专利名称：含有3,3－取代的二氢吲哚衍生物的避孕组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及联合施用黄体酮受体拮抗剂和孕激素或雌激素，或两者的疗法。
背景技术：
细胞内受体(IR)形成一类结构相关的基因调节剂，称为“配体依赖性转录因子”(R.M.Evans，Science，240，889，1988)。类固醇受体家族是IR家族的一个亚类，包括黄体酮受体(PR)、雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)、糖皮质激素受体(GR)和盐皮质激素受体(MR)。
对PR而言天然激素或配体是类固醇黄体酮，但也合成了化合物如甲羟孕酮醋酸酯或左炔诺孕酮作为配体。一旦细胞周围的液体中存在配体，配体就通过被动扩散穿过膜，并与IR结合产生受体/配体复合物。这种复合物与细胞DNA中存在的特异性基因启动子结合。一旦结合于DNA，该复合物就调节mRNA和该基因编码的蛋白质的产生。
将结合于IR且模拟天然激素作用的化合物称为促效剂，而抑制激素作用的化合物称为拮抗剂。
PR拮抗剂可用于避孕。在这种情况下它们可以单独给予(Ulmann等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.，261，248，1995)，也可与PR促效剂联用(Kekkonen等人，Fertilityand Sterility，60，610，1993)或与部分ER拮抗剂(如他莫昔芬)联用(WO96/19997，1996年7月4日出版)。
PR拮抗剂可以用于治疗激素依赖性乳腺癌(Horwitz等人，Horm.Cancer，283，出版商Birkhaeuser，Boston，Mass编著Vedeckis)和子宫和卵巢癌。PR拮抗剂还可用于治疗非恶性慢性病如纤维瘤(Murphy等人，J.Clin.Endo.Metab.，76，513，1993)和子宫内膜异位(Kettel等人，Fertility and Sterility，56，402，1991)。PR拮抗剂还可用于激素替代治疗，与部分ER拮抗剂(如他莫昔芬)联用治疗绝经后的患者(US5719136)。已显示在激素依赖性前列腺癌模型中，PR拮抗剂(如米非司酮和奥那司酮)是有效的，表明它们可用于治疗男性的这类疾病(Michna等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.，761，224，1995)。
Jones等人(美国专利号5,688,810)描述的化合物是PR拮抗剂二氢喹啉A。 Jones等描述了作为PR配体的烯醇醚B(美国专利号5,693,646)。 Jones等人描述了作为PR配体的化合物C(美国专利No.5,696,127)。 Zhi等人描述了作为PR拮抗剂的内酯D、E和F(J.Med.Chem.，41，291，1998)。
DE FZhi等人描述了作为PR拮抗剂的醚G(J.Med.Chem.，41，291，1998)。 Combs等人公开了作为PR配体的酰胺H(J.Med.Chem.，38，4880，1995)。 Perlman等人描述了作为PR配体的维生素D类似物I(Tet.Letters，35，2295，1994)。 Hamann等人描述了PR拮抗剂J(Ann.N.Y. Acad.Sci.，761，383，1995). Chen等人描述了PR拮抗剂K(Chen等人POI-37，16thInt.Cong.Het.Chem.，Montana，1997)。 Kurihari等人描述了PR配体L(J.Antibiotics，50，360，1997)。 Elliott(Smith Kline Beecham)公开了通用的二氢吲哚M作为可能的内皮素受体拮抗剂(WO 94/14434)。该专利未公开二氢吲哚，并缺少合适的5-芳基取代，如CN和NO2。 R1，R10，P1和P2＝H，1-8C烷基，Phn＝0R3＝HR2＝HR4＝Ar(取代的)其中R4＝H，Ar，R11，OH，1-5C烷氧基(最佳被OH、OMe或卤素取代)，-S(O)qR11，N(R6)2，XR11，卤素或NHCOR6；X＝(CH2)n，O，NR6或S(O)q；n＝0-6；q＝0-2；R6＝H或1-4C烷基；R11＝1-8C烷基，2-8C链烯基或2-8C炔基(全部最佳取代)；Ar＝(i)被苯基或(a)或(b)苯并稠合基团；或(ii)萘基，吲哚基，吡啶基，噻吩基，噁唑啉基，噁唑基，噻唑基，异噻唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，咪唑基，咪唑烷基，噻唑烷基，异噁唑基，噁二唑基，噻二唑基、吗啉基，哌啶基，吡咯基或嘧啶基，它们都优选被一个或多个R1或R2基团取代。 A＝CO或(C(R6)2)mB＝CH2或O美国专利号5,521,166(Grubb)指出周期激素疗法包括抗孕激素和孕激素，其中改变抗孕激素的存在或不存在，施用孕激素。还提供了使用雌激素2-4日来防止穿破性出血。
发明描述本发明提供了利用抗孕药联合一种或多种促孕药的组合治疗和剂量方案。本发明还提供了将这些抗孕药和促孕药与雌激素(如乙炔雌二醇)联用的治疗方法和剂量方案。
可将这些疗法和组合给予哺乳动物，以引起避孕或治疗和/或预防继发性闭经、功能失调性出血、子宫平滑肌瘤、子宫内膜异位；多囊性卵巢综合征，子宫粘膜、卵巢、乳腺、结肠、前列腺的癌和腺癌。本发明的其他用途包括刺激食物摄取。本文用于治疗和/或预防上述情况或疾病的用途包括，根据本发明连续施用或定期不连续施用，使得有效剂量最小或副作用或周期性经血最少。
本发明的避孕用途包括，将抗孕激素与雌激素或孕激素或两者联用，一起施给(优选口服)育龄妇女。这些给药方案宜连续进行28天，在该周期的最终期间不施用孕激素、雌激素或抗孕激素。
在周期头14-24日，这些组合中的孕激素可单独给予或联合雌激素给予，给予的孕激素剂量范围在促孕活性上相当于每日约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的相当于每日约35-100微克左炔诺孕酮。然后在第14-24日之间的周期日开始单独给予抗孕激素或联合雌激素给予抗孕激素，持续1-11日。这些组合中的抗孕激素可以每日约2-50微克的剂量给予，雌激素可以每日约10-35微克的剂量给予。在口服给药中，含有28片片剂的包装或药盒将包括在不给予抗孕激素或孕激素或雌激素的那些日子所给予的安慰剂片剂。
在本发明的一个较佳实施方案中，可在28日周期的头18-21日单独或联合雌激素给予本发明的孕激素，然后单独或联合雌激素给予抗孕激素，持续1-7日。
本发明的组合物和制剂中使用的雌激素优选是乙炔雌二醇。
本发明中有用的促孕药包括，但不限于左炔诺孕酮、炔诺孕酮、去氧孕烯、3-酮去氧孕烯、炔诺酮、孕二烯酮、乙酸炔诺酮、诺孕酯、奥沙孕酮(osaterone)、乙酸环丙孕酮、曲美孕酮(trimegestone)、地诺孕素、屈螺利酮(drospirenone)、诺美孕酮或(17-脱乙酰基)诺孕酯。用于本发明组合中的较佳孕激素是左炔诺孕酮、孕二烯酮和曲美孕酮。
本发明的在28日周期内经口给药的方案例子包括，在前21日单独给予促孕药，其日剂量在促孕活性上相当于约35-100微克的左炔诺孕酮。然后在第22-24日以日剂量为约2-50毫克给予本发明的抗孕激素化合物，然后在第25-28日不给药或给予安慰剂。最佳的是，将日剂量的各有关活性组分合并成组合的单个日剂量单位中，28日周期每日一个单位，共28个日单位。
在另一方案中，前21日可共同给予促孕药(日剂量在促孕活性上相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是相当于约35-100微克左炔诺孕酮)和雌激素(如乙炔雌二醇，日剂量范围约10-35微克)。在这之后可如上所述在第22-24日给予日剂量约2-50毫克的抗孕激素，然后在第25-28日不给药或给予安慰剂。
本发明范围中的其他方案包括在第1-21日联合给予促孕药和雌激素，所述促孕药宜为左炔诺孕酮，其日剂量的促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮，所述雌激素(如乙炔雌二醇)的日剂量范围约为10-35微克。然后，在第22-24日联合给予抗孕激素(2-50毫克/日)和雌激素(如乙炔雌二醇，其日剂量是约10-35微克)。在第25-28日，不给药或给予安慰剂。
本发明还包括设计用于本发明所述方案的药物制剂的药盒或包装。这些药盒宜设计成用于在28日周期内每日经口给药，较佳的是每日经口给药一次，并组织起来，以表明在28日周期的每日要服用的单份口服制剂或口服制剂的组合。较佳的是，各药盒包括在指定的每日要服用的口服片剂，较佳的是一片口服片剂将含有标明的各种组合的日剂量。
根据上述方案，一种28日药盒可含有
a)用于开始阶段的14-21个日剂量单位的促孕药，其促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮；b)用于第二阶段的1-11个日剂量单位的本发明抗孕激素化合物，各日剂量单位含有日剂量约为2-50毫克的抗孕激素化合物；和b)第二部分，1-11个本发明抗孕激素化合物的每日剂量单位，各每日剂量单位含有每日剂量约2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)可任选的，用于第三阶段的周期剩余日的药物学上可接受的口服安慰剂，其中未给予抗孕激素、孕激素或雌激素。
该试剂盒的优选例可包括a)用于第一阶段的21个日剂量单位的促孕药，其促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮；b)用于第二阶段第22-24日的3个日剂量的本发明抗孕激素化合物，各日剂量单位含有日剂量约2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)可任选的用于第三阶段的4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂，用于第25-28日。
本发明另一种28日周期包装方案或药盒包含a)用于第一阶段的18-21个含促孕药和雌激素的日剂量单位，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮，作为雌激素的乙炔雌二醇的日剂量范围约为10-35微克；和b)用于第二阶段的有1-7个日剂量约为2-50毫克的本发明抗孕激素化合物的日剂量单位；和c)可任选的，用于28日周期剩余0-9日中每日的药物学上可接受的口服安慰剂，其中未给予抗孕激素、孕激素或雌激素。
上述药盒的一个较佳实施方案可包括a)用于第一阶段的21个日剂量单位的促孕药和雌激素，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是相当于约35-100微克左炔诺孕酮，作为雌激素的乙炔雌二醇日剂量范围约为10-35微克；和b)用于第二阶段第22-24日的3个日剂量单位的抗孕激素，其每日给予剂量约为2-50毫克；和c)可任选的，用于第三阶段第25-28日中每日的4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂。
本发明另一种28日包装方案或药盒包含
a)用于第一阶段的18-21个日剂量单位，各单位含有本发明的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是相当于约35-100微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇日剂量范围约为10-35微克；和b)用于第二阶段的1-7个日剂量单位，各日剂量单位含有浓度约2-50毫克的本发明抗孕激素化合物和浓度为约10-35微克的乙炔雌二醇；和c)可任选的，用于28日周期剩余0-9日中每日的药物学上可接受的口服安慰剂，其中未给予孕激素、雌激素或抗孕激素。
上述包装或药盒的一个较佳实施方案包含a)用于第一阶段的21个日剂量单位，各单位含有本发明的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量相当于约35-150微克，优选约35-100微克左炔诺孕酮的促孕活性，乙炔雌二醇的日剂量范围是约10-35微克；和b)用于第二阶段第22-24日的3个日剂量单位，各剂量单位含有浓度约2-50毫克的本发明抗孕激素以及浓度约10-35微克的乙炔雌二醇；和c)可任选的，用于第三阶段第25-28日中每日的4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂。
在上述各方案和药盒中，较佳的是，各方案中药物活性成分的日剂量在每个特定给药阶段中是固定的。还应理解，所述的日剂量单位以所述顺序给予，第一阶段后依次是第二和第三阶段。为了与各方案一致，另外较佳的是药盒还含有在周期最后几日使用的所述安慰剂。另外，每个包装或药盒宜有药物学上可接受的包装，它具有对应于28日周期每日的标志，如本领域内已知的带标记的泡罩包装或带刻度的给药器包装。
在该文中，术语抗孕药、抗孕激素和黄体酮受体拮抗剂应理解成同义词。类似的，孕激素、促孕药和黄体酮受体促效剂理解成具有相同活性的化合物。
这些剂量方案可作调节，以提供最佳的治疗反应。例如，根据治疗情况，可每日以几个分开的剂量给予每种成分，或按比例增加或减少剂量。在本文的描述中，所谓“日剂量单位”还可包括在周期每日过程中分开给予的剂量单位。
可用作本文所述药盒、方法和方案中的抗孕药的本发明的化合物，是具有式1的那些化合物 其中R1和R2各是选自以下的取代基H、烷基、取代的烷基；OH；O(烷基)；O(取代的烷基)；OAc芳基；可任选取代的芳基；杂芳基；可任选取代的杂芳基；烷芳基；烷基杂芳基；1-丙炔基；或3-丙炔基；其中或R1和R2合起来形成环，包括下列-CH2(CH2)nCH2-；-CH2CH2CMe2CH2CH2-；-O(CH2)mCH2-；O(CH2)pO-；-CH2CH2OCH2CH2-；-CH2CH2N(H或烷基)CH2CH2-；n是0-5的整数；m是1-4的整数；p是1-4的整数；或R1和R2一起构成与＝C(CH3)2；＝C(C3-C6环烷基)、＝O或＝C(环醚)连接的双键，其中环醚选自四氢呋喃基或六氢吡喃基；R3是H，OH，NH2，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C3-C6链烯基，炔基或取代的炔基，或CORA；RA是H、C1-C3烷基、取代的C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、取代的C1-C3烷氧基、C1-C3氨烷基、或取代的C1-C3氨烷基；R4是H、卤素、CN、NH2、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C1-C6氨烷基、或取代的C1-C6氨烷基；R5选自a)、b)或c)a)R5是如下所示的含有取代基X、Y和Z的三取代苯环 X选自卤素、OH、CN、C1-C3烷基、取代的C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、取代的C1-C3烷氧基、C1-C3烷硫基、取代的C1-C3烷硫基、S(O)烷基、S(O)2烷基、C1-C3氨烷基、取代的C1-C3氨烷基、NO2、C1-C3全氟烷基、含有1-3个杂原子的5或6元杂环、CORB、OCORB、或NRCCORB；RB是H、C1-C3烷基、取代的C1-C3烷基、芳基、取代的芳基、C1-C3烷氧基、取代的C1-C3烷氧基、C1-C3氨烷基、或取代的C1-C3氨烷基；RC是H、C1-C3烷基、或取代的C1-C3烷基；Y和Z分别选自以下的取代基包括H、卤素、CN、NO2、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、或C1-C3烷硫基；或b)R5是5或6元环，含有1、2、或3个选自包括O、S、SO、SO2或NR6的杂原子，且含有1或2个各选自以下的独立的取代基包括H、卤素、CN、NO2、和C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3氨烷基、CORD、或NRECORD；RD是H、C1-C3烷基、取代的C1-C3烷基、芳基、取代的芳基、C1-C3烷氧基、取代的C1-C3烷氧基、C1-C3氨烷基、或取代的C1-C3氨烷基；RE是H、C1-C3烷基、或取代的C1-C3烷基；R6是H或C1-C3烷基；或c)R5是吲哚-4-基、吲哚-7-基或苯并2-噻吩基，该基团可被1-3个取代基任选取代，这些取代基选自卤素、低级烷基、CN、NO2、低级烷氧基或CF3；其中R6和R7分别选自H、甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、环己基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基；或其药物学上可接受的盐。
式II描述了一组优选的本发明抗孕激素化合物 其中R5是如下所示的含有取代基X和Y的二取代苯环 X选自卤素、CN、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、NO2、C1-C3全氟烷基、含有1-3个杂原子的5元杂环或C1-C3硫代烷氧基；Y是4′或5′位上的取代基，选自H、卤素、CN、NO2、C1-C3烷氧基、C1-C4烷基或C1-C3烷硫基；或R5是具有如下结构的5元环 U是O、S、或NR6，R6是H、或C1-C3烷基、或C1-C4CO2烷基；X’选自卤素、CN、NO2、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基；Y’选自H、F、CN、NO2或C1-C4烷基；或R5是具有如下结构的6元环 X1是N或CX2；X2是卤素、CN或NO2或其药物学上可接受的盐。
本发明的化合物可含有不对称碳原子，且本发明的一些化合物可含有一个或多个不对称中心，并因此可以有光学异构体和非对映体。虽然式I和II并未以立体化学显示，但本发明包括此类光学异构体和非对映体；以及消旋的和拆解的对映体纯R和S立体异构体；以及R和S立体异构体的其他混合物和它们药学上可接受的盐。
本文所用的术语“烷基”指直链或支链饱和的含有1-8个碳原子的脂族烃类基团，优选地为含有1-6个碳原子；“链烯基”包括含有至少1或2个碳碳双键和2-8个碳原子的直链和支链烃基，较佳地含有2-6个碳原子；“炔基”包括含有至少1或2个碳碳三键和2-8个碳原子的直链和支链烃基，较佳地含有2-6个碳原子。
术语“取代的烷基”、“取代的链烯基”和“取代的炔基”指被一个或多个选自以下的取代基取代的上述烷基、链烯基和炔基卤素、CN、OH、NO2、氨基、芳基、杂环、取代的芳基、取代的杂环、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、芳硫基。这些取代基可连接于烷基、链烯基或炔基基团的任何碳原子上，但条件是这种连接构成稳定的化学部分。
本文的术语“芳基”指芳族体系，可以是单环或稠合的或连接在一起的单或多芳环，从而稠合或连接环的至少一个部分形成共轭的芳系。芳基基团可包括(但不限制于)苯基、萘基、联苯基、蒽基、四氢萘基、菲基。
术语“取代的芳基”指被1-4个选自以下的基团取代的上述芳基卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、环烷基、链烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基或芳硫基。
本文所用的术语“杂环”指稳定的4-到7-元单环或稳定的多环杂环，可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的，且由碳原子和选自以下的1-4个杂原子构成N、O和S原子。N和S原子可以被氧化。杂环还可包括任何多环，其中任一上述杂环可稠合于芳环。该杂环可连接于任何杂原子或碳原子，但所生成的结构必须是化学稳定的。这些杂环包括如四氢呋喃、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌啶基、吖庚因基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、异噁唑基、吗啉基、吲哚基、喹啉基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜和异喹啉基。
本文所用的术语“取代的杂环”指被以下1-4个取代的取代基上述杂环卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代的烷基、环烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、或芳基硫。本文所用的术语“烷硫基”指SR基团，其中R是含有1-8个碳原子的烷基或取代的烷基。本文所用的术语“烷氧基”指OR基团，其中R是含有1-8个碳原子的烷基或取代的烷基。本文的术语“芳氧基”指OR基团，其中R是如上定义的芳基或取代的芳基。本文的术语“烷基羰基”指RCO基团，其中R是烷基或取代的烷基，含有1-8个碳原子，优选1-6个碳原子。本文的术语“烷基羧基”指COOR基团，其中R是烷基或取代的烷基，含有1-8个碳原子，优选1-6个碳原子。术语“氨烷基”指仲胺或叔胺，其中烷基或取代的烷基含有1-8个碳原子，可以是相同的或不同的，且连接点是在氮原子上。术语“卤素”指Cl、Br、F或I。
本发明的抗孕激素化合物可以由药学上或生理学可接受的酸或碱衍生的盐形式使用。这些盐包括(但不限制于)与如下无机酸形成的盐如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸，有机酸则指乙酸、草酸、丁二酸和顺丁烯二酸。其他盐包括与碱金属或碱土金属的盐，如钠、钾、钙或镁，乙酯、氨基甲酸酯或其他常规的“前体药物”的形式(当给予这种形式时，在体内可转化成活性部分)。
当本疗法的活性化合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，如溶剂、稀释剂等，而且可以如下形式口服给药片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液(含有如约0.05-5％悬浮剂)、糖浆(含有如10-50％糖)、和酏剂(含有约20-50％乙醇)等，或以无菌可注射溶液或悬浮液形式(在等渗介质中含有约0.05-5％悬浮剂)肠胃外给药。这些药物制剂可含有如与载体混合的约25-90％活性成分，更通常约为5％-60％(重量)间。
可通过口服以及静脉内、肌内或皮下途径给予本发明的这些药物活性剂。固态载体包括淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适应于活性成分的特性和所需的给药形式。可以有利地包含在制备药物组合物中通常使用的佐剂包括如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。
从易于制备和给药来看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和硬填充的或充液的胶囊。化合物的口服给药是优选的。
这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性化合物(游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬浮液。还可在甘油、液体聚乙二醇和它们在油中的混合物中制备分散液。在普通储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物生长。
适应于注射的药物形式包括无菌水溶液或分散液和无菌粉末(用于临时制备无菌注射溶液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器的使用。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能抵抗微生物(如细菌和真菌)的污染影响。载体可以是溶剂或分散介质，含有如水、乙醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、它们的适当混合物和植物油。
可按如下流程制备本发明的化合物如流程I所示，通常本发明的化合物可用适当的偶联反应以趋同方式制备。例如，使芳基卤与芳基硼酸在钯介导下偶联得到所要的二-芳基取代的目标。芳基卤-芳基硼酸组合的选择是通过实验建立的。
流程1 Z＝I，Br，或B(OH)2 Z＝I，Br，或B(OH)2如流程2中所述，本发明抗孕化合物“右侧”可通过Letcher，R.M.等，J.Chem.Soc.Perkin Trans，1993，卷1939-944页中所述的方法制备。
流程2 例如，右侧模板2是通过使合适取代的苯肼和合适的酮缩合，得到相应的腙。将该物质在回流的乙酸中环化成亚胺，然后还原成所需的二氢吲哚模板2。通过该途径用合适的酮制备了实施例1-7和10-20。
如流程3中所述制备了其他右侧模板。用合适的碱和相应的烷基卤在C-3二烷基化商品购得的羟吲哚，得到3，3-二烷基-羟吲哚、8、或螺环羟吲哚9。然后在标准条件下溴化这些羟吲哚，用氢化物介导的还原将羰基还原成所需的亚甲基。芳基偶联和2-位羰基的还原时间通过实验建立。
流程3 用合适的钯(0)催化剂，流程4偶联右侧的模板和合适的芳基硼酸。例如，在标准Suzuki条件下偶联化合物10和合适的取代的芳基硼酸得到化合物11。
流程4 本发明的化合物是稳定的半固体，可通过用酸处理方便的转化成其相应的盐。当用HCl在二噁烷中处理实施例1，化合物11(R1＝R2＝R3＝Me)时得到白色固态的HCl盐(实施例2)。可将旋光性二氢吲哚用手性HPLC分离成对映体，得到各对映体＞98％EE。
本发明可用下列非限制性实施例进一步理解。
实施例12，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚-5-溴-2，3，3-三甲基-2，3-二氢-1H-吲哚用Letcher，R.M.等，J.Chem.Soc.Perkin Trans，1939-944，1993的方法制备了该化合物。
在4-溴-苯肼盐酸盐(2.59克，11.6毫摩尔)和3-甲基-2-丁酮(1.0克，11.6毫摩尔)的20毫升苯的溶液中加入乙酸(催化量)，共沸回流得到的溶液14小时，除去H2O。将得到的混合物冷却至室温并浓缩。用乙酸抽提得到的半固体，回流12小时。将反应混合物冷却至室温并浓缩。用乙醚抽提半固体剩余物，用K2CO3中和。干燥乙醚层并浓缩。将得到的固体亚胺溶于THF-MeOH(6∶1)，冷却至0℃，加入硼氢化钠(0.5克，13.2毫摩尔)。使溶液温至室温，搅拌0.5小时。将反应混合物倒入15％盐酸水溶液中，用K2CO3碱化。分离有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。用柱层析(SiO2，己烷-乙酸乙酯9∶1)纯化粗产物。分离出橙色液态产物(2.1克，75％)1H-NMR(CDCl3)δ1.03(s，3H)，1.15(d，J＝6.6Hz，3H)，1.25(s，3H)，3.50(q，J＝6.6Hz，1H)，3.70(br.s，1H)，6.45(d，J＝8.7Hz，1H)，7.09(m，2H)；13C-NMR(CDCl3)δ15.10，22.25，26.11(q)，43.72(s)，65.47(d)，110.32(s)，110.70，125.47，129.75(d)，141.48，148.33(s)；MS(EI)m/z 240，242(M+H)+。
5-溴-2，3，3-三甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(0.5克，2.1毫摩尔)和四-(三苯膦)合钯(0.14克，0.12毫摩尔)的二甲氧基乙烷(10毫升)在N2-真空下循环(4x)，然后在N2下搅拌0.5小时。然后在该混合物中加入3-硝基苯基硼酸(0.42克，2.5毫摩尔)，然后是Na2CO3(0.36克，3.4毫摩尔)的5毫升水溶液，在N2-真空中循环(3x)。回流溶液6小时，然后冷却至室温，倒入水中，用EtOAc抽提。用水、盐水洗涤合并的有机抽提物，干燥(Na2SO4)并蒸发。用柱层析(SiO2，二氯甲烷∶己烷1∶3)纯化残余物得到橙色半固体标题化合物(0.48克，82％)1H NMR(CDCl3)δ1.12(s，3H)，1.21(d，J＝6.6Hz，3H)，1.35(s，3H)，3.60(q，J＝6.6Hz，1H)，3.9(brs，1H)，6.69(d，J＝7.9Hz，1H)，7.28-7.29(m，2H)，7.32(d，J＝1.9Hz，1H)，7.53(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，7.85(ddd，J＝7.9，2.0，2.0Hz，1H)，8.07(ddd，J＝7.9，2.0，2.0Hz，1H)，8.08(d，J＝7.9Hz，1H)，8.39(dd，J＝2.0，2.0Hz，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ15.27，22.54，26.39(q)，43.53(s)，65.57(d)，109.48，120.67，121.04，121.10，126.58(d)，129.15(s)，129.53，132.35(d)，140.18，143.64，148.78，150.11(s)；MS(EI)m/z 283(M+H)+。
实施例22，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚盐酸盐用1.5毫升4M HCl/二噁烷溶液在室温下处理2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚(0.8克，2.79毫摩尔)的20毫升1∶1乙醚∶二噁烷溶液。过滤分离得到的固体并用己烷洗涤，得到褐色固态标题化合物(0.81克，90％)熔点240-241℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.37(s，3H)，1.51(s，3H)，4.01(d，J＝6.5 Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.59(d，J＝7.3Hz，1H)，7.7(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，7.8(d，J＝7.9，Hz，1H)，7.89(d，J＝7.7Hz，1H)，8.3(dd，J＝7.9，1.8Hz，1H)，8.42(s，1H)，11.9(br s.2H)；13C-NMR(CDCl3)δ；MS(EI)m/z 283(M+H)+。
实施例3(2-R或S)-2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚和实施例4(2-S或R)-2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚用手性制备级HPLC[柱Chiralcel OD，4.6×250毫米，isocratic，5∶95 IPA∶己烷，流速＝1毫升/分钟；注射体积＝5微升；保持时间3，9.2分钟和4，10.39分钟]分离实施例2中制备的旋光2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚(25毫克)，得到橙色半固态的对映体3和4。手性分析HPLC确定对映体具有＞99％的EE。实施例3和4具有与旋光物质实施例1相同的光谱数据1H-NMR(CDCl3)δ1.12(s，3H)，1.21(d，J＝6.6Hz，3H)，1.35(s，3H)，3.60(q，J＝6.6Hz，1H)，3.9(br s，1H)，6.69(d，J＝7.9Hz，1H)，7.28-7.29(m，2H)，7.32(d，J＝1.9Hz，1H)，7.53(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，7.85(ddd，J＝7.9，2.0，2.0Hz，1H)，8.07(ddd，J＝7.9，2.0，2.0Hz，1H)，8.08(d，J＝7.9Hz，1H)，8.39(dd，J＝2.0，2.0Hz，1H)；MS(EI)m/z 283(M+H)+。
实施例52，3，3-二乙基-2-甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚-5-溴-3，3-二乙基-2-甲基-2，3-二氢-1H-吲哚根据实施例1的方法，用4-溴-苯肼盐酸盐(5.9克，26.3毫摩尔)和3-乙基-2-戊酮(3.0克，26.3毫摩尔)制备了化合物。获得了产率为65％的浅黄色油状副标题化合物(4.5克)1H-NMR(CDCl3)δ0.81(t，J＝7.4Hz，3H)，0.83(t，J＝7.4Hz，3H)，1.18(d，J＝6.5Hz，3H)，1.42(dq，J＝14.0，7.4Hz，1H)，1.66(dq，J＝14.0，7.4Hz，3H)，3.73(q，J＝6.5Hz，1H)，6.47(d，J＝8.2Hz，1H)，7.02(d，J＝2Hz，1H)，7.09(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ10.46，10.66，17.70(q)，26.5，29.67(t)，52.25(s)，64.80(d)，111.64(s)，112.41，129.07，131.58(d)，139.57，151.04(s)；MS(EI)m/z268，270(M+H)+。
用实施例1中提供的标准偶联条件，从5-溴-3，3-二乙基-2-甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(0.13克，0.45毫摩尔)、四-(三苯膦)合钯(0.05克，0.04毫摩尔)的二甲氧基乙烷(4毫升)溶液和3-硝基苯基硼酸(0.09克，0.54毫摩尔)和碳酸钠(0.15克，4.95毫摩尔)的2毫升水溶液反应制备了标题化合物。获得红棕色玻璃状标题化合物(0.09克，65％)1H NMR(CDCl3)δ0.86(DT，J＝4.0，4.0Hz，3H)，0.88(dt，J＝4.0，4.0Hz，3H)，1.24(d，J＝6.6Hz，3H)，1.5(dq，J＝14.1，7.3Hz，1H)，1.66-1.84(m，3H)，3.81(q，J＝6.6Hz，1H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H)，7.20(d，J＝1.9Hz，1H)，7.32(dd，J＝8.0，1.9Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.85(dd，J＝7.9，1.1Hz，1H)，8.09(dd，J＝7.9，1.1Hz，1H)，8.4(dd，J＝1.9Hz，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ8.99，9.14，16.24(q)，24.87，28.14(t)，50.30(s)，63.31(d)，109.56，120.80，121.22，123.19，126.76(d)，128.64(s)，129.67，132.55(d)，136.5，143.92，148.95，151.07(s)；MS(EI)m/z 310(M)+。
实施例64a-甲基-6-(3-硝基-苯基)-2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-咔唑6-溴-4a-甲基-2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-咔唑用实施例1的方法，用4-溴-苯肼乙酸乙酯(2.0克，8.95毫摩尔)和2-甲基环己酮(1.0克，8.95毫摩尔)制备了该化合物。获得黄色油状的亚标题化合物(1.5克，65％)1H NMR(CDCl3)δ1.26(s，3H)，1.38-1.46(m，4H)，1.56-1.68(m，4H)，3.4(t，J＝4.4Hz，1H)，3.6(br s，1H)，6.53(d，J＝8Hz，1H)，7.08(d，J＝2.0Hz，1H)，7.09(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ21.45，21.87(t)，23.96(q)，27.92，35.32(t)，43.56(s)，66.65(d)，110.73(s)，111.88，125.25，129.99(d)，142.17，149.03(s)；MS(EI)m/z268，270(M+H)+。
用实施例1中给出的标准偶联条件，用6-溴-4a-甲基-2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-咔唑(1.6克，6.0毫摩尔)、四(三苯膦)合钯(0.4克，0.35毫摩尔)的二甲氧基乙烷(30毫升)溶液与3-硝基苯基硼酸(1.2克，7.2毫摩尔)和碳酸钠(1.9克，18毫摩尔)在10毫升水中制备了标题化合物。获得了橙色泡沫状纯产物(1.2克，70％)1H NMR(CDCl3)δ1.36(s，3H)，1.44-1.74(m，8H)，3.49(t，J＝4.4Hz，1H)，3.83(br s，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(d，J＝1.9Hz，1H)，7.32(dd，J＝8.0，1.9Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，8.08(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，8.39(dd，J＝2.0，2.0Hz，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ21.27，21.71(t)，23.87(q)，27.76，35.29(t)，43.06(s)，66.46(d)，110.41，120.57，120.83，121.24，126.55(d)，129.26(s)，129.68，132.55(d)，140.66，143.86，148.95，150.51(s)；MS(EI)m/z 309(M+H)+。
实施例71，2-二氢-2-甲基-5-(3-硝基-苯基)螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]5-溴-1，2-二氢-2-甲基螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]用实施例1中的条件，用4-溴-苯肼HCl(3.5克，15.7毫摩尔)和环己基甲基酮(2.0克，15.7毫摩尔)制备了亚标题化合物。获得了油状纯物质(3.0克，68％)1H NMR(CDCl3)δ1.09(d，J＝6.5Hz，3H)，1.25-1.73(m，10H)，3.45(br s，1H)，3.71(q，J＝6.5Hz，1H)，6.47(d，J＝8.2Hz，1H)，7.09，dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.19(d，J＝2.0Hz，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ17.22(q)，23.19，23.44，26.16，30.17，36.70(t)，47.99(s)，62.34(d)，110.08(s)，111.07，126.83，130.08(d)，139.98，148.49(s)；MS(EI)m/z 280，282(M+H)+。
用实施例1中给出的标准偶联条件，用5-溴-1，2-二氢-2-甲基螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚](0.5克，1.65毫摩尔)、四(三苯膦)合钯(0.08克，0.07毫摩尔)的二甲氧基乙烷(5毫升)溶液与3-硝基苯基硼酸(0.33克，1.98毫摩尔)和碳酸钠(0.53克，4.95毫摩尔)在5毫升水中制备了标题化合物。获得了橙棕色半固态纯产物(0.35克，55％)1H NMR(CDCl3)δ1.16(d，J＝6.4Hz，3H)，1.38-1.83(m，10H)，3.7(br s，1H)，3.8(q，J＝6.4Hz，1H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H)，7.31(dd，J＝8.0，1.8Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.86(d，J＝7.3Hz，1H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H)，8.39(dd，J＝1.9，1.9Hz，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ17.45(q)，23.32，23.70，26.21，30.31，37.07(t)，47.77(s)，62.11(d)，109.81，120.78，121.23，122.40，126.92(d)，128.96(s)，129.66，132.51(d)，138.63，143.92，148.94，150.1(s)；MS(EI)m/z 322(M)+。
实施例83，3-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚(WAY-160655)3，3-二甲基-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮用A.Kende，Synth.Commun.，112(1982)所述的通用方法制备了该化合物。柱层析(SiO2，二氯甲烷∶己烷1∶3)纯化粗物质得到亚标题化合物，与报道的光谱数据一致。
在乙酸(5.0毫升)中搅拌上述羟吲哚(0.65克，4.03毫摩尔)和乙酸钠(0.334克，4.07毫摩尔)。在反应混合物中滴加溴(0.66克，0.00413摩尔)的乙酸(5.0毫升)溶液。搅拌反应物50分钟，然后倒入水(10毫升)中。用碳酸钠碱化混合物，用乙酸乙酯抽提，干燥(MgSO4)，过滤，并蒸发得到5-溴-1，3-二氢-3，3-二甲基-2H-吲哚-2-酮(0.89克，92％)1H NMR(DMSO-d6)1.21(s，6H)，6.76(d，J＝8.22Hz，1H)，7.29(dd，J＝2.1，8.2Hz，1H)，7.49(d，J＝2.0Hz，1H)，10.4(s，1H)。
在5-溴-1，3-二氢-3，3-二甲基-2H-吲哚-2-酮(0.9克，3.7毫摩尔)的20毫升THF溶液中，在0℃加入硼烷-甲基硫复合物(2M的THF溶液，38毫升，75毫摩尔)。反应混合物温至室温后使之回流4小时。冷却混合物至室温，倒入H2O/CH2Cl2中，用5％NaHCO3洗涤。用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩。用MeOH抽提粗产物，加入三甲胺N-氧化物(2.0克，26.6毫摩尔)，溶液回流2小时。冷却反应混合物，浓缩并柱层析(SiO2，二氯甲烷)纯化粗剩余物，得到黄色油状的5-溴-3，3-二甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(0.074克，87％)1H NMR(CDCl3)δ1.29(s，6H)，3.30(s，2H)，3.5(br s，1H)，6.49(d，J＝8.8Hz，1H)，7.08-7.12(m，2H)；13C-NMR(CDCl3)δ27.69(q)，42.21(s)，62.01(d)，110.38(s)，111.09，125.46，130.09(d)，141.03，149.52(s)；MS(EI)m/z 225，227(M)+。
用实施例1中给出的标准偶联条件，用5-溴-3，3-二甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(0.25克，1.1毫摩尔)、四(三苯膦)合钯(0.08克，0.07毫摩尔)的二甲氧基乙烷(5毫升)溶液与3-硝基苯基硼酸(0.22克，1.3毫摩尔)和碳酸钠(0.35克，3.3毫摩尔)在5毫升水中制备了标题化合物。获得了棕色半固态标题化合物(0.17克，60％)1H NMR(CDCl3)δ1.38(s，3H)，3.40(s，2H)，6.72(d，J＝8.0Hz，1H)，7.29-7.34(m，2H)，7.54(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，8.09(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，8.40(dd，J＝2.0，2.0Hz，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ27.89(q)，41.93(s)，62.05(d)，109.78，120.87，121.02，121.23，126.87(d)，129.19(s)，129.69，132，52(d)，139.64，143.75，148.94，151.17(s)；MS(EI)m/z 268(M)+。
实施例95′-(3-氯苯基)-1′，2′-二氢螺[环己烷-1，3′-[3H]吲哚]螺[环己烷-1，3′-[3H]吲哚-2-(1′H)酮]将羟吲哚(25克，190毫摩尔)的800毫升无水THF溶液冷却至-20℃，缓慢加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液，152毫升，0.38摩尔)，然后加入N，N，N′，N′-四亚甲基二胺(51毫升，0.38摩尔)。15分钟后，缓慢加入1，5-二碘戊烷(174克，0.54摩尔)，将混合物温至室温。搅拌16小时后，加入饱和氯化胺水溶液(1升)和乙酸乙酯(1升)。15分钟后，分离各层，用乙酸乙酯抽提水相。用盐酸(1N，500毫升)抽提合并的有机层，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩获得油。用己烷(200毫升)和苯(20毫升)研磨油。收集沉淀，真空干燥得到无色晶状螺[环己烷-1，3′-[3H]吲哚]-2′-(1′H)酮(26.3克，69.6％)熔点110-114℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.67(m，10H)，6.84(d，1H，J＝8 Hz)，6.94(t，1H，J＝8 Hz)，7.17(t，1H，J＝8 Hz)，7.44(d，1H，J＝8Hz)，10.3(s，1H)。
在上述羟吲哚(17.6克，90.0毫摩尔)的乙酸(300毫升)溶液中一边搅拌一边加入乙酸钠(8.0克，100.0毫摩尔)和溴(14.6克，91.0毫摩尔)。室温下30分钟后，在水和乙酸乙酯之间分配反应混合物。用乙酸乙酯抽提水相。用水洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)并蒸发。用己烷研磨剩余物。收集沉淀，真空干燥得到米色晶状5-溴-螺[环己烷-1，3’-[3H]吲哚]-2’(1’H)-酮(16.5克，67％)熔点196-199℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.62(m，10H)，6.8(d，1H，J＝6.8Hz)，7.36(d，1H，J＝8.2，1.8Hz)，7.58(dd，1H，J＝8.2，1.8Hz)，10.44(s，1H)。
用实施例1中给出的标准偶联条件，用上述溴-羟吲哚(0.32克，1.14毫摩尔)、四(三苯膦)合钯(0.08克，0.07毫摩尔)和3-氯苯基硼酸(0.21克，1.37毫摩尔)和碳酸钠(0.36克，3.4毫摩尔)的水溶液(3毫升)制备了标题化合物。获得了黄色固态的5-(3-氯苯基)-螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]-2(1H)-酮(0.28克，80％)熔点164-165℃；1H NMR(CDCl3)δ1.60-1.78(m，6H)，1.81-1.99(m，4H)，7.04(d，J＝8.1Hz，1H)，7.22-7.47(m，4H)，7.53(s，1H)，7.61(s，1H)，9.28(br s，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ20.17，24.12，31.92(t)，47.22(s)，109.21，121.94，124.06，125.50，125.79，125.97，126.38，128.96(d)，132.88，133.59，135.60，139.14，142.17，182.89(s)；MS(EI)m/z 310，312(M-H)+。
在5-(3-氯苯基)-螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]-2(1H)-酮(0.42克，1.4毫摩尔)的20毫升THF溶液中，在0℃加入硼烷-二甲基硫复合物(2M的THF溶液，14毫升，28毫摩尔)。将反应混合物温至室温，然后回流4小时。将混合物冷至室温，与CH2Cl2一起倒入H2O中，用5％NaHCO3洗涤。用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩。用MeOH抽提粗产物，加入三甲胺N-氧化物(1.0克，9.0毫摩尔)。回流溶液2小时，冷却混合物，浓缩并用柱层析(SiO2，二氯甲烷)纯化粗剩余物，得到黄色油状标题化合物(0.25克，63％)1H NMR(CDCl3)δ1.3-1.55(m，3H)，1.6-1.85(m，7H)，3.1(br s，1H).3.5(s，2H)，6.6(d，J＝8.0Hz，1H)，7.18-7.32(m，4H)，7.4(dd，J＝7.7，1.5Hz，1H)，7.5(s，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ23.65，26.24，37.00(t)，46.58(s)，57.49(t)，109.95，121.82，125.07，126.36，126.98，127.08，130.29(d)，130.64，134.91，139.65，144.29，151.09(s)；MS(EI)m/z 298，300(M+H)+。
实施例103-(2′，3′，3′-三甲基-2′，3′-二氢-1H-吲哚-5′-基)苯腈在5-溴-2，3，3-三甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(2.03克，8.45毫摩尔)的二甲氧基乙烷(50毫升)溶液中，在氮气下加入四(三苯膦)合钯(0.47克，0.4毫摩尔)。室温20分钟后，加入3-甲酰基苯基硼酸(2.36克，16.4毫摩尔)和碳酸钾(6.80克，55毫摩尔)的水(25毫升)溶液，回流加热混合物。2小时后，冷却混合物，倒入盐水并用EtOAc(x2)抽提。用盐水洗涤合并的有机抽提物。干燥(MgSO4)并蒸发。然后柱层析剩余物(SiO2，EtOAc∶己烷，1∶8)得到3-(2′，3，3′-三甲基-2′-3-二氢-1H-吲哚-5′-基)苯甲醛(0.96克，3.62毫摩尔，43％)的稍有杂质的固体，不经进一步纯化使用1HNMR(CDCl3)δ1.11(s，3H)，1.22(d，3H，J＝6.5Hz)，1.35(s，3H)，3.59(dd，1H，J＝13，7Hz)，6.69(d，1H，J＝1Hz)，7.25(s，1H)，7.32(s，1H)，7.55(t，1H，J＝7.6Hz)，7.80(d，1H，J＝1Hz)，7.82(d，1H，J＝1Hz)，8.05(s，1H)，10.07(s，1H)。
在上述化合物(0.96克，3.62毫摩尔)的MeCN/H2O(20毫升，95∶5)的溶液中加入羟胺盐酸盐(0.82克，7.25毫摩尔)。1小时后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液中，用EtOAc抽提(x2)。用水洗涤合并的有机抽提物，干燥(MgSO4)并浓缩。然后将剩余物溶于二氯甲烷(20毫升)中，用亚硫酰氯(0.53毫升，7.25毫摩尔)处理。16小时后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应并浓缩，在水和EtOAc之间分配，并用EtOAc重新抽提。用盐水洗涤合并的有机抽提物，干燥(MgSO4)并蒸发。用柱层析(EtOAc∶己烷，1∶8)纯化得到黄色油(0.31克)，将其溶于甲醇(5毫升)并用醚氯化氢(1M，1.3毫升，1.3毫摩尔)处理并蒸发。用MeOH/Et2O重结晶得到标题化合物(0.20克，0.60毫摩尔，18％)熔点＞235℃(分解)，1H NMR(CDCl3)δ1.57(s，3H)，1.36(d，3H，J＝6.7Hz)，1.40(s，3H)，3.72-3.76(m，1H)，7.30(d，1H，J＝8Hz)，7.67(t，2H，J＝7Hz)，7.79-7.84(m，2H)，8.03(d，1H，J＝8Hz)，(8.2，s，1H)；MS(EI)m/z 262(M)+。
实施例11-药理学如下在体外试验中评估了本发明化合物的生物活性。体外效能在0.01nM-10,000nM之间，体内效能在1微克/公斤-100毫克/公斤范围内。
通过以下方法测定体外生物学(1)竞争性放射性配体结合用带有黄体酮作为放射性配体的A型人黄体酮受体；(2)共转染试验，可提供以促效剂EC50和拮抗剂IC50值表达的功能性活力；(3)T47D细胞增殖，这是提供促效剂和拮抗剂数据的另一种功能性试验。
1.hPR结合试验参考Pathirana，C.；Stein，R.B.；Berger，T.S.；Fenieal，W.；Ianiro，T.；Mais，D.E.；Torres，A.；Glodman，M.E.，“来自海藻cymoplia barbata的非甾类人黄体酮受体调制剂”，J.Steroid Biochem.Mol.Biol.，1992，41，733-738进行。
2.CV-1细胞中的PRE-荧光素酶试验本试验的目的是基于化合物在用人PR和PRE-荧光素酶质粒共转染的CV-1细胞中对PRE-荧光素酶报道分子活性的影响，确定化合物的促孕或抗孕效果。本试验中所用的材料如下a.培养基生长培养基如下含有10％(v/v)胎牛血清(热灭活)、0.1mM MEM非必需氨基酸、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的DMEM(BioWhittaker)。试验培养基如下含有10％(v/v)活性炭解吸的胎牛血清(热灭活)、0.1mM MEM非必需氨基酸、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的无酚红DMEM(BioWhittaker)。
b.细胞的培养、转染、处理和荧光素酶试验将CV-1细胞原液维持在生长培养基中。用1.2×107个细胞、5mg pLEM质粒(在Sph1和BamH1位点插入hPR-B)、10mg pGL3质粒(在荧光素酶序列上游有两个PRE)，和50mg超声处理过的小牛胸腺DNA作为载体DNA(250ml)，进行共转染。用Biorad Gene Pulser II在260V和1,000mF进行电穿孔。电穿孔后，将细胞重悬浮于生长培养基，并在96孔板上以40,000个细胞/孔(200μl)接种。培养过夜后，将培养基换成试验培养基。然后在试验培养基中用对照或测试化合物处理这些细胞。在3nM黄体酮的存在下测定化合物的抗孕活性。处理24小时后，弃去培养基，用D-PBS(GIBCO，BRL)洗涤这些细胞3次。各孔加入50μl细胞裂解缓冲液(Promega，Madison，WI)，平板在滴定平板振荡器(Lab Line Instrument，Inc)上振荡15分钟。用Promega的荧光素酶试剂测定荧光素酶的活性。
c.结果分析各种处理重复至少4次。用对数换算的数据分析匹配于促效剂和拮抗剂模式的方差和非线性剂量应答曲线。用Huber加权法降低非正常值(outlier)的影响。用重新换算的数值计算EC50或IC50。在方差和非线性应答分析的两个单向分析中，使用JMP软件(SAS Institute，Inc.)。
d.对照化合物黄体酮和曲美孕酮(trimegestone)作为对照孕激素，RU486作为对照抗孕激素。所有对照化合物都在全剂量应答曲线中进行试验，并计算EC50或IC50值。
表1.三个独立研究的参照孕激素估计的EC50，标准误差(SE)，和95％置信区间(CI)EC50 95％CI化合物实验 (nM) SE下限上限黄体酮10.616 0.026 0.509 0.74620.402 0.019 0.323 0.50130.486 0.028 0.371 0.637曲美孕10.0075 0.0002 0.0066 0.0085酮20.008 0.0003 0.0070 0.009430.0067 0.0003 0.0055 0.0082表2.三个独立研究中抗孕激素RU486的预计EC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)IC50 95％CI化合物实验(nM)SE下限上限RU48610.0280.0020.0190.042
20.0370.002 0.029 0.04830.0190.001 0.013 0.027促孕活性与对照载体相比，使PRE-荧光素酶活性显著增加(p＜0.05)的化合物认为是有活性的。
抗孕活性显著降低3nM黄体酮诱导的PRE-荧光素酶的活性(p＜0.05)的化合物。
EC50能增加PRE-荧光素酶活性最大值的一半活性时，化合物的浓度(默认为“nM”)及标准偏差。
IC50能降低3nM黄体酮诱导的PRE-荧光素酶活性最大值的一半活性时，化合物的浓度(默认为“nM”)及标准偏差。
3.T47D细胞的增殖实验本实验的目的是用T47D细胞的细胞增殖实验来测定促孕和抗孕的效力。测定化合物对T47D细胞的DNA合成的作用。以下为本实验所用的材料和方法a.生长培养基补充有10％(v/v)胎牛血清(未加热灭活)、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mMGlutaMax(GIBCO，BRL)的DEME∶F12(1∶1)(GIBCO，BRL)。
b.处理培养基补充有0.5％活性炭解吸的胎牛血清、100U/ml青霉素、200mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的无酚红的极限必需培养基(MEM)(#51200-038 GIBCO，BRL)。
c.细胞培养将T47D细胞原液维持在生长培养基中。对BrdU掺入实验而言，将细胞以10,000个细胞/孔的量(在生长培养基中)将细胞置于96孔板(Falcon，BectonDickinson Labware)中。培养过夜后，将培养基换成处理培养基，在处理前再培养这些细胞24小时。将化合物原液溶解于适当的载体(100％乙醇或50％乙醇/50％DMSO)中，然后用处理培养基稀释，加给细胞。孕激素和抗孕激素对照化合物均以全剂量-响应曲线方式进行试验。载体的终浓度为0.1％。在对照孔中，细胞仅接受载体。在0.03nM曲美孕酮(对照孕激素促效剂)存在下测定抗孕激素。处理24小时后，弃去培养基，用10mM BrdU(Amersham Life Science，Arlington Heights，IL)在处理培养基中标记细胞4小时。
d.细胞增殖实验当BrdU标记结束时，弃去培养基，按供应商的说明，用细胞增殖ELISA试剂盒(#RPN 250，Amersham Life Science)测定BrdU的掺入。简而言之，将细胞在含有固定剂的乙醇中固定30分钟，然后在封阻缓冲液中培养30分钟以降低背景。将过氧化物酶标记的抗BrdU抗体加到孔中，培养60分钟。用PBS漂洗细胞3次，用3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)底物培养10-20分钟(取决于所测试的化合物的效力)。然后在各孔中加入25μl 1M硫酸以终止次显色反应，5分钟内在450nm处用平板读数仪读取光密度。
e.结果分析平方根换算的数据，用于分析匹配于促效剂和拮抗剂模式的方差和非线性剂量应答曲线。用Huber加权法降低非正常值的影响。由重新换算的数值计算EC50或IC50。在方差和非线性剂量应答分析的单剂量和剂量应答分析中，使用JMP软件(SAS Institute，Inc.)。
f.对照化合物曲美孕酮和甲羟孕酮醋酸酯(MPA)作为对照孕激素，RU486作为对照抗孕激素。所有对照化合物以全剂量应答曲线方式进行试验，并计算EC50或IC50值。
表3.各研究中的预计EC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)EC5095％CI化合物实验(nM)SE下限上限曲美孕酮1 0.010.00 0.000.047 3 7 02 0.010.00 0.010.014 1 1 73 0.010.00 0.010.029 1 6 4MPA 1 0.010.00 0.010.029 1 3 72 0.010.00 0.010.027 1 1 4表4.抗孕激素RU486的预计EC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)IC50 95％CI
化合物实验(nM)SE下限上限RU486 1 0.01 0.000.00 0.011 1 8 42 0.01 0.000.01 0.026 1 4 03 0.01 0.000.01 0.028 1 4 2EC50能增加BrdU掺入量最大值一半时化合物的浓度和标准偏差；IC50能使0.1曲美孕酮诱导的BrdU掺入量减少最大值一半时化合物的浓度和标准偏差。
本发明将上述所有应用的出版物都纳入作为参考。预期本发明中包含于上述说明书的许多改良及变化对于本领域技术人员来说是明显的。相信本发明中的这些方法、溶液和仪器的改变和变化是属于本发明所附的权利要求范围内的。
权利要求
1.一种避孕方法，该方法包括将下列物质给予育龄妇女连续28天a)第一阶段，给予14-24个日剂量单位的促孕药，促孕药的促孕活性相当于35-100微克左炔诺孕酮；b)第二阶段，给予1-11个日剂量单位的式1抗孕化合物或其药学上可接受的盐，日剂量单位为2-50毫克 R1和R2各是选自以下的取代基H、烷基、取代的烷基；OH；O(烷基)；O(取代的烷基)；OAc；芳基；可任选取代的芳基；杂芳基；可任选取代的杂芳基；烷芳基；烷基杂芳基；1-丙炔基；或3-丙炔基；或R1和R2合起来形成环，包括-CH2(CH2)nCH2-；-CH2CH2CMe2CH2CH2-；-O(CH2)mCH2-；O(CH2)pO-；-CH2CH2OCH2CH2-；-CH2CH2N(H或烷基)CH2CH2-；n是0-5的整数；m是1-4的整数；p是1-4的整数；或R1和R2一起构成与＝C(CH3)2；＝C(C3-C6环烷基)、＝O或＝C(环醚)相连的双键，其中环醚选自四氢呋喃基或六氢吡喃基；R3是H，OH，NH2，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C3-C6链烯基，炔基或取代的炔基，或CORA；RA＝H、C1-C3烷基、取代的C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、取代的C1-C3烷氧基、C1-C3氨烷基、或取代的C1-C3氨烷基；R4＝H、卤素、CN、NH2、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、C1-C6氨烷基、或取代的C1-C6氨烷基；R5选自a)、b)或c)a)R5是苯环，具有式 X选自卤素、OH、CN、C1-C3烷基、取代的C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、取代的C1-C3烷氧基、C1-C3烷硫基、取代的C1-C3烷硫基、S(O)烷基、S(O)2烷基、C1-C3氨烷基、取代的C1-C3氨烷基、NO2、C1-C3全氟烷基、含有1-3个杂原子的5或6元杂环、CORB、OCORB、或NRCCORB；RB是H、C1-C3烷基、取代的C1-C3烷基、芳基、取代的芳基、C1-C3烷氧基、取代的C1-C3烷氧基、C1-C3氨烷基、或取代的C1-C3氨烷基；RC是H、C1-C3烷基、或取代的C1-C3烷基；Y和Z分别选自H、卤素、CN、NO2、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、或C1-C3烷硫基；或b)R5是5或6元环，含有1、2、或3个选自包括O、S、SO、SO2或NR6的杂原子，且含有1或2个选自H、卤素、CN、NO2、和C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3氨烷基、CORD、或NRECORD的独立取代基；RD是H、C1-C3烷基、取代的C1-C3烷基、芳基、取代的芳基、C1-C3烷氧基、取代的C1-C3烷氧基、C1-C3氨烷基、或取代的C1-C3氨烷基；RE是H、C1-C3烷基、或取代的C1-C3烷基；R6是H或C1-C3烷基；或c)R5是吲哚-4-基、吲哚-7-基或苯并2-噻吩基，该基团可被1-3个取代基任选取代，所述取代基选自卤素、低级烷基、CN、NO2、低级烷氧基或CF3；其中R6和R7分别选自H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、环己基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基；和c)任选的，给予用于28个连续日的剩余日的第三阶段的药物学上可接受的口服安慰剂，其中未给予抗孕激素、孕激素或雌激素；第一、第二和第三阶段的日剂量单位总数等于28。
2.根据权利要求1所述的方法，其中促孕药是左炔诺孕酮，抗孕激素化合物具有以下结构 其中X选自卤素、CN、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、NO2、C1-C3全氟烷基、含有1-3个杂原子的5元杂环或C1-C3硫代烷氧基；Y是4′或5′位上的取代基，选自H、卤素、CN、NO2、C1-C3烷氧基、C1-C4烷基或C1-C3烷硫基；或其药物学上可接受的盐。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述促孕药是左炔诺孕酮，所述抗孕激素化合物具有结构 其中U是O、S、或NR6，R6是H、或C1-C3烷基、或C1-C4CO2烷基；X’选自卤素、CN、NO2、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基；Y’选自H、F、CN、NO2或C1-C4烷基；或其药物学上可接受的盐。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述促孕药是左炔诺孕酮，所述抗孕激素化合物具有结构 其中X1是N或CX2；X2是卤素、CN或NO2。或其药物学上可接受的盐。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚盐酸盐或其药物学上可接受的盐。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是(2-R)-2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-IH-吲哚或其药物学上可接受的盐。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是(2-S)-2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是2，3，3-二乙基-2-甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是4a-甲基-6-(3-硝基-苯基)-2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-咔唑或其药物学上可接受的盐。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是1，2-二氢-2-甲基-5-(3-硝基-苯基)螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]或其药物学上可接受的盐。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是3，3-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。
13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是5′-(3-氯苯基)-1′，2′-二氢螺[环己烷-1，3′-[3H]吲哚]或其药物学上可接受的盐。
14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗孕激素化合物是3-(2′，3′，3′-三甲基-2′，3′-二氢-1H-吲哚-5′-基)苯腈或其药物学上可接受的盐。
15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述促孕药选自左炔诺孕酮、炔诺孕酮、去氧孕烯、3-酮去氧孕烯、炔诺酮、孕二烯酮、乙酸炔诺酮、炔诺肟酯、奥沙孕酮、乙酸环丙孕酮、曲美孕酮、地诺孕素、屈螺利酮、诺美孕酮或(17-脱乙酰基)诺孕酯。
16.根据权利要求1所述的方法，该方法包括在28日周期内连续给予育龄女性下列物质a)第一阶段，给予21个日剂量单位的促孕药，促孕药的促孕活性相当于35-100微克左炔诺孕酮；b)第二阶段，给予3个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素化合物，每个日剂量单位含有日剂量为2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)可任选地给予4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂，在28日周期中第一和第二阶段后的每一日给予。
17.一种避孕方法，该方法包括在连续的28日内给予育龄女性下列物质a)第一阶段，给予18-21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的促孕活性相当于35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围为10-35微克；和b)第二阶段，给予1-7个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素，其日剂量为2-50毫克；和c)可任选的在连续28日中剩余的每一日给予药物学上可接受的口服安慰剂。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，包括在连续28天的时间内给予育龄妇女下列物质a)第一阶段，给予21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的促孕活性相当于35-100微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇日剂量范围为10-35微克；和b)第二阶段，给予3个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素，其日剂量为2-50毫克；和c)可任选的第三阶段，给予4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂。
19.一种避孕方法，该方法包括在连续28日期间给予育龄妇女下列物质a)第一阶段，给予18-21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇日剂量范围为10-35微克；和b)第二阶段，给予1-7个日剂量单位，各日剂量单位含有浓度为2-50毫克的权利要求1所述的抗孕激素和浓度为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)可任选的第三阶段，给予日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂，日剂量单位总数为28。
20.根据权利要求19的避孕方法，该方法包括在连续28日期间给予育龄妇女下列物质a)第一阶段，给予21个日剂量单位，每个日剂量单位含有促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于35-100微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围为10-35微克；和b)第二阶段，给予3个日剂量单位，每个日剂量单位含有浓度为2-50毫克的权利要求1所述的抗孕激素和浓度为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)可任选的第三阶段，给予4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂。
21.一种适合每日口服的药物学有用的药盒，它包含a)用于第一阶段的14-21个日剂量单位的促孕药，促孕药的促孕活性相当于35-150微克左炔诺孕酮；b)用于第二阶段的1-11个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素化合物，每个日剂量单位含有日剂量为2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)用于第三阶段的药物学上可接受的口服安慰剂日剂量单位；其中第一阶段、第二阶段和第三阶段的日剂量单位总数等于28。
22.根据权利要求21所述的适合每日口服的药物学有用的药盒，它包含a)用于第一阶段的21个日剂量单位的促孕药，促孕药的促孕活性相当于35-150微克左炔诺孕酮；b)用于第二阶段的3个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素化合物，每个日剂量单位含有日剂量为2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)用于第三阶段的4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂。
23.一种适合每日口服的药物学有用的药盒，它包含a)用于第一阶段的18-21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的促孕活性相当于35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围为10-35微克；和b)用于第二阶段的1-7个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素化合物，其日剂量为2-50毫克；和c)用于第三阶段的0-9个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂；其中第一阶段、第二阶段和第三阶段中的日剂量单位总数等于28。
24.根据权利要求23所述的适合每日口服的药物学有用的药盒，它包含a)用于第一阶段的21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的促孕活性相当于35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围为10-35微克；和b)用于第二阶段的3个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素，其日剂量为2-50毫克；和c)用于第三阶段的4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂。
25.一种适合每日口服的药物学有用的药盒，它包含a)用于第一阶段的18-21个日剂量单位，每个日剂量单位含有促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围为10-35微克；b)用于第二阶段的1-7个日剂量单位，每个日剂量单位含有浓度为2-50毫克的权利要求1所述的抗孕激素和浓度为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)用于第三阶段的0-9个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂；其中第一阶段、第二阶段和第三阶段中的日剂量单位总数等于28。
26.根据权利要求25所述的适合每日口服的药物学有用的药盒，它包含a)用于第一阶段的21个日剂量单位，每个日剂量单位含有促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围为10-35微克；b)用于第二阶段的3个日剂量单位，每个日剂量单位含有浓度为2-50毫克的权利要求1所述的抗孕激素和浓度为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)用于第三阶段的4个日剂量单位的药物学上可接受的口服安慰剂。
全文摘要
本发明涉及利用作为黄体酮受体拮抗剂的取代的二氢吲哚衍生物的周期组合疗法,该衍生物具有通式(I),其中:R
文档编号A61K31/404GK1349417SQ00807136
公开日2002年5月15日 申请日期2000年5月1日 优先权日1999年5月4日
发明者G·S·格拉布, J·W·乌尔里克, A·芬森, J·E·弗罗贝尔, J·P·爱德华兹, T·K·琼斯, C·M·特格利, 智林 申请人:美国家庭用品有限公司, 莱加制药公司