糖水培养基中，其中，红糖5份、纯净水95份， 在发酵罐搅拌均匀后于30°C条件下密闭培养至pH小于3.60,然后继续培养25天，得到复合 菌；
[0061] 第三步:筛选出个体均匀的葛根、沙棘、葡萄籽，并分别通过粉碎机粉碎成40目，按 照葛根25份、沙棘20份、葡萄籽20份、红糖3份、水45份的重量配比混合得到复合培养基； [0062]第四步:将所述复合菌按1:20的重量比例添加到所述复合培养基中，在发酵罐搅 拌均匀后于30°C条件下密闭培养15天，得到复合发酵物；
[0063]第五步:发酵罐内添加水，使固液比达到1:1，浸泡1天，然后淋洗;淋洗液在50°C进 行浓缩至20% ;浓缩液在60°C下杀菌20分钟后4°C贮藏待用；
[0064]第六步：固态剂型的制备:按照浓缩灭菌液20份、赤藓糖醇20份、乳糖55份、保护剂 5份的重量配比进行称取，先将所述赤藓糖醇和乳糖依次加入喷雾干燥一步制粒机中，然后 开始喷入所述浓缩灭菌液，流量为l〇ml/min，最后喷入溶解于适量水中的保护剂，其中，所 述制粒机的进风温度为60°C，出风温度为45°C，待喷雾器内温度降到30°C时出料，得到所述 固态制剂。
[0065] 实施例2
[0066] -种用于修复应激性肠道粘膜损伤的生物制剂的制备方法，包括：
[0067]第一步:菌种的培养:将从中国农业微生物菌种保藏管理中心购买的酿酒酵母菌 种（Saccharomyces cerevisiae，ACCC20065)接入马铃薯液体培养基的维形瓶中，在28°C， 180-220rpm振荡培养48小时，待培养基浑浊后取出；将嗜酸乳杆菌菌种（Lactobacillus acidophilus，ACCC10637)、植物乳杆菌菌种（Lactobacillus plantarum，ACCC11118)，分别 接入MRS液体培养基的锥形瓶中，在37°C条件下培养48小时，待待培养基浑浊后取出，然后 放入4 °C冰箱保存待用；
[0068]第二步:按照酿酒酵母20份、嗜酸乳杆菌35份、植物乳杆菌30份的重量配比混合得 到混合菌，按照1:100的重量比例将其添加到红糖水培养基中，其中，红糖3份、纯净水97份， 在发酵罐搅拌均匀后于32°C条件下密闭培养至pH小于3.60,然后继续培养22天，得到复合 菌；
[0069]第三步:筛选出个体均匀的葛根、沙棘、葡萄籽，并分别通过粉碎机粉碎成40目，按 照葛根20份、沙棘15份、葡萄籽25份、红糖2份、水40份的重量配比混合得到复合培养基； [0070]第四步:将所述复合菌按1:15的重量比例添加到所述复合培养基中，在发酵罐搅 拌均匀后于32°C条件下密闭培养12天，得到复合发酵物；
[0071 ]第五步:发酵罐内添加水，使固液比达到1:1，浸泡1天，然后淋洗;淋洗液在45°C进 行浓缩至20 % ;浓缩液在65 °C下杀菌10分钟后4°C贮藏待用；
[0072]第六步：口服液的制备：按照浓缩灭菌液45份、赤藓糖醇45份、保护剂10份的重量 配比进行称取，先将所述赤藓糖醇和保护剂中加入适量热蒸馏水搅拌溶解，待冷却至35°C 后，加入所述浓缩灭菌液，搅拌至澄清，得到所述口服液。
[0073]检测实施例
[0074] 动物分组:选择健康清洁级42日龄SD大鼠，无特定病原体(SPF)级，体重(200 ± 20) g，随机分成3组，每组12只（雌雄各占1/2)。给药剂量的确定：对照组和诱导组饲喂基础日 粮，损伤修复组饲喂基础日粮并在饮水中按每只每天〇. 8mL添加微生物源性抗氧化剂。诱导 组和损伤修复组在试验的第5、9、13、17天每千克体重腹腔注射0.8mg LPS，对照组注射等量 生理盐水。试验期共22d。
[0075] 指标检测方法：；将大鼠采用眼球处死法处死，打开腹腔在肠道组织中，在空肠中 段剪下近lcm的肠段，迅速放入固定液中，摇匀，待做组织切片。将固定的标本经水洗、透明、 浸蜡、包埋等处理后，在室温下切成Sum的切片，苏木精一伊红染色，在每个组织部位切片上 选5个典型视野(绒毛完整、走向平直），用目镜测微尺测量每个视野中最长最宽绒毛处的绒 毛高度、隐窝深度。置室温下的小肠在完全解冻前沿肠管纵向剪开，取出食糜，刮下黏膜并 混合后用4°C的0.4mol/L氯化钾溶液按3-10倍稀释后匀浆并离心，上清液至于-20°C下保 存。
[0076] 表1为微生物源性抗氧化剂对LPS损伤大鼠肠道组织形态的影响
[0078] 由表1可得:肠道组织形态方面，与对照组相比，诱导组大鼠肠道绒毛高度略低，隐 窝深度略深，绒毛高度与隐窝深度比值略低，但差异不显著(P>〇.05)，而损伤修复组与对照 组相比，绒毛高度较高，隐窝深度较浅，绒毛高度与隐窝深度比值较大，差异显著(P〈〇. 05)。 因此，添加微生物源性抗氧化剂对维持肠道正常结构方面，修复应激性肠道粘膜损伤具有 良好的效果。
[0079] 进一步地，采用同样上述实验要求，将修复组中的微生物源性抗氧化剂替换为实 施例1或2中制备得到的生物制剂，最后检测发现其上述指标与修复组相近，甚至优于修复 组。进一步将实施例1或2得到的生物制剂用于小鼠应激性肠道粘膜损伤的修复中，效果显 著。
[0080] 以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限 制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和 替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和 修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1. 一种用于修复应激性肠道粘膜损伤的生物制剂的制备方法，其特征在于，包括： 步骤1:按照酿酒酵母20-35份、嗜酸乳杆菌25-40份、植物乳杆菌20-35份的重量配比混 合得到混合菌，将其添加到红糖水培养基中，于28-32Γ条件下密闭培养至pH小于4.00,然 后继续培养20-30天，得到复合菌； 步骤2:按照葛根10-25份、沙棘15-25份、葡萄籽20-30份、红糖1-3份、水40-60份的重量 配比混合得到复合培养基； 步骤3:将所述复合菌添加到所述复合培养基中，于28-32Γ条件下密闭培养30-45天， 得到复合发酵物； 步骤4:对所述复合发酵物进行浸泡、淋洗、浓缩、灭菌、成型，得到所述生物制剂。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)为保藏编号为ACCC20065的菌种；所述嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus)为保藏编号为ACCC10637的菌种；所述植物乳杆菌（Lactobacillus p lantarum)为保藏编号为ACCC11118的菌种。3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括菌种的培养，具体为： 将酿酒酵母菌种接入马铃薯液体培养基中进行振荡培养，其中，培养温度为28-32Γ， 振荡培养的转数为180_220rpm，振荡时间为48-72小时，待培养基浑浊后取出，放入2-4°C冰 箱保存待用； 将嗜酸乳杆菌菌种、植物乳杆菌菌种分别接入MRS液体培养基中进行静置培养，其中， 培养温度为35-39 °C，培养时间为48-72小时，待培养基浑浊后取出，放入2-4°C冰箱保存待 用。4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，关于步骤1，所述混合菌按照1:80-120 的重量配比添加到红糖水培养基中，其中，所述红糖水培养基的组分及其重量配比为红糖 5-10份、水90-98份。5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，关于步骤2,所述葛根、沙棘、葡萄籽通 过粉碎机粉碎，得到30-50目颗粒。6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，关于步骤3,所述复合菌按照1:15-20 的重量配比添加到所述复合培养基中。7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，关于步骤4，其中： 将所述复合发酵物中添加水至固液重量配比为1:1，浸泡1-2天； 然后淋洗，并将淋洗液在40-50°C条件下浓缩至20-30%，得到浓缩液； 进一步地，在60-70°C条件下灭菌10-30分钟，得到浓缩灭菌液。8. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述成型是进一步的加工过程，其中， 所述生物制剂是固态制剂，则关于固态制剂的进一步地加工步骤为:按照浓缩灭菌液15-30 份、赤藓糖醇15-30份、乳糖30-60份、保护剂3-5份的重量配比进行称取，先将所述赤藓糖醇 和乳糖依次加入喷雾干燥一步制粒机中，然后开始喷入所述浓缩灭菌液，流量为10_20ml/ min，最后喷入溶解于水中的保护剂，其中，所述制粒机的进风温度为60-80°C，出风温度为 40-60 °C，待喷雾器内温度降到25-35 °C时出料，得到所述固态制剂。9. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述生物制剂是液态制剂，如□服液， 则所述口服液的进一步地加工步骤为:按照浓缩灭菌液45-50份、赤藓糖醇45-50份、保护剂 5-10份的重量配比进行称取，先将所述赤藓糖醇和保护剂中加入适量热水搅拌溶解，待冷 却至25-35 °C后，加入所述浓缩灭菌液，搅拌至澄清，得到所述口服液。10. -种如权利要求1 -9中任意一种所述的制备方法制备得到的生物制剂。
【专利摘要】本发明提供了一种用于修复应激性肠道粘膜损伤的生物制剂的制备方法，包括：将酿酒酵母、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌混合得到混合菌，将其添加到红糖水培养基中，密闭培养至pH小于4.00，然后继续培养20-30天，得到复合菌；将葛根、沙棘、葡萄籽、红糖、水混合得到复合培养基；将复合菌添加到复合培养基中，密闭培养30-45天，得到复合发酵物；然后浸泡、淋洗、浓缩、灭菌、成型，得到生物制剂。本发明通过微生物复合发酵技术对植物的有效成分进行转化，使产品具有更易吸收和利用、治疗效果显著等特点，尤其能够清除自由基，调节肠道菌群平衡，促进修复应激性肠道粘膜损伤，是一种用于修复应激性肠道粘膜损伤的天然生物制剂。
【IPC分类】A23L33/135, A23L33/10, A23L33/14
【公开号】CN105614880
【申请号】CN201510999991
【发明人】江瀚
【申请人】上海普乐拜格健康科技有限公司
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2015年12月28日