专利名称：使用环脲和环酰胺衍生物的循环疗法的制作方法
技术领域：
本发明涉及作为黄体酮受体拮抗剂的化合物与孕激素、雌激素或两者联用的给药方案。
背景技术：
细胞内受体(IR)形成一类结构相关的基因调节剂，称为“配体依赖性转录因子”(R.M.Evans，Science，240，889，1988)。类固醇受体家族是IR家族的一个亚类，包括黄体酮受体(PR)、雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)、糖皮质激素受体(GR)和盐皮质激素受体(MR)。
对PR而言，天然激素或配体是类固醇黄体酮，但也制备了合成化合物如甲羟孕酮醋酸酯或左炔诺孕酮，它们可作为配体。一旦细胞周围的液体中存在配体，配体就通过被动扩散穿过膜，并与IR结合产生受体/配体复合物。这种复合物与细胞DNA中存在的特异性基因启动子结合。一旦结合于DNA，复合物就调节mRNA和该基因编码的蛋白质的产生。
将结合于IR且模拟天然激素作用的化合物称为促效剂，而抑制激素作用的化合物称为拮抗剂。
已知，PR促效剂(天然的和合成的)在妇女健康中起重要作用。PR促效剂可用于生育控制制剂，通常在存在ER促效剂时。ER促效剂可用于治疗绝经期综合症，但是伴有子宫增生的作用，这会导致患子宫癌危险的上升。同时施用PR促效剂可降低或消除这种危险。PR拮抗剂可用于避孕。在这种情况下，它们可以单独给予(Ulmann等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.，261，248，1995)，与可与PR促效剂联用(Kekkonen等人，Fertility and Sterility，60，610，1993)或与部分ER拮抗剂(如他莫昔芬)联用(WO96/19997 A1，1996年7月4日)。
PR拮抗剂可以用于治疗激素依赖性乳腺癌(Horwitz等人，Horm.Cancer，283，出版商Birkhaeuser，Boston，Mass.，编者Vedeckis)，以及子宫癌和卵巢癌。PR拮抗剂还可用于治疗非恶性慢性病如纤维瘤(Murphy等人，J.Clin.Endo.Metab.，76，513，1993)和子宫内膜异位(Kettel等人，Fertilityand Sterility，56，402，1991)。
PR拮抗剂还可用于激素替代治疗，与部分ER拮抗剂(如他莫昔芬)联用治疗绝经后的患者(美国专利5719136)。
已显示，在激素依赖性前列腺癌模型中，PR拮抗剂(如米非司酮和奥那司酮(onapristone))是有效的，表明它们可用于治疗男性的这类疾病(Michna等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.，761，224，1995)。
Jones等人(美国专利No.5,688,810)描述了PR拮抗剂二氢喹啉1。 Jones等人描述了作为PR配体的烯醇醚2(美国专利No.5,693,646)。 Jones等人描述了作为PR配体的化合物3(美国专利No.5,696,127)。
Zhi等人描述了作为PR拮抗剂的内酯4，5和6(J.Med.Chem.，41，291，1998)。 Zhi等人描述了作为PR拮抗剂的醚7(J.Med.Chem.，41，291，1998)。 Combs等人公开了作为PR配体的酰胺8(J.Med.Chem.，38，4880，1995)。 Perlman等人描述了作为PR配体的维生素D类似物9(Tet.Letters，35，2295，1994)。 Hamann等人描述了PR拮抗剂10(Ann.N.Y.Acad.Sci.，761，383，1995)。 Chen等人描述了PR拮抗剂11(Chen等人，POI-37，16thInt.Cong.Het.Chem.，Montana，1997)。 Kurihari等人描述了PR配体12(J.Antibiotics，50，360，1997)。
Christ等人的专利(WO9814436)要求保护化合物A等环酰胺(cyclo amide)，它们可作为HIV逆转录酶的抑制剂。其他现有技术包括Turck等人(Tetrahedron，49(3)，599-606(1993).)的哒嗪环酰胺，如化合物B，以及Canonne等人(J.heterocyclic Chem.26，113(1989).)的化合物C。在Turck和Canonne的出版物中没有报道活性数据。 对于环酰胺，Singh等人和Kumar等人(Singh等人J.Med.Chem.37(2)，248-254(1994)；Kumar等人J.Org.Chem.57(25)，6995-6998(1992).)公开了诸如D和E之类的化合物，它们被声称是cAMP PDE III抑制剂。 美国专利5,521,166(Grubb)讲授了包括抗孕激素和孕激素的循环激素疗法(cyclophasic hormonal regimens)，其中在抗孕激素交替地存在或不存在时，施用孕激素。还提供了使用雌激素2-4日来预防穿破性出血的公开疗法。
发明详述本发明提供了利用抗孕药联合一种或多种促孕药的组合治疗和剂量方案。本发明还提供了将这些抗孕药和促孕药与雌激素(如乙炔雌二醇)联用的治疗方法和剂量方案。
可将这些疗法和组合给予哺乳动物，以引起避孕或治疗和/或预防继发性闭经、功能失调性出血、子宫平滑肌瘤、子宫内膜异位；多囊性卵巢综合征，子宫粘膜、卵巢、乳腺、结肠、前列腺的癌和腺癌。本发明的其他用途包括刺激食物摄取。本文用于治疗和/或预防上述情况或疾病的用途包括，根据本发明连续施用或定期不连续施用，使得有效剂量最小或副作用或周期性经血最少。
本发明的避孕用途包括，将抗孕素与雌激素或孕激素或两者联用，一起施给(优选口服)育龄妇女。这些给药方案宜连续进行28天，在该周期的最终期间不施用孕激素、雌激素或抗孕素。
在周期头14-24日，这些组合中的孕激素可单独给予或联合雌激素给予，给予的孕激素剂量范围在促孕活性上相当于每日约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的相当于每日约35-100微克左炔诺孕酮。然后在第14-24日之间的周期日开始单独给予抗孕素或联合雌激素给予抗孕激素，持续1-11日。这些组合中的抗孕激素可以每日约2-50微克的剂量给予，雌激素可以每日约10-35微克的剂量给予。在口服给药中，含有28片片剂的包装或药盒将包括在不给予抗孕激素或孕激素或雌激素的那些日子所给予的安慰剂片剂。
在本发明的一个较佳实施方案中，可在28日周期的头18-21日单独或联合雌激素给予本发明的孕激素，然后单独或联合雌激素给予抗孕激素，持续1-7日。
本发明的组合物和制剂中使用的雌激素优选是乙炔雌二醇。
本发明中有用的促孕药包括，但不限于左炔诺孕酮、炔诺孕酮、去氧孕烯、3-酮去氧孕烯、炔诺酮、孕二烯酮、乙酸炔诺酮、诺孕酯、奥沙孕酮(osaterone)、乙酸环丙孕酮、曲美孕酮(trimegestone)、地诺孕素、屈螺利酮(drospirenone)、诺美孕酮或(17-脱乙酰基)诺孕酯。用于本发明组合中的较佳孕激素是左炔诺孕酮、孕二烯酮和曲美孕酮。
本发明的在28日周期内经口给药的方案例子包括，在前21日单独给予促孕药，其日剂量在促孕活性上相当于约35-100微克的左炔诺孕酮。然后在第22-24日以日剂量约为2-50毫克给予本发明的抗孕激素化合物，然后在第25-28日不给药或给予安慰剂。最佳的是，将日剂量的各有关活性组分合并成组合的单个日剂量单位中，28日周期每日一个单位，共28个日单位。
在另一方案中，前21日可共同给予促孕药(日剂量在促孕活性上相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是相当于约35-100微克左炔诺孕酮)和雌激素(如乙炔雌二醇，日剂量范围约10-35微克)。在这之后可如上所述在第22-24日给予日剂量约2-50毫克的抗孕激素，然后在第25-28日不给药或给予安慰剂。
本发明范围中的其他方案包括在第1-21日联合给予促孕药和雌激素，所述促孕药宜为左炔诺孕酮，其日剂量的促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮，所述雌激素(如乙炔雌二醇)的日剂量范围约为10-35微克。然后，在第22-24日联合给予抗孕激素(2-50毫克/日)和雌激素(如乙炔雌二醇，其日剂量是约10-35微克)。在第25-28日，不给药或给予安慰剂。
本发明还包括设计用于本发明所述方案的药物制剂的药盒或包装。这些药盒宜设计成用于在28日周期内每日经口给药，较佳的是每日经口给药一次，并组织起来，以表明在28日周期的每日要服用的单份口服制剂或口服制剂的组合。较佳的是，各药盒包括在指定的每日要服用的口服片剂，较佳的是一片口服片剂将含有标明的各种组合的日剂量。
根据上述方案，一种28日药盒可含有a)用于第一阶段的14-21个日剂量单位的促孕药，其促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮；b)用于第二阶段的1-11个日剂量单位的本发明抗孕激素化合物，各日剂量单位含有日剂量约为2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)可任选的，用于第三阶段的周期剩余日的药学上可接受的口服安慰剂，其中未给予抗孕激素、孕激素或雌激素。
该药盒的较佳实施方案可包括a)用于第一阶段的21个日剂量单位的促孕药，其促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮；b)用于第二阶段第22-24日的3个日剂量的本发明抗孕激素化合物，各日剂量单位含有日剂量约2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)可任选的用于第三阶段的4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂，用于第25-28日。
本发明另一种28日周期包装方案或药盒包含a)用于第一阶段的18-21个含促孕药和雌激素的日剂量单位，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮，作为雌激素的乙炔雌二醇的日剂量范围约为10-35微克；和b)用于第二阶段的有1-7个日剂量约为2-50毫克的本发明抗孕激素化合物的日剂量单位；和c)可任选的，用于28日周期剩余0-9日中每日的药学上可接受的口服安慰剂，其中未给予抗孕激素、孕激素或雌激素。
上述药盒的一个较佳实施方案可包括a)用于第一阶段的21个日剂量单位的促孕药和雌激素，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是相当于约35-100微克左炔诺孕酮，作为雌激素的乙炔雌二醇日剂量范围约为10-35微克；和b)用于第二阶段第22-24日的3个日剂量单位的抗孕激素，其每日给予剂量约为2-50毫克；和c)可任选的，用于第三阶段第25-28日中每日的4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂。
本发明另一种28日包装方案或药盒包含a)用于第一阶段的18-21个日剂量单位，各单位含有本发明的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于约35-150微克左炔诺孕酮，较佳的是相当于约35-100微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇日剂量范围约为10-35微克；和b)用于第二阶段的1-7个日剂量单位，各日剂量单位含有浓度约2-50毫克的本发明抗孕激素化合物和浓度约为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)可任选的，用于28日周期剩余0-9日中每日的药学上可接受的口服安慰剂，其中未给予促孕激素、雌激素或抗孕激素。
上述包装或药盒的一个较佳实施方案包含a)用于第一阶段的21个日剂量单位，各单位含有本发明的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量相当于约35-150微克，优选约35-100微克左炔诺孕酮的促孕活性，乙炔雌二醇的日剂量范围是约10-35微克；和b)用于第二阶段第22-24日的3个日剂量单位，各剂量单位含有浓度约2-50毫克的本发明抗孕激素以及浓度约10-35微克的乙炔雌二醇；和c)可任选的，用于第三阶段第25-28日中每日的4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂。
在上述各方案和药盒中，较佳的是，各方案中药物活性成分的日剂量在每个特定给药阶段中是固定的。还应理解，所述的日剂量单位以所述顺序给予，第一阶段后依次是第二和第三阶段。为了与各方案一致，另外较佳的是药盒还含有在周期最后几日使用的所述安慰剂。另外，每个包装或药盒宜有药学上可接受的包装，它具有对应于28日周期每日的标志，如本领域内已知的带标记的泡罩包装或带刻度的给药器包装。
在该文中，术语抗孕药、抗孕激素和黄体酮受体拮抗剂应理解成同义词。类似的，孕激素、促孕药和黄体酮受体促效剂理解成具有相同活性的化合物。
这些剂量方案可作调节，以提供最佳的治疗反应。例如，根据治疗情况，可每日以几个分开的剂量给予每种成分，或按比例增加或减少剂量。在本文的描述中，所谓“日剂量单位”还可包括在周期每日过程中分开给予的剂量单位。
可用作本文所述药盒、方法和方案中的抗孕药的本发明的化合物，是具有式1的那些化合物或其药学上可接受的盐 式中A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1和R2是选自下组的独立取代基H，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C2-C6链烯基，取代的C2-C6链烯基，C2-C6炔基，取代的C2-C6炔基，C3-C8环烷基，取代的C3-C8环烷基，芳基，取代的芳基，杂环，取代的杂环，CORA，或NRBCORA；或R1和R2稠合形成选自a)，b)或c)的螺环，每个螺环可任选地被1-3个C1-C3烷基取代a)3-8元螺环烷基环；b)3-8元螺环链烯基环；或c)任选取代的3-8元杂环，它含有1-3个选自下组的杂原子O、S和N；a)，b)和c)的螺环可任选地被选自下组的1-4个基团取代氟，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，-CF3，-OH，-CN，NH2，-NH(C1-C6烷基)，或-N(C1-C6烷基)2；RA是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基，RB是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基，R3是H，OH，NH2，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C3-C6链烯基，取代的C1-C6链烯基，或CORC，RC是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基，R4是如下所示含有取代基X、Y、和Z的三取代苯环 X选自下组卤素，CN，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3硫代烷氧基，取代的C1-C3硫代烷氧基，氨基，C1-C3氨烷基，取代的C1-C3氨烷基，NO2，C1-C3全氟烷基，含1-3个杂原子的5或6元环，CORD，OCORD，或NRECORD；RD是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基；RE是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基；Y和Z是选自下组的独立取代基H，卤素，CN，NO2，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基，或C1-C3硫代烷氧基；或者R4是含1、2或3个选自下组的杂原子的5或6元环O，S，SO，SO2或NR5，并且含1-2个选自下组的独立取代基H，卤素，CN，NO2，和C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，CORF，或NRGCORF；RF是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基；RG是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基；R5是H或C1-C3烷基；W是O或化学键。
当W是化学键时，应理解，式I以如下形式存在 优选抗孕激素化合物是那些下式化合物，或其药学上可接受的盐 式中A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1是H，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C3-C8环烷基，取代的C3-C8环烷基，芳基，取代的芳基，杂环，取代的杂环，CORA，或NRBCORA；R2是H，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C2-C6链烯基，取代的C2-C6链烯基，C3-C8环烷基，取代的C3-C8环烷基，芳基，取代的芳基，杂环，取代的杂环，CORA，或NRBCORA；或者R1和R2稠合形成如上所述的任选取代的3-8元螺环烷基，链烯基或杂环；RA是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基；RB是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基，R3是H，OH，NH2，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C3-C6链烯基，取代的C1-C6链烯基，或CORC；RC是H，C1-C4烷基，取代的C1-C4烷基，芳基，取代的芳基，C1-C4烷氧基，取代的C1-C4烷氧基，C1-C4氨烷基，或取代的C1-C4氨烷基；R4是如下所示的含取代基X、Y和Z的三取代苯环 X选自卤素，CN，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3硫代烷氧基，取代的C1-C3硫代烷氧基，C1-C3氨烷基，取代的C1-C3氨烷基，NO2，C1-C3全氟烷基，含1-3个杂原子的5元杂环，CORD，OCORD，或NRECORD；RD是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基；
RE是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基；Y和Z是选自下组的独立取代基H，卤素，CN，NO2，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基，或C1-C3硫代烷氧基；或者R4是含1、2或3个选自下组的杂原子的5或6元环O，S，SO，SO2或NR5，并且含1-2个选自下组的独立取代基H，卤素，CN，NO2，和C1-C3烷基，或C1-C3烷氧基；R5是H或C1-C3烷基；W是O或化学键。
另外，更优选的抗孕激素化合物是那些下式化合物或其药学上可接受的盐 式中A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1＝R2并选自下组C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，或通过稠合R1和R2形成3-6元螺环所构成的螺环烷基；R3是H，OH，NH2，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，或CORC；RC是H，C1-C4烷基，或C1-C4烷氧基；R4是如下所示含取代基X和Y的二取代苯环 X选自下组卤素，CN，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基，NO2，C1-C3全氟烷基，含1-3个杂原子的5元杂环，或C1-C3硫代烷氧基；Y是在4’或5’位上的选自下组的取代基H，卤素，CN，NO2，C1-C3烷氧基，C1-C4烷基，或C1-C3硫代烷氧基；或者R4是具有如下结构的5元环 U是O，S，或NR5；R5是H，或C1-C3烷基，或C1-C4CO2烷基；X’选自卤素，CN，NO2，C1-C3烷基，或C1-C3烷氧基；Y’选自H和C1-C4烷基；或者R4是具有如下结构的6元环 X1是N或CX2；X2是卤素，CN或NO2。更优选的抗孕激素化合物包括那些下式化合物，或其药学上可接受的盐 式中，A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1＝R2并选自CH3和通过稠合R1和R2形成6元螺环所构成的螺环烷基；R3是H，OH，NH2，CH3，取代的甲基，或CORC；RC是H，C1-C3烷基，或C1-C4烷氧基；R4是如下所示含取代基X和Y的二取代苯环 X是卤素，CN，甲氧基，NO2，或2-噻唑；Y是在4’或5’位且选自下组的取代基H和F；或者R4是具有如下结构的5元环 U是O，S，或NH；X’是卤素，CN，或NO2；Y’是H或C1-C4烷基；W是O或化学键。
本发明的抗孕激素化合物可含有不对称碳原子，且本发明的一些化合物可含有一个或多个不对称中心，并因此可以有光学异构体和非对映体。虽然式I并未以立体化学显示，但本发明包括这些光学异构体和非对映体；以及外消旋的和拆解的对映体纯R和S的立体异构体；以及R和S立体异构体的其他混合物和它们药学上可接受的盐。
本文所用的术语“烷基”指直链或支链饱和的、含有1-8个碳原子(较佳地1-6个碳原子)的脂族烃类基团；“链烯基”包括含有至少一个碳碳双键和2-8个碳原子(较佳地2-6个碳原子)的直链和支链烃基；“炔基”包括含有至少一个碳碳三键和2-8个碳原子(较佳地2-6个碳原子)的直链和支链烃基。
术语“取代的烷基”、“取代的链烯基”和“取代的炔基”指被一个或多个选自下组的取代基所取代的上述烷基、链烯基和炔基卤素、CN、OH、NO2、氨基、芳基、杂环、取代的芳基、取代的杂环、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、芳硫基。这些取代基可连接于烷基、链烯基或炔基基团的任何碳原子上，但条件是这种连接构成稳定的化学结构部分。
本文的术语“芳基”指芳族体系，可以是单环或原本稠合的或连接在一起的多芳环，从而使至少一部分稠合或连接的环形成共轭的芳系。芳基基团包括(但不限制于)苯基、萘基、联苯基、蒽基、四氢萘基、菲基。
术语“取代的芳基”指被1-4个选自下组的基团所取代的上述芳基卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、环烷基、链烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基或芳硫基。
本文所用的术语“杂环”指稳定的4-7元单环或稳定的多环杂环，该杂环可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的，且由碳原子和选自以下的1-4个杂原子构成N、O和S原子。N和S原子可以被氧化。杂环还可包括任何多环，其中任一上述杂环可稠合于芳环。该杂环还可连接于任何杂原子或碳原子，但条件是所生成的结构必须是化学稳定的。这些杂环基团包括例如，四氢呋喃、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌啶基、吖庚因基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、异噁唑基、吗啉基、吲哚基、喹啉基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜和异喹啉基。
本文所用的术语“取代的杂环”指被以下1-4个取代基所取代的上述杂环卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代的烷基、环烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、或芳硫基。本文所用的术语“烷氧基”指OR基团，其中R是烷基或取代的烷基。本文所用的术语“芳氧基”指OR基团，其中R是芳基或取代的芳基。本文所用的术语“烷基羰基”指RCO基团，其中R是烷基或取代的烷基。本文所用的术语“烷基羧基”指COOR基团，其中R是烷基或取代的烷基。术语“氨烷基”指仲胺或叔胺，其中含有1-8个碳原子的烷基或取代的烷基可以是相同或不同的，且连接点是在氮原子上。“卤素”指Cl、Br、F或I。
本发明的抗孕激素化合物可以以由药学上或生理学可接受的酸或碱衍生的盐形式使用。这些盐包括(但不限于)与如下无机酸形成的盐如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸，以及与有机酸形成的盐，而有机酸则指乙酸、草酸、丁二酸和马来酸。其他盐包括与碱金属或碱土金属(如钠、钾、钙或镁)形成的盐，以酯、氨基甲酸酯或其他常规的“前体药物”的形式(当以这种形式给药时，在体内可转化成活性部分)。
这些方法可用于避孕，或者治疗或预防继发闭经，功能失调性出血、子宫平滑肌瘤、子宫内膜异位；多囊性卵巢综合症，子宫粘膜、卵巢、乳腺、结肠、前列腺的癌和腺癌，或者减少周期性经血的副作用。本发明的其他用途包括促进摄食。
当化合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，如溶剂、稀释剂等，而且可以用如下形式口服给药片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液(含有如约0.05-5％悬浮剂)、糖浆(含有如约10-50％糖)、和酏剂(含有约20-50％乙醇)，或者以无菌可注射溶液或悬浮液形式(在等渗介质中含有约0.05-5％悬浮剂)进行非肠胃给药。例如，这些药物制剂可含有与载体混合的约25-90％，通常约为5％-60％(重量)的活性成分。
本方法和方案中这些活性成分可通过口服以及静脉内、肌内或皮下途径给药。固态载体包括淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂，如维生素E、维生素C、BHT和BHA。
从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。化合物的口服给药是优选的。
这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性化合物(作为游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬浮液。还可在甘油、液体、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物生长。
适应于注射的药物形式包括无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射溶液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物(如细菌和真菌)的污染影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、它们的适当混合物和植物油。
本发明的抗孕激素化合物可用下列所示流程进行制备如流程I所示，通常可通过利用合适的偶联反应作为最后步骤来制备本发明的抗孕激素化合物。在惰性气氛如氩气或氮气中，在-78至室温下，适当取代的邻-氨基酸或其衍生物，如乙酯(x＝Br，I，Cl，或潜在的偶联前体，如烷氧基，它能转化为偶联反应中合适的OTf基团)，用合适的有机金属试剂(如Grignard试剂)，在合适的非质子性溶剂(nonprotic solvents)(包括但并不限于THF或乙醚)中进行处理，形成邻-氨基甲醇2。使甲醇2闭环以形成噁嗪-2-酮3通常是用缩合剂如羰二咪唑、光气、碳酸二甲酯或碳酸二乙酯，在合适的非质子性溶剂(如THF)，在室温至65℃下实现。用各种偶联反应(包括Suzuki反应和Stille反应等)，可实现噁嗪-2-酮3的芳基化，从而形成化合物4。这些反应通常在过渡金属催化剂存在下进行，例如，通常与膦配基(如Ph3P，1，1’-双(二苯膦基)二茂铁，1，2-双(二苯膦基)乙烷)形成的钯和镍复合物，或诸如乙酸钯之类的钯盐。在这种催化条件下，适当取代的亲核试剂(如芳基硼酸、芳基锡烷或芳基锌化合物)与噁嗪酮3偶联，生成化合物4。如果反应中需要碱，通常使用的碱包括(但不限制于)碳酸氢钠、碳酸钠、磷酸钾、碳酸钡、乙酸钾或氟化铯。在这些反应中最常用的溶剂包括苯、DMF、异丙醇、乙醇、DME、乙醚、丙酮或任一上述溶剂与水的混合物。通常在惰性气氛(如氮气或氩气)中，在从室温到95℃的温度下，进行偶联反应。噁嗪酮3可被转变成亲核试剂如硼酸(boronicacid)，后者与合适的亲电试剂(如芳基溴或芳基碘)采用上述的偶联反应条件偶联可得到6。 在-78℃至室温，在惰性气氛(如氩气或氮气)下，通过在非质子性溶剂(如THF或乙醚)中用有机金属试剂(如正丁基锂)处理3，然后用合适的亲电试剂(如硼酸三甲酯、硼酸三异丙酯、双六烷基锡(bishexalkyl tin)试剂或氯化锌)淬灭反应溶液，可将3转变为5。在惰性气氛(如氩气或氮气)下，在溶剂沸点温度下，通过用在合适非质子性溶剂(如甲苯、氯苯、苯或二甲苯)中的合适硫试剂如P2S5或Lawesson试剂处理6，可以轻易地将氨基甲酸酯6转变为硫代氨基甲酸酯7。
流程II描述了在4位具有两个不同取代基的噁嗪酮的制备程序。当在质子性溶剂(如乙醇或异丙醇)中，在惰性气氛(如氩气或氮气)和回流温度下，用N-，O-二甲基羟基胺盐酸盐处理时，可从合适取代的N-羧氨基苯甲酸酐制得Weinreb酰胺9。将酰胺9与芳基亲电子试剂如芳基硼酸或芳基锡烷偶联以形成10，可以通过采用典型的偶联反应(如Suzuki，Stille偶联程序)，按与制备噁嗪酮4中所述的类似方式进行。在惰性气氛(如氩气或氮气)下，在-78℃到室温的温度范围，用有机金属化合物(如烷基锂、炔基锂、芳基锂，或它们的Grignard对应物)，在非质子性溶剂(如THF或乙醚)中处理Weinreb酰胺10，生成氨基酮11。在惰性气氛(如氩气或氮气)下，-78℃至室温的温度范围，在非质子性溶剂(如THF或乙醚)中，用有机金属试剂(如烷基、炔基或芳基Grignard化合物)处理10，可将酮11转化成甲醇12。也可在惰性气氛下，0℃至溶剂沸点的温度范围，在合适的溶剂(如THF、乙醚或无水乙醇)中，用适当的还原剂(如氢化铝锂、硼氢化钠)将11的酮基团还原成12的甲醇部分，从而将酮11转化成甲醇12。可用缩合剂如羰二咪唑、光气、碳酸二甲酯或碳酸二乙酯，在合适的非质子性溶剂(如THF)，在室温至65℃下，使甲醇12闭环以形成本发明化合物13。在惰性气氛(如氩气或氮气)下，在溶剂沸点温度下，通过用在合适非质子性溶剂(如甲苯、氯苯、苯或二甲苯)中的合适硫试剂如P2S5或Lawesson试剂处理13，可以轻易地将氨基甲酸酯13转变为硫代氨基甲酸酯14。
流程II 或者，如流程III所示，还可在惰性气氛(如氩气或氮气)下，-78℃至室温的温度范围，在合适溶剂(THF或乙醚)中，用有机金属化合物(如有机锂试剂或Gringard试剂)处理邻-氨基腈16，从而制得邻氨基酮11。按与制备Weinreb酰胺10相似的方式，用合适的偶联反应(如Stille或Suzuki流程)，从适当取代的腈(如溴代苄腈15)可轻易制得腈16。 下列不起限定作用的实施例阐述了用于本发明的化合物的制备。
实施例12-氨基-5-溴-3-吡啶羧酸在氮气和室温下，向2-氨基-烟酸(10g，72.5mmol)的乙酸(70mL)溶液滴加溴(9.8mL，79.8mmol)。反应结束后，真空去除溶剂，残留物与乙醚一起研磨，过滤收集，得到2-氨基-5-溴-3-吡啶羧酸为黄色固体(15.7g，99％)mp 272℃，(分解的)；1H-NMR(DMSO-d6)δ8.8-7.8(bs，2H)，8.44(d，1H，J＝2.48Hz)，8.34(d，1H，J＝2.48Hz)；MS(EI)m/z 216/218([M+]+，100％)实施例22-(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-丙-2-醇在氮气下，于0℃，向2-氨基-5-溴-3-吡啶羧酸(5g，23mmol)的THF(70mL)溶液，加入溴化甲基镁(13.7g，115mmol)。加入后，在65℃加热反应混合物12小时，冷却至室温，用饱和氯化铵水溶液淬灭。加入乙酸乙酯，分离有机层，用硫酸钠干燥并浓缩，残留物通过快速色谱法纯化，得到2-(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-丙-2-醇为黄色固体(1.2g，23％)mp107-108℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ7.89(d，1H，J＝2.3Hz)，7.40(d，1H，J＝2.3Hz)，6.28(bs，2H)，5.51(s，1H)，1.4(s，6H)；MS(APCI)m/z 231([M+H]+，100％)。
实施例36-溴-4，4’-二甲基-1，4-二氢-3-氧杂-1，8-二氮杂-萘-2-酮将2-(2-氨基-5-溴-吡啶-3-基)-丙-2-醇(0.86g，3.7mmol)和1，1’-羰基二咪唑(过量)在THF(10mL)中的混合物，在35℃加热过夜。将反应溶液冷却至室温，倒入乙酸乙酯(200mL)，用1 N HCl(2×50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。残留物通过快速色谱法(硅胶，25％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到6-溴-4，4’-二甲基-1，4-二氢-3-氧杂-1，8-二氮杂-萘-2-酮(0.9g，94％)，为白色固体mp 251-252℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ10.9(s，1H)，8.32(d，1H，J＝2.19Hz)，8.0(d，1H，J＝2.22Hz)，1.6(s，6H)；MS(EI)m/z 256([M]+，80％)；C9H9BrN2O2的分析值C，42.05，H，3.53，N，10.90.实测值C，42.15，H，3.65，N，10.80.
实施例46-(3-氯-苯基)-4，4-二甲基-1，4-二氢-3-氧杂-1，8-二氮杂-萘-2-酮将6-溴-4，4’-二甲基-1，4-二氢-3-氧杂-1，8-二氮杂-萘-2-酮(0.1g，0.39mmol)，3-氯苯基硼酸(0.075g，0.47mmol)，四(三苯基膦)合钯(O)(0.023g，0.02mmol)，和碳酸钠(0.1g，0.94mmol)在DME(8mL)和水(5mL)中的混合物，在氮气覆盖层下，于50℃放置15分钟，然后在85℃加热30分钟。反应冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)。有机层用氯化铵溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。将产物溶解在二氯甲烷，然后通过酸式硅酸镁(magnesol)塞。除去溶剂，将获得的透明油与乙醚(25mL)一起研磨，得到6-(3-氯-苯基)-4，4-二甲基-1，4-二氢-3-氧杂-1，8-二氮杂-萘-2-酮，为白色固体(0.087g，80％)mp 214-215℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ10.9(s，1H)，8.56(d，1H，J＝2.35Hz)，8.06(d，1H，J＝2.35Hz)，7.86(t，1H，J＝2.35Hz)，7.72(td，1H，J＝9.4，2.35Hz)，7.54-7.44(m，2H)，1.69(s，6H)；MS(ESI)m/z 289([M+H]+，100％)；C17H17NO3的分析值C，62.40，H，4.54，N，9.70.实测值C，60.53，H，4.40，N，9.21。
实施例56-氯-3-硝基-吡啶-2-甲腈将2，6-二氯-3-硝基吡啶和氰化亚铜在1-甲基-2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)中的混合物快速加热至180℃，并在该温度下强力搅拌维持15分钟。将混合物冷却至-10℃，将深棕色溶液倒入冰水(3.5L)，搅拌30分钟。收集绒毛状的棕色沉淀物，用水洗涤。干燥1.5小时后，用沸腾的甲苯(3×300mL)萃取潮湿的固体。合并的甲苯提取物用水和盐水洗涤，并干燥(MgSO4)，浓缩。粗产物用乙酸乙酯/己烷结晶，得到标题化合物mp115-117℃；1H NMR(DMSO-d6)δ8.16(dd，1H，J＝8.7，3.0Hz)，8.82(d，1H，J＝9.0Hz)；MS(EI)m/z183/185(M+H)+；C6H2ClN3O2的分析值C，39.26，H，1.10，N，22.89实测值C，39.47，H，1.38，N，22.77。
实施例63-氨基-6-氯-吡啶-2-甲腈向2，6-二氯-3-硝基吡啶(4.8g，26.15mmol)在甲醇(60mL)和浓盐酸(25mL)中的溶液，缓慢加入铁粉(5.12g，91.53mmol)。添加结束后，混合物回流45分钟，然后倒入700mL H2O。对形成的浆料进行过滤，得到暗黄色固体。用浓氨水使滤液成为碱性，过滤形成的浆料，用乙醚萃取固体和滤液。合并的萃取物被干燥(MgSO4)并蒸发，得到标题化合物，为奶油色固体(2.8g，58％)熔点162-165℃，它不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
实施例71-(3-氨基-6-氯-吡啶-2-基)-乙酮在氮气下，向3-氨基-6-氯-吡啶-2-甲腈(0.75g，4.88mmol)的无水THF(25mL)溶液中加入溴化甲基镁(3M乙醚溶液，8.1mL，24.3mmol)。搅拌反应混合物30分钟，然后用水缓慢地淬灭，用5N HCl溶液进行处理。混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，有机萃取物用盐水洗涤，并干燥(MgSO4)。在去除溶剂后，残留物通过色谱法进行纯化，其中用乙酸乙酯/己烷混合物(1∶3)作为洗脱液，得到标题化合物，为绿色结晶固体(0.71g，85％)mp108-110℃.1H NMR(DMSO-d6)δ2.51(s，3H)，7.28-7.39(m，4H)；MS(ESI)m/z 171/173(M+H)+；C7H7ClN2O的分析值C，49.28，H，4.14，N，16.14.实测值C，49.70，H，4.03，N，16.41.
实施例81-(3-氨基-6-氯-吡啶-2-基)-丙-2-醇在氮气下，向1-(3-氨基-6-氯-吡啶-2-基)-乙酮的无水THF溶液中，加入溴化甲基镁溶液(3N乙醚溶液)。形成的反应混合物在室温下搅拌4小时，用水缓慢地淬灭，用0.5N HCl处理，然后搅拌30分钟，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩并层析(使用乙酸乙酯/己烷(3.5∶6.5)混合物)，得到标题化合物，为白色晶体(0.45g，82％)mp118-121℃.1H NMR(DMSO-d6)δ1.45(s，6H)，3.35(s，1H)，5.51(s，1H)，5.68(s，1H)，7.02(s，1H)；MS((+)APCI)m/z187/189(M+H)+；C8H11ClN2O的分析值C，51.48，H，5.94，N，15.01.实测值C，51.22，H，5.99，N，14.47.
实施例96-氯-4，4-二甲基-1，4-二氢-3-氧杂-1，5-二氮杂-萘-2-酮向1-(3-氨基-6-氯-3-硝基-吡啶-2-基)-丙-2-醇(0.3g，1.67mmol)的无水THF(20mL)溶液中，加入1，1’-羰基二咪唑(0.68g，4.12mmol)的无水THF(10mL)溶液。回流加热反应混合物3小时。用0.5N HCl处理，用盐水和水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩和用乙酸乙酯/己烷结晶，获得标题化合物，为白色晶状固体(0.2g，56％)mp175-178℃.1H NMR(DMSO-d6)δ1.60(s，6H)，7.30(d，1H，J＝8.41Hz)，7.41(d，1H，J＝8.41Hz)，10.47(s，1H)；MS((+)APCI)m/z 213(M+H)+；C9H9ClN2O2的分析值C，50.84，H，4.27，N，13.17.实测值C，50.99，H，4.28，N，12.98。
实施例10将本发明的化合物用如下所述的相关试验进行测试，在体外试验中它们的效力范围为0.01nM到5μM，在体内试验中为0.001-300mg/kg。选定的例子是实施例4。 实施例4，hPR CV-1，IC50＝0.8μMA.体外生物学通过以下方法测定体外生物学(1)竞争性放射性配体结合用带有黄体酮作为放射性配体的A型人黄体酮受体；(2)共转染试验，可提供以促效剂EC50和拮抗剂IC50值表达的功能性活力；(3)T47D细胞增殖，这是提供促效剂和拮抗剂数据的另一种功能性试验；和(4)T47D细胞碱性磷酸酯酶试验，这也是一种提供促效剂和拮抗剂数据的功能性试验。
1.hPR结合试验参考Pathirana，C.；Stein，R.B.；Berger，T.S.；Fenical，W.；Ianiro，T.；Mais，D.E.；Torres，A.；Glodman，M.E.，“来自海藻cymoplia barbata的非甾类人黄体酮受体调制剂”，J.SteroidBiochem.Mol.Biol.，1992，41，733-738进行。
2.CV-1细胞中的PRE-荧光素酶试验本试验的目的是基于化合物在用人PR和PRE-荧光素酶质粒共转染的CV-1细胞中对PRE-荧光素酶报道分子活性的影响，确定化合物的促孕或抗孕效果。本试验中所用的材料如下a.培养基生长培养基如下含有10％(v/v)胎牛血清(热失活)、0.1mM MEM非必需氨基酸、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的DMEM(BioWhittaker)。试验培养基如下含有10％(v/v)活性碳解吸的胎牛血清(热灭活)、0.1mM MEM非必需氨基酸、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的无酚红DMEM(BioWhittaker)。
b.细胞的培养、转染、处理和荧光素酶试验将CV-1细胞原液维持在生长培养基中。用1.2×107个细胞、5mg pLEM质粒(在Sph1和BamH1位点插入hPR-B)、10mgpGL3质粒(在荧光素酶序列上游有两个PRE)，和50mg超声处理过的小牛胸腺DNA作为载体DNA(250ml)，进行共转染。
用Biorad Gene Pulser II在260V和1,000mF进行电穿孔。电穿孔后，将细胞重悬浮于生长培养基，并在96孔板上以40,000个细胞/孔(200μl)接种。培养过夜后，将培养基换成试验培养基。然后在试验培养基中用对照或测试化合物处理这些细胞。在3nM黄体酮时测定化合物的避孕活性。处理24小时后，弃去培养基，用D-PBS(GIBCO，BRL)洗涤这些细胞3次。各孔加入50μl细胞裂解缓冲液(Promega，Madison，WI)，平板在滴定平板振荡器(Lab Line Instrument，Inc)上振荡15分钟。用Promega的荧光素酶试剂测定荧光素酶的活性。
c.结果分析各种处理重复至少4次。用对数换算的数据分析匹配于促效剂和拮抗剂模式的方差和非线性剂量应答曲线。用Huber加权法降低非正常值(outlier)的影响。用重新换算的数值计算EC50或IC50。在方差和非线性应答分析的两个单向分析中，使用JMP软件(SAS Institute，Inc.)。
d.对照化合物黄体酮和曲美孕酮(trimegestone)作为对照孕激素，RU486作为对照抗孕激素。所有对照化合物都在全剂量应答曲线中进行试验，并计算EC50或IC50值。表1.三个独立研究中对照孕激素的预计EC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)EC5095％CI化合物实验(nM)SE下限上限黄体酮 1 0.616 0.026 0.509 0.7462 0.402 0.019 0.323 0.5013 0.486 0.028 0.371 0.637曲美孕酮 1 0.0075 0.0002 0.0066 0.00852 0.0081 0.0003 0.0070 0.00943 0.0067 0.0003 0.0055 0.0082表2.三个独立研究中抗孕激素RU486的预计IC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)IC5095％CI化合物实验(nM)SE下限上限RU486 10.028 0.002 0.019 0.04220.037 0.002 0.029 0.04830.019 0.001 0.013 0.027促孕活性与对照载体相比，使PRE-荧光素酶活性显著增加(p＜0.05)的化合物认为是有活性的。
抗孕活性显著降低3nM黄体酮诱导的PRE-荧光素酶的活性(p＜0.05)的化合物。
EC50能增加PRE-荧光素酶活性最大值一半时，化合物的浓度(默认为“nM”)及标准偏差。
IC50能降低3nM黄体酮诱导的PRE-荧光素酶活性最大值一半时，化合物的浓度(默认为“nM”)及标准偏差。
3.T47D细胞的增殖实验本实验的目的是用T47D细胞的细胞增殖实验来测定促孕和抗孕的效力。测定化合物对T47D细胞中DNA合成的作用。以下为本实验所用的材料和方法a.生长培养基补充有10％(v/v)胎牛血清(未加热失活)、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的DEME∶F12(1∶1)(GIBCO，BRL)。
b.处理培养基补充有0.5％活性碳解吸的胎牛血清、100U/ml青霉素、200mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的无酚红的极限必需培养基(MEM)(#51200-038 GIBCO，BRL)。
c.细胞培养将T47D细胞原液维持在生长培养基中。对BrdU掺入实验而言，将细胞以10,000个细胞/孔的量(在生长培养基中)将细胞置于96孔板(Falcon，BectonDickinson Labware)中。培养过夜后，将培养基换成处理培养基，在处理前再培养这些细胞24小时。将化合物原液溶解于适当的载体(100％乙醇或50％乙醇/50％DMSO)中，然后用处理培养基稀释，加给细胞。孕激素和抗孕激素对照化合物均以全剂量-响应曲线方式进行试验。载体的终浓度为0.1％。在对照孔中，细胞仅接受载体。在0.03nM曲美孕酮(对照孕激素促效剂)存在下测定抗孕激素。处理24小时后，弃去培养基，用10mM BrdU(Amersham Life Science，ArlingtonHeights，IL)在处理培养基中标记细胞4小时。
d.细胞增殖实验当BrdU标记结束时，弃去培养基，按供应商的说明，用细胞增殖ELISA试剂盒(#RPN 250，Amersham Life Science)测定BrdU的掺入。简而言之，将细胞在含有固定剂的乙醇中固定30分钟，然后在封阻缓冲液中培养30分钟以降低背景。将过氧化物酶标记的抗BrdU抗体加到孔中，培养60分钟。用PBS漂洗细胞3次，用3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)底物培养10-20分钟(取决于所测试的化合物的效力)。然后在各孔中加入25μl 1M硫酸以终止显色反应，5分钟内在450nm处用平板读数仪读取光密度。
e.结果分析用平方根换算的数据，分析匹配于促效剂和拮抗剂模式的方差和非线性剂量应答曲线。用Huber加权法降低非正常值的影响。由重新换算的数值计算EC50或IC50。在单向的方差和非线性剂量应答分析的单剂量和剂量应答分析中，使用JMP软件(SAS Institute，Inc.)。
f.对照化合物曲美孕酮和甲羟孕酮醋酸酯(MPA)作为对照孕激素，RU486作为对照抗孕激素。所有对照化合物以全剂量应答曲线方式进行试验，并计算EC50或IC50值。
表3.各研究中的预计EC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)EC5095％CI化合物实验(nM) SE 下限 上限曲美孕酮10.0170.0030.0070.04020.0140.0010.0110.01730.0190.0010.0160.024MPA 10.0190.0010.0130.02720.0170.0010.0110.024表4.抗孕激素RU486的预计IC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)IC5095％CI化合物 实验(nM) SE下限 上限RU4861 0.0110.001 0.008 0.0142 0.0160.001 0.014 0.0203 0.0180.001 0.014 0.022EC50能增加BrdU掺入量最大值一半时化合物的浓度和标准偏差；IC50能使0.1曲美孕酮诱导的BrdU掺入量减少最大值一半时化合物的浓度和标准偏差。
4.T47D细胞碱性磷酸酶实验本实验的目的是通过测定化合物对T47D细胞中碱性磷酸酶酶活性的作用，来鉴定孕激素或抗孕激素。以下为本实验所用的材料和方法。
a.培养基补充有5％(v/v)活性碳解吸的胎牛血清(未加热失活)、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的DMEM∶F12(1∶1)(GIBCO，BRL)。
b.碱性磷酸酶实验缓冲液I.0.1M Tris-HCl，pH 9.8，含有0.2％Triton X-100II.0.1M Tris-HCl，pH 9.8，含有4mM磷酸对-硝基苯酯(Sigma)c.细胞培养和处理将冷冻的T47D细胞在37℃水浴中解冻，并用培养基稀释至280,000个细胞/ml。在96孔板(Falcon，Becton Dickinson Labware)的各孔中加入180μl稀释的细胞悬浮液。然后在各孔中加入20μl以培养基稀释的对照或测试化合物。当测试孕激素拮抗剂活性时，在1nM黄体酮存在下加入对照抗孕激素或测试化合物。在37℃，5％CO2/湿润气氛中培养这些细胞24小时。
d.碱性磷酸酶酶实验在处理结束时，弃去平板中的培养基，在各孔中加入50μl实验缓冲液I。将这些平板在滴定板振荡器上振荡15分钟。然后将150μl实验缓冲液II加到各孔中。在405nM测试波长，以5分钟为间隔测定光密度共30分钟。
e.结果分析分析剂量应答数据对参考和测试化合物，以剂量(X-轴)对酶反应的速度(斜率)(Y-轴)绘制剂量应答曲线。平方根换算的数据，用于分析匹配于促效剂和拮抗剂模式的方差和非线性剂量应答曲线。用Huber加权法降低非正常值的影响。由重新换算的数值计算EC50或IC50。在单向的方差和非线性应答分析的单剂量和剂量应答分析中，使用JMP软件(SAS Institute，Inc.)。
f.对照化合物黄体酮和曲美孕酮作为对照孕激素，RU486作为对照抗孕激素。所有对照化合物都以全剂量应答曲线方式进行试验，并计算EC50或IC50值。表5.三次独立实验中对照孕激素的预计EC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)EC5095％CI化合物实验(nM)SE下限上限黄体酮 1 0.839 0.030 0.706 0.9962 0.639 0.006 0.611 0.6693 1.286 0.029 1.158 1.429曲美孕酮 1 0.084 0.002 0.076 0.0912 0.076 0.001 0.072 0.0803 0.160 0.004 0.141 0.181
表6.三次独立实验中对照抗孕激素RU486的预计IC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)IC5095％CI化合物实验(nM) SE 下限 上限RU486 1 0.1030.0020.0920.1152 0.1200.0010.1150.1263 0.0940.0070.0660.134B.体内生物学用大鼠蜕膜化模型进行最初的体内实验，它可用于测定促效剂和拮抗剂的促孕作用。二级体内实验是用大鼠排卵抑制模型，由于该模型尚还处于开发阶段因此未能获得详细报告。
1.大鼠蜕膜化实验本流程的目的是评估孕激素和抗孕激素对大鼠子宫蜕膜化的作用，并对各种测试化合物的相对效力进行比较。以下为所用的材料和方法a.方法将测试化合物溶解于100％乙醇中，并与玉米油(载体)混合。然后通过加热(～80℃)此混合物以蒸发掉乙醇，从而制备在油(MazolaTM)中的测试化合物原液。随后在处理动物之前，用100％玉米油或10％乙醇(在玉米油中)稀释测试化合物。当这两种载体相比较时，未发现蜕膜应答间的差异。
b.动物(RACUC流程#5002)在手术后，从Taconic(Taconic Farms，NY)得到切除卵巢的成年雌性Sprague-Dawley大鼠(～60天龄和230g)。在处理前至少10天进行卵巢切除以降低循环系统中的性类固醇。将这些动物关养在12小时光亮/黑暗循环的房间内，并喂以标准大鼠饲料并任意给水。
c.处理在处理前将大鼠称重并随机分组，每组4或5只。用含有测试化合物的0.2ml载体皮下注射大鼠的颈背，或以管饲法用0.5ml载体进行。每天处理这些动物1次，共7天。在测试抗孕激素时，在处理的前3天动物接受测试化合物和EC50剂量的黄体酮(5.6mg/kg)。在蜕膜刺激后，动物依旧接受黄体酮直至4天后解剖尸体。
d.剂量按基于mg/kg平均组体重制备剂量。在所有研究中，包括仅接受载体的对照组。用半对数增加值确定剂量应答曲线(如0.1、0.3、1.0、3.0mg/kg...)。
e.蜕膜诱发第三次注射后约24小时，通过用21G针刮擦反子宫膜(antimesometrial)腔内皮，从而在子宫的一个角诱发蜕膜。对角不进行刮擦从而作为未受刺激的对照。在最终处理约24小时后，通过CO2窒息处死大鼠，测量体重。取出子宫，清理掉脂肪。分别称重蜕膜(D-角)和对照(C-角)子宫角。
f.结果分析由D-角/C-角计算蜕膜子宫角重量的增加，并用对数转换使方差的正态性和同质性最大化。用Huber M-估计量来降低剂量应答曲线拟合和方差单向分析中所观察到的非正常的转换值的影响。在单向ANOVA和非线性应答分析中，使用JMP软件(SAS Institute，Inc.)。
g.对照化合物将所有孕激素对照化合物都以全剂量应答曲线方式进行试验，并计算对于子宫湿重的EC50值。
表7.各实验的预计EC50、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)EC5095％CI化合物 实验 (mg/kg，s.c.)SE下限上限黄体酮 15.500.77 4.217.2026.211.12 4.418.763-酮去氧孕烯 10.110.02 0.070.16(3-Ketodesogestrel) 20.100.05 0.110.2530.060.03 0.030.14左炔诺孕酮10.080.03 0.040.1620.120.02 0.090.1730.090.02 0.060.1340.090.02 0.060.14MPA 10.420.03 0.290.6020.390.05 0.220.6730.390.04 0.250.61
表8.三种对照化合物的剂量应答曲线中的预计平均EC50、标准偏差和95％置信区间EC5095％CI化合物 (mg/kg，s.c.)SE下限上限黄体酮5.62 0.62 4.557.003-酮去氧孕烯 0.10 0.02 0.070.14左炔诺孕酮0.10 0.01 0.080.12表9.抗孕激素RU486的预计IC50、标准偏差和95％置信区间IC5095％CI化合物实验(mg/kg，p.o.)SE下限 上限RU 486 1 0.210.07 0.05 0.962 0.140.02 0.08 0.27浓度实验中化合物的浓度(默认为mg/kg体重)给药路径给予动物化合物的路径。
体重动物的平均总体重(默认为kg)。
D-角蜕膜化子宫角的湿重(默认为mg)。
C-角对照子宫角的湿重(默认为mg)。
蜕膜应答[(D-C)/C]×100％促孕活性与对照载体相比，能显著(p＜0.05)诱发蜕膜作用的化合物被认为是有活性的。
抗孕活性显著降低EC50黄体酮所诱发的蜕膜作用的化合物(p＜0.05)。
子宫重量的EC50使蜕膜应答最大值增加一半时的化合物浓度(默认为mg/kg)。
子宫重量的IC50使EC50黄体酮诱发的蜕膜应答最大值减小一半时的化合物浓度(默认为mg/kg)。
本文将所有引用的出版物都纳入作为参考。虽然本发明是以特别优选的实施例进行描述的，但应理解，可在不脱离本发明的精神情况下作一些改动。这些改动落于本发明所附的权利要求的范围。
权利要求
1.一种避孕方法，其特征在于，该方法包括将下列物质给予育龄妇女连续28天a)第一阶段，给予14-21个日剂量单位的促孕药，其促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮；b)第二阶段，给予1-11个日剂量单位的、日剂量约为2-50毫克的式I抗孕激素化合物或其药学上可接受的盐 式中A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1和R2是选自下组的独立取代基H，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C2-C6链烯基，取代的C2-C6链烯基，C2-C6炔基，取代的C2-C6炔基，C3-C8环烷基，取代的C3-C8环烷基，芳基，取代的芳基，杂环，取代的杂环，CORA，或NRBCORA；或R1和R2稠合形成选自a)，b)或c)的螺环，每个螺环可任选地被1-3个C1-C3烷基取代a)3-8元螺环烷基环；b)3-8元螺环链烯基环；或c)任选取代的3-8元杂环，它含有1-3个选自下组的杂原子O、S和N；a)，b)和c)的螺环可任选地被选自下组的1-4个基团取代氟，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，-CF3，-OH，-CN，NH2，-NH(C1-C6烷基)，或-N(C1-C6烷基)2；RA是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基，RB是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基，R3是H，OH，NH2，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C3-C6链烯基，取代的C1-C6链烯基，或CORC，RC是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基，R4是如下所示含有取代基X、Y、和Z的三取代苯环 X选自下组卤素，CN，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3硫代烷氧基，取代的C1-C3硫代烷氧基，氨基，C1-C3氨烷基，取代的C1-C3氨烷基，NO2，C1-C3全氟烷基，含1-3个杂原子的5或6元环，CORD，OCORD，或NRECORD；RD是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基；RE是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基；Y和Z是选自下组的独立取代基H，卤素，CN，NO2，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基，或C1-C3硫代烷氧基；或者R4是含1、2或3个选自下组的杂原子的5或6元环O，S，SO，SO2或NR5，并且含1-2个选自下组的独立取代基H，卤素，CN，NO2，和C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，CORF，或NRGCORF；RF是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基；RG是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基；Q是O，S，NR6，或CR7R8；R5是H或C1-C3烷基；W是O或化学键；c)任选的第三阶段，在28个连续日的剩余日给予药学上可接受的口服安慰剂，其中未给予抗孕激素、孕激素或雌激素；并且第一、第二和第三阶段的日剂量单位总数等于28。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该促孕药是左炔诺孕酮，抗孕激素化合物是具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐 式中A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1是H，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C3-C8环烷基，取代的C3-C8环烷基，芳基，取代的芳基，杂环，取代的杂环，CORA，或NRBCORA；R2是H，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C2-C6链烯基，取代的C2-C6链烯基，C3-C8环烷基，取代的C3-C8环烷基，芳基，取代的芳基，杂环，取代的杂环，CORA，或NRBCORA；或者R1和R2稠合形成如上所述的任选取代的3-8元螺环烷基，链烯基或杂环；RA是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基；RB是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基，R3是H，OH，NH2，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C3-C6链烯基，取代的C1-C6链烯基，或CORC；RC是H，C1-C4烷基，取代的C1-C4烷基，芳基，取代的芳基，C1-C4烷氧基，取代的C1-C4烷氧基，C1-C4氨烷基，或取代的C1-C4氨烷基；R4是如下所示的含取代基X、Y和Z的三取代苯环 X选自卤素，CN，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3硫代烷氧基，取代的C1-C3硫代烷氧基，C1-C3氨烷基，取代的C1-C3氨烷基，NO2，C1-C3全氟烷基，含1-3个杂原子的5元杂环，CORD，OCORD，或NRECORD；RD是H，C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，芳基，取代的芳基，C1-C3烷氧基，取代的C1-C3烷氧基，C1-C3氨烷基，或取代的C1-C3氨烷基；RE是H，C1-C3烷基，或取代的C1-C3烷基；Y和Z是选自下组的独立取代基H，卤素，CN，NO2，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基，或C1-C3硫代烷氧基；或者R4是含1、2或3个选自下组的杂原子的5或6元环O，S，SO，SO2或NR5，并且含1-2个选自下组的独立取代基H，卤素，CN，NO2，和C1-C3烷基，或C1-C3烷氧基；R5是H或C1-C3烷基；Q是O，S，NR6，或CR7R8；W是O或化学键。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该促孕药是左炔诺孕酮，抗孕激素化合物是具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐 式中A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1＝R2并选自下组C1-C3烷基，取代的C1-C3烷基，或通过稠合R1和R2形成3-6元螺环所构成的螺环烷基；R3是H，OH，NH2，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，或CORC；RC是H，C1-C4烷基，或C1-C4烷氧基；R4选自a)、b)或c)a)R4是下式所示的苯环 X选自下组卤素，CN，C1-C3烷氧基，C1-C3烷基，NO2，C1-C3全氟烷基，含1-3个杂原子的5元杂环，或C1-C3硫代烷氧基；Y是在4′或5′位上的选自下组的取代基H，卤素，CN，NO2，C1-C3烷氧基，C1-C4烷基，或C1-C3硫代烷氧基；或者b)R4是具有如下结构的5元环 U是O，S，或NR5；R5是H，或C1-C3烷基，或C1-C4CO2烷基；X′选自卤素，CN，NO2，C1-C3烷基，或C1-C3烷氧基；Y′选自H和C1-C4烷基；c)R4是具有如下结构的6元环 X1是N或CX2；X2是卤素，CN或NO2。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该促孕药是左炔诺孕酮，抗孕激素化合物是具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐 式中，A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1＝R2并选自CH3和通过稠合R1和R2形成6元螺环所构成的螺环烷基；R3是H，OH，NH2，CH3，取代的甲基，或CORC；RC是H，C1-C3烷基，或C1-C4烷氧基；R4是如下所示含取代基X和Y的二取代苯环 X是卤素，CN，甲氧基，NO2，或2-噻唑；Y是在4′或5′位且选自下组的取代基H和F；W是O或化学键。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该促孕药是左炔诺孕酮，抗孕激素化合物是具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐 式中，A，B和D是N或CH，条件是A，B和D不能都是CH；R1＝R2并选自CH3和通过稠合R1和R2形成6元螺环所构成的螺环烷基；R3是H，OH，NH2，CH3，取代的甲基，或CORC；RC是H，C1-C3烷基，或C1-C4烷氧基；R4是具有如下结构的5元环 U是O，S，或NH；X′是卤素，CN，或NO2；Y′是H或C1-C4烷基；W是O或化学键。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该抗孕激素化合物是6-(3-氯-苯基)-4，4-二甲基-1，4-二氢-3-氧杂-1，8-二氮杂-萘-2-酮，或其药学上可接受的盐。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该促孕药选自下组左炔诺孕酮、炔诺孕酮、去氧孕烯、3-酮去氧孕烯、炔诺酮、孕二烯酮、乙酸炔诺酮、诺孕酯、奥沙孕酮、乙酸环丙孕酮、曲美孕酮、地诺孕素、屈螺利酮、诺美孕酮或(17-脱乙酰基)诺孕酯。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法包括在28日周期内连续给予育龄女性下列物质a)第一阶段，给予21个日剂量单位的促孕药，促孕药的促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮；b)第二阶段，给予3个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素化合物，每个日剂量单位含有日剂量约为2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)可任选地在28日周期中第一和第二阶段后的每一日，给予4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂。
9.一种避孕方法，其特征在于，该方法包括在连续28日期间给予育龄女性下列物质a)第一阶段，给予18-21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围约为10-35微克；和b)第二阶段，给予1-7个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素，其日剂量约为2-50毫克；和c)可任选地在连续28日中剩余的每一日给予药学上可接受的口服安慰剂。
10.根据权利要求15所述的避孕方法，它包括在连续28天的时间内给予育龄妇女下列物质a)第一阶段，给予21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的促孕活性相当于约35-100微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇日剂量范围约为10-35微克；和b)第二阶段，给予3个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素，其日剂量约为2-50毫克；和c)可任选的第三阶段，给予4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂。
11.一种避孕方法，其特征在于，该方法包括在连续28日期间给予育龄妇女下列物质a)第一阶段，给予18-21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于约35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇日剂量范围约为10-35微克；和b)第二阶段，给予1-7个日剂量单位，各日剂量单位含有浓度为2-50毫克的权利要求1所述的抗孕激素和浓度约为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)可任选的第三阶段，给予日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂，日剂量单位总数为28。
12.根据权利要求11所述的避孕方法，其特征在于，该方法包括在连续28日期间给予育龄妇女下列物质a)第一阶段，给予21个日剂量单位，每个日剂量单位含有促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于约35-100微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围约为10-35微克；和b)第二阶段，给予3个日剂量单位，每个日剂量单位含有浓度为2-50毫克的权利要求1所述的抗孕激素和浓度约为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)可任选的第三阶段，给予4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂。
13.一种适合每日口服给药的药学上有用的药盒，其特征在于，它包含a)用于第一阶段的14-21个日剂量单位的促孕药，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮；b)用于第二阶段的1-11个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素化合物，每个日剂量单位含有日剂量约为2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)用于第三阶段的日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂；其中第一阶段、第二阶段和第三阶段的日剂量单位总数等于28。
14.根据权利要求13所述的适合每日口服给药的药学上有用的药盒，其特征在于，它包含a)用于第一阶段的21个日剂量单位的促孕药，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮；b)用于第二阶段的3个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素化合物，每个日剂量单位含有日剂量约为2-50毫克的抗孕激素化合物；和c)用于第三阶段的4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂。
15.一种适合每日口服给药的药学上有用的药盒，其特征在于，它包含a)用于第一阶段的18-21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围约为10-35微克；和b)用于第二阶段的1-7个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素，其日剂量约为2-50毫克；和c)用于第三阶段的0-9个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂；其中第一阶段、第二阶段和第三阶段中的日剂量单位总数等于28。
16.根据权利要求15所述的适合每日口服给药的药学上有用的药盒，其特征在于，它包含a)用于第一阶段的21个日剂量单位的促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的促孕活性相当于约35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围约为10-35微克；和b)用于第二阶段的3个日剂量单位的权利要求1所述的抗孕激素，其日剂量约为2-50毫克；和c)用于第三阶段的4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂。
17.一种适合每日口服给药的药学上有用的药盒，它包含a)用于第一阶段的18-21个日剂量单位，每个日剂量单位含有促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于约35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围约为10-35微克；b)用于第二阶段的1-7个日剂量单位，每个日剂量单位含有浓度为2-50毫克的权利要求1所述的抗孕激素和浓度约为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)用于第三阶段的0-9个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂；其中第一阶段、第二阶段和第三阶段中的日剂量单位总数等于28。
18.根据权利要求17所述的适合每日口服给药的药学上有用的药盒，它包含a)用于第一阶段的21个日剂量单位，每个日剂量单位含有促孕药和乙炔雌二醇，促孕药的日剂量在促孕活性上相当于约35-150微克左炔诺孕酮，乙炔雌二醇的日剂量范围约为10-35微克；b)用于第二阶段的3个日剂量单位，每个日剂量单位含有浓度为2-50毫克的权利要求1所述的抗孕激素和浓度约为10-35微克的乙炔雌二醇；和c)用于第三阶段的4个日剂量单位的药学上可接受的口服安慰剂。
全文摘要
本发明涉及将作为黄体酮受体拮抗剂的通式(I)的二氢吲哚衍生物或其药学上可接受的盐的循环组合疗法:式中,A,B和D是N或CH,但是不能都是CH;R
文档编号A61P15/18GK1349412SQ00807088
公开日2002年5月15日 申请日期2000年5月1日 优先权日1999年5月4日
发明者G·S·格拉布, 智林, T·K·琼斯, C·M·特格利, 张普文, A·芬森, E·A·捷烈弗柯, J·E·弗罗贝尔, A·A·桑蒂利, A·Q·维耶, J·P·爱德华兹 申请人:美国家庭用品有限公司, 莱加制药公司