专利名称：诱导抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫应答的多肽的制作方法
相关申请的相互参考本申请要求2004年5月25日提交的美国临时申请No.60/574,032的优先权，在此全文引入该申请作为参考。
背景技术：
不承认本申请中引用的参考文献是要求保护的本发明的现有技术。
金黄色葡萄球菌是导致多种疾病和状况的病原体。由金黄色葡萄球菌导致的疾病和状况的实例包括菌血症、感染性心内膜炎、毛囊炎、疖、痈、天疱疮、大疱性天疱疮、蜂窝织炎、葡萄状菌病、毒性休克综合征、皮肤烫伤综合征、中枢神经系统感染、感染性和炎性眼病、骨髓炎以及关节和骨的其它感染，和呼吸道感染(The StaphylococciinHuman Disease，Crossley and Archer(eds.)，Churchill Livingstone Inc.1997.)。
用基于免疫的策略控制金黄色葡萄球菌感染和金黄色葡萄球菌的传播。基于免疫的策略包括被动和主动免疫。被动免疫采用靶定金黄色葡萄球菌的免疫球蛋白。主动免疫诱导抗金黄色葡萄球菌的免疫应答。
可能的金黄色葡萄球菌疫苗靶定金黄色葡萄球菌多糖和多肽。可以用合适的金黄色葡萄球菌多糖或多肽作为疫苗成分来获得靶定。可以用作可能的疫苗成分的多糖的实例包括金黄色葡萄球菌5型和8型荚膜多糖(Shinefield et al.，N.Eng.J.Med.346491-496，2002.)。可以用作可能的疫苗成分的多肽的实例包括胶原粘附蛋白、纤维蛋白原结合蛋白和聚集因子(Mamo et al.，FEMS Immunology and MedicalMicrobiology 1047-54，1994，Nilsson et al.，J.Clin.Invest.1012640-2649，1998，Josefsson et al.，The Journal of Infectious Diseases 1841572-1580，2001.)。
从金黄色葡萄球菌基因组的测序获得的关于金黄色葡萄球菌多肽序列的信息(Kuroda et al.，Lancet 3571225-1240，2001，Baba et al.，Lancet 3591819-1827，2000，Kunsch et al.，欧洲专利公开EP 0 786519，1997年7月30日公开)。在某种程度上，已经致力于将生物信息学用于表征从基因组测序获得的多肽序列(Kunsch et al.，欧洲专利公开EP 0 786 519，1997年7月30日公开)。
诸如涉及展示技术和来自感染的患者血清的那些技术可以用于致力于鉴定编码潜在抗原的基因(Foster et al.，国际专利公开号WO01/98499，2001年12月27日公开，Meinke et al.，国际专利公开号WO02/059148，2002年8月1日公开，Etz et al.，PNAS 996573-6578，2002.)。
发明概述本发明表征了包含与SEQ ID NO1结构上相关的氨基酸序列的多肽及所述多肽的用途。SEQ ID NO1是全长金黄色葡萄球菌多肽的衍生物。全长天然多肽在此称作全长“ORF0826”。SEQ ID NO1衍生物包含起始甲硫氨酸后的丙氨酸添加。发现SEQ ID NO1的His-标志产生抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫应答。
“保护性”免疫或免疫应答表示可检测水平的抗金黄色葡萄球菌感染的保护作用。可以用诸如此处描述的动物模型评估保护水平。
因此，本发明的第一方面描述了包含与SEQ ID NO1具有至少85％同一性的氨基酸序列的多肽免疫原，其中所述多肽不是SEQ IDNO3、SEQ ID NO4或SEQ ID NO5。免疫原表示提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的能力。
包含与SEQ ID NO1具有至少85％同一性的氨基酸序列表示存在SEQ ID NO1相关区，并且可能存在额外的多肽区。SEQ ID NO3、SEQ ID NO4或SEQ ID NO5的多肽在85％同一性的范围内，但它们排除在本发明的第一方面外。
与参考序列的百分比同一性(也称作百分比同一)是通过将多肽序列与参考序列比对，并且确定相应区域中相同氨基酸的数目而确定的。用该数目除以参考序列(如SEQ ID NO1)中的氨基酸总数，然后乘100，并且四舍五入到最近的整数。
本发明的另一方面描述了一种免疫原，它包含提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的多肽和一个或多个共价连接于所述多肽的羧基端或氨基端的额外区域或部分，其中每个区域或部分独立地选自具有至少一种以下性质的区域或部分增强免疫应答、促进纯化或促进多肽稳定性。
“额外的区域或部分”表示不同于ORF0826区的区域或部分。额外的区域或部分可以是例如额外的多肽区或非肽区。
本发明的另一方面描述了能够在患者中诱导抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的组合物。该组合物包含药学可接受的载体和免疫有效量的提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的多肽。
免疫有效量是足够提供抗金黄色葡萄球菌感染的保护性免疫的量。该量应该足以显著地防止金黄色葡萄球菌感染的可能性或严重程度。
本发明的另一方面描述了包含重组基因的核酸，所述重组基因编码提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的多肽。重组基因包含编码多肽的重组核酸和用于正确转录和加工的调节元件(其可能包括翻译和翻译后元件)。重组基因可以不依赖于宿主基因组存在，或可以是宿主基因组的一部分。
重组核酸是其序列和/形式天然不存在的核酸。重组核酸的实例包括纯化的核酸、组合在一起的提供不同于天然核酸的核酸的两个或多个核酸区域，以及缺失天然彼此相关的一个或多个核酸区域(如上游或下游区域)。
本发明的另一方面描述了重组细胞。该细胞包含重组基因，该重组基因编码提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的多肽。
本发明的另一方面描述了制备提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的多肽的方法。该方法包含生长含有编码多肽的重组核酸的重组细胞，并且纯化多肽。
本发明的另一方面描述了提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的多肽，该多肽是通过包括以下步骤的方法制备的在宿主中生长含有编码多肽的重组核酸的重组细胞，并且纯化多肽。可以使用不同的宿主细胞。
本发明的另一方面描述了在患者中诱导抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫应答的方法。该方法包括给患者施用免疫有效量的提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的多肽或含有保护性多肽的免疫原的步骤。
除非特定的术语是互斥的，“或”表示任意一种或两种可能性。有时用短语如“和/或”强调是任意一种或两种可能性。
开放式的术语如“包含”允许有额外的元件或步骤。有时用带有或不带有开放式术语的短语如“一种或多种”强调有额外的元件或步骤的可能性。
除非明确指出，术语如“一个”或“一种”不限于一个。例如，“一个细胞”不排除“多个细胞”。有时用短语如一个或多个强调存在多个的可能性。
本发明的其它特征和优点从此处提供的额外说明，包括不同实施例中可以显而易见。提供的实施例举例说明了用于实施本发明的不同成分和方法。实施例不限制要求保护的发明。基于本公开内容，本领域技术人员可以鉴定和使用其它成分和方法，用于实施本发明。
附图简述
图1示出了SEQ ID NO1和SEQ ID NO2的氨基酸序列。完整序列是SEQ ID NO2。粗体表示的部分是SEQ ID NO1。加下划线的区域是添加到SEQ ID NO1的His-标志区。
图2示出了SEQ ID NO1(SEQ 1)SEQ ID NO3(SEQ 3)、SEQ IDNO4(SEQ 4)、SEQ ID NO5(SEQ 5)、SEQ ID NO6(SEQ 6)和SEQID NO7(SEQ 7)的序列比较。氨基酸差异以粗体表示。
图3示出了编码SEQ ID NO2的核酸序列(SEQ ID NO8)。编码SEQ ID NO1的区域以粗体表示。His-标志区和GCC丙氨酸密码子用下划线表示。
图4示出了编码ORF0826的核酸序列(SEQ ID NO9)。
图5A、5B和5C示出了采用羟磷酸铝佐剂(AHP)中的SEQ ID NO2多肽进行的不同实验的结果。多肽称作″SEQ 2″。
发明详述在下文实施例中用SEQ ID NO2举例说明了SEQ ID NO1相关多肽提供保护性免疫的能力。SEQ ID NO2是SEQ ID NO1的His-标志衍生物。His-标志促进了多肽纯化和鉴定。
SEQ ID NO1是称作ORF0826的全长金黄色葡萄球菌多肽的衍生物。与SEQ ID NO1结构相关的多肽包括含有不同金黄色葡萄球菌中存在的相应区域的多肽和天然区域的衍生物。SEQ ID NO1的氨基酸序列由图1中的粗体区域表示。图1也示出了SEQ ID NO2中存在的His-标志区。
ORF0826序列在不同参考文献中赋予ORF0826相关序列不同的名称。不同名称的实例提供于Kuroda et al.，Lancet 3571225-1240，2001(SAV23049和SA2097)；Baba et al.，Lancet3591819-1827，2002(MW2222)；和Etzet al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99(10)6573-6578，2002(SA2295)。
ORF0826与表皮葡萄球菌分泌的抗原Ssa具有高度同源性。Ssa描述于Lang et al.，FEMS Immunology and Medical Microbiology 29213-220，2000。
不同的专利公开中也提供了相应于ORF0826相关序列的多肽序列(2002年8月1日公开的Meinke et al.，国际公开号WO 02/059148，和2002年11月28日公开的Masignani et al.，国际公开号WO 02/094868)。
图2提供了不同ORF0826相关序列的序列比较。SEQ ID NO3是二甲氧基苯青霉素抗性金黄色葡萄球菌(通过检索保藏在www.sanger.ac.uk的核酸序列数据而获得)，SEQ ID NO4相应于WO02/059148序列标识号73，SEQ ID NO5相应于WO 02/094868序列标识号782，SEQ ID NOs6和7是额外的天然序列。
可以基于与公知的ORF0826序列相比高度序列相似性或连续氨基酸的存在而鉴定其它天然ORF0826序列。连续氨基酸提供了特征性标志。在不同的实施方案中，天然ORF0826序列是存在于葡萄球菌，优选金黄色葡萄球菌中的序列，其具有SEQ ID NO1中的至少20个、至少30个或至少50个连续氨基酸；和/或与SEQ ID NO1具有至少85％序列相似性或同一性。
可以通过本领域公知的不同算法和技术确定序列相似性。通常，通过在序列之一中允许空位、添加和缺失的情况下比对两个序列以获得最大氨基酸同一性的技术确定序列相似性。
例如，可以采用利用lalign程序的局部比对工具(由Huang andMiller，Adv.Appl.Math.12337-357，1991开发，针对sim程序)确定序列。选项和环境变量是-f#第一个残基是空位的罚分(缺省值是-14)；-g#空位中每个额外残基的罚分(缺省值是-4)-s str(SMATRIX)可供选择的评分矩阵文件的文件名。对于蛋白序列，通过缺省的-w#(LINLEN)序列比对输出线长度(60)使用PAM250。
SEO ID NO1相关多肽SEQ ID NO1相关多肽含有与SEQ ID NO1具有至少85％同一性的氨基酸序列。“多肽”不提供最小或最大大小限制。
与SEQ ID NO1具有至少85％同一性的多肽含有对SEQ ID NO1的最多约25个氨基酸改变。在不同的实施方案中，SEQ ID NO1相关多肽与SEQ ID NO1具有至少90％、至少94％或至少99％同一性；与SEQ ID NO1有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的不同；或基本由SEQ ID NO1的氨基酸2-167组成。每个氨基酸改变独立地是添加、取代或缺失。
“基本由指定的氨基酸组成”表示存在指出的氨基酸，并且可能存在额外的氨基酸。额外的氨基酸可以在羧基端或氨基端。在不同实施方案中，存在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个额外的氨基酸。优选的额外氨基酸是氨基端甲硫氨酸。
可以对SEQ ID NO1进行改变，获得可包括抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的衍生物。例如，可以进行改变，获得保留诱导抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫的衍生物或获得除提供保护性免疫，也具有能够实现特定目的的区域的衍生物。
可以用图2中提供的序列比较辅助指导对SEQ ID NO1的可能改变的设计。此外，可以考虑其它ORF0826序列和氨基酸的公知性质而进行改变。
通常，在取代不同氨基酸而保留活性时，优选改变具有相似特性的氨基酸。氨基酸取代中要考虑的因素包括氨基酸大小、电荷、极性和疏水性。不同氨基酸R基团对氨基酸特性的影响是本领域公知的(例如参见Ausubel，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley，1987-2002，Appendix 1C.)。
在改变氨基酸而保留活性时，取代氨基酸应该具有一种或多种相似特性如大致相同的电荷和/或大小和/或极性和/或疏水性。例如，用缬氨酸取代亮氨酸、用精氨酸取代赖氨酸和用天冬酰胺取代谷氨酰胺是不改变多肽功能的良好候选物。
改变以获得特定的目的包括设计用于促进多肽生产或效力的那些；或克隆编码的核酸。可以通过使用适于重组表达的起始密码子(如编码甲硫氨酸)促进多肽生产。甲硫氨酸可以在细胞加工的更晚期去除。例如，可以通过导入伴随氨基酸添加或改变的限制位点而促进克隆。
可以通过表位增强而增强多肽诱导免疫应答的效力。可以用不同技术进行表位增强，如涉及改变锚定残基以改进对MHC分子的肽亲和力的那些和增加肽-MHC复合物对T细胞受体的亲和力的那些(Berzofsky et al.，Nature Review 1209-219，2001.)。
优选地，多肽是纯化的多肽。“纯化的多肽”存在于缺乏与其天然相关的一种或多种其它多肽的环境中，和/或占存在的总蛋白的至少约10％。在不同实施方案中，纯化的多肽占样品或制剂中总蛋白的至少约50％、至少约75％或至少约95％。
在一种实施方案中，多肽是“基本纯化的”。基本纯化的多肽存在于缺乏所有或大多数与该多肽天然相关的其它多肽的环境中。例如，基本纯化的金黄色葡萄球菌多肽存在于缺乏所有或大多数其它金黄色葡萄球菌多肽的环境中。环境可以是例如样品或制剂。
“纯化的”或“基本纯化的”不要求多肽进行任何纯化过程，并且可能包括，例如没有经过纯化的化学合成的多肽。
可以通过修饰多肽羧基端或氨基端而增强多肽稳定性。可能的修饰的实例包括氨基端保护基如乙酰基、丙基、琥珀酰基、苄基、苄氧羰基或叔丁氧羰基；羧基端保护剂如酰胺、甲基酰胺和乙基酰胺。
在本发明的一种实施方案中，多肽免疫原是含有一个或多个与多肽的羧基端或氨基端共价连接的区域或部分的免疫原的一部分，其中每个区域或部分独立地选自具有至少一种以下特性的区域或部分增强免疫应答、促进纯化或促进多肽稳定性。例如，可以用可能存在于氨基或羧基端上的诸如聚乙二醇的基团增强多肽稳定性。
可以通过在羧基端或氨基端添加基团而增强多肽纯化，从而促进纯化。可以用于促进纯化的基团的实例包括提供亲和标志的多肽。亲和标志的实例包括六组氨酸标志、trpE、谷胱甘肽和麦芽糖结合蛋白。
可以用通常增强免疫应答的基团增强多肽产生免疫应答的能力。可以连接于多肽以增强抗多肽的免疫应答的基团的实例包括诸如IL-2细胞因子(Buchan et al.，2000.Molecular Immunology 37545-552.)。
多肽生产可以用包括涉及化学合成和涉及从生产多肽的细胞纯化的那些标准技术生产多肽。用于化学合成多肽的技术是本领域公知的(参见，例如Vincent，Peptide and Protein Drug Delivery，New York，N.Y.，Decker，1990.)。用于重组多肽生产和纯化的技术是本领域公知的(参见，例如Ausubel，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley，1987-2002.)。
用重组核酸技术促进从细胞获得多肽，以生产多肽。用于生产多肽的重组核酸技术包括在细胞中导入或生产编码多肽的重组基因并且表达多肽。
重组基因包含编码多肽的核酸和用于多肽表达的调节元件。重组基因可以存在于细胞基因组中，或者可以是表达载体的一部分。
可以作为重组基因的一部分存在的调节元件包括与多肽编码序列天然相关的那些和不与多肽编码序列天然相关的外源调节元件。诸如外源启动子的外源调节元件可以用于在特定宿主中表达重组基因或增加表达水平。通常，存在于重组基因中的调节元件包括转录启动子、核糖体结合位点、终止子和任选存在的操纵子。用于在真核细胞中加工的优选元件是聚腺苷酸化信号。
通过采用表达载体促进重组基因在细胞中的表达。优选地，除重组基因，表达载体还包含用于在宿主细胞中自主复制的复制起点、选择标记、有限数目的有用的限制酶位点和高拷贝数的潜能。表达载体的实例是克隆载体、修饰的克隆载体、具体命名的质粒和病毒。
由于遗传密码的简并性，可以用大量不同的编码核酸序列来编码特定的多肽。遗传密码的简并性是由于几乎所有的氨基酸都是由不同的核酸三联体组合或“密码子”编码的。氨基酸由如下密码子编码A＝Ala＝丙氨酸密码子GCA，GCC，GCG，GCUC＝Cys＝半胱氨酸密码子UGC，UGU
D＝Asp＝天冬氨酸密码子GAC，GAUE＝Glu＝谷氨酸密码子GAA，GAGF＝Phe＝苯丙氨酸密码子UUC，UUUG＝Gly＝甘氨酸密码子GGA，GGC，GGG，GGUH＝His＝组氨酸密码子CAC，CAUI＝Ile＝异亮氨酸密码子AUA，AUC，AUUK＝Lys＝赖氨酸密码子AAA，AAGL＝Leu＝亮氨酸密码子UUA，UUG，CUA，CUC，CUG，CUUM＝Met＝甲硫氨酸密码子AUGN＝Asn＝天冬酰胺密码子AAC，AAUP＝Pro＝脯氨酸密码子CCA，CCC，CCG，CCUQ＝Gln＝谷氨酰胺密码子CAA，CAGR＝Arg＝精氨酸密码子AGA，AGG，CGA，CGC，CGG，CGUS＝Ser＝丝氨酸密码子AGC，AGU，UCA，UCC，UCG，UCUT＝Thr＝苏氨酸密码子ACA，ACC，ACG，ACUV＝Val＝缬氨酸密码子GUA，GUC，GUG，GUUW＝Trp＝色氨酸密码子UGGY＝Tyr＝酪氨酸密码子UAC，UAU用于SEQ ID NO1相关多肽的重组核酸表达的合适细胞是原核细胞和真核细胞。原核细胞的实例包括大肠杆菌；葡萄球菌属的成员，如金黄色葡萄球菌；乳杆菌属的成员，如植物乳杆菌；乳球菌属的成员，如乳酸乳球菌；和芽孢杆菌属的成员，如枯草芽孢杆菌。真核细胞的实例包括哺乳动物细胞；昆虫细胞；酵母细胞，如糖酵母属的成员(如啤酒糖酵母)，毕赤酵母属的成员(如巴斯德毕赤酵母)，汉逊酵母属的成员(如多形汉逊酵母)、克鲁维酵母属的成员(如乳酸克鲁维酵母或脆壁克鲁维酵母)和裂殖酵母属的成员(如粟酒裂殖酵母)。
用于重组基因生产、导入细胞和重组基因表达的技术是本领域公知的。所述技术的实例提供于诸如Ausubel，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley，1987-2002和Sambrook et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，2nd Edition，Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989的参考文献中。
如果需要，可以通过密码子优化增强特定宿主中的表达。密码子优化包括使用更优选的密码子。不同宿主中密码子优化的技术是本领域公知的。
SEQ ID NO1相关多肽可以包含翻译后修饰，例如，N-连接的糖基化、O-连接的糖基化或乙酰化。“多肽”或多肽的“氨基酸”序列包括含有一个或多个具有来自诸如酵母宿主的宿主细胞的翻译后修饰结构的氨基酸的多肽。
可以化学生产或用合适的宿主生产翻译后修饰。例如，在啤酒糖酵母中，倒数第二个氨基酸的性质似乎决定了是否去除N-末端甲硫氨酸。此外，倒数第二个氨基酸的性质也决定了N-末端氨基酸是否是Nα-乙酰化的(Huang et al.，Biochemistry 268242-8246，1987)。另一个实例包括由于分泌前导序列(如信号肽)的存在而被靶定用于分泌的多肽，其中蛋白通过N-连接或O-连接的糖基化进行了修饰(Kukuruzinska et al.，Ann.Rev.Biochem.56915-944，1987.)。
佐剂佐剂是能够辅助免疫原产生免疫应答的物质。佐剂可以通过不同的机制起作用，如以下一种或多种增加抗原的生物或免疫半衰期；改进抗原向抗原呈递细胞的送递；改进抗原呈递细胞的抗原加工和呈递；以及诱导免疫调节性细胞因子的产生(Vogel，Clinical InfectiousDiseases 30(suppl.3)S266-270，2000.)。
多种不同类型的佐剂可以用于辅助产生免疫应答。特定佐剂的实例包括氢氧化铝、磷酸铝或其它铝盐、磷酸钙、DNA CpG基序、单磷脂酰脂质A、霍乱毒素、大肠杆菌热不稳定性毒素、百日咳毒素、胞壁酰二肽、弗氏不完全佐剂、MF59、SAF、免疫刺激复合物、脂质体、可生物降解的微球、皂苷、非离子型嵌段共聚物、胞壁酰肽类似物、聚磷腈、合成的多核苷酸、IFN-γ、IL-2和IL-12(Vogel ClinicalInfectious Diseases 30(suppl 3)S266-270，2000，Klein et al.，Journalof Pharmaceutical Sciences 89311-321，2000.)。
诱导保护性免疫的患者“患者”是指能够被金黄色葡萄球菌感染的哺乳动物。可以对患者进行预防性或治疗性处理。预防性处理提供了足够的保护性免疫，以降低金黄色葡萄球菌感染的可能性或严重程度。可以进行治疗性处理，以降低金黄色葡萄球菌感染的严重程度。
可以用含有此处描述的免疫原的疫苗进行预防性处理。所述处理优选对人进行。可以给普通人群或具有金黄色葡萄球菌感染风险的人施用疫苗。
具有金黄色葡萄球菌感染风险的人包括保健工作者；医院中的患者；免疫系统减弱的患者；进行手术的患者；接受外来的身体植入物如导管或血管装置的患者；面临导致免疫减弱的治疗的患者；和从事具有烧伤或创伤风险的职业的患者(The Staphylococci inHumanDisease，Crossley and Archer(ed.)，Churchill Livingstone Inc.1997.)。
可以被金黄色葡萄球菌感染的非人患者包括牛、猪、绵羊、山羊、兔、马、狗、猫和小鼠。对非人患者的处理用于保护宠物和家畜，并且用于评估特定治疗的效果。
联合疫苗可以单独使用或与其它免疫原联合使用SEQ ID NO1相关多肽来诱导免疫应答。可以存在的额外免疫原包括一种或多种额外的金黄色葡萄球菌免疫原，如上文发明背景部分提到的那些；一种或多种靶定一种或多种其它葡萄球菌生物的免疫原，所述葡萄球菌生物如表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、路邓葡萄球菌；和一种或多种靶定其它感染微生物的免疫原。
动物模型系统用动物模型系统评估免疫原产生抗葡萄球菌的保护性免疫应答的效力。建立保护性动物模型中遇到的两个障碍是(1)需要非常高的攻击剂量来克服先天免疫，和(2)死亡速度太快，以至于不能检测保护性应答。具体地，在细菌攻击小鼠后，小鼠在24小时内死于感染，这不能提供足够的时间来产生特异性免疫应答以解决感染问题。如果剂量降低，对照和免疫小鼠都能在感染后存活。
通过使用慢动力学致死模型克服了这些障碍，该模型涉及从静止期的细胞制备的、合适滴定的、和静脉内施用的葡萄球菌。该死亡的慢动力学提供了足够的时间产生抵抗细菌感染的特异性免疫防御(如10天，而不是24小时)。
可以从在固体培养基上生长的细胞获得静止期的葡萄球菌细胞。也可以从液体获得这些细胞，但是，用固体培养基上生长的细胞获得的结果更具有可重复性。通常在固体培养基上使细胞生长过夜。例如，金黄色葡萄球菌可以在使加倍时间是大约20-30分钟的条件下生长大约18-大约24小时。
可以用标准技术从固体或液体培养基分离葡萄球菌，以维持葡萄球菌效能。可以将分离的葡萄球菌作为含有甘油的磷酸缓冲液中的洗涤过的高密度悬浮液(＞109个菌落形成单位(CFU)/mL)储存于例如-70℃。
葡萄球菌攻击应该具有在从第一天或第二天开始的大约7-10天的时间段中在动物模型中提供大约80-90％死亡率的效能。可以用动物模型进行滴定实验，以监测储存的葡萄球菌接种物的效能。可以在接种实验前1-2周进行滴定实验。
滴定实验的最初效能可以基于以前的实验。对于金黄色葡萄球菌和动物模型株Becker，合适的效能通常是5×108-8×108CFU/ml。
施用可以用此处提供的指导，结合本领域公知的技术配制免疫原并且给患者施用。药物施用的指导通常提供于例如Vaccines Eds.Plotkinand Orenstein，W.B.Sanders Company，1999；Remington′sPharmaceutical Sciences 20th Edition，Ed.Gennaro，Mack Publishing，2000；和Modem Pharmaceutics 2nd Edition，Eds.Banker and Rhodes，Marcel Dekker，Inc.，1990，在此引入每篇文献作为参考。
药学可接受的载体促进免疫原的储存和给患者的施用。药学可接受的载体可以包含不同的成分，如缓冲液、无菌注射用水、生理盐水或磷酸缓冲液、蔗糖、组氨酸、盐和聚山梨醇酯。
可以通过不同的途径施用免疫原，如皮下、肌内或粘膜。可以采用例如针头或喷射注射器进行皮下和肌内注射。
优选考虑本领域公知的因素来确定合适的给药方案，所述因素包括患者的年龄、体重、性别和医学状况；施用途径；需要的效果和使用的特定化合物。可以以多剂疫苗形式使用免疫原。预计剂量将是1.0μg-1.0mg总多肽的范围，在本发明的不同实施方案中，该范围是0.01mg-1.0mg和0.1mg-1.0mg。
给药的时间取决于本领域公知的因素。在最初施用后，随后可以施用一个或多次加强剂量，以维持或加强抗体滴度。给药方案的实例可是第1天、1个月、在4、6或12个月施用第三剂，按照需要在更远的时间施用额外的加强剂量。
抗体的制备可以用SEQ ID NO1相关多肽制备结合于多肽或结合于金黄色葡萄球菌的抗体和抗体片段。所述抗体和抗体片段具有不同的用途，包括用于多肽纯化、金黄色葡萄球菌鉴定或抗金黄色葡萄球菌感染的治疗性或预防性处理。
抗体可以是多克隆或单克隆的。生产和使用抗体的技术是本领域公知的。所述技术的实例描述于Ausubel，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley，1987-2002，Harlow et al.，Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，1988和Kohleret al.，Nature 256495-497，1975。
实施例下文提供了进一步说明本发明的不同特征的实施例。实施例也举例说明了用于实施本发明的有用的方法。这些实施例不限制要求保护的发明。
实施例1保护性免疫该实施例说明了SEQ ID NO1相关多肽在动物模型中提供保护性免疫的能力。用SEQ ID NO1的His-标志衍生物，即SEQ ID NO2来提供保护性免疫。
SEQ ID NO2克隆和表达设计从带有由载体编码的末端His残基的pET30载体表达蛋白。此外，在起始的甲硫氨酸后给蛋白添加丙氨酸残基。该设计的DNA序列编码成熟ORF0826的具有211个氨基酸的改变形式。
用Vector NTI软件翻译ORF0826DNA序列(SEQ ID NO9)，分析得到的具有167个氨基酸的序列(SEQ ID NO4)。设计PCR引物，扩增从第一个赖氨酸残基开始，终止于终止密码子前的末端异亮氨酸残基的基因。正向PCR引物具有额外的NcoI限制位点，以促进克隆到表达载体中，它们也包含甲硫氨酸密码子，其后是丙氨酸密码子，以确保蛋白符合读框地表达。反向PCR引物包括促进克隆到表达载体的XhoI限制位点和终止密码子。
用NcoI和XhoI消化PCR扩增的序列，然后用工程化到PCR引物中的NcoI/XhoI位点连接到pET30载体(Novagen)中，并且通过热激导入大肠杆菌DH5α(Invitrogen)。选择菌落，在含有30μg/mL卡那霉素的LB中生长，制备DNA微量制备物(Promega)，并且通过限制消化和PCR确定插入片段的完整性。选择不含对需要的序列进行DNA改变的克隆。
转化大肠杆菌HMS 174(DE3)细胞(Novagen)，在含有卡那霉素(30μg/mL)的LB板上生长。用来自LB(卡那霉素)板的单菌落进行接种，在37℃，250rpm温育，直到A600为0.6-1.0，然后通过加入IPTG到1mM的终浓度进行诱导，然后再温育3小时，从而建立液体LB(卡那霉素)培养物。通过4℃下5000xg离心5分钟收获培养物。将细胞重悬于500μl裂解缓冲液(Bugbuster，含有蛋白酶抑制剂，Novagen)。加入等体积的加样缓冲液(用β-巯基乙醇补充到5％的终体积)，然后在70℃将样品加热5分钟。在Novex 4-20％Tris-甘氨酸凝胶上对提取物进行电泳，测定(考马斯亮蓝染色的)蛋白，印迹到硝酸纤维素膜上，用抗HIS6抗体(Zymed)探测。
SEQ ID NO2纯化将冷冻的重组大肠杆菌细胞糊(17.3克)在100ml裂解缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 8.0，20℃+2mM氯化镁，10mM咪唑，0.1％Tween-80，0.15M NaCl，100uL Benzonase(25,000个单位)，1ml蛋白酶抑制剂(Sigma#P-8849)和100mg溶菌酶)中融化。用大约14,000psi的微流化器制备裂解物。通过在4℃下11,000xg离心20分钟使裂解物澄清。用TBS(0.15M NaCl，溶于20mM Tris-HCI，pH 8.0)将沉淀物洗涤两次，重悬于TBS中的8M尿素中，以便从沉淀物溶解蛋白。将可溶于尿素的蛋白溶液与Ni-NTA琼脂糖色谱树脂(Qiagen#30250)混合，室温下搅拌1小时。
将尿素可溶的蛋白溶液中的色谱树脂浆倾注到色谱柱，从柱子出口通过重力收集未结合的级分。用TBS洗涤树脂，用洗脱缓冲液(0.3M咪唑，0.15M NaCl，20mM Tris-HCI，pH 7.5，+0.1％Tween-80)洗脱柱子。通过SDS/PAGE和考马斯亮蓝染色鉴定含有蛋白产物的级分，并且合并。使从Ni-NTA琼脂糖柱合并的级分通过Zeta PlusBioCapTM过滤器(CUNO#BC0030A90SP)进行过滤。在10,000 MWCOSlide-A-LyzerTM透析盒(Pierce)中用透析缓冲液(20mM Tris-HCI，pH 7.5，0.15M NaCl，0.1％Tween-80)对过滤物进行透析。无菌过滤的产物以0.2mg/ml的终浓度吸附在羟磷酸铝上。无菌过滤的产物的残余物在液氮中迅速冷冻，在-70℃长期储存。
金黄色葡萄球菌攻击的制备金黄色葡萄球菌在37℃下在TSA板上生长过夜。通过在板上添加5ml PBS而从TSA板上洗出细菌，用无菌喷液器轻柔重悬细菌。用Sorvall RC-5B离心机(DuPont Instruments)以6000rpm将细菌悬浮液离心20分钟。将沉淀物重悬于16％甘油，在-70℃储存等分物。
在使用前，使接种物融化，大致稀释，用于感染。对每份储液滴定至少3次，以确定在幼稚小鼠中诱导慢死亡动力学的合适剂量。持续监测细菌接种物的效能(80-90％致死率)，以确保模型的可重复性。在每个攻击实验前10天，攻击一组10只对照动物(用单独的佐剂免疫)并且监测。
对SEQ ID NO2多肽的保护作用研究用(1)25只BALB/c小鼠，(2)20只BALB/c小鼠，和(3)20只BALB/c小鼠进行三次不同的保护作用研究。用三剂添加了羟磷酸铝佐剂(每剂450μg)的SEQ ID NO2多肽(每剂20μg)对小鼠进行免疫。羟磷酸铝佐剂(AHP)描述于Klein et al.，Journal of PharmaceuticalSciences 89，311-321，2000。这三剂是在第0、7和21天作为两次50μl注射而施用的。在第28天对小鼠取血，通过ELSIA筛选它们的血清中对识别SEQ ID NO2的抗体的反应性。
在实验第35天，用金黄色葡萄球菌(108CFU ml)攻击小鼠，与刚刚用AHP免疫的相同数目小鼠的对照组进行比较评估。监测小鼠的存活。
结果示于图5A、5B和5C。在第一个实验中(图5A)，25只免疫的小鼠中9只存活，而AHP对照组的25只中3只存活。在第二个实验中(图5B)，采用20只免疫的小鼠和20只对照小鼠，与对照相比，没有观察到保护作用增加。在第三个实验中(图5C)，20只免疫的小鼠中8只存活，而AHP对照组中30只中6只存活。
第二个实验被认为是无效实验，因为对照AHP组中有大量小鼠存活(13只小鼠)。无效实验有时是因为采用该模型进行实验中的困难导致的，这取决于用于攻击的细菌的数量和质量。
以下权利要求中包括了其它实施方案。尽管已经显示和描述了一些实施方案，可以进行多个修改而不离开本发明的精神和范围。
序列表<110>Merck & Co.，Inc.
<120>诱导抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫应答的多肽<130>21628 PCT<150>60/574,032<151>2004-05-25<160>9<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>167<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>含有添加在起始甲硫氨酸后的丙氨酸的ORF0826衍生物<400>1Met Ala Lys Lys Leu Val Thr Ala Thr Thr Leu Thr Ala Gly Ile Gly1 5 10 15Thr Ala Leu Val Gly Gln Ala Tyr His Ala Asp Ala Ala Glu Asn Tyr20 25 30Thr Asn Tyr Asn Asn Tyr Asn Tyr Asn Thr Thr Gln Thr Thr Thr Thr35 40 45Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Ser Ile Ser His Ser Gly Asn Leu50 55 60Tyr Thr Ala Gly Gln Cys Thr Trp Tyr Val Tyr Asp Lys Val Gly Gly65 70 75 80Glu Ile Gly Ser Thr Trp Gly Asn Ala Asn Asn Trp Ala Ala Ala Ala85 90 95Gln Gly Ala Gly Phe Thr Val Asn His Thr Pro Ser Lys Gly Ala Ile100 105 110Leu Gln Ser Ser Glu Gly Pro Phe Gly His Val Ala Tyr Val Glu Ser115 120 125Val Asn Ser Asp Gly Ser Val Thr Ile Ser Glu Met Asn Tyr Ser Gly130 135 140Gly Pro Phe Ser Val Ser Ser Arg Thr Ile Ser Ala Ser Glu Ala Gly145 150 155 160Asn Tyr Asn Tyr Ile His Ile165
<210>2<211>211<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SEQ ID NO1的His-标志衍生物<400>2Met His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro Arg Gly Ser1 5 10 15Gly Met Lys Glu Thr Ala Ala Ala Lys Phe Glu Arg Gln His Met Asp20 25 30Ser Pro Asp Leu Gly Thr Asp Asp Asp Asp Lys Ala Met Ala Lys Lys35 40 45Leu Val Thr Ala Thr Thr Leu Thr Ala Gly Ile Gly Thr Ala Leu Val50 55 60Gly Gln Ala Tyr His Ala Asp Ala Ala Glu Asn Tyr Thr Asn Tyr Asn65 70 75 80Asn Tyr Asn Tyr Asn Thr Thr Gln Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr85 90 95Thr Thr Thr Ser Ser Ile Ser His Ser Gly Asn Leu Tyr Thr Ala Gly100 105 110Gln Cys Thr Trp Tyr Val Tyr Asp Lys Val Gly Gly Glu Ile Gly Ser115 120 125Thr Trp Gly Asn Ala Asn Asn Trp Ala Ala Ala Ala Gln Gly Ala Gly130 135140Phe Thr Val Asn His Thr Pro Ser Lys Gly Ala lle Leu Gln Ser Ser145 150 155 160Glu Gly Pro Phe Gly His Val Ala Tyr Val Glu Ser Val Asn Ser Asp165 170 175Gly Ser Val Thr Ile Ser Glu Met Asn Tyr Ser Gly Gly Pro Phe Ser180 185 190Val Ser Ser Arg Thr Ile Ser Ala Ser Glu Ala Gly Asn Tyr Asn Tyr195 200 205Ile His Ile210<210>3<211>162<212>PRT<213>金黄色葡萄球菌<400>3Met Lys Lys Leu Val Thr Ala Thr Thr Leu Thr Ala Gly Ile Gly Thr1 5 l0 15
Ala Leu Val Gly His Ala Gln His Ala Asp Ala Ala Glu Asn Tyr Thr20 25 30Asn Tyr Asn Tyr Asn Thr Thr Gln Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr35 40 45Thr Thr Thr Ser Ser Ile Ser His Ser Gly Asn Leu Tyr Thr Ala Gly50 55 60Gln Cys Thr Trp Tyr Val Tyr Asp Lys Val Gly Gly Glu Ile Gly Ser65 70 75 80Thr Trp Gly Asn Ala Asn Asn Trp Ala Ala Ala Ala Gln Gly Ala Gly85 90 95Phe Thr Val Asn His Thr Pro Ser Lys Gly Ala Ile Leu Gln Ser Ser100 105 110Glu Gly Pro Phe His Val Ala Tyr Val Glu Ser Val Asn Ser Asp Gly115 120 125Ser Val Thr Ile Ser Glu Met Asn Tyr Ser Gly Gly Pro Phe Ser Val130 135 140Ser Ser Arg Thr Ile Ser Ala Ser Glu Ala Gly Asn Tyr Asn Tyr Ile145 150155 160His Ile<210>4<211>166<212>PRT<213>金黄色葡萄球菌<400>4Met Lys Lys Leu Val Thr Ala Thr Thr Leu Thr Ala Gly Ile Gly Thr1 5 10 15Ala Leu Val Gly Gln Ala Tyr His Ala Asp Ala Ala Glu Asn Tyr Thr20 25 30Asn Tyr Asn Asn Tyr Asn Tyr Asn Thr Thr Gln Thr Thr Thr Thr Thr35 40 45Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Ser Ile Ser His Ser Gly Asn Leu Tyr50 55 60Thr Ala Gly Gln Cys Thr Trp Tyr Val Tyr Asp Lys Val Gly Gly Glu65 70 75 80Ile Gly Ser Thr Trp Gly Asn Ala Asn Asn Trp Ala Ala Ala Ala Gln85 90 95Gly Ala Gly Phe Thr Val Asn His Thr Pro Ser Lys Gly Ala Ile Leu100 105 110Gln Ser Ser Glu Gly Pro Phe Gly His Val Ala Tyr Val Glu Ser Val115 120 125Asn Ser Asp Gly Ser Val Thr Ile Ser Glu Met Asn Tyr Ser Gly Gly130 135 140Pro Phe Ser Val Ser Ser Arg Thr Ile Ser Ala Ser Glu Ala Gly Asn145 150 155 160
Tyr Asn Tyr Ile His Ile165<210>5<211>166<212>PRT<213>金黄色葡萄球菌<400>5Met Lys Lys Leu Val Thr Ala Thr Thr Leu Thr Ala Gly Ile Gly Thr1 5 10 15Ala Leu Val Gly Gln Ala His His Ala Asp Ala Ala Glu Asn Tyr Thr20 25 30Asn Tyr Asn Asn Tyr Asn Tyr Asn Thr Thr Gln Thr Thr Thr Thr Thr35 40 45Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Ser Ile Ser His Ser Gly Asn Leu Tyr50 55 60Thr Ala Gly Gln Cys Thr Trp Tyr Val Tyr Asp Lys Val Gly Gly Glu65 70 75 80Ile Gly Ser Thr Trp Gly Asn Ala Asn Asn Trp Ala Ala Ala Ala Gln85 90 95Gly Ala Gly Phe Thr Val Asn His Thr Pro Ser Lys Gly Ala Ile Leu100 105 110Gln Ser Ser Glu Gly Pro Phe Gly His Val Ala Tyr Val Glu Ser Val115 120 125Asn Ser Asp Gly Ser Val Thr Ile Ser Glu Met Asn Tyr Ser Gly Gly130 135 140Pro Phe Ser Val Ser Ser Arg Thr Ile Ser Ala Ser Glu Ala Gly Asn145 150 155 160Tyr Asn Tyr Ile His Ile165<210>6<211>166<212>PRT<213>金黄色葡萄球菌<400>6Gly Gln Lys Leu Val Thr Ala Thr Thr Leu Thr Ala Gly Ile Gly Thr1 5 10 15Ala Leu Val Gly Gln Ala His His Ala Asp Ala Ala Glu Asn Tyr Thr20 25 30Asn Tyr Asn Asn Tyr Asn Tyr Asn Thr Thr Gln Thr Thr Thr Thr Thr35 40 45Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Ser Ile Ser His Ser Gly Asn Leu Tyr50 55 60
Thr Ala Gly Gln Cys Thr Trp Tyr Val Tyr Asp Lys Val Gly Gly Glu65 70 75 80Ile Gly Ser Thr Trp Gly Asn Ala Asn Asn Trp Ala Ala Ala Ala Gln85 90 95Gly Ala Gly Phe Thr Val Asn His Thr Pro Ser Lys Gly Ala Ile Leu100 105 110Gln Ser Ser Glu Gly Pro Phe Gly His Val Ala Tyr Val Glu Ser Val115 120 125Asn Ser Asp Gly Ser Val Thr Ile Ser Glu Met Asn Tyr Ser Gly Gly130 135 140Pro Phe Ser Val Ser Ser Arg Thr Ile Ser Ala Ser Glu Ala Gly Asn145 150 155 160Tyr Asn Tyr Ile His Ile165<210>7<211>161<212>PRT<213>金黄色葡萄球菌<400>7Met Lys Lys Leu Val Thr Ala Thr Thr Leu Thr Ala Gly Ile Gly Thr1 5 10 15Ala Leu Val Gly Gln Val His His Ala Asp Ala Ala Glu Asn Tyr Thr20 25 30Asn Tyr Asn Asn Tyr Asn Tyr Asn Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr35 40 45Thr Ser Ser Ile Ser His Ser Gly Asn Leu Tyr Thr Ala Gly Gln Cys50 55 60Thr Trp Tyr Val Tyr Asp Lys Val Gly Gly Glu Ile Gly Ser Thr Trp65 70 75 80Gly Asn Ala Asn Asn Trp Ala Ala Ala Ala Gln Gly Ala Gly Phe Thr85 90 95Val Asn His Thr Pro Ser Lys Gly Ala Ile Leu Gln Ser Ser Glu Gly100 105 110Pro Phe Gly His Val Ala Tyr Val Glu Ser Val Asn Ser Asp Gly Ser115 120 125Val Thr Ile Ser Glu Met Asn Tyr Ser Gly Gly Pro Phe Ser Val Ser130 135 140Ser Arg Thr Ile Ser Ala Ser Glu Ala Gly Asn Tyr Asn Tyr Ile His145 150 155 160Ile<210>8<211>636
<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>编码SEQ ID NO2的核酸序列<400>8atgcaccatc atcatcatca ttcttctggt ctggtgccac gcggttctgg tatgaaagaa 60accgctgctg ctaaattcga acgccagcac atggacagcc cagatctggg taccgacgac 120gacgacaagg ccatggccaa aaaattagta acagcaacta cgttaacagc aggaatcggc 180acagcattag taggtcaagc atatcatgca gatgctgctg aaaattatac aaattacaac 240aactataact acaacacgac tcaaactaca acgactacga caactacgac aactacatca 300tcaatttcac attctggtaa cttatacact gcaggacaat gtacttggta tgtatatgat 360aaagttggcg gagaaatcgg ttctacttgg ggaaatgcta ataattgggc tgctgctgca 420caaggtgctg gattcacagt aaatcataca ccttctaaag gcgctatcct acaatcttct 480gaaggaccat ttggtcacgt tgcatatgta gaaagtgtaa acagtgatgg ttcagttaca 540atttcagaaa tgaattatag tggcggacct ttctcagtaa gttctagaac tatttctgca 600agtgaagcag gtaactacaa ctacatccat atttaa 636<210>9<211>498<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>编码ORF0826的cDNA<400>9atgaaaaaat tagtaacagc aactacgtta acagcaggaa tcggcacagc attagtaggt 60caagcatatc atgcagatgc tgctgaaaat tatacaaatt acaacaacta taactacaac 120acgactcaaa ctacaacgac tacgacaact acgacaacta catcatcaat ttcacattct 180ggtaacttat acactgcagg acaatgtact tggtatgtat atgataaagt tggcggagaa 240atcggttcta cttggggaaa tgctaataat tgggctgctg ctgcacaagg tgctggattc 300acagtaaatc atacaccttc taaaggcgct atcctacaat cttctgaagg accatttggt 360cacgttgcat atgtagaaag tgtaaacagt gatggttcag ttacaatttc agaaatgaat 420tatagtggcg gacctttctc agtaagttct agaactattt ctgcaagtga agcaggtaac 480tacaactaca tccatatt 498
权利要求
1.一种多肽免疫原，包含与SEQ ID NO1具有至少85％的同一性的氨基酸序列，其中所述多肽不是SEQ ID NOs3、4或5，其中所述多肽提供抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫。
2.权利要求1的多肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO1具有至少95％的同一性。
3.权利要求2的多肽，其中所述氨基酸序列基本由SEQ ID NO1的氨基酸3-167组成。
4.权利要求1的多肽，其中所述多肽由SEQ ID NO1的氨基酸序列、SEQ ID NO1的氨基酸2-167，或SEQ ID NO1的氨基酸3-167组成。
5.一种多肽免疫原，包含与SEQ ID NO1具有至少85％的同一性的氨基酸序列和一个或多个共价连接于所述氨基酸序列的羧基端或氨基端的额外区域或部分，其中每个区域或部分独立地选自具有至少一种以下性质的区域或部分增强免疫应答、促进纯化或促进多肽稳定性。
6.能够在患者中诱导保护性免疫应答的组合物，包含免疫有效量的权利要求1-5的任一项的免疫原和药学可接受的载体。
7.权利要求6的组合物，其中所述组合物进一步包含佐剂。
8.包含重组基因的核酸，所述重组基因包含编码权利要求1-4的任一项的多肽的核苷酸序列。
9.权利要求8的核酸，其中所述核酸是表达载体。
10.包含重组基因的重组细胞，所述重组基因包含编码权利要求1-4的任一项的多肽的核苷酸序列。
11.制备提供保护性免疫的金黄色葡萄球菌多肽的方法，包括以下步骤(a)在表达所述多肽的条件下生长权利要求10的重组细胞；和(b)纯化所述多肽。
12.在患者中诱导保护性免疫应答的方法，包括给所述患者施用免疫有效量的权利要求1-5的任一项的免疫原的步骤。
13.权利要求12的方法，其中所述患者是人。
14.权利要求13的方法，其中所述患者进行了抗金黄色葡萄球菌感染的预防性处理。
15.在患者中诱导保护性免疫应答的方法，包括给所述患者施用免疫有效量的由权利要求11的方法制备的多肽的步骤。
全文摘要
本发明表征了包含与SEQ ID NO1结构上相关的氨基酸序列的多肽及所述多肽的用途。SEQ ID NO1是全长金黄色葡萄球菌多肽的衍生物。全长天然多肽在此称作全长“ORF0826”。SEQ ID NO1衍生物包含起始甲硫氨酸后的丙氨酸添加。发现SEQ ID NO1的His－标志产生抗金黄色葡萄球菌的保护性免疫应答。
文档编号A61K39/085GK1956727SQ200580016839
公开日2007年5月2日 申请日期2005年5月20日 优先权日2004年5月25日
发明者A·S·安德森 申请人:默克公司