嘧啶化合物的制作方法

专利名称：嘧啶化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯，它们具有细胞循环抑制活性并因此可使用其抗癌(如抗细胞增殖、抗细胞迁移和/或编程性细胞死亡(apoptotic))活性，所以可用于治疗人或动物体的方法中。本发明也涉及制备所述嘧啶衍生物的方法、含有所述嘧啶衍生物的药物组合物和所述嘧啶衍生物在制备用于在温血动物如人中产生抗细胞增殖作用的药物中的用途。
一类称作细胞周期蛋白的细胞内蛋白质在细胞循环中起重要的作用。细胞周期蛋白的合成和降解被严格控制以使其细胞循环期间的表达水平波动。细胞周期蛋白与周期表蛋白依赖性的丝氨酸/苏氨酸激酶(CDKs)结合并且这种关系对于细胞中的CDK(如CDK1、CDK2、CDK4和/或CDK6)的活性来说是必要的。尽管对这些因子各自如何组合来调节CDK活性的细节了解甚少，但两者之间的平衡决定细胞是不是经细胞周期向前发展。
致癌基因和肿瘤抑制基因研究的最新综合确定对进入细胞周期的调节是肿瘤有丝分裂期发生的关键控制点。而且，CDKs似乎是在多种致癌基因传递信号途径的下游。因细胞周期蛋白的上调和/或内源性抑制剂的缺失而失去对CDK活性的调节似乎是有丝分裂期发生的信号传递途径和肿瘤细胞增殖之间的重要的轴心。
因此，意识到细胞循环激酶，特别是CDK2、CDK4和/或CDK6(它们分别操纵S-阶段、G1-S和G1-S阶段)抑制剂作为细胞增殖如哺乳动物癌细胞生长的选择性抑制剂是有价值的。
此外，相信粘着斑激酶(FAK)(包括在信号传道途径中)的抑制诱导编程性细胞死亡(细胞死亡)和/或抑制细胞迁移并因此FAK抑制剂作为抗癌剂是有价值的。
本发明基于发现某些嘧啶化合物意想不到地抑制显示CDK2、CDK4和CDK6选择性的细胞循环激酶的作用，也抑制FAK并因此具有抗癌(抗细胞迁移/增殖和/或程序性细胞死亡)的作用。期望这些特性在在治疗与异常细胞循环和细胞增殖相关疾病是有价值的，所述疾病如癌症(固体肿瘤和白血病)、成纤维细胞增殖和分化疾病、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、粥样硬化、动脉restenosis、自身免疫疾病、急性和慢性炎症、骨疾病和视网膜血管增殖的眼疾病。
本发明提供式(I)或(I’)的嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯 其中Rx选自氢，卤素，羟基，硝基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，氰基，三氟甲基，三氯甲基，C1-3烷基[未取代的或由1或2个取代基取代的，所述取代基独立地选自卤素，氰基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，羟基和三氟甲基]，C3-5链烯基[未取代的或由高达3个卤素取代基，或一个三氟甲基取代基取代的]，C3-5链炔基，C1-3烷氧基，-SH，-S-C1-3烷基，羧基，C1-3烷氧基羰基；Q1是苯基，并且Q1在不与-NH-键相连的一个有效碳原子上携带一个式(Ia)取代基，并且NO2(下文定义的)可以不携带或在任何有效碳原子上携带另一式(Ia)取代基 其中X是-CH2-，-O-，-NH-，-NRy-或-S-[其中Ry是C1-4烷基，未取代的或由一个选自卤素，氨基，氰基，C1-4烷氧基或羟基的取代基取代的]；Y1是H，C1-4烷基或如Z的定义；Y2是H或C1-4烷基；Z是RaO-，RbRcN-，RdS-，ReRfNNRg-，连接杂芳基的氮或杂环的氮[其中所述杂环是未取代的或在环碳或环氮上由C1-4烷基或C1-4烷酰基取代的]，其中Ra，Rb，Rc，Rd，Re，Rf和Rg独立地选自氢，C1-4烷基，C2-4链烯基，C3-8环烷基，并且其中所述C1-4烷基C2-4链烯基是未取代的或由一个或多个苯基取代的；n是1，2或3；m是1，2或3；并且-NQ2是非季铵N-连接的5-，6-或7-元单环杂环部分，它包含一个氮杂原子并且可有可无地包含另外一个或两个选自氮，氧和硫的杂原子或者-NQ2是非季铵N-连接的8-，9-或10-元单环杂环部分，它包含一个或两个氮杂原子并且可有可无地包含另外一个或两个选自氮，氧和硫的杂原子，其中如果所述杂环部分包含-NH-部分，那么氮可以是未取代的或由下列取代基取代的，所述取代基选自C1-6烷基，C1-6烷酰基，C1-6烷基磺酰基，C1-6烷氧基羰基，苄基，苯甲酰基或苯基磺酰基；并且Q1和-NQ2可以可有可无地和独立地在任何有效碳原子上携带高达4个取代基，所述取代基独立地选自卤素，羟基，硫，硝基，羧基，氰基，C2-4链烯基[未取代的或由高达3个卤素取代基或一个三氟甲基取代基取代的]，C2-4链炔基，C1-5烷酰基，C1-4烷氧基羰基，C1-6烷基，羟基-C1-3烷基，氟-C1-4烷基，氨基-C1-3烷基，C1-4烷基氨基-C1-3烷基，二[C1-4烷基]氨基-C1-3烷基，氰基-C1-4烷基，C2-4烷酰氧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基-C1-3烷基，羧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷基，氨基甲酰基-C1-4烷基，N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷基，吡咯烷-1-基-C1-3烷基，哌啶-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基-C1-3烷基，吗啉-C1-3烷基，硫吗啉-C1-3烷基，咪唑-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基，吗啉基，硫吗啉基，C1-4烷氧基，氰基-C1-4烷氧基，氨基甲酰基-C1-4烷氧基，N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷氧基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷氧基，2-氨基乙氧基，2-C1-4烷基氨基乙氧基，2-二-[C1-4烷基]氨基乙氧基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷氧基，卤素-C1-4烷氧基，2-羟基乙氧基，C2-4烷酰基-C2-4烷氧基，2-C1-4烷氧基乙氧基，羧基-C1-4烷氧基，2-吡咯烷-1-基-乙氧基，2-哌啶子基-乙氧基，2-哌嗪-1-基-乙氧基，2-吗啉-乙氧基，2-硫吗啉-乙氧基，2-咪唑-1-基-乙氧基，C3-5烯氧基，C3-5炔氧基，C1-4烷硫基，C1-4烷基亚磺酰基，C1-4烷基磺酰基，羟基-C2-4烷硫基，羟基-C2-4烷基亚磺酰基，羟基-C2-4烷基磺酰基，脲基(H2N-CO-NH-)，C1-4烷基NH-CO-NH-，二-[C1-4烷基]N-CO-NH-，C1-4烷基NH-CO-N[C1-4烷基]-，二-[C1-4烷基]N-CO-N[C1-4烷基]-，氨基甲酰基，N-[C1-4烷基]氨基甲酰基，N，N-二-[C1-4烷基]氨基甲酰基，氨基，C1-4烷基氨基，二-[C1-4烷基]氨基，C2-4烷酰基氨基，氨磺酰，N-[C1-4烷基]氨磺酰，N，N-二-[C1-4烷基]氨磺酰，并且如果适宜，除了上述取代基外，Q1和-NQ2可以可有可无地和独立地在任何有效碳原子上携带高达2个其他取代基，所述取代基独立地选自C3-8环烷基，苯基-C1-4烷基，苯基-C1-4烷氧基，苯硫基，苯基，萘基，苯甲酰基，苯氧基，苯并咪唑-2-基，和5-或6-元芳族杂环(通过环碳原子连接并且包含1-3个独立地选自氧，硫和氮的杂原子)；其中所述萘基，苯基，苯甲酰基，苯氧基，5-或6-元芳族杂环取代基并且在所述苯基-C1-4烷基，苯硫基和苯基-C1-4烷氧基取代基中的苯基可以可有可无地携带一或两个独立地选自卤素，C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基。
适宜的作为非季铵N-连接的包含一个氮杂原子并且可有可无地包含另外一个或两个选自氮，氧和硫杂原子的5-，6-或7-元单环杂环部分的-NQ2是单环杂环部分，它包含(在与(I)或(I’)中的嘧啶环连接之前)游离的-NH，如吡咯，2-二氢吡咯，3-二氢吡咯，吡咯烷，咪唑，咪唑啉，咪唑烷，吡唑，吡唑啉，吡唑烷，三唑，哌啶，吗啉，硫吗啉，哌嗪，高哌嗪或高哌啶。
适宜的作为非季铵N-连接的包含一个氮杂原子并且可有可无地包含另外一个或两个选自氮，氧和硫杂原子的8-，9-或10-元单环杂环部分的-NQ2是二环杂环部分，它包含(在与(I)或(I’)中的嘧啶环连接之前)游离的-NH，如1H-咪唑并[1，2-a]吡咯，吲哚，异吲哚，二氢吲哚，异吲唑(苯并吡唑)，苯并咪唑或嘌呤(或这些基团中任一基团的部分或全部氢化变型)；或部分或全部饱和的芳族杂环，它饱和(在与(I)或(I’)中的嘧啶环连接之前)游离的-NH，如部分或全部饱和的喹啉衍生物(如1，2-二氢喹啉基或1，2，3，4-四氢喹啉基)，异喹啉基，噌啉基，喹唑啉基，喹喔啉基，2，3-二氮杂萘基，萘啶基，苯并噁唑，苯并噻唑，咪唑并[1，2-a]吡啶，咪唑并[1，5-a]吡啶，咪唑并[1，2-c]嘧啶，咪唑并[1，2-a]嘧啶，咪唑并[1，5-a]嘧啶，咪唑并[1，2-a]吡嗪或咪唑并[1，5-a]吡嗪或4，5，6，7-四氢噻吩并[2，3-c]吡啶-6-基。
对于适宜的作为非季铵N-连接的包含一个氮杂原子(并且可有可无地包含另外一个或两个选自氮，氧和硫杂原子)的8-，9-或10-元单环杂环部分的-NQ2来说，与(I)或(I’)中嘧啶环的连接可以通过两个二环杂环部分中的任一氮原子进行，前提条件是所述环系统保持非季铵化。
例如，适宜的-NQ2为吲哚，异吲哚，二氢吲哚，异吲唑(苯并吡唑)，苯并咪唑，嘌呤或1，2，3，4-四氢喹啉基。
或者，例如，-NQ2为吲哚，二氢吲哚，苯并咪唑，1，2，3，4-四氢喹啉基哌嗪或吗啉。
当所述环是5-或6-元芳族杂环(通过环碳原子连接并且包含1-3个独立地选自氧，硫和氮的杂原子)时，适宜的环取代基是，例如吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，异噁唑，噻唑，吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基或对-异噁嗪。
当基团(Ia)是“氮连接的杂芳基”时，基团(Ia)中适宜的Z是具有不饱和度的单环或二环，它包含4-12个原子，其中至少一个原子选自氮，并且可有可无地包含1-3个其他选自氮，硫或氧的原子，其中-CH2-可以不被替代或被-C(O)-替代，并且环上硫和/或氮原子可以不被氧化或氧化形成S-氧化物和/或N-氧化物。适宜的“氮连接的杂芳基”是包含5或6个原子的单环或包含9或10个原子的二环。氮连接导致中性化合物形成。适宜的“氮连接的杂芳基”包括咪唑-1-基，吡咯啉-1-基，咪唑啉-1-基，吡唑啉-1-基，三唑-1-基，吲哚-1-基，异吲哚-2-基，二氢吲哚-1-基，苯并咪唑-1-基，吡咯-1-基或吡唑-1-基。优选地，“氮连接的杂芳基”是咪唑-1-基。
当基团(Ia)是“氮连接的杂环”时，基团(Ia)中适宜的Z是不饱和的单环或二环，它包含4-12个原子，其中至少一个原子选自氮，并且可有可无地包含1-3个其他选自氮，硫或氧的原子，其中-CH2-可以不被替代或被-C(O)-替代，并且环上硫可以不被氧化或氧化形成S-氧化物。适宜的“氮连接的杂环”是包含5或6个原子的单环或包含9或10个原子的二环。适宜的“氮连接的杂环”包括吡咯烷-1-基，哌啶子基，哌嗪-1-基，吗啉，硫吗啉，高哌啶-1-基或高哌嗪-1-基。优选地，“氮连接的杂环基”是吡咯烷-1-基，哌嗪-1-基或吗啉。
在本说明书中，术语“烷基”包括直链和支链烷基，但对于个别烷基如“丙基”的参考仅对直链变型是特异性的。类似的约定也适用于其他一般术语。
以上提到适宜的一般基团(如在Q1和-NQ2上的取代基)包括下列基团卤素如氟，氯，溴和碘；C2-4链烯基如乙烯基和烯丙基；C3-5链烯基如烯丙基和丁烯-3-基；C3-5链炔基如丙炔-2-基；C2-4链炔基如乙炔基和丙炔-2-基；C1-5烷酰基如甲酰基和乙酰基；C1-3烷氧基羰基如甲氧基羰基，乙氧基羰基和丙氧基羰基；C1-4烷氧基羰基如甲氧基羰基，乙氧基羰基，丙氧基羰基和叔丁氧基羰基；C1-3烷基如甲基，乙基，丙基，异丙基；C1-4烷基如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基或叔丁基；C1-6烷基如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，3-甲基丁基或己基；羟基-C1-3烷基如羟甲基，1-羟乙基，2-羟乙基和3-羟丙基；氟-C1-4烷基如氟甲基，二氟甲基，三氟甲基和2-氟乙基；氨基-C1-3烷基如氨基甲基，1-氨基乙基和2-氨基乙基；C1-4烷基氨基-C1-3烷基如甲基氨基甲基，乙基氨基甲基，1-甲基氨基乙基，2-甲基氨基乙基，2-乙基氨基乙基和3-甲基氨基丙基；二-[C1-4烷基]氨基-C1-3烷基如二甲基氨基甲基，二乙基氨基甲基，1-二甲基氨基乙基，2-二甲基氨基乙基和3-二甲基氨基丙基；氰基-C1-4烷基如氰基甲基，2-氰基乙基和3-氰基丙基；C2-4烷酰氧基-C1-4烷基如乙酰氧基甲基，丙酰氧基甲基，丁酰氧基甲基，2-乙酰氧基乙基和3-乙酰氧基丙基；C1-4烷氧基-C1-3烷基如甲氧基甲基，乙氧基甲基，1-甲氧基乙基，2-甲氧基乙基，2-乙氧基乙基和3-甲氧基丙基；羧基-C1-4烷基如羧甲基，1-羧基乙基，2-羧乙基和3-羧丙基；C1-4烷氧基羰基-C1-4烷基如甲氧基羰基甲基，乙氧基羰基甲基，叔丁氧基羰基甲基，1-甲氧基羰基乙基，1-乙氧基羰基乙基，2-甲氧基羰基乙基，2-乙氧基羰基乙基，3-甲氧基羰基丙基和3-乙氧基羰基丙基；氨基甲酰基-C1-4烷基如氨基甲酰基甲基，1-氨基甲酰基乙基，2-氨基甲酰基乙基和3-氨基甲酰基丙基；N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷基如N-甲基氨基甲酰基甲基，N-乙基氨基甲酰基甲基，N-丙基氨基甲酰基甲基，1-(N-甲基氨基甲酰基)乙基，1-(N-乙基氨基甲酰基)乙基，2-(N-甲基氨基甲酰基)乙基，2-(N-乙基氨基甲酰基)乙基和3-(N-甲基氨基甲酰基)丙基；N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷基如N，N-二甲基氨基甲酰基甲基，N-乙基-N-甲基氨基甲酰基甲基，N，N-二乙基氨基甲酰基甲基，1-(N，N-二甲基氨基甲酰基)乙基，1-(N，N-二乙基氨基甲酰基)乙基，2-(N，N-二甲基氨基甲酰基)乙基，2-(N，N-二乙基氨基甲酰基)乙基和3-(N，N-二甲基氨基甲酰基)丙基；吡咯烷-1-基-C1-3烷基如吡咯烷-1-基甲基和2-吡咯烷-1-基乙基；哌啶-1-基-C1-3烷基如哌啶-1-基甲基和2-哌啶-1-基乙基；哌嗪-1-基-C1-3烷基如哌嗪-1-基甲基和2-哌嗪-1-基乙基；吗啉-C1-3烷基如吗啉甲基和2-吗啉乙基；硫吗啉-C1-3烷基如硫吗啉甲基和2-硫吗啉乙基；咪唑-1-基-C1-3烷基如咪唑-1-基甲基和2-咪唑-1-基乙基；C1-3烷氧基如甲氧基，乙氧基，丙氧基或异丙氧基；C1-4烷氧基如甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基或丁氧基；氰基-C1-4烷氧基如氰基甲氧基，1-氰基乙氧基，2-氰基乙氧基和3-氰基丙氧基；氨基甲酰基-C1-4烷氧基如氨基甲酰基甲氧基，1-氨基甲酰基乙氧基，2-氨基甲酰基乙氧基和3-氨基甲酰基丙氧基；N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷氧基如N-甲基氨基甲酰基甲氧基，N-乙基氨基甲酰基甲氧基，2-(N-甲基氨基甲酰基)乙氧基，2-(N-乙基氨基甲酰基)乙氧基和3-(N-甲基氨基甲酰基)丙氧基；N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷氧基如N，N-二甲基氨基甲酰基甲氧基，N-乙基-N-甲基氨基甲酰基甲氧基，N，N-二乙基氨基甲酰基甲氧基，2-(N，N-二甲基氨基甲酰基)乙氧基，2-(N，N-二乙基氨基甲酰基)乙氧基和3-(N，N-二甲基氨基甲酰基)丙氧基；2-C1-4烷基氨基乙氧基如2-(甲基氨基)乙氧基，2-(乙基氨基)乙氧基和2-(丙基氨基)乙氧基；2-二-[C1-4烷基]氨基乙氧基如2-(二甲基氨基)乙氧基，2-(N-乙基-N-甲基氨基)乙氧基，2-(二乙基氨基)乙氧基和2-(二丙基氨基)乙氧基；C1-4烷氧基羰基-C1-4烷氧基如甲氧基羰基甲氧基，乙氧基羰基甲氧基，1-甲氧基羰基乙氧基，2-甲氧基羰基乙氧基，2-乙氧基羰基乙氧基和3-甲氧基羰基丙氧基；卤代-C1-4烷氧基如二氟甲氧基，三氟甲氧基，2-氟乙氧基，2-氯乙氧基，2-溴乙氧基，3-氟丙氧基和3-氯丙氧基；C2-4烷酰氧基-C2-4烷氧基如2--乙酰氧基乙氧基，2-丙酰氧基乙氧基，2-丁酰氧基乙氧基和3-乙酰氧基丙氧；2-C1-4烷氧基乙氧基如2-甲氧基乙氧基，2-乙氧基乙氧基；羧基-C1-4烷氧基如羧基甲氧基，1-羧基乙氧基，2-羧基乙氧基和3-羧基丙氧基；C3-5链烯氧基如烯丙氧基；C3-5链炔氧基如丙炔氧基；C1-4烷硫基如甲硫基，乙硫基或丙硫；C1-4烷基亚磺酰基如甲基亚磺酰基，乙基亚磺酰基或丙基亚磺酰基；C1-4烷基磺酰基如甲磺酰基，乙磺酰基或丙磺酰基；N-C1-4烷基氨基甲酰基如N-甲基氨基甲酰基，N-乙基氨基甲酰基和N-丙基氨基甲酰基；N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基如N，N-二甲基氨基甲酰基，N-乙基-N-甲基氨基甲酰基和N，N-二乙基氨基甲酰基；C1-4烷基氨基或C1-3烷基氨基如甲氨基，乙氨基或丙氨基；二-[C1-4烷基]-氨基或二-[C1-3烷基]-氨基如二甲基氨基，N-乙基-N-甲基氨基，二乙基氨基，N-甲基-N-丙基氨基或二丙基氨基；C2-4烷酰基氨基如乙酰氨基，丙酰氨基或丁酰氨基；苯基-C1-4烷基如苄基或2-苯乙基；苯基-C1-4烷氧基如苄氧基；C3-8环烷基如环丙基，环戊基或环己基；羟基C2-4烷硫基如2-羟基乙硫基或2-羟基丙硫基；羟基C2-4烷基亚磺酰基如2-羟基乙基亚磺酰基或2-羟基丙基亚磺酰基；羟基C2-4烷基磺酰基如2-羟基乙基磺酰基或2-羟基丙基磺酰基；N-(C1-4烷基)氨磺酰基如N-甲基氨磺酰基或N-乙基氨磺酰基；N，N-二-(C1-4烷基)氨磺酰基如N，N-二甲基氨磺酰基，N-乙基-N-甲基氨磺酰基；或N，N-二乙基氨磺酰基。
本发明嘧啶衍生物适宜的可药用盐是，例如本发明具有足够碱性的嘧啶衍生物的酸加成盐，例如与无机或有机酸酸的酸加成盐，所述酸的实例如盐酸，氢溴酸，硫酸，磷酸，三氟乙酸，柠檬酸或马来酸。另外，本发明具有足够酸性的嘧啶衍生物适宜的可药用盐是碱金属盐，例如钠或钾盐，碱土金属盐，例如钙或镁盐，铵盐或与提供生理上可耐受阳离子的有机碱的盐，例如与甲胺，二甲胺，三甲胺，哌啶，吗啉或三-(2-羟乙基)胺的盐。
式(I)或(I’)化合物可以以前药的形式给予，所述前药在人体或动物体内裂解得到式(I)或(I’)化合物。前药的实例包括体内可水解的式(I)或(I’)化合物的酯。
体内可水解的包含羟基或羧基的式(I)或(I’)化合物的酯是，例如在人体或动物体内水解产生原始酸或醇的可药用酯。羧酸适宜的可药用酯包括C1-6烷氧基甲酯如甲氧基甲酯，C1-6烷酰氧基甲酯如新戊酰氧基甲酯，肽基酯，C3-8环烷氧基羰基氧基C1-6烷基酯如1-环己基羰基氧基乙酯；1，3-二dioxolen-2-only甲酯如5-甲基-1，3-二dioxolen-2-only甲酯；和C1-6烷氧基羰基氧基乙酯如1-甲氧基羰基氧基乙酯并且可以在本发明化合物的任一羧基上形成。
体内可水解的包含羟基的式(I)或(I’)化合物的酯包括无机酯如磷酸酯(包括氨基磷酸环酯)和α-酰氧基烷基醚及其在体内水解产生原始羟基的相关化合物。α-酰氧基烷基醚的实例包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基甲氧基。可与羟基形成体内可水解酯的基团包括烷酰基，，苯甲酰基，苯乙酰基个取代的苯甲酰基和苯乙酰基，烷氧基羰基(提供碳酸酯)，二烷基氨基甲酰基和N-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲酰基(提供氨基甲酸酯)，二烷基氨基乙酰基和羧基乙酰基。苯甲酰基取代基的实例包括由氮原子通过亚甲基连接到苯甲酰基环3-或4-位的吗啉基和哌嗪基。
某些式(I)或(I’)化合物可能具有手性中心和/或几何异构中心(E-和Z-异构体)，并且可以理解，本发明包括所有具有CDK和/或FAK抑制剂活性的光学非对映异构体和几何异构体(及其混合物)。
本发明涉及具有CDK和/或FAK抑制剂活性的式(I)或(I’)化合物的任一和所有互变异构形式。
也可以理解，某些式(I)或(I’)化合物可以异溶剂化以及非溶剂化形式如水合形式存在。可以理解，本发明包括所有具有CDK和/或FAK抑制剂活性的溶剂化形式。
本发明另一方面提供式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解的酯 其中
Rx选自氢，卤素，羟基，硝基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，氰基，三氟甲基，三氯甲基，C1-3烷基[未取代的或由1或2个取代基取代的，所述取代基独立地选自卤素，氰基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，羟基和三氟甲基]，C3-5链烯基[未取代的或由高达3个卤素取代基，或一个三氟甲基取代基取代的]，C3-5链炔基，C1-3烷氧基，-SH，-S-C1-3烷基，羧基，C1-3烷氧基羰基；Q1是苯基，并且Q1在不与-NH-键相连的一个有效碳原子上携带一个式(Ia’)取代基，并且-NO2(下文定义的)可以不携带或在任何有效碳原子上携带另一式(Ia’)取代基 其中X是CH2，O，NH或S；Y是H或如Z的定义；Z是OH，SH，NH2，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基，-NHC1-4烷基，-N[C1-4烷基]2，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，吗啉代或硫吗啉基；n是1，2或3；m是1，2或3；并且-NQ2是非季铵N-连接的8-，9-或10-元双环杂环部分，它包含一个或两个氮杂原子并且可有可无地包含另外一个或两个选自氮，氧和硫的杂原子；并且Q1和-NQ2可以可有可无地和独立地在任何有效碳原子上携带高达4个取代基，所述取代基独立地选自卤素，羟基，硫，硝基，羧基，氰基，C2-4链烯基[未取代的或由高达3个卤素取代基或一个三氟甲基取代基取代的]，C2-4链炔基，C1-5烷酰基，C1-4烷氧基羰基，C1-6烷基，羟基-C1-3烷基，氟-C1-4烷基，氨基-C1-3烷基，C1-4烷基氨基-C1-3烷基，二[C1-4烷基]氨基-C1-3烷基，氰基-C1-4烷基，C2-4烷酰氧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基-C1-3烷基，羧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷基，氨基甲酰基-C1-4烷基，N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷基，吡咯烷-1-基-C1-3烷基，哌啶-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基-C1-3烷基，吗啉-C1-3烷基，硫吗啉-C1-3烷基，哌嗪-1-基，吗啉基，硫吗啉基，C1-4烷氧基，氰基-C1-4烷氧基，氨基甲酰基-C1-4烷氧基，N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷氧基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷氧基，2-氨基乙氧基，2-C1-4烷基氨基乙氧基，2-二-[C1-4烷基]氨基乙氧基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷氧基，卤素-C1-4烷氧基，2-羟基乙氧基，C2-4烷酰基-C2-4烷氧基，2-C1-4烷氧基乙氧基，羧基-C1-4烷氧基，C3-5烯氧基，C3-5炔氧基，C1-4烷硫基，C1-4烷基亚磺酰基，C1-4烷基磺酰基，脲基(H2N-CO-NH-)，C1-4烷基NH-CO-NH-，二-[C1-4烷基]N-CO-NH-，C1-4烷基NH-CO-N[C1-4烷基]-，二-[C1-4烷基]N-CO-N[C1-4烷基]-，氨基甲酰基，N-[C1-4烷基]氨基甲酰基，N，N-二-[C1-4烷基]氨基甲酰基，氨基，C1-4烷基氨基，二-[C1-4烷基]氨基，C2-4烷酰基氨基，并且如果适宜，除了上述取代基外，Q1和-NQ2可有可无地和独立地在任何有效碳原子上携带高达2个其他取代基，所述取代基独立地选自苯基-C1-4烷基，苯基-C1-4烷氧基，苯基，萘基，苯甲酰基和5-或6-元芳族杂环(通过环碳原子连接并且包含1-3个独立地选自氧，硫和氮的杂原子)；其中所述萘基，苯甲酰基，5-或6-元芳族杂环取代基和在所述并且在所述苯基-C1-4烷基和苯基-C1-4烷氧基取代基上的苯基可有可无地携带一或两个独立地选自卤素，C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基。
特别优选的本发明化合物包含式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解的酯，其中RX，Q1，-NQ2，X，Y，Z，m和n具有上文所定义的任一含义，或任一下列值(a)、优选地，-NQ2为二氢吲哚；(b)、更优选地，-NQ2为二氢吲哚，哌嗪，吗啉，二氢吲哚，1，2，3，4-四氢化萘，苯并咪唑或吲哚；(c)、优选地，RX选自氢，卤素，羟基，硝基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，氰基，三氟甲基，C1-3烷基[未取代的或由1或2个取代基取代的，所述取代基独立地选自卤素，氰基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，羟基和三氟甲基]，C3-5链烯基[未取代的或由高达3个卤素取代基，或一个三氟甲基取代基取代的]，C3-5链炔基，C1-3烷氧基，-SH，-S-C1-3烷基；(d)、更优选地，RX选自氢，卤素(尤其氯)，硝基和C1-3烷基(尤其甲基)；RX特别优选氢或氯；(e)、RX特别是氢，氟，氯，溴或甲基；(f)、优选地，在式(Ia’)取代基中，X为O，Y为OH并且Z为-N[C1-4烷基]2；优选地，n为1并且m为1；(g)、优选地，在式(Ia)取代基中，X为O，Y1为OH，Y2为H并且Z为-N[C1-4烷基]2；优选地，n为1并且m为1；(h)、最优选地，式(Ia)或(Ia’)取代基为3-二甲基氨基-2-羟基丙氧基；(i)、优选地，有一个式(Ia)或(Ia’)取代基，即优选-NQ2不携带式(Ia)或(Ia’)取代基；(j)、Q1中式(Ia)或(Ia’)取代基必须在-NH-的对位或间位，优选地在对位；(k)、其他优选的-NQ2的取代基包括卤素(特别是溴)，C1-5烷酰基(特别是乙酰基)和C1-4烷基(特别是甲基)；(l)、优选地，不携带式(Ia)或(Ia’)取代基的环-NQ2由一个或两个其他取代基取代，优选卤素(特别是溴)，C1-5烷酰基(特别是乙酰基)和C1-4烷基(特别是甲基)；(m)、优选地，-NQ2是未取代的或由卤素，C1-5烷酰基或C1-4烷基取代的，并且如果-NQ2中的杂环部分包含-NH-部分，那么优选地，氮是未取代的或由C1-6烷氧基羰基取代的；(n)、-NQ2是二氢吲哚，4-叔丁氧基羰基哌嗪，哌嗪，吗啉，2-甲基二氢吲哚，5-溴二氢吲哚，5-乙酰基二氢吲哚，2，3-二甲基二氢吲哚，1，2，3，4-四氢化萘，苯并咪唑或吲哚；(o)、优选地，如果-NQ2中的杂环部分包含-NH-部分，那么优选地，氮是未取代的或由C1-6烷氧基羰基取代的；(p)、一方面，本发明优选化合物是式(I)化合物；并且(q)、另一方面，本发明优选的化合物是式(I’)化合物。
优选的本发明化合物是式(I)嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解的酯，其中Q1为苯基并且-NQ2为二氢吲哚；
RX为氢或氯(特别是氢)；Q1携带一个式(I)或(I’)取代基(特别是3-二甲基氨基-2-羟基丙氧基)，优选地在对位；-NQ2携带一个或两个独立地选自卤素(特别是溴)，C1-5烷酰基(特别是乙酰基)和C1-4烷基(特别是甲基)的取代基。
更优选的本发明化合物是式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解的酯，其中Q1为苯基并且-NQ2为二氢吲哚，哌嗪(未取代的或在4-氮上由叔丁氧基羰基取代的)，吗啉，1，2，3，4-四氢化萘，苯并咪唑或吲哚；RX为氢，氟，氯，溴或甲基；Q1在式(I)或(I’)的对位携带一个取代基，该取代基为3-二甲基氨基-2-羟基丙氧基；-NQ2在碳上携带一个或两个独立地选自溴，乙酰基和甲基的取代基。
特别优选的本发明化合物是实施例5(下文描述)中的式(I)嘧啶衍生物；或其可药用盐或体内可水解的酯。
在本发明另一方面，本发明优选的化合物包括任一实施例化合物或其可药用盐或体内可水解的酯。
本发明优选的方面是与所述化合物或其可药用盐有关的化合物。
可通过已知用于制备化学相关化合物的任何方法来制备式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解的酯。当用于制备式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解的酯时，所述方法作为本发明另一特征描述并且由下列代表性实施例说明，其中(除非另外说明)，Q1，-NQ2，RX，X，Y1，Y2，Z，m和n具有上文关于式(I)或(I’)嘧啶衍生物所定义的任何含义，并且除非环Q1或-NQ2上的另一取代基被取缔，否则，所述环可以携带上文所描述的任一取代基(未保护的或者如果需要也可以是保护的)。如果环Q1上的一个取代基被取缔，那么这种情况包括(除非另外说明)除了或者代替在环Q1上，所述取代基在环-NQ2上的可能性(视情况而定)。如果X在该部分定义为-NH-，那么可以理解这也包括X作为-NRy-的可能性。必需的起始物质可通过标准有机化学方法(例如，参见Advanced Organic Chemistry(Wiley-Interscience)，Jerry March-也用作反应条件和试剂的一般指导)获得。所述起始物质的制备在补充非限制性方法和实施例中描述。或者，必需的起始物质可通过有机化学普通技术范围内所描述的类似方法获得。2，4-嘧啶方法因此，本发明另一特征是本发明提供下列制备式(I)化合物的方法，该方法包括方法a)、将式(II)嘧啶 其中L为下文所定义的可替换基团；与式(III)化合物反应 方法b)、将式(IV)嘧啶 其中L为下文所定义的可替换基团；与式(V)化合物反应 方法c)、对于其中n为1，2或3，m＝1，Y2为H并且Y1为OH，NH2或SH的式(I)化合物来说，将包含式(VI)化合物的3元杂烷基环 其中A为O，S或NH；与式(VII)亲核试剂反应Z-D(VII)其中D为H或适宜的反荷离子；方法d)、对于其中X为氧的式(I)化合物来说，将式(VIII)醇 与式(IX)醇反应 方法e)、对于其中X为-CH2-，-O-，-NH-或-S-，Y1为OH，Y2为H并且m为2或3的式(I)化合物来说，将式(X)化合物 其中LgO为下文所定义的离去基团；与式(VII)亲核试剂反应；方法f)、对于其中X为-CH2-，-O-，-NH-或-S-，Y1为H，Y2为H，n为1，2或3并且m为1，2或3的式(I)化合物来说，将式(XI)化合物 其中LgO为下文所定义的离去基团；与式(VII)亲核试剂反应；方法g)、对于其中X为-O-，-NH-或-S-，Y1为H，Y2为H，n为1，2或3并且m为1，2或3的式(I)化合物来说，将式(XII)化合物 与式(XIII)化合物反应； 其中L为下文所定义的可替换基团；方法h)、对于其中Z为HS-的式(I)化合物来说，将相应化合物中的硫代乙酸根基进行转化；并且如果需要i)、将式(I)化合物转化为另一式(I)化合物；ii)、除掉任何保护基；iii)、形成可药用盐或体内可水解的酯。
L为可替换基团，适宜的L基为例如卤素或磺酰氧基，例如氯，溴，甲磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基。其他适宜的L基包括卤素，甲磺酰基，甲硫基和甲基亚磺酰基。
D为氢或反荷离子，当D为反荷离子时，适宜的D包括钠和钾。
LgO为离去基团。适宜的LgO包括甲磺酸根和甲苯磺酸根。
上述反应的特定反应条件如下方法a)、式(II)嘧啶和式(III)化合物可以一起反应i)、可有可无地在适宜的酸例如无机酸如盐酸或硫酸，或者有机酸如乙酸或甲酸存在下。优选地，该反应在适宜的惰性溶剂或稀释剂，例如二氯甲烷(DCM)，乙腈，丁醇，四甲基砜，四氢呋喃，1，2-二甲氧基乙烷，N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷-2-酮中，在温度范围，例如0-150℃，优选在回流温度或其附近进行；或者ii)、在标准Buchwald条件下(例如，参见J.Am.Chem.Soc.，118，7215；J.Am.Chem.Soc.，119，8451；J.Org.Chem.，62，1568和6066)，例如在醋酸钯存在下，在适宜的溶剂，例如芳族溶剂如甲苯，苯或二甲苯中，用适宜的碱，例如无机碱如碳酸铯或有机碱如叔丁醇钾，在适宜的配体如2，2’-二(二苯基膦)-1，1’-二萘基存在下并且在25-80℃的温度范围。
式(II)嘧啶可以按照下列合成方案制备 其中Ra是未取代的或取代的烷基或芳基并且L是上述定义的可替换基团。优选地，Ra为甲基，乙基或对甲苯基。
式(V)和(III)化合物可通过商业渠道获得或者可通过本领域已知的方法制备。方法b)、式(IV)嘧啶和式(V)化合物可以一起在适宜的溶剂，例如酮如丙酮，或醇如乙醇或丁醇，或芳香烃如甲苯或N-甲基吡咯烷，或溶剂如四甲基砜存在下，可有可无地在适宜的酸(如上述方法a)中所定义的那些或Lewis酸)或碱(如Hunig’s碱或碳酸钙)存在下，在0℃-回流温度，优选地在回流温度下反应。
式(IV)嘧啶可以按照下列合成方案制备
式(IVA)，(III)和(V)化合物可通过商业渠道获得或者可通过本领域已知的方法制备。例如，式(IVA)嘧啶可通过将其中L为-OH的式(IVA)化合物(即尿嘧啶)与POCl3反应，得到其中L为-Cl的式(IVA)化合物来制备。方法c)、将包含式(VI)化合物的3-元杂烷基环与式(VII)亲核试剂一起在20-100℃，优选在20-50℃的温度下，可有可无地在适宜的溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺，二甲基亚砜或四氢呋喃中反应。
式(VI)化合物可按照下列合成方案制备合成方案I)、对于其中A为O并且X不为碳的式(VI)化合物 (VIB)转化为(VI)也可以通过在DMF中，在碱存在下与Br-(CH2)n-CHO或相当的酯反应，然后在适宜的惰性溶剂如THF中与硫反应得到(Me2SOCH2)进行(参见合成方案V)。合成方案II)、对于其中A为NH并且X不为碳的式(VI)化合物 (关于PhINTs，例如参见Tet.Let.，1997，38(39)，6897-6900；式(VIC)化合物也可以在类似于下文合成方案IV的条件下氧化为环氧化物)；合成方案III)、对于其中A为S并且X不为碳的式(VI)化合物 (例如，参见Synlett，1994，267-268)；合成方案IV)、对于其中X为碳的式(VI)化合物 其中R3与它所连接的-COO-一起形成酯，例如甲酯或乙酯。合成方案V)、对于其中X为CH2，O，NH或S；Y1为OH；Y2为H；n为1，2或3并且m为1的式(VI)化合物 (VIJ)与(IV)反应(以合成方案I的方式)得到(VI)。
也可以使用相当的酯(VIH)。也参见Russ.Chem.Rev.47，975-990，1978。
式(VIH)，(VII)和(VIA)和(VIE)可以通过商业渠道获得或者通过本领域已知的方法制备。方法d)、式(VIII)和(IX)醇(或酚)可以在标准Mitsunobu条件下一起反应。例如在偶氮二羧酸二乙酯和三苯基膦存在下，在适宜的溶剂如二氯甲烷，甲苯或四氢呋喃中，在0-80℃，优选在20-60℃的温度范围。或者式(VIII)醇可以用其中末端羟基被适宜的离去基团取代的适宜的式(IX)化合物烷基化。
式(VIII)醇可按照上述合成方案I)中合成中间体(VIB)(其中X为氧)的方法制备。
式(IX)醇可通过商业渠道获得或通过本领域已知的方法制备。
在类似于方法d)的方法中，其中X为-S-的化合物可通过将其中羟基为-SH的式(VIII)化合物与其中羟基为离去基团如甲磺酸根或甲苯磺酸根的式(IX)化合物反应制备。方法e)、其中X为-CH2-，-O-，-NH-或-S-；Y1为OH；Y2为H并且m为2或3的式(X)化合物与式(VII)亲核试剂一起在20-100℃，优选20-50℃的温度下，可有可无地在适宜的溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺，二甲基亚砜或四氢呋喃中，并且可有可无地在适宜的碱如碳酸钾存在下反应。
式(X)化合物可按照下列合成方案制备(m为2或3) 在最后步骤中步骤1)和2)的顺序可以颠倒。步骤2)中适宜的碱为三乙胺。
式(XA)和(VII)化合物可以通过商业渠道获得或通过本领域已知的方法制备。例如，其中X为-NH-，-O-或-S-的式(XA)化合物可通过将式(VIA)化合物在该反应标准条件下与适宜的卤代醛或相当的酯反应制备。方法f)、式(XI)化合物和式(VII)亲核试剂如方法e)所述一起反应。
式(XI)化合物可按照本方法制备上述式(X)化合物最终步骤中步骤2)类似的方法制备。必需的伯醇起始物质可通过商业渠道获得或通过本领域已知的方法制备。方法g)、式(XII)和(XIII)化合物在惰性溶剂如DMF中，在碱如碳酸钾存在下反应。
式(XII)化合物具有与本文所描述的式(VIB)化合物相同的通式并且如那些化合物所述(参见合成方案I)制备。式(XIII)化合物可通过商业渠道和或通过本领域已知的方法制备。方法h)、对于其中Z为SH的式(I)化合物，在相应化合物中硫代乙酸根的转化如本文式(IJ)转化为(IK)化合物时所描述的那样进行。
适宜的包含硫代乙酸根的起始物质如本文式(IG)转化为(IJ)化合物时所描述的那样，用相应的包含离去基团如甲磺酸根和甲苯磺酸根的化合物(在标准条件下，从相应的羟基化合物制备)和硫代乙酸制备。
式(I)化合物转化为另一式(I)化合物的实例为转化i)、式(Ia)或(Ia’)的一个侧链转化为式(Ia)或(Ia’)的另一个侧链，例如转化I)、对于式(I)化合物，其中Y1为H并且Y1为NH2(如下文所述，使用氨)，C1-4烷氧基，C1-4烷硫基，-NHC1-4烷基，-N[C1-4烷基]2，吡咯烷-1-基，哌啶-1-基，哌嗪-1-基，吗啉代或硫吗啉基； 或转化II)、对于式(I)化合物，其中Y2为H并且Y1为S 转化III)、对于式(I)化合物，其中Y1为H并且Y2为H 转化ii)、使用标准方法，一个RX转化为另一个RX，例如作为羟基的RX转化为C1-3烷氧基。
技术人员可以领会，上述方法c)和d)中所描述的侧链(Ia)或(Ia’)的处理也可以在中间体上进行，例如制备式(II)，(IIA)，(IIB)或(V)中间体。例如 4，6-嘧啶方法因此，本发明另一特征是本发明提供下列制备式(I’)化合物的方法，该方法包括方法a’)将式(II’)嘧啶 其中L为如下定义的可替换基团，与式(III’)化合物反应 方法b’)将式(IV’)嘧啶 其中L为如下定义的可替换基团，与式(V’)化合物反应 方法c’)、对于其中n为1，2或3，m＝1，Y2为H并且Y1为OH，NH2或SH的式(I’)化合物，将式(VI’)3-元杂烷基环 其中A为O，S或NH；与式(VII’)亲核试剂反应Z-D(VII′)其中D为H或适宜的反荷离子；方法d’)对于其中X为氧的式(I’)化合物，通过将式(VIII’)醇 与式(IX’)醇反应 方法e’)、对于其中X为-CH2，-O-，-NH-或-S-；Y1为OH；Y2为H并且m为2或3的式(I’)化合物，将式(X’)化合物 其中LgO为如下定义的离去基团；与式(VII’)化合物亲核体反应；方法f’)、对于其中X为-CH2-，-O-，-NH-或-S-；Y1为H；Y2为H；n为1，2或3并且m为1，2或3的式(I’)化合物，将式(X’)化合物 其中LgO为如下定义的离去基团；与式(VII’)化合物亲核体反应。方法g’)、对于其中X为-O-，-NH-或-S-；Y1为H；Y2为H；n为1，2或3并且m为1，2或3的式(I’)化合物，将式(XII’)化合物 与式(XIII’)化合物反应 其中L为如下定义的可替换基团；方法h’)、对于其中Z为HS-的式(I’)化合物，将相应化合物中的硫代乙酸根基进行转化；并且如果需要i)、将式(I’)化合物转化为另一式(I’)化合物；ii)、除掉任何保护基；iii)、形成可药用盐或体内可水解的酯。
除非另外说明，在该4，6-嘧啶方法部分的变量(如L和D)如上2，4-嘧啶方法部分所述。
上述4，6-嘧啶方法的特定反应条件如下方法a’)、式(II’)嘧啶和式(III’)化合物可以如上2，4-嘧啶方法a)所述一起反应。
式(II’)嘧啶可以按照下列方案制备 式(III’)化合物可通过商业渠道获得或通过本领域已知的方法制备。方法b’)、式(IV’)嘧啶和式(V’)化合物可以如上2，4-嘧啶方法b)所述一起反应。
式(IV’)嘧啶可以按照下列合成方案制备 其中L为如上定义的可替换基团。
式(V’)化合物可通过商业渠道获得或通过本领域已知的方法制备。方法c’)、式(VI’)3元杂环和式(VII’)亲核试剂可以如上2，4-嘧啶方法c)所述一起反应。
式(VI’)化合物可以如上2，4-嘧啶方法部分所述，按照合成方案I)-IV)类似的方法制备(但是用4，6-嘧啶化合物代替上述合成方案中的2，4-嘧啶化合物)。
式(VII’)化合物和必需的中间体可通过商业渠道获得或通过本领域已知的方法(通过上述2，4-嘧啶方法部分c)类似的方法)制备。方法d’)、式(VIII’)和式(IX’)醇可在上述2，4-嘧啶方法d)所述标准Mitsunobu条件下一起反应。
式(VIII’)醇可按照上述2，4-嘧啶方法d)所述类似的方法制备。
式(IX’)醇可通过商业渠道和或通过本领域已知的方法制备。方法e’)、式(X’)和式(VII’)化合物可在上述2，4-嘧啶方法e)所述标准条件下一起反应。
式(X’)化合物可按照上述2，4-嘧啶方法d)所述类似的方法制备。
式(VII’)化合物可通过商业渠道和或通过本领域已知的方法制备。方法f’)、式(XI’)和式(VII’)化合物可在上述2，4-嘧啶方法f)所述标准条件下一起反应。
式(XI’)化合物可按照上述2，4-嘧啶方法d)所述类似的方法制备。方法g’)、式(XII’)和式(XIII’)化合物可在上述2，4-嘧啶方法g)所述标准条件下一起反应。
式(XII’)化合物可按照上述2，4-嘧啶方法d)所述类似的方法制备。
式(XIII’)化合物可通过商业渠道和或通过本领域已知的方法制备。方法h’)、硫代乙酸根的转化为可在上述2，4-嘧啶方法h)所述标准条件下进行。
式(I’)化合物转化为另一式(I’)化合物的实例与上述式(I)2，4-嘧啶的转化I)-转化III)类似，例如，一个式(Ia)或(Ia’)侧链转化为另一个式(Ia)或(Ia’)侧链(但是用4，6-嘧啶化合物代替上述转化中的2，4-嘧定)。
如上式(I)2，4-嘧啶的转化所述，技术人员可以领会，所述侧链(Ia)或(Ia’)的处理也可以在中间体上进行(通过上述2，4-嘧啶方法部分d)所描述的类似的方法)。
可以领会，本发明化合物中，某些环上取代基可以在上述方法之前或紧跟在该方法之后通过标准芳族取代反应引入或通过常规官能团修饰产生，并且这些都包括在本发明方法之中。所述反应和修饰包括，例如通过芳族取代反应，还原取代基，烷基化取代基和氧化取代基方法引入取代基。所述方法的试剂和反应条件是化学制剂领域公知的。芳族取代反应的特定实例包括，用浓硝酸引入硝基，在Friedel Crafts条件下，用例如酰卤和Lewis酸(如三氯化铝)引入酰基；在FriedelCrafts条件下，用烷基卤和Lewis酸(如三氯化铝)引入烷基；和引入卤原子。修饰的特定实例包括，例如通过用镍催化剂催化氢化，或在盐酸存在下，在加热下用铁处理，将硝基还原为氨基；将烷硫基氧化为烷基亚磺酰基或烷基磺酰基。
也可以领会，在本文所述的某些反应中，可能必需或要求保护化合物中任何敏感的基团。必需或要求保护的例子和适宜的保护方法是本领域技术人员已知的。依据标准惯例，可使用常规保护基(例如参见T.W.Green，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wileyand Sons，1991)。因此，如果反应物包含基团如氨基，羧基或羟基，那么在本文所述某些反应中要求保护该基团。
适宜的氨基或烷基氨基的保护基为酰基，例如烷酰基如乙酰基，烷氧基羰基，例如甲氧基羰基，乙氧基羰基或叔丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基，例如苄氧基羰基，或芳香烃酰基，例如苯甲酰基。上述保护基的脱保护条件必须随保护基的选择改变。因此，例如，烷酰基或烷氧基羰基或芳香烃酰基可通过用适宜的碱，如碱金属氢氧化物，例如锂或钠的氢氧化物水解除掉。或者，酰基如叔丁氧基羰基可通过用适宜的酸如盐酸，硫酸或磷酸或三氟乙酸处理除掉并且芳基甲氧基羰基如苄氧基羰基可通过用催化剂如披钯炭氢化，或通过用Lewis酸，例如三(三氟乙酸)硼处理除掉。适宜的其他伯氨基保护基为，例如可通过用烷基胺，例如二甲基氨基苯胺或用肼处理除掉的邻苯二甲酰基。
适宜的羟基的保护基为酰基，例如烷酰基如乙酰基，芳香烃酰基，例如苯甲酰基，或芳基甲基，例如苄基。上述保护基的脱保护条件必须随保护基的选择改变。因此，例如，酰基如烷酰基或芳香烃酰基可通过用适宜的碱，如碱金属氢氧化物，例如锂或钠的氢氧化物水解除掉。或者，芳基甲基如苄基可通过用催化剂如披钯炭氢化除掉。
适宜的羧基的保护基为酯化基团，例如可通过用碱如氢氧化钠水解除掉的甲基或乙基，或者例如可通过用酸如有机酸如三氟乙酸处理除掉的叔丁基，或者例如可通过用催化剂如披钯炭氢化除掉的苄基。
保护基可用化学制剂领域公知的常规技术，在合成的任何步骤除掉。
本文所定义的很多中间体是新的，例如那些通式II和IV化合物，并且这些中间体作为本发明的另一方面提供。测定方法如上文所述，本发明定义的嘧啶衍生物具有抗细胞增殖的活性如抗癌活性，相信这种活性是由化合物的CDK和/或FAK抑制活性产生的。这些特性如可使用下文所述的方法来评价CDK4抑制作用的测定使用下列缩写HEPES是N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸)DTT是二硫苏糖醇PMSF是苯基甲基磺酰氟在体外激酶测定方法中试验化合物，所述方法在96孔格中进行，使用闪烁亲近测定法(SPA-从Amersham处获得)来测量[γ-33-P]-腺苷三磷酸盐与试验底物(GST-成视网膜细胞瘤)的结合情况。在各孔中，放置被试验的化合物(在DMSO和水中稀释到合适的浓度)并在对照孔中或者加入作为抑制剂对照的p16或者加入作为阳性对照的DMSO。
于各个孔中加入在25μl培养缓冲液中稀释的大约0.5μlCDK4/细胞周期蛋白D1部分纯化的酶(其量依赖于酶的活性)，然后加入20μlGST-Rb/ATP/ATP33混合物(含有0.5μg GST-Rb和0.2μM ATP和0.14μCi[γ-33-P]-腺苷三磷酸盐)，并将所得混合物轻轻振摇，然后在室温下培养60分钟。
此后，在各孔中加入150μl的终止溶液，含有0.8mg/孔的蛋白质A-PVT SPA珠(Amersham)、20pM/孔的抗谷胱甘肽转移酶，Rabbit IgG(由分子探针获得)、61mM EDTA和50mM含有0.05％叠氮化钠的HEPES pH7.5。
用Topseal-S板密封剂将板密封，放置2小时然后以2500rpm，1124xg的转速旋转5分钟。将板在Topcount上以30秒/孔进行读数。
使用培养缓冲液稀释酶和底物混合物，底物混合物含有50mM HEPESpH7.5、10mM MnCl2、1mM DTT、100μM钒酸钠、100μM NaF、10mM甘油磷酸钠、BSA(最终1mg/ml)。
作为对照，在p16位置可使用另一种已知的CDK4抑制剂。试验底物在该测定中，仅使用部分成视网膜细胞瘤(Science 1987 Mar13；235(4794)1394-1399；Lee W.H.，Bookstein R.，Hong F.，Young L.J.，Shew J.Y.，Lee E.Y.)，与GST标记物融合。将视网膜细胞瘤氨基酸379-928(从视网膜细胞瘤质粒ATCCpLRbRNL获得)进行体外扩增，并将该序列克隆到pGEX2T融合载体中(SmithD.B.和Johnson，K.S.Gene 67，31(1988)；它含有诱导表达的tac启动子、在任何大肠杆菌宿主中使用的内部lac Iq基因和凝血酶卵裂编码区-从PharmaciaBiotech处获得)，该载体用于扩增氨基酸792-928。该序列被反复克隆到pGEX2T中。
使用标准的诱导表达技术，在大肠杆菌(BL21(DE3)pLysS细胞)中表达如上获得的视网膜细胞瘤792-928序列，并如下进行纯化。
将大肠杆菌糊重新悬浮在10ml/g的NETN缓冲液(50mM TrispH7.5，120mM NaCl，1mM EDTA，0.5％v/v NP-40，1mM PMSF，1μg/ml亮抑酶肽，1μg/ml抑蛋白酶肽和1μg/ml抑胃酶肽)中并超声处理2×45秒/100ml组织匀浆。离心后，将上清液装载到10ml谷胱甘肽琼脂糖柱(Pharmacia Biotech，Herts，UK)上，并用TETN缓冲液洗涤。用激酶缓冲液(50mM HEPES pH7.5、10mM MgCl2、1mM DTT、1mM PMSF、1μg/ml亮抑酶肽，1μg/ml抑蛋白酶肽和1μg/ml抑胃酶肽)洗涤后，用50mM还原的谷胱甘肽(在激酶缓冲液中)洗脱该蛋白质。收集含有GST-Rb(792-927)的馏分并与激酶缓冲液渗析过夜。最终产品使用8-16％Tris-Glycine凝胶(Novex，San Diego，USA)通过十二烷基硫酸钠(SDS)PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)来分析。CDK4和细胞周期蛋白D1如下用MCF-7细胞系(由ATCC号HTB22，乳腺腺癌系获得)通过RNA来克隆CDK4和细胞周期蛋白D1。由MCF-7细胞制备RNA，然后使用低聚dT引物进行逆转录。使用PCR扩增各个基因的完整编码序列[CDK4氨基酸1-303；参见Cell 1992，10，16；71(2)323-334；MatsushimeH.，Ewen M.E.，Stron D.K.，Kato J.Y.，Hahks S.K.，Roussel M.F.，Sherr C.J.和细胞周期蛋白D1氨基酸1-296；参见Cold Spring Harb.Symp.Quant.Biol.，1991；5693-97；Arnold A.，Motokura T.，BloomT.，Kronenburg，Ruderman J.，Juppner H.，Kim H.G.]。
测序后，使用标准技术将PCR产物克隆到昆虫表达载体pVL1393(由Invitrogen 1995目录号V1392-20获得)中。然后将PCR产物双重表达[使用标准的病毒Baculogold共同感染技术]到昆虫SF21细胞体系(由Fall Army Worm(可购得)的卵巢组织衍生的SpodopteraFrugiperda细胞)之中。
下列实施例详细描述在SF21细胞(在TC100+10％FBS(TCS)+0.2％Pluronic)中生产周期蛋白D1 & CDK4，该细胞具有细胞周期蛋白D1和CDK4各个病毒的双重感染的MOI3。生产细胞周期蛋白D1/CDK4的实例SF21细胞在滚瓶中培养生长到2.33×106个细胞/ml，然后以0.2×10E6个细胞/ml接种10×500ml滚瓶。在滚轴设备上以28℃培养滚瓶。
3天(72小时)后，记录细胞数，并发现2瓶的平均值是1.86×10E6个细胞/ml(99％可生存)。然后用双重病毒以每个病毒一个MOI3的量感染培养物。
10×500ml用JS303细胞周期蛋白D1病毒滴度-9×10E7pfu/ml、JS304 CDK4病毒滴度-1×10E8 pfu/ml感染。细胞周期蛋白1.86×10E6×500×3/0.9×108＝31ml病毒/500ml瓶。CDK41.86×10E6×500×3/1×108＝28ml病毒/500ml瓶。
在加入培养物中之前，将病毒混合，并将培养物放回28℃的滚轴设备上。
3天(72小时)后，收获感染过的5升培养物。收获时细胞总数是1.58×10E6个细胞/ml(99％可生存)。该细胞于4℃下在HeraeusOmnifuge2.0RS上以250ml的量和2500rpm的转速旋转30分钟。丢弃上清液。将20小丸4×10E8个细胞/丸在LN2中猛烈冷冻并在-80℃的CCRF冷室中储存。然后通过在溶胞缓冲液(50mM HEPES pH7.5、10mMMgCl2、1mM DTT、10mM甘油磷酸盐、0.1mM PMSF、0.1mM氟化钠、0.1mM正钒酸钠、5μg/ml抑蛋白酶肽、5μg/ml亮抑酶肽和20％w/v蔗糖)中重新悬浮并加入冰冷却的的去离子水来使SF21细胞低渗溶解。离心后，将上清液装载到Poros HQ/M 1.4/100阴离子交换柱(PE Biosystems，Hertford，UK)上。用375mM NaCl(在溶胞缓冲液中)同时洗脱CDK4和细胞周期蛋白D1，并通过蛋白印迹使用合适的抗-CDK4和抗-细胞周期蛋白抗体(从Santa Cruz Biotechnology，California，US处获得)检测成分的存在。P16对照(天然366704-707；1993；Serrano M.Hannon GJ，Beach D)P16(CDK4/细胞周期蛋白D1的天然抑制剂)由HeLa cDNA(由ATCCCCL2，人子宫颈上皮癌；Cancer Res.12264，1952获得的Hela细胞)，克隆到具有5’His末端的pTB375NBSE上并使用标准技术转化到BL21(DE3)pLysS细胞(从Promega处获得；参见Studier F.W.和MoffatB，A.，J.Mol.Biol.，189，113，1986)上。将1升培养物生长到合适的OD，然后用IPTG诱导以过夜表达p16。通过在50mM磷酸钠、0.5mM氯化钠、PMSF、0.5μg/ml亮抑酶肽和0.5μg/ml抑蛋白酶肽中超声来使细胞溶解。旋转混合物，上清液加到镍螯合珠中并混合1.5小时。在磷酸钠、NaCl pH6.0中洗涤所得珠并在磷酸钠、NaCl pH7.4中用200mM咪唑洗脱p16产物。
如下由pTB375NBPE构建pTB NBSEpTB375用于产生pTB375的本底载体是pZEN0042(参见英国专利2253852)并且含有来自质粒RP4的tetA/tetR可诱导四环素耐受的序列和来自pAT153衍生本底中质粒pKS492的cer稳定性序列。通过加入由T7基因10启动子、多克隆位点和T7基因10末端序列组成的表达盒来产生pTB375。另外，表达盒的上游包括设计用于减少本底载体转录连读的终止子序列。pTB375NBPE除去存在于pTB375中的单一EcoRI限定位点。将含有限定酶NdeI、BamHI、PstI和EcoRI识别序列的新的多克隆位点引入存在于pTB375中的NdeI和BamHI位点破坏的原BamHI位点之间的pTB375中。pTB375NBSE将含有限定酶NdeI、BamHI、SmaI和EcoRI识别序列的新的多克隆位点引入NdeI和EcoRI位点之间的pTB375NBPE中。含有限定位点的低聚核苷酸也含有6组氨酸密码子，当起动密码子(ATG)存在于NdeI位点中时，组氨酸密码子位于相同读码的NdeI和BamHI位点之间。
通过上述类似方法，可设计用于评价CDK2和CDK6抑制作用的测定方法。CDK2(EMBL登记号X62071)可与细胞周期蛋白A或细胞周期蛋白E(参见EMBL登记号M73812)一起使用，并且在PCT国际公开号WO99/21845有关生物化学和生物学评价部分中进一步详细描述了这些测定方法，该文献引入本文供参考。
如果使用具有细胞周期蛋白E的CDK2，可如下完成部分共纯化将SF21细胞重新悬浮在溶胞缓冲液(50mM tris pH8.2，10mM MgCl2，1mMDTT，10mM甘油磷酸酯，0.1mM正钒酸钠，0.1mM NaF，1mM PMSF，1μg/ml亮抑酶肽和1μg/ml抑蛋白酶肽)中并且在10ml Dounce匀化器中匀化2分钟。离心后，将上清液装载到Poros HQ/M 1.4/100阴离子交换柱(PEBiosystems，Hertford，UK)上。CDK2和细胞周期蛋白E在0-1M NaCl梯度(在溶胞缓冲液负型蛋白酶抑制剂中进行)的开始到20倍柱体积被共同洗脱下来。使用抗CDK2和抗细胞周期蛋白E抗体(Santa CruzBiotechnology，California，US)通过蛋白质印迹来检测共同洗脱情况。FAK3激酶抑制作用的测定该测定用来确定试验化合物抑制人粘着斑激酶(FAK)酪氨酸激酶活性的能力。
DNA编码的FAK通过总基因合成(Edwards M，IntrnationalBiotechnology Lab 5(3)，19-25，1987)或通过克隆来获得。然后将其表达在合适的表达体系中以获得具有酪氨酸激酶活性的多肽。例如，发现在昆虫细胞中重组蛋白质的表达所获得的FAK显示内在的酪氨酸激酶活性。
修饰FAK(Andre等人描述的全长人cDNA(Biochemical andBiophysical Research Communications，1993，190(1)140-147；EMBL/GenBank Accession Number L05186))以便在翻译时所得蛋白质在N端起始蛋氨酸之前具有6组氨酸靶。使用类似的N端6组氨酸靶来将活性FAK蛋白质预先表达在杆状病毒体系中(Protein ExpressionAnd Purification，1996，712-18)。人FAK cDNA被克隆到杆状病毒置换性载体pFastbacl(Life Technologies)，并且重组构件被共同转染到具有病毒DNA的昆虫细胞(例如，草地夜蛾21(Sf21))中来制备重组杆状病毒(在标准课本中可发现重组DNA分子聚集和重组杆状病毒的制备和使用方法的详细描述，例如Sambrook等人，1989，Molecularcloning-A Laboratory Manual，2ndedition，Cold Spring HarbourLaboratory Press和O’Reilly等人，1992，Baculovirus ExpressionVectors-A Laboratory Manual，W.H.Freeman and Co，纽约。在Anderson等人，1995，FOCUS(Life Technologies Bulletin Magazine)，17，p53中对pFastbac(‘Bac to Bac’)系统的使用进行了具体描述)。
为了表达生物活性人FAK蛋白，用蚀斑纯化的FAK重组病毒以3的感染复数感染Sf21细胞并在48小时后收获。用冰冷却的磷酸盐缓冲的生理盐水(PBS)(10mM磷酸钠pH7.4、138mM氯化钠、2.7mM氯化钾)洗涤收获的细胞，然后以每1千万个细胞250μl溶胞缓冲液重新悬浮在冰冷却的溶胞缓冲液(50mM HEPES pH7.5、10mM MgCl2、1mMDTT、0.1mM氟化钠、0.1mM正钒酸钠、10mM甘油磷酸盐、1mM苯甲基磺酰基氟化物(PMSF)、5μg/ml抑蛋白酶肽、5μg/ml亮抑酶肽，1％吐温；PMSF在用前才加入新鲜制备的100mM甲醇溶液)。将悬浮液在冰上保温15分钟并在4℃温度下以13000rpm的转速离心。取出上清液(酶储备液)并将制备的等份试样在液氮中速冻并储存在-70℃温度下。对于典型的一批来说，储备液以1∶250用酶稀释液((100mM HEPES pH7.4、0.2mM DTT、200μM正钒酸钠、0.1％Triton X-100)并且50ml新鲜稀释的酶用于每个测定孔(参见下文FAK3试验方法)。FAK3体外酶测定试验方法由含有酪氨酸的随机共聚物，例如聚(Glu，Ala，Tyr)6∶3∶1(SigmaP3899)制备储备底物溶液，以1mg/ml在PBS中的储备液在-20℃温度下储存并以1∶500的比例用PBS稀释用于板的涂敷。
在测定前一天，将100μl稀释的底物溶液分配到测定板的所有孔(Maxisorp 96孔免疫板Life technologies，Cat.439454A)，用密封板密封并在4℃温度下放置过夜。
在测定这一天，将底物溶液弃去并用200μl PBST(含有0.05％v/v吐温20的PBS)和200μl 50mM Hepes pH7.4各洗涤一次。
试验化合物被制成10mM或30mM的DMSO储备液，在玻璃杯中用蒸馏水进一步稀释到10倍于最终测定浓度。将10μl稀释的化合物被转移到洗涤过的测定板的孔中。“无化合物”对照孔含有10μl代替化合物的蒸馏水。
将40微升含有6.25μM腺苷-5’-三磷酸(ATP)的25mM氯化锰加到所有试验孔。在每个孔中加入50μl新鲜稀释的酶来开始反应并且将该板在23℃温度下保温90分钟。通过加入100μl含有20mM EDTA的PBS来终止反应。弃去液体并用PBST将孔洗涤两次。
将100微升以1∶1500用含有0.5％w/v牛血清白蛋白(BSA)稀释的小鼠HRP连接的抗磷酸酪氨酸抗体(Santa Cruz，Product SC 7020-HRP)加到各孔中并将该板在室温下保温1小时，然后弃去液体并用200μPBST将孔洗涤两次。将100微升新鲜制备的2，2’-连氮基-二(3-乙基苯噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)溶液加到各孔中，所述溶液是使用50mgATBS片(Boehringer 1204 521)在50ml新鲜制备的50mM磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液pH5.0+0.03％过硼酸钠(每100ml蒸馏水用1ml磷酸盐柠檬酸盐缓冲液和过硼酸钠(PCSB)胶囊(Sigma P4922)制备的)。然后将板在室温下保温20-60分钟直到使用读板分光光度计在405nm处测量的“无化合物”对照孔吸收值约为1.0。
使用Origin软件由读出的吸收值绘制量效曲线。按Origin软件的定义，使用抑制浓度50(IC50)排列化合物的效力。
尽管式(I)或(I’)化合物的药理学特性随结构式变化，但上述测定中式(I)或(I’)化合物所具有的活性通常可表明IC50浓度或剂量在250μM-1nM范围中。
在上述体外测定试验中，测得的实施例5的CDK4抑制活性IC50＝0.02μM。在上述体外测定试验中，测得的实施例3的CDK4抑制活性IC50＝0.553μM。
本发明化合物的体内活性可通过标准技术来评价，例如可测量对细胞生长的抑制作用和评价细胞毒性。例如，可在下来文献中发现更详细的描述
a)粘着斑激酶表达的减少诱导肿瘤细胞程序性死亡。Xu L-h等人，Cell Growth & Differentition(1996)7，p413-418；b)粘着斑激酶的COOH-末端区域诱导人肿瘤细胞粘着丧失和细胞死亡。Xu L-h等人，Cell Growth & Differentition(1998)9，p999-1005；c)pp125-FAK在培养的成纤维细胞中的抑制作用导致细胞程序性死亡。Hungerford J.E等人，The Journal of Cell Biology(1996)135，p1383-1390；d)粘着斑激酶(FAK)信号传递在粘着斑中的抑制减少细胞的运动性和增殖。Gilmore A.P和Romer L.H.，Molecular Biology of theCell(1996)7，p1209-1224。
用Sulforhodamine B(SRB)使细胞染色可测量对细胞生长的抑制作用，SRB是一种使蛋白质染色的荧光染料并因此可估量孔中蛋白质(即细胞)的量(参见Boyd，M.R.(1989)Status of the NCI preclinicalantitumour drug discovery screen，Prin.Prac Oncol 101-12)。因此，下文详细描述细胞生长抑制作用的测量方法在合适介质中的细胞以100μl的体积涂敷在96孔板中；介质是用于MCF-7，SK-UT-1B和SK-UT-1的Dulbecco’s Modified Eagle介质。允许细胞吸附过夜，然后以各种浓度加入抑制剂化合物，化合物以最大浓度存在于1％的DMSO(v/v)中。在加入化合物前，测定对照板的细胞值。细胞在37℃(5％CO2)温度下培养3天。
三天结束后，以16％(v/v)的最终浓度，将TCA加到板中。然后，将板在4℃温度下培养1小时，取出上清液并将板在自来水中洗涤。干燥后，在37℃温度下，加入100μlSRB染料(0.4％SRB在1％乙酸中)30分钟。除去过量的SRB并在1％乙酸中洗涤培养板。将结合蛋白质的SRB溶解在10mM Tris pH7.5中并在室温下振摇30分钟。在540nm处读出OD并由抑制浓度与吸收值的半对数点确定引起50％生长抑制的抑制剂浓度。使光密度减小到低于实验开始时涂敷细胞所获得的化合物的浓度给出毒性值。
SRB测定中本发明化合物的IC50值通常在1mM-1nM的范围中。
本发明的另一方面是提供一种药物组合物，它含有上文定义的式(I)或(I’)化合物、或其可药用盐或体内可水解的酯和可药用稀释剂或载体。
组合物可以是适于口服的(例如片剂或胶囊)、非胃肠道注射的(包括静脉、皮下、肌内、血管内或输注的灭菌溶液、悬浮液或乳剂)、局部给药的(油膏或霜剂)或者直肠给药的(栓剂)形式。
一般来说，上述组合物可使用常规赋形剂以常规方法来制备。
本发明嘧啶化合物通常以单位剂量和动物每平方米体表5-5000mg的范围，即大约0.1-100mg/kg给予温血动物，并因此通常提供治疗有效的剂量。单位剂量形式如片剂或胶囊通常可含有如1-250mg的活性组分。优选地，采用1-50mg/kg范围的每日剂量。然而，每日剂量需要随被治疗的主体、给药的特定途径和被治疗疾病的严重性来变化。因此，最佳剂量可由治疗任何特定病人的医师来决定。
本发明的另一方面是将上文定义的式(I)或(I’)化合物、或其可药用盐或体内可水解的酯用在治疗人或动物体的方法中。
我们发现本发明定义的嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解的酯是有效的的细胞循环抑制剂(抗细胞增殖剂)，相信其特性(不与理论结合)是由其CDK抑制剂特性产生的。本发明化合物也是有效的FAK抑制剂。因此，期望本发明化合物可用于治疗单独或部分由CDK和/或FAK酶介导的疾病或医学病症，即本发明化合物可用于在需要这种治疗的温血动物中产生CDK抑制作用。所以，本发明化合物提供一种通过抑制CDK和/或FAK酶来治疗恶性细胞的增殖和/或转移的方法，即，本发明化合物可用于产生单独或部分由CDK和/或FAK抑制介导的抗增殖/转移作用。本发明化合物也可通过诱导细胞死亡(细胞程序性死亡)而用作FAK抑制剂。期望本发明的嘧啶衍生物具有广谱的抗癌特性，因为CDK和/或FAK参与许多常见的人癌症如白血病和乳房、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、胰腺和卵巢癌。因此，本发明的嘧啶衍生物期望具有对抗这些癌症的抗癌活性。另外，本发明嘧啶衍生物期望具有对抗白血病、淋巴恶性和固体肿瘤如在组织肝、肾、前列腺和胰腺中的癌和肉瘤。特别是，本发明的这些化合物期望有利地减缓如结肠、乳房、前列腺、肺和皮肤的原发和复发固体肿瘤的生长。更具体来说，本发明的化合物、或其可药用盐或体内可水解的酯期望抑制与CDK和/或FAK相关的，特别是其生长和传播明显依赖于CDK和/或FAK的，例如包括结肠、乳房、前列腺、肺、外阴和皮肤的某些肿瘤的那些原发和复发固体肿瘤的生长。
本发明的嘧啶衍生物还期望具有在各种各样其他疾病状态中的其他细胞增殖、转移疾病包括白血病、纤维增殖和分化疾病、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫疾病、急性和慢性炎症、骨疾病和视网膜血管增殖的眼疾病的活性。
因此，本发明提供上文定义的式(I)或(I’)化合物、或其可药用盐或体内可水解的酯用作药物；和上文定义的式(I)或(I’)化合物、或其可药用盐或体内可水解的酯在制备用于在温血动物如人中产生抗癌、细胞循环抑制(抗细胞增殖)作用和/或FAK抑制(抗细胞转移和/或诱导细胞程序性死亡)作用的药物中的用途。特别是，在S或G1-S阶段通过抑制CDK2、CDK4和/或CDK6，特别是CDK4和CDK6来产生细胞循环抑制作用。
本发明的另一特征是提供一种用于在需要这种治疗的温血动物中产生抗癌、细胞循环抑制(抗细胞增殖)作用和/或FAK抑制(抗细胞转移和/或诱导细胞程序性死亡)作用的方法，它包括给予所述动物有效量的上文定义的嘧啶衍生物。特别是，在S或G1-S阶段通过抑制CDK2、CDK4和/或CDK6，特别是CDK4和CDK6来产生抑制作用。
如上所述，治疗或预防特点细胞增殖疾病所需剂量的大小需要随治疗主体、给药途径和被治疗疾病的严重性来变化。设想单位剂量在如1-100mg/kg，优选1-50mg/kg的范围中。
上文定义的CDK和/或FAK抑制剂可单独作为治疗方法使用，或者除本发明化合物外可包括一种或多种其他物质和/或治疗方法。这种联合治疗可通过同时、依次或分别给予治疗的各个成分来完成。在医学肿瘤学领域中，除上文定义的细胞循环抑制治疗外，所述联合治疗的成分可包括外科手术、放疗或化疗。这种化疗可包括三类主要的治疗剂(i) 以上文定义的相同或不同机制作用的其他细胞循环抑制剂；(ii)细胞抑制剂如抗雌激素(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene)、孕激素(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如anastrozole、letrazole、vorazole、依西美坦)、抗孕激素、抗雄激素(例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙酸环丙孕酮)、LHRH激动剂和拮抗剂(例如乙酸戈舍瑞林、luprolide)、睾酮5α-二氢还原酶抑制剂(例如非那雄胺)、抗侵入剂(例如金属蛋白酶抑制剂如marimastat和尿激酶纤溶酶激活物受体功能抑制剂)和生长因子功能抑制剂(此生长因子如包括血小板衍生的生长因子和肝细胞生长因子，此抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)；和(iii)在医学肿瘤学中使用的抗增殖/抗肿瘤药物及其组合物，如抗代谢剂(例如叶酸拮抗物如甲氨蝶呤、氟嘧啶如5-尿嘧啶、嘌呤和腺苷类似物、阿糖胞苷)；抗肿瘤抗体(例如anthracyclines如阿霉素、道诺霉素、表柔比星和伊达比星，丝裂霉素-C、放线菌素D、普卡霉素)；铂衍生物(例如顺铂、碳铂)；烷化剂(例如氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、自消安、环磷酰胺、异环磷酰胺、nitrosoureas、塞替派)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱和taxoids如紫杉醇、taxotere)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素如表鬼臼毒素吡喃葡糖苷和表鬼臼毒素噻吩糖苷、DNA嵌入剂(安吖啶)、topotecan)。
本发明这方面提供一种药物产品，它含有上文定义的式(I)或(I’)嘧啶衍生物和上文定义的用于癌症联合治疗的另一种抗肿瘤物质。有用的是，也可以给予抗催吐药，例如当使用上文定义的联合治疗时。
除了在治疗药物中使用外，式(I)或(I’)化合物及其可药用盐也可作为新的治疗剂筛选的部分用作在实验室于动物如猫、狗、兔子、猴子、大鼠和小鼠上体外和体内评价细胞循环活性抑制作用的开发和标准化中的药理学工具。
另外，本文也描述了药物组合物、步骤、方法、用途和药物制备特征、本发明化合物的另外的和优选的实施方案。
现在，以下列非限定实施例的方式举例说明本发明，其中合适时可以使用化学技术人员已知的标准技术和类似于这些实施例的技术，并且除非另有说明，否则其中(i)通过在真空下旋转蒸发来进行蒸发并经过滤除去残余固体如干燥剂后进行处理；(ii)在室温和空气中进行处理，室温通常在18-25℃的范围中(除非另有说明)，或者技术人员另外在惰性气体如氩气环境下进行操作；
(iii)在Merck Kieselgel二氧化硅(Art.9385)或在MerckLichroprep RP-18(Art.9303)反向二氧化硅(从E.Merck，Darmstadt，德国处获得)上进行柱色谱层析(通过快速过程进行)和中压液相色谱层析(MPLC)；使用Varian Mega Bond Elut药筒(10g，顺序编号1225-6034)(从Varian Sample Preparation Products，California，美国处获得)进行结合洗脱色谱层析；(iv)仅仅为了说明而给出产量并不一定是最大可获得的量；(v)式(I)最终产物的结构通常用核(一般为质子)磁共振(NMR)和质谱技术来确定；质子磁共振化学位移值在氘化DMSO-d6(除非另有说明)于δ标(从四甲基硅烷开始的下移ppm)上使用Varian Gemini2000分光计(在300MHz的领域强度下运行)或Bruker AM250分光计(在250MHz的领域强度下运行)来测量；并且如下表示多重峰s，单峰；d，双重峰；dd，两个双重峰；t，三重峰；tt，三个三重峰；q，四重峰；tq，三个四重峰；m，多重峰；br，宽带峰；质谱(MS)通过在VG平台上电子喷射来进行；(vi)中间体通常不进行充分的确定并且纯度通过薄层色谱层析(TLC)、HPLC、红外(IR)、MS或NMR分析来评价；(vii)干燥溶液时，干燥剂是硫酸镁；(viii)上下文中可使用下列缩写DCM 二氯甲烷DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO 二甲基亚砜NMP N-甲基吡咯烷-2-酮
NMR2.19(s，6H)，2.21-2.3(m，1H)，2.3-2.4(m，1H)，3.1-3.25(m，2H)，3.8-4.1(m，5H)，5.75(m，1H)，6.2(m，2H)，6.8-6.9(m，3H)，7.0-7.1(m，1H)，7.15-7.25(m，1H)，7.5-7.6(m，2H)，8.05-8.1(m，1H)，8.3-8.4(m，1H)，8.95(s，1H)；MS(MH+)406.5.
NMR2.1(m，9H)，2.3(m，2H)，3.9(m，3H)，4.8(d，1H)，6.85(d，1H)，6.9(d，2H)，7.2(m，2H)，7.6(m，5H)，8.5(s，1H)，9.5(s，1H)；MS(MH+)418.
NMR(CDCl3)2.33(s，6H)，2.98(m，1H)，2.54(m，1H)，4.00(m，3 H)，7.00(d，2H)，8.20(d，2H)；MS(MH+)241.方法32-氯-4-(二氢吲哚-1-基)嘧啶将2，4-二氯嘧啶(596mg，4.0mmol)，二氢吲哚(0.45mg，4.0mol)和N，N-二异丙基乙胺(0.69ml，4.0mmol)的正丁醇(20ml)溶液在100℃下加热18小时。加入二氧化硅(3g)并通过蒸发除掉挥发性物质。残渣通过柱色谱层析纯化，用0-40％乙酸乙酯/异己烷洗脱，得到产物的无色固体(460mg，50％)。
NMR(CDCl3)3.2(t，2H)，4.0-4.1(t，2H)，6.5(d，1H)，7.0-7.1(m，1H)7.2-7.3(m，2H)，8.2(m，1H)，8.3-8.4(m，1H)；MS(MH+)232.7.方法4-7按照方法3所描述的类似的方法，从2，4-二氯嘧啶和适宜的取代二氢吲哚开始制备下列化合物
方法82-氯-4-(1，2，3，4-四氢喹啉-1-基)嘧啶按照方法3所描述的类似的方法，从2，4-二氯嘧啶和1，2，3，4-四氢喹啉开始得到产物。MS(MH+)246，248。方法9-10按照方法3所描述的类似的方法，从二氢吲哚和适宜的2，4-二氯-5-卤代嘧啶(通过商业渠道获得或如方法11所述获得)开始制备下列化合物
方法112，4，5-三氯嘧啶将5-氯尿嘧啶(10.0g，68.5mmol)溶解在磷酰氯(60ml)中并加入五氯化磷(16.0g，77.0mmol)。将该混合物加热回流16小时，放冷，然后在剧烈搅拌下缓慢地倾入水(200ml)中。将该混合物搅拌1.5小时，然后加入乙酸乙酯(250ml)。分离有机层并将水层用另一部分乙酸乙酯(250ml)提取。合并的提取液用饱和碳酸氢钠(200ml)和饱和氯化钠(200ml)洗涤，然后干燥。通过蒸发除掉挥发性物质，残渣通过柱色谱层析纯化，用DCM洗脱，得到产物的黄色液体(6.37g，51％)。NMR(CDCl3)8.62(s，1H)；MS(MH+)182，184，186。方法125-溴-2-氯-4-(苯并咪唑-1-基)嘧啶在0℃下，将氢化钠(60％油悬浮液；110mg，2.75mmol)加到苯并咪唑(295mg，2.5mmol)的DMF(6ml)溶液中。将该混合物在0℃下搅拌10分钟，然后滴加到冷(0℃)的5-溴-2，4-二氯嘧啶(712mg，3.14mmol)的DMF(6ml)溶液中。将该混合物在0℃下搅拌2小时，然后加入乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)。分离有机相并干燥，通过蒸发除掉挥发性物质。残渣通过柱色谱层析纯化，用20％乙酸乙酯/DCM洗脱，得到产物的白色固体(500mg，52％)。NMR7.4(m，2H)，7.8()(m，2H)，8.8(s，1H)，9.3(s，1H)；MS(MH+)309，311。方法13-14按照方法12所描述的类似的方法，从吲哚和适宜的2，4-二氯-5-卤代嘧啶(通过商业渠道获得或如方法11所述获得)开始制备下列化合物
1不必纯化或定性即可使用。方法15-17按照方法3所描述的类似的方法，从4，6-二氯嘧啶和适宜的二氢吲哚开始并在125℃下反应1小时制备下列化合物
实施例19下面举例说明人类治疗或预防疾病中应用的、有代表性的包含式(I)或(I’)化合物或其可药用盐或体内可水解酯(下文称作化合物X)的药物剂量形式
注意上述制剂可通过制药领域公知的常规方法获得。片剂(a)-(c)可以是过常规方法肠包衣的，例如提供邻苯二甲酸醋酸纤维素包衣。
权利要求
1.一种式(I)或(I’)的嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯 其中Rx选自氢，卤素，羟基，硝基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，氰基，三氟甲基，三氯甲基，C1-3烷基[未取代的或由1或2个取代基取代的，所述取代基独立地选自卤素，氰基，氨基，C1-3烷基氨基，二-[C1-3烷基]氨基，羟基和三氟甲基]，C3-5链烯基[未取代的或由高达3个卤素取代基，或一个三氟甲基取代基取代的]，C3-5链炔基，C1-3烷氧基，-SH，-S-C1-3烷基，羧基，C1-3烷氧基羰基；Q1是苯基，并且Q1在不与-NH-键相连的一个有效碳原子上携带一个式(Ia)取代基，并且NO2(下文定义的)可以不携带或在任何有效碳原子上携带另一式(Ia)取代基 其中X是-CH2-，-O-，-NH-，-NRy-或-S-[其中Ry是C1-4烷基，未取代的或由一个选自卤素，氨基，氰基，C1-4烷氧基或羟基的取代基取代的]；Y1是H，C1-4烷基或如Z的定义；Y2是H或C1-4烷基；Z是RaO-，RbRcN-，RdS-，ReRfNNRg-，连接杂芳基的氮或杂环的氮[其中所述杂环是未取代的或在环碳或环氮上由C1-4烷基或C1-4烷酰基取代的]，其中Ra，Rb，Rc，Rd，Re，Rf和Rg独立地选自氢，C1-4烷基，C2-4链烯基，C3-8环烷基，并且其中所述C1-4烷基C2-4链烯基是未取代的或由一个或多个苯基取代的；n是1，2或3；m是1，2或3；并且-NQ2是非季铵N-连接的5-，6-或7-元单环杂环部分，它包含一个氮杂原子并且可有可无地包含另外一个或两个选自氮，氧和硫的杂原子或者-NQ2是非季铵N-连接的8-，9-或10-元双环杂环部分，它包含一个或两个氮杂原子并且可有可无地包含另外一个或两个选自氮，氧和硫的杂原子，其中如果所述杂环部分包含-NH-部分，那么氮可以是未取代的或由下列取代基取代的，所述取代基选自C1-6烷基，C1-6烷酰基，C1-6烷基磺酰基，C1-6烷氧基羰基，苄基，苯甲酰基或苯基磺酰基；并且Q1和-NQ2可有可无地和独立地在任何有效碳原子上携带高达4个取代基，所述取代基独立地选自卤素，羟基，硫，硝基，羧基，氰基，C2-4链烯基[未取代的或由高达3个卤素取代基或一个三氟甲基取代基取代的]，C2-4链炔基，C1-5烷酰基，C1-4烷氧基羰基，C1-6烷基，羟基-C1-3烷基，氟-C1-4烷基，氨基-C1-3烷基，C1-4烷基氨基-C1-3烷基，二[C1-4烷基]氨基-C1-3烷基，氰基-C1-4烷基，C2-4烷酰氧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基-C1-3烷基，羧基-C1-4烷基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷基，氨基甲酰基-C1-4烷基，N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷基，吡咯烷-1-基-C1-3烷基，哌啶-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基-C1-3烷基，吗啉-C1-3烷基，硫吗啉-C1-3烷基，咪唑-1-基-C1-3烷基，哌嗪-1-基，吗啉基，硫吗啉基，C1-4烷氧基，氰基-C1-4烷氧基，氨基甲酰基-C1-4烷氧基，N-C1-4烷基氨基甲酰基-C1-4烷氧基，N，N-二-[C1-4烷基]-氨基甲酰基-C1-4烷氧基，2-氨基乙氧基，2-C1-4烷基氨基乙氧基，2-二-[C1-4烷基]氨基乙氧基，C1-4烷氧基羰基-C1-4烷氧基，卤素-C1-4烷氧基，2-羟基乙氧基，C2-4烷酰基-C2-4烷氧基，2-C1-4烷氧基乙氧基，羧基-C1-4烷氧基，2-吡咯烷-1-基-乙氧基，2-哌啶子基-乙氧基，2-哌嗪-1-基-乙氧基，2-吗啉-乙氧基，2-硫吗啉-乙氧基，2-咪唑-1-基-乙氧基，C3-5烯氧基，C3-5炔氧基，C1-4烷硫基，C1-4烷基亚磺酰基，C1-4烷基磺酰基，羟基-C2-4烷硫基，羟基-C2-4烷基亚磺酰基，羟基-C2-4烷基磺酰基，脲基(H2N-CO-NH-)，C1-4烷基NH-CO-NH-，二-[C1-4烷基]N-CO-NH-，C1-4烷基NH-CO-N[C1-4烷基]-，二-[C1-4烷基]N-CO-N[C1-4烷基]-，氨基甲酰基，N-[C1-4烷基]氨基甲酰基，N，N-二-[C1-4烷基]氨基甲酰基，氨基，C1-4烷基氨基，二-[C1-4烷基]氨基，C2-4烷酰基氨基，氨磺酰，N-[C1-4烷基]氨磺酰，N，N-二-[C1-4烷基]氨磺酰，并且也独立的是，如果适宜，除了上述取代基外，Q1和-NQ2可有可无地和独立地在任何有效碳原子上携带高达2个其他取代基，所述取代基独立地选自C3-8环烷基，苯基-C1-4烷基，苯基-C1-4烷氧基，苯硫基，苯基，萘基，苯甲酰基，苯氧基，苯并咪唑-2-基，和5-或6-元芳族杂环(通过环碳原子连接并且包含1-3个独立地选自氧，硫和氮的杂原子)；其中所述萘基，苯基，苯甲酰基，苯氧基，5-或6-元芳族杂环取代基并且在所述苯基-C1-4烷基，苯硫基和苯基-C1-4烷氧基取代基中的苯基可有可无地携带一或两个独立地选自卤素，C1-4烷基和C1-4烷氧基的取代基。
2.权利要求1的嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯，其中Rx是氢、氟、氯、溴或甲基。
3.权利要求1或2的嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯，其中-NQ2为二氢吲哚，哌嗪、吗啉、二氢吲哚，1，2，3，4-四氢萘，苯并咪唑，或吲哚。
4.权利要求1到3的任一嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯，其中式(Ia)取代基为3-二甲基氨基-2-羟基丙氧基。
5.权利要求1-4的任一嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯，其中-NQ2不被取代或被卤素、C1-5烷酰基或C1-4烷基取代；并且如果-NQ2的杂环部分含有-NH-部分，那么氮原子不被取代或被C1-6烷氧基羰基取代。
6.权利要求1-5的任一嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯，其中式(Ia)取代基与-NH-相对。
7.权利要求1-6的任一嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯是2-{4-[2-羟基-3-(N，N-二甲基氨基)丙氧基]苯氨基}-4-(2，3-二甲基二氢吲哚-1-基)嘧啶。
8.制备式(I)嘧啶衍生物的方法，该方法包括a)、将式(II)嘧啶 其中L为下文所定义的可替换基团；与式(III)化合物反应 b)、将式(IV)嘧啶 其中L为下文所定义的可替换基团；与式(V)化合物反应 c)、对于其中n为1，2或3，m＝1，Y2为H并且Y1为OH，NH2或SH的式(I)化合物来说，将包含式(VI)化合物的3-元杂烷基环 其中A为O，S或NH；与式(VII)亲核试剂反应Z-D(VII)其中D为H或适宜的反荷离子；d)、对于其中X为氧的式(I)化合物来说，将式(VIII)醇 与式(IX)醇反应 e)、对于其中X为-CH2-，-O-，-NH-或-S-，Y1为OH，Y2为H并且m为2或3的式(I)化合物来说，将式(X)化合物 其中LgO为下文所定义的离去基团；与式(VII)亲核试剂反应；f)、对于其中X为-CH2-，-O-，-NH-或-S-，Y1为H，Y2为H，n为1，2或3并且m为1，2或3的式(I)化合物来说，将式(XI)化合物 其中LgO为下文所定义的离去基团；与式(VII)亲核试剂反应；g)、对于其中X为-O-，-NH-或-S-，Y1为H，Y2为H，n为1，2或3并且m为1，2或3的式(I)化合物来说，将式(XII)化合物 与式(XIII)化合物反应； 其中L为下文所定义的可替换基团；h)、对于其中Z为HS-的式(I)化合物来说，将相应化合物中的硫代乙酸根基进行转化；并且如果需要i). 将式(I)化合物转化为另一式(I)化合物；ii). 除掉任何保护基；iii).形成可药用盐或体内可水解的酯。
9.制备式(I’)嘧啶衍生物的方法，该方法包括a)、将式(II’)嘧啶 其中L为如下定义的可替换基团，与式(III’)化合物反应 b)、将式(IV’)嘧啶 其中L为如下定义的可替换基团，与式(V’)化合物反应 c)、对于其中n为1，2或3，m＝1，Y2为H并且Y1为OH，NH2或SH的式(I’)化合物，将式(VI’)3-元杂烷基环 其中A为O，S或NH；与式(VII’)亲核试剂反应Z-D(VII′)其中D为H或适宜的反荷离子；d)、对于其中X为氧的式(I’)化合物，通过将式(VIII’)醇 与式(IX’)醇反应 e)、对于其中X为-CH2，-O-，-NH-或-S-；Y1为OH；Y2为H并且m为2或3的式(I’)化合物，将式(X’)化合物 其中LgO为如下定义的离去基团；与式(VII’)化合物亲核体反应f)、对于其中X为-CH2-，-O-，-NH-或-S-；Y1为H；Y2为H；n为1，2或3并且m为1，2或3的式(I’)化合物，将式(XI’)的化合物 其中LgO为如下定义的离去基团；与式(VII’)的亲核试剂反应；g)、对于其中X为-O-，-NH-或-S-；Y1为H；Y2为H；n为1，2或3并且m为1，2或3的式(I’)化合物，将式(XII’)化合物 与式(XIII’)化合物反应 其中L为如下定义的可替换基团；h)、对于其中Z为HS-的式(I’)化合物，将相应化合物中的硫代乙酸根基进行转化；并且如果需要i). 将式(I’)化合物转化为另一式(I’)化合物；ii). 除掉任何保护基；iii).形成可药用盐或体内可水解的酯。
10.在温血动物中产生抗癌作用的方法，该方法包括给予所述动物有效量权利要求1-7的任一式(I)或(I’)嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯。
11.权利要求1-7的任一式(I)或(I’)嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯在生产用于在温血动物中产生抗癌作用的药物中的应用。
12.一种包含权利要求1-7的任一式(I)或(I’)嘧啶衍生物，或其可药用盐或体内可水解的酯，和可药用稀释剂或载体的药物组合物。
全文摘要
本说明书描述了一种用作抗癌剂的式(I)或(I’)嘧啶衍生物或其可药用盐或体内可水解的酯,其中RX是本说明书所定义的取代基;Q
文档编号A61K31/506GK1349528SQ0080706
公开日2002年5月15日 申请日期2000年3月2日 优先权日1999年3月6日
发明者G·A·布雷奥尔特, S·R·詹姆斯, J·E·佩斯 申请人:阿斯特拉曾尼卡有限公司