用于治疗变应性疾病的局部用制剂的制作方法

专利名称：用于治疗变应性疾病的局部用制剂的制作方法
背景技术：
发明领域本发明涉及用于治疗变应性疾病的局部用制剂。更具体而言，本发明涉及某些三环化合物用于治疗眼、耳或鼻的变应性疾病的局部用途。
相关领域描述如美国专利US 4,871,865和4,923,892(均转让给Burroughs WellcomeCo.(“Burroughs Wellcome专利”)中所教导的，多塞平的某些羧酸衍生物，包括11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-甲酸和11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2(E)-丙烯酸，具有抗组胺和抗哮喘活性两者。这两篇专利将多塞平的羧酸衍生物分类为具有抗组胺作用的肥大细胞稳定剂，因为相信它们抑制自身活性物质(即组胺、5-羟色胺等)从肥大细胞中的释放以及直接抑制组胺对靶组织的作用。BurroughsWellcome专利教导了多种含有多塞平的羧酸衍生物的药物制剂；这两篇专利中的实施例8(I)公开了眼用溶液制剂。
美国专利US 5,116,863公开了如下内容某些二苯并[b，e1氧杂衍生物，包括如下化合物(即Z-11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-乙酸)， 具有抗变应性和抗炎性活性。Kyowa专利教导的用于多塞平乙酸衍生物的药物形式包含宽范围的可接受的载体；然而，仅仅提及口服和注射给药的形式。在变应性眼病如变应性结膜炎的治疗中，这样的给药方法需要大剂量的药物。
美国专利US 5,461,805公开了11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-乙酸及其盐可用于变应性眼病的局部治疗。
所需要的是适于局部眼用、耳用或鼻用的同时具有抗组胺和肥大细胞稳定活性的其它化合物。
发明概述本发明提供了治疗变应性疾病的方法，其特征在于给眼、耳或鼻局部施用含有治疗有效量的式I、II或III三环化合物或其可药用盐的制剂。式I、II和III化合物具有抗组胺活性和肥大细胞稳定活性两者。在优选的实施方案中，本发明的化合物用于治疗选自变应性结膜炎、春季结膜炎、春季角膜结膜炎和巨乳头状结膜炎的变应性眼病。
发明详述可用于本发明的方法的三环化合物以式I、II和III定义 其中Y、Y2＝CH；X＝-CH2-O-；Z＝-CH＝CH-；R1、R2＝Cl、Br、F、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基O-；A＝C、CH、N；条件是，当A＝CH或N时，则B＝CH2-CH2-CH2-Y3，当A＝C时，则B＝CH-CH2CH2-Y3或
R3＝C1-4烷基；Y3＝NR4R5或 R4、R5＝H、C1-4烷基；D＝X1-(CH2)n-X2；X1＝直键；n＝1-6；X2＝NHC(O)R3、NHS(O)2R3、OC(O)NR6R7、NHC(O)NR6R7；且R6、R7＝H、C1-4烷基； 其中Y、Y2＝CH、N；X＝-CH2-CH2-、-CH＝CH-、CH2-S-、Δ；Z＝-CH-CH-、-S-；R1、R2＝Cl、Br、F、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基O-；A＝C、CH、N；条件是，当A＝CH或N时，则B＝CH2-CH2-CH2-Y3；当A＝C时，则B＝CH-CH2CH2-Y3或 R3＝C1-4烷基；Y3＝NR4R5或
R4、R5＝H、C1-4烷基；Y＝X1-(CH2)n-X2；X1＝O、直键；n＝1-6，条件是当X1为O时，则n＝2-6；X2＝H、OH、OR3、OC(O)R3、NHC(O)R3、NHS(O)2R3、OC(O)NR6R7、NHC(O)NR6R7、C(O)NR8R9；R6、R7＝H、C1-4烷基；R8、R9＝H、C1-4烷基、OH、OCH3，条件是R8和R9中仅一个可为OH或OCH3； 其中Y、Y2＝CH、N，条件是Y和Y2中至少一个为N；X＝CH2-O；Z＝-CH-CH-、-S-；R1、R2＝Cl、Br、F、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基O-；A＝C、CH、N；条件是当A＝N时，则B＝CH2-CH2-CH2-Y3，当A＝CH时，则B＝ R3＝C1-4烷基；Y3＝NR4R5或
R4、R5＝H、C1-4烷基；Y＝X1-(CH2)n-X2；X1＝O、直键；n＝1-6，条件是当X1为O时，n＝2-6；X2＝H、OH、OR3、OC(O)R3、NHC(O)R3、NHS(O)2R3、C(O)NR6R7、OC(O)NR6R7、NHC(O)NR6R7、C(O)NR8R9；R6、R7＝H、C1-4烷基；且R8、R9＝H、C1-4烷基、OH、OCH3，条件是R8和R9中仅一个可为OH或OCH3。
根据本发明的方法，将式I、II或III化合物或其可药用盐局部施用于眼。式I、II和III化合物的可药用盐的实例包括但不限于与无机酸形成的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐和磷酸盐；与有机酸形成的盐，例如乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐和柠檬酸盐；碱金属盐，例如钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如镁盐和钙盐；金属盐，例如铝盐和锌盐；有机胺加成盐，例如三乙胺加成盐(还称为氨丁三醇)、吗啉加成盐和哌啶加成盐。
可以看出，式(I)-(III)化合物可含有一个或多个手性中心。本发明包括所有的对映异构体、非对映异构体及它们的混合物。在上述定义中，取代基中的碳原子总数以前缀Ci-Cj表示，其中数字i和j定义碳原子数；该定义包括直链、支链和环状的烷基或(环状烷基)烷基。
上述结构式中所确定的取代基当引入所示结构单元时可以单独或者多次存在。
提供下述实施例来解释说明本发明的不同方面和实施方案。这些实施例不意欲以任何方式限制所公开的发明。在实施例中使用下列缩写DCE二氯乙烷；DCM二氯甲烷；EDCl1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳二亚胺盐酸盐；EtOAc乙酸乙酯；HOBT羟基苯并三唑水合物；MeOH甲醇；THF-四氢呋喃。
实施例1(S)-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-N-四氢呋喃-2-基甲基)乙酰胺富马酸盐通过多步反应序列制得(S)-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-N-四氢呋喃-2-基甲基)乙酰胺富马酸盐。
{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-乙酸甲酯将盐酸奥洛他定(0.25g，0.67mmol)溶于甲醇(10ml)中，于23℃用过量乙酰氯(0.2g，2.5mmol)处理。将溶液搅拌2小时，然后倒入稀NaHCO3水溶液(50ml)中，用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗品经快速硅胶色谱法纯化[洗脱剂甲醇/DCM梯度(5％-20％)]，得到{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-乙酸甲酯(0.22g，0.63mmol)，产率94％。
质谱m/z 352[M+H]+.1H NMR(CDCl3，600MHz)δ7.31(m，1H)，7.24(m，3H)，7.07(d，J＝2.4Hz，1H)，7.05(dd，J＝8.4Hz，1H)，6.80(d，J＝8.4Hz，1H)，5.71(t，J＝7.2Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.53(s，2H)，2.58(dd，J＝14.4，72Hz，2H)，2.45(t，J＝7.2Hz，2H)，2.23(s，6H).13C NMR(CDCl3，150MHz)δ172.15，154.58，145.60，139.67，133.64，132.00，130.81，129.90，129.04，127.44，127.43，126.29，125.68，123.93，119.74，70.40，59.49，51.96，45.40，40.25，28.06.
(S)-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-N-四氢呋喃-2-基甲基)乙酰胺富马酸盐在密闭试管中，将{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-乙酸甲酯(0.22g，0.63mmol)溶于THF(5mL)中，加入(S)-四氢糠基胺(1g，9.9mmol)。将溶液于100℃加热20.5小时，冷却至23℃，倒入稀NaHCO3水溶液(50mL)中，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗品经快速硅胶色谱法纯化[洗脱剂甲醇/DCM梯度(5％-10％)]，得到(S)-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-N-四氢呋喃-2-基甲基)乙酰胺(0.21g，0.5mmol)，产率80％。将经纯化的酰胺溶于甲醇中，加入富马酸(0.058g，0.5mmol)。将溶液真空浓缩，得到(S)-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-N-四氢呋喃-2-基甲基)乙酰胺富马酸盐。
质谱m/z421[M+H]+.1H NMR(D2O，600MHz)δ7.45(m，3H)，7.37(d，J＝6.6Hz，1H)，7.24(d，J＝9.0Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.01(d，J＝9.0Hz，1H)，6.73(s，2H)，5.82(m，1H)，4.05(m，1H)，3.69(t，J＝6.6Hz，2H)，3.59(m，2H)，3.33(m，4H)，2.86(s，7H)，1.95(m，1H)，1.82(m，1H)，1.78(m，1H)，1.49(m，1H).
实施例21-[4-(2-二乙基氨基-乙基)-哌啶-1-基]-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-乙酮富马酸盐将盐酸奥洛他定(0.26g，0.7mmol)、HOBT(0.12g，0.9mmol)、4-(2-二乙基氨基-乙基)-哌啶(0.16g，0.8mmol)和三乙胺溶于THF(20ml)中。加入EDCl(0.15g，0.79mmol)，溶液于23℃搅拌16小时，倒入稀NaHCO3水溶液(50mL)中，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗品经快速硅胶色谱法纯化[洗脱剂甲醇/DCM(20％)]，得到1-[4-(2-二乙基氨基-乙基)-哌啶-1-基]-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-乙酮(0.37g，0.7mmol)，产率为99％。将经纯化的酰胺(0.10g，0.2mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入富马酸(0.023g，0.2mmol)。将溶液真空浓缩，得到1-[4-(2-二乙基氨基-乙基)-哌啶-1-基]-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-乙酮富马酸盐。
质谱m/z 505[M+H]+.1H NMR(D2O，600MHz)δ7.46(m，3H)，7.42(m，1H)，7.22(d，J＝7.8Hz，1H)，7.13(s，1H)，7.01(d，J＝7.8Hz，1H)，6.67(s，3H)，5.80(t，J＝8.4Hz，1H)，4.38(d，J＝13.2Hz，1H)，3.92(m，1H)，3.86(d，J＝15.6Hz，1H)，3.77(d，J＝15.6Hz，1H)，3.36(t，J＝7.8Hz，2H)，3.06(bm，6H)，2.74(bs，8H)，2.72(t，J＝10.8Hz，1H)，1.75(d，J＝13.2Hz，1H)，1.55(m，3H).13C NMR(CDCl3，150MHz)δ175.39，146.57，137.85，132.47，131.44，130.59，129.29，127.93，123.09，73.76，59.84，50.30，50.14，49.53，45.63，42.06，35.71，34.02，32.12，27.73，11.22.
下述实施例2-6类似于实施例1和2制备。
实施例32-[11Z-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]乙酰胺质谱m/z 337[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ.7.35(m，1H)，7.21(m，3H)，7.05(m，2H)，6.75(d，1H)，5.78(t，1H)，3.30(s，2H)，2.40(m，6H)，2.09(s，6H).13C NMR(DMSO-d6，75MHz)δ172.75，153.94，145.62，139.15，133.98，131.95，131.46，130.22，129.41，128.78，128.01，127.78，126.23，119.30，59.06，45.32，41.57，40.80，40.52，40.25，39.69，39.41，39.17，27.77.
实施例42-[11Z-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]-N-甲基乙酰胺质谱m/z 351[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ.7.30(m，4H)，7.21(m，3H)，7.10(m，2H)，6.75(d，1H)，5.65(t，1H)，3.53(s，2H)，2.58(m，4H)，2.38(m，2H)，2.15(s，6H).13C NMR(DMSO-d6，75MHz)171.05，154.00，145.58，139.16，133.96，131.84，131.44，130.15，129.40，128.70，128.00，127.78，126.24，123.77，119.36，69.91，59.06，45.28，41.73，40.81，40.53，40.26，39.98，39.70，39.42，39.14，27.77，25.95.
实施例52-[11Z-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]-N-(2-羟基乙基)乙酰胺质谱m/z 381[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ.7.99(bs，1H)，7.25(m，4H)，7.10(m，2H)，6.75(d，1H)，3.45(m，2H)，3.30(s，2H)，3.1(m，2H)2.40(m，6H)，2.15(s，6H).13C NMR(DMSO-d6，75MHz)170.77，153.97，145.61，139.15，133.96，131.89，131.44，130.17，129.41，128.75，128.01，127.78，126.23，123.72，119.33，69.89，60.29，59.04，45.28，41.98，41.69，40.80，40.52，40.25，39.97，39.69，39.41，39.13，27.76.
实施例62-[11Z-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]-N，N-二甲基乙酰胺质谱m/z 365[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ.7.40(m，4H)，6.95(m，2H)，6.75(d，1H)，5.70(t，1H)，3.60(s，2H)，2.95(s，3H)，2.75(s，3H)2.45(m，4H)，2.38(m，2H)，2.05(s，6H).13C NMR(DMSO-d6，75MHz)172.75，153.94，145.62，139.15，133.96，131.46，130.22，129.41，128.78，128.01，127.78，126.23，123.73，119.30，69.89，59.06，45.32，41.57，40.80，40.52，40.25，39.69，39.41，39.13，27.77.
实施例7{3-[2-{2-[4-(2-二乙基氨基-乙基)-哌啶-1-基]-乙基}-6H-6，11-二苯并[b，e]氧杂-(11Z)-叉基]-丙基}-二甲基胺富马酸盐将1-[4-(2-二乙基氨基-乙基)-哌啶-1-基]-2-{11-[3-二甲基氨基-(Z)-亚丙基]-6，11-二氢-二苯并[b，e]氧杂-2-基}-乙酮(0.37g，0.74mmol)溶于乙醚(20ml)中，将溶液用冰浴冷却至0℃，加入LAH/THF(1M，3.0mL，3.0mmol)。将溶液回流加热17小时，冷却至23℃，小心加入甲醇(1ml)、50％NaOH水溶液(0.1mL)和乙醚(5ml)使之淬灭，过滤并浓缩。粗品经快速硅胶色谱法纯化[洗脱剂甲醇/DCM梯度(20％-20％含2％TEA)]，得到胺(0.21g，0.43mmol)，产率为58％。将经纯化的胺溶于甲醇中，加入富马酸(0.05g，0.43mmol)。将溶液真空浓缩，得到{3-[2-{2-[4-(2-二乙基氨基-乙基)-哌啶-1-基]-乙基}-6H-6，11-二苯并[b，e]氧杂-(11Z)-叉基]-丙基}-二甲基胺富马酸盐(AL-43437A)mp＝65-67℃质谱m/z 490[M+H]+.1H NMR(D2O，600MHz)δ7.38(m，3H)，7.31(m，1H)，7.17(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.11(d，J＝2.0Hz，1H)，6.94(d，J＝8.4Hz，1H)，6.46(s，1H)，5.75(t，J＝7.2Hz，1H)，5.3(bm，2H)，3.56(d，J＝12.0Hz，2H)，3.3-3.2(m，4H)，3.12(q，J＝7.2Hz，4H)，3.1(m，2H)，2.9(m，4H)，2.8-2.7(m，8H)，1.95(d，J＝12.0Hz，2H)，1.66(m，3H)，1.4(m，2H)，1.23(t，J＝7.2Hz，6H).13C NMR(CDCl3，150MHz)δ174.35，153.71，141.70，135.31，133.20，130.36，129.44，128.44，127.51，126.38，125.38，120.34，70.84，56.80，47.29，28.28，24.75，8.17.燃烧分析，C32H47N3O·1.2C4H4O4·4H2O，计算值C 63.04，H 8.60，N 5.99；实测值C 63.36，H 8.24，N 6.05。
下述实施例类似于实施例7制备。
实施例8{3-[2-(2-氨基乙基)-6H-二苯并[b，e]氧杂-11-叉基]丙基}-二甲基胺质谱m/z 322[M+H]+.1H NMR(CD3OD，300MHz)δ7.3(m，4H)，7.00(m，2H)，6.75(d，1H)，5.65(t，1H)，5.3(bm，2H)，3.3(s，2H)，2.81(m，2H)，2.65(m，2H)，2.60(m，2H)，2.50(m，2H)2.25(s，6H).13C NMR(CD3OD，75MHz)δ155.89，147.07，142.50，135.76，133.24，132.73，131.25，131.10，130.45，129.03，128.84，125.50，126.00，121.25，71.88，60.65，50.27，49.44，49.71，49.42，49.14，48.85，48.57，45.73，44.63，39.35，29.20.
实施例9N-{2-[11-(3-二甲基氨基(Z)-亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]乙基}-甲磺酰胺于室温向{3-[2-(2-氨基乙基)-6H-二苯并[b，e]氧杂-11-叉基]丙基}二甲基胺(85mg，0.26mmol)在DCM(3ml)中的溶液中加入三乙胺(50μL，0.39mmol)。将所得混合物冷却至0℃，滴加甲磺酰氯(20μL，0.29mmol)进行处理。将所得混合物于0℃搅拌15分钟，通过TLC分析确定反应完全[EtOAc/MeOH(1∶1)]。
将反应混合物浓缩，残余物在水(20ml)和EtOAc(15ml)之间分配。将水相进一步用EtOAc(3×15ml)萃取。所合并的有机萃取液用饱和NaCl水溶液(20ml)洗涤，然后经MgSO4干燥，浓缩至橙色固体。将该物质进行快速柱色谱法，用EtOAc至EtOAc/MeOH(1∶1)洗脱，得到N-{2-[11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]乙基}甲磺酰胺(42mg，40％)，为黄色固体。HPLC分析表明为90.1％(AUC)。
质谱m/z 401[M+H]+.1H NMR(CD3OD，300MHz)δ7.40(m，4H)，7.10(m，2H)，6.75(d，1H)，5.70(t，1H)，5.20(bs，1H)，4.85(s，1H)3.30(m，2H)，2.95(d，2H)，2.65(m，4H)，2.30(s，6H)13C NMR(CD3OD，75MHz)δ142.63，135.71，133.01，131.35，130.69，130.50，129.09，128.88，127.52，121.26，71.86，60.44，50.29，50.01，49.72，49.44，49.16，48.87，48.59，46.20，45.59，46.20，45.59.40.35，37.15，29.00.
下述实施例类似于实施例9制备。
实施例10N-{2-[11-(3-二甲基氨基(Z)-亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]乙基}-乙酰胺质谱m/z 366[M+H]+.1H NMR(CD3OD，300MHz)δ7.30(m，4H)，7.05(m，2H)，6.75(d，1H)，5.75(t，1H)，5.20(bs，1H)，4.90(s，1H)3.40(m，2H)，2.95(m，2H)，2.65(m，2H)，2.55(m，2H)2.25(s，6H)，1.85(s，3H)13CNMR(CD3OD，75MHz)δ173.56，155.92，147.12，142.48，135.74，131.29，131.13，130.48，129.03，128.86，127.50，121.18，71.84，60.66，50.30，50.01，49.73，49.45，49.16，48.88，48.60，45.79，42.68，35.97，29.20，23.01.
实施例11[11-(1-甲基哌啶-4-叉基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基氧基]乙酸盐酸盐通过下述概括的多步反应序列制得[11-(1-甲基哌啶-4-叉基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基氧基]-乙酸盐酸盐。
2-溴甲基苯甲酸将邻甲基苯甲酸(15.0g，110.3mmol)在CCl4(150ml)中的溶液温热至回流，用Br2(17.6g，110.3mmol)在CCl4(150ml)中的溶液处理，同时用200W钨丝灯照射溶液。加入溴使得在加入过程中观察到浅橙色。在加入过程中还观察到溴化氢的剧烈反流和放出。
在加入结束时，观察到无色混悬液，继续照射和加热另外5分钟，然后除去。对混合物进行TLC分析[己烷/EtOAc(1∶1)]表明没有原料剩余。将溶液冷却至65℃，用正己烷处理，然后进一步冷却至室温。过滤除去所沉淀的固体，用正己烷洗涤，在真空烘箱中于40℃(-30inHg)干燥。得到所需的2-溴甲基苯甲酸，为无色固体(20.0g，84％)，认为其纯度足以用于随后的步骤而不需要进一步纯化(NMR分析)。
2-溴甲基苯甲酰氯将2-溴甲基苯甲酸(20.0g，93.0mmol)溶于亚硫酰氯(110.7g，68mL，930.0mmol)中，回流加热3小时，此时GC/MS分析(通过将等分试样的反应混合物加入过量甲醇中并回流加热5分钟衍生化为甲酯)表明反应完全。通过真空蒸馏除去过量亚硫酰氯，粗品进一步真空干燥(10mmHg)，得到所需的2-溴甲基苯甲酰氯，为浅黄色固体(21.67g，100％)，以粗品形式用于随后的操作。
(2-溴甲基苯基)-(2，5-二甲氧基苯基)甲酮于0℃将2-溴甲基苯甲酰氯(21.67g，93.0mmol)在1，2-二氯乙烷(DCE)(900ml)中的溶液滴加至AICl3(12.4g，93.0mmol)在DCE(900ml)中的混悬液中。观察到略微放热(5℃)，在加入过程中内温维持在0-5℃。将所得浅黄色溶液于0℃搅拌15分钟，然后滴加1，4-二甲氧基苯(12.83g，93.0mmol)进行处理，通过加入速率再次维持在0-5℃。在加入过程中，溶液变为暗绿色，将所得混合物历经12小时温热至15℃。TLC分析[己烷EtOAc(4∶1)]表明反应完全。
将反应混合物倾入冰-水(1.8L)中，分离有机相。将水相进一步用DCM(3×1.0L)萃取，所合并的有机相经Na2SO4干燥，浓缩至残余体积为约1.0L。将该(2-溴甲基苯基)-(2，5-二甲氧基苯基)甲酮溶液以粗品形式用于下一步骤[注意粗品在于室温放置时出现分解，发现在硅胶色谱法时不稳定。]
(2-溴甲基苯基)-(2，5-二羟基苯基)甲酮将(2-溴甲基苯基)-(2，5-二甲氧基苯基)甲酮[31.2g，93.0mmol(由最后步骤假定为100％)]在DCE(1.0L)中的溶液用DCM(500mL)稀释，冷却至0℃。滴加三溴化硼(66.0g，26.0mL，0.26mol，2.8当量)处理暗绿色溶液，同时维持0-5℃(要求充足的排气，反应为放热)。在加入过程中，溶液变为暗红色，历经3小时将该溶液搅拌并温热至室温。此时TLC分析[己烷/EtOAc(4∶1)]表明反应完全。
加入甲醇(约10mL或至反应停止)小心地使反应混合物淬灭，然后浓缩至红色固体。将固体在水(1.0L)和DCM(1.0L)之间分配。将水相进一步用DCM(2×1.0L)萃取，所合并的有机萃取相经Na2SO4干燥(注意当使用MgSO4作为干燥剂时观察到由暗红色至暗棕色的变色)，浓缩至红色油状物(27.8g，97％)，未经进一步纯化用于随后的操作[注意粗品于室温放置时出现分解，发现在硅胶色谱法时不稳定]。
2-羟基-6H-二苯并[b，e]氧杂-11-酮将(2-溴甲基苯基)-(2，5-二羟基苯基)甲酮(27.8g，90.5mmol)在MeCN(2.0L)中的溶液用细粉末状的K2CO3(25.0g，181.0mmol)处理，将所得混悬液于室温搅拌18小时，此时通过TLC分析[己烷/EtOAc(4∶1)]确定反应完全。
将反应混合物用水(1.0L)稀释，加入1N盐酸水溶液酸化至pH为约3-4。然后将该混合物用EtOAc(3×1.5L)萃取，所合并的有机萃取液经Na2SO4干燥，浓缩至棕色固体。将该固体进行快速柱色谱法，用己烷/EtOAc(2∶1)洗脱，得到2-羟基-6H-二苯并[b，e]氧杂-11-酮(9.2g，35％)，为黄色固体。
11-(1-甲基哌啶-4-基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-11-二醇将2-羟基-6H-二苯并[b，e]氧杂-11-酮(1.0g，4.42mmol)在THF(30mL)中的溶液用1-甲基哌啶-4-氯化镁*(0.79M，11.8mL，9.3mmol)溶液于0℃处理。将所得橙色溶液于0℃搅拌1小时，此时通过TLC分析[己烷/EtOAc(1∶1)]确定反应完全。
加入饱和NH4Cl水溶液(10mL)使反应混合物淬灭，在EtOAc(50mL)和水(30mL)之间分配。将水相进一步用EtOAc(3×50mL)萃取，所合并的有机萃取相经Na2SO4干燥，浓缩至橙色油状物。将该油状物用EtOAc研磨，得到11-(1-甲基哌啶-4-基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-11-二醇(715mg，50％)，为棕色固体，TLC和NMR分析表明其为均一的。
*[格氏溶液由N-甲基-4-氯哌啶(1.0当量，仅游离碱)和新鲜镁屑(1.1当量)在THF(1ml/g)中制备。将该混合物用碘晶体处理，回流加热12-24小时，此时形成乳白色混悬液。][11-羟基-11-(1-甲基哌啶-4-基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基氧基]乙酸叔丁酯将11-(1-甲基哌啶-4-基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-11-二醇(563mg，1.73mmol)在DMF(6mL)中的溶液用细粉末状的K2CO3(478mg，3.46mmol)处理，然后用溴乙酸叔丁酯(372mg，282μL，1.91mmol)处理，将所得混合物于室温搅拌14小时，此时TLC分析[DCM/MeOH(92∶8)]确定反应完全。
加入饱和NaCl(3mL)水溶液，形成灰白色沉淀。过滤收集沉淀，用水和正庚烷洗涤，然后在真空烘箱中于30℃(-30inHg)干燥，得到[11-羟基-11-(1-甲基哌啶-4-基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基氧基]-乙酸叔丁酯(765mg，101％)，为灰白色泡沫。NMR分析表明有单一杂质(总计10-15％)，发现不能通过重结晶或柱色谱法除去。氧杂-2-基氧基]乙酸叔丁酯将[11-羟基-11-(1-甲基哌啶-4-基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基氧基]乙酸叔丁酯(760mg，1.73mmol)溶于乙酸酐(4ml)中，将所得橙色溶液于80℃搅拌48小时，此时TLC分析[DCM/MeOH(8∶2)]确定反应完全。
真空除去挥发性物质，将所得残余物进行快速柱色谱法，用DCM/MeOH(97∶3)洗脱，得到[11-(1-甲基哌啶-4-叉基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基氧基]-乙酸叔丁酯(425mg，58％)，为橙色油状物。氧杂-2-基氧基]乙酸盐酸盐将[11-(1-甲基哌啶-4-叉基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基氧基]-乙酸叔丁酯(310mg，0.736mmol)溶于6N盐酸水溶液(5ml)中，于50℃加热1小时，此时TLC分析[DCM/MeOH(97∶3)]表明没有原料剩余。
将反应混合物浓缩至棕色固体。将固体从甲醇/丙酮中重结晶，得到[11-(1-甲基哌啶-4-叉基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基氧基]乙酸盐酸盐(96mg，33％)，为褐色固体。
质谱m/z 366[M+H]+.1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ7.40(m，3H)，7.15(m，1H)，6.65(m，2H)，6.50(s，1H)5.15(dd，2H)，4.35(d，2H)，3.7(m，2H)，3.35(s，2H)，3.20(s，2H)2.80(m，2H)，2.60(m，2H)，2.50(s，3H)13C NMR(DMSO-d6，75MHz)δ166.38，166.12，150.87，147.25，141.91，133.96，133.82，133.75，128.97，128.86，128.61，128.44，128.11，127.12，127.04，124.91，124.83，120.14，116.98，116.68，116.64，68.94，63.32，61.04，60.93，60.70，60.43，58.41，55.26，50.11，45.42，24.91，24.77，24.86N-{2-[11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]乙基}甲磺酰胺的合成 于室温向{3-[2-(2-氨基乙基)-6H-二苯并[b，e]氧杂-11-叉基]丙基}二甲基胺(85mg，0.26mmol)在DCM(3ml)中的溶液中加入三乙胺(50μL，0.39mmol)。将所得混合物冷却至0℃，滴加甲磺酰氯(20μL，0.29mmol)进行处理。将所得混合物于0℃搅拌15分钟，此时通过TLC分析[EtOAc/MeOH(1∶1)]确定反应完全。
将反应混合物浓缩，残余物在水(20mL)和EtOAc(15ml)之间分配。水相用EtOAc(3×15mL)进一步萃取。所合并的有机萃取相用饱和NaCl水溶液(20mL)洗涤。然后经MgSO4干燥，浓缩至橙色固体。将该物质进行快速柱色谱法，采用EtOAc至EtOAc/MeOH(1∶1)洗脱，得到N-{2-[11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]乙基}甲磺酰胺(42mg，40％)，为黄色固体。HPLC分析表明为90.1％(AUC)。
质谱m/z 401[M+H]+.1H NMR(CD3OD，300MHz)δ7.40(m，4H)，7.10(m，2H)，6.75(d，1H)，5.70(t，1H)，5.20(bs，1H)，4.85(s，1H)3.30(m，2H)，2.95(d，2H)，2.65(m，4H)，2.30(s，6H)13C NMR(CD3OD，75MHz)δ142.63，135.71，133.01，131.35，130.69，130.50，129.09，128.88，127.52，121.26，71.86，60.44，50.29，50.01，49.72，49.44，49.16，48.87，48.59，46.20，45.59，46.20，45.59.40.35，37.15，29.00.
N-{2-[11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6，11-二氢二苯并[b，e]氧杂-2-基]乙基}甲磺酰胺的合成质谱m/z 366[M+H]+.1H NMR(CD3OD，300MHz)δ7.30(m，4H)，7.05(m，2H)，6.75(d，1H)，5.75(t，1H)，5.20(bs，1H)，4.90(s，1H)3.40(m，2H)，2.95(m，2H)，2.65(m，2H)，2.55(m，2H)2.25(s，6H)，1.85(s，3H)13CNMR(CD3OD，75MHz)δ173.56，155.92，147.12，142.48，135.74，131.29，131.13，130.48，129.03，128.86，127.50，121.18，71.84，60.66，50.30，50.01，49.73，49.45，49.16，48.88，48.60，45.79，42.68，35.97，29.20，23.01.
实施例12放射性配体结合研究和组胺研究组胺受体结合在经过洗涤的啮齿动物脑匀浆中进行。简言之，将由Pel-Freez(罗杰斯，AR)获得的豚鼠前脑(H1和H2受体)和大鼠前脑(H3受体)在20ml冰冷的磷酸盐缓冲盐水(PBS；pH7.4)中采用Polytron组织破碎器(设置为5-7，10秒)匀浆化，在Beckman J2-MC离心机上于40,000g离心15分钟。弃去上清液，将组织沉淀物在新鲜PBS缓冲液中重新匀化，如上所述进行离心。将最终沉淀物分散于50mM磷酸钾钠缓冲液(pH7.5)中，于-40℃冷冻保存至用于结合分析。
按照以前出版的方法，做较小的改变，进行H1组胺受体结合分析(Chang，R.S.L.，Tran，V.T.和Snyder，S.H.J.Neurochem.，321653-1663，1979，Hill，S.J.，Young，J.M.和Marrian，D.H.Nature，270361-363，1977，Gajtkowski，G.A.，Norris，D.B.，Rising，TJ.和Wood，TP.Nature，30465-67，1983，Korte，A.，Myers，J.，Shih，N.-Y.，Egan，R.W.，和Clark，M.A.Biochem.Biophys.Res.Comm.，168979-986，1990)。简言之，将50μl[3H]美吡拉敏(1-2nM，24Ci/mmol，来自NEN，波士顿，MA)、[3H]硫替丁(4-5nM，87Ci/mmol，来自NEN，波士顿，MA)或[3H]N-甲基组胺(1-2nM，84Ci/mmol，来自NEN，波士顿，MA)用200μl 2.5-4.0mg/ml冷冻融化的脑匀浆在有或无未标记测试化合物(50μl，10pM-100μM)的存在下在总容积500μl的聚丙烯试管中进行温育。采用5mM组胺测定非特异性结合。药物稀释和分析组分的分配采用计算机控制的自动系统(Biomek；Beckman，富勒顿，CA)进行。分析于23℃进行40分钟，然后采用Tomtec细胞收获器(Gaithersburg，MD)经Whatman GF/B玻璃纤维滤器快速过滤来终止，所述滤器预先在0.3％聚乙烯亚胺中浸泡。将分析试管用2×6ml冰冷的50mMTris-HCl缓冲液(pH7.4)冲洗。在Wallac Beta-平板(Gaithersburg，MD)固体闪烁计数器上以40-50％效力确定滤器结合的放射活性。如以前Michel，A.D.和Whiting，R.L.Brit.J.Pharmacol.，83460p，1984，Sharif，N.A.，Wong，E.H.F.，Loury，D.，Stefanich，E.，Eglen，R.M.，Michel，A.D.，和Whiting，R.L. Brit.J.Pharmacol.，102919-925，1991中所述，采用迭代曲线拟合程序，对竞争性结合数据进行分析。药物亲和力(解离常数，Kis)根据Cheng-Prussof方程(Cheng，Y.-C.和Prusoff，W.H.Biochem.Pharmacol.，223099-3018，1973)来计算Ki＝IC50/(1+L/Kd)其中IC50是对受体结合产生50％抑制所需的化合物浓度，L是分析中放射性配体的浓度，Kd是放射性配体的解离常数。
在豚鼠结膜中组胺诱导的血管渗透性将雄性Dunkin Hartley Viral Antibody Free out bread豚鼠(CharlesRiver Labs，Portage，Ml，250-350克，6/组)经耳缘静脉静脉内注射(i.v.)1.0ml伊文思蓝染料(1.0mg/ml)。染料注射后45分钟时，将20μl测试化合物或载体局部应用于各实验动物的一只眼睛。局部应用药物后30分钟时，麻醉豚鼠，用组胺(300ng/10μl)进行结膜下攻击。如以前Yanni，J.M.，Weimer，L.K.，Glaser，R.K.，Lang，L.S.，Robertson，S.M.和Spellman，J.M.Int.Arch.Allergy Immunol.101102-106，1993所述对响应进行定量。
组胺从人c结膜肥大细胞中的释放细胞混悬液的制备已经有人描述了单分散人结膜组织肥大细胞的详细制备方法和这些细胞的介体释放研究(Miller等人，1996)。简言之，人结膜组织肥大细胞从死后组织供体中分离，所述供体在死亡后8小时内通过多个眼库获得并在Optisol(R)角膜防腐培养基中运输。将组织通过重复接触(30分钟，37℃)Tyrode′s缓冲液(含0.1％凝胶)中的胶原蛋白酶和透明质酸酶进行酶消化(各2×200U/gm组织，然后各2-4×2000U/gm组织)。将各消化混合物经Nitex布(100μm筛孔)过滤，用等体积缓冲液洗涤。将滤液于825×g离心(7分钟)。将沉淀物重新混悬于缓冲液中，然后经1.058g/L Percoll垫合并以浓缩。将浓缩的沉淀物洗涤，重新混悬于补充RPMI 1640培养基中于37℃平衡。
从培养板收获细胞，对成活力(台盼蓝排除法)和肥大细胞数(甲苯胺兰O)进行计数。将肥大细胞(5000/管；1ml终体积)于37℃用羊抗人IgE(10μg/mL)攻击15分钟，然后用测试药物或Tyrode′s缓冲液处理(1或15分钟，37℃)。将总和非特异性释放对照分别接触0.1％ Triton X-100和羊IgG(10μg/mL)。通过离心使反应终止(500×g，4℃，10分钟)。将上清液于-20℃存储至用于通过RIA Miller，S.等人，Ocular Immunology andInflammation 4(1)39-49(1996)分析组胺含量。
结果在下表1中报道。
表1
本发明的三环化合物可通过常规局部用制剂局部(即局部性、器官特异性地传送)施用，例如用于眼和耳的溶液、混悬液或凝胶，用于鼻的鼻喷雾剂或雾化剂(mist)。本发明的制剂中式I、II或III化合物的浓度将取决于所选择的施用途径和剂型，但是通常为0.00001至5wt.％，优选为0.001至5wt.％。对于意欲局部施用于眼的溶液而言，式I、II或III三环化合物的浓度优选为0.0001至0.2wt.％，最优选为0.01至0.2wt.％。本发明的局部用组合物按照常规技术制备，除一种或多种式I、II或III三环化合物外还含有常规赋形剂。制备滴眼剂组合物的通用方法如下文所述将一种或多种式I、II或III三环化合物以及张力调节剂加入灭菌的纯化水和(如果希望或需要的话)一种或多种赋形剂中。张力调节剂以足以使得最终组合物具有可眼用的渗透压(通常约150-450mOsm、优选250-350mOsm)的量存在。常规的赋形剂包括防腐剂、缓冲剂、螯合剂或稳定剂、粘度增强剂等。将所选择的成分混合至均匀。待溶液混合后，调节pH(通常用NaOH或HCl调节)至适于局部眼用的范围、优选4.5至8。
已知多种可眼用赋形剂，例如包括作为张力调节剂的氯化钠、甘露醇、甘油等；作为防腐剂的苯扎氯铵、聚季铵盐-1等；作为缓冲剂的磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硼酸等；作为螯合剂或稳定剂的依地酸二钠等；作为粘度增强剂的聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸或多糖等；和作为pH控制剂的氢氧化钠、盐酸等。
根据本发明，式I、II和III三环化合物可用于治疗眼变应性紊乱，包括变应性结膜炎、春季结膜炎、春季角膜结膜炎和巨乳头状结膜炎；鼻变应性紊乱，包括变应性鼻炎和鼻窦炎；以及耳变应性紊乱，包括咽鼓管瘙痒。
通过上述方法生产的滴眼剂通常仅需要一天少数几次应用于眼，每次的量为一至数滴，虽然在更严重的病例中滴眼剂可一天应用数次。典型的滴眼剂为约30μl。
下述实施例中解释说明了本发明的某些实施方案。
实施例1局部眼用溶液制剂成分浓度(w/v％)式I、II或III三环化合物 0.1磷酸氢二钠(无水)0.5氯化钠 0.65苯扎氯铵0.01氢氧化钠适量至pH7.0±0.2盐酸适量至pH7.0±0.2纯化水 适量至100实施例2局部眼用凝胶制剂成分浓度(w/v％)式I、II或III三环化合物 0.1卡波普974P 0.8EDTA二钠0.01聚山梨酯80 0.05苯扎氯铵溶液0.01+5xs氢氧化钠适量至pH7.0±0.2盐酸适量至pH7.0±0.2注射用水适量至100
权利要求
1.治疗眼、耳或鼻的变应性疾病的方法，该方法包括给患者局部施用包含可药用载体和药物有效量的式I、II或III三环化合物或其可药用盐的组合物， 其中Y、Y2＝CH；X＝-CH2-O-；Z＝-CH＝CH-；R1、R2＝Cl、Br、F、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基O-；A＝C、CH、N；条件是，当A＝CH或N时，则B＝CH2-CH2-CH2-Y3，当A＝C时，则B＝CH-CH2CH2-Y3或 R3＝C1-4烷基；Y3＝NR4R5或 R4、R5＝H、C1-4烷基；D＝X1-(CH2)n-X2；X1＝直键；n＝1-6；X2＝NHC(O)R3、NHS(O)2R3、OC(O)NR6R7、NHC(O)NR6R7；且R6、R7＝H、C1-4烷基； 其中Y、Y2＝CH、N；X＝-CH2-CH2-、-CH＝CH-、CH2-S-、 Z＝-CH-CH-、-S-；R1、R2＝Cl、Br、F、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基O-；A＝C、CH、N；条件是，当A＝CH或N时，则B＝CH2-CH2-CH2-Y3；当A＝C时，则B＝CH-CH2CH2-Y3或 R3＝C1-4烷基；Y3＝NR4R5或 R4、R5＝H、C1-4烷基；Y＝X1-(CH2)n-X2；X1＝O、直键；n＝1-6，条件是当X1为O时，则n＝2-6；X2＝H、OH、OR3、OC(O)R3、NHC(O)R3、NHS(O)2R3、OC(O)NR6R7、NHC(O)NR6R7、C(O)NR8R9；R6、R7＝H、C1-4烷基；R8、R9＝H、C1-4烷基、OH、OCH3，条件是R8和R9中仅一个可为OH或OCH3； 其中Y、Y2＝CH、N，条件是Y和Y2中至少一个为N；X＝CH2-O；Z＝-CH-CH-、-S-；R1、R2＝Cl、Br、F、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基O-；A＝C、CH、N；条件是当A＝N时，则B＝CH2-CH2-CH2-Y3，当A＝CH时，则B＝ R3＝C1-4烷基；Y3＝NR4R5或 R4、R5＝H、C1-4烷基；Y＝X1-(CH2)n-X2；X1＝O、直键；n＝1-6，条件是当X1为O时，n＝2-6；X2＝H、OH、OR3、OC(O)R3、NHC(O)R3、NHS(O)2R3、C(O)NR6R7、OC(O)NR6R7、NHC(O)NR6R7、C(O)NR8R9；R6、R7＝H、C1-4烷基；且R8、R9＝H、C1-4烷基、OH、OCH3，条件是R8和R9中仅一个可为OH或OCH3。
2.权利要求1的方法，其中三环化合物的药物有效量为0.00001至5wt％。
3.权利要求2的方法，其中组合物用于局部施用于眼，且三环化合物的药物有效量为0.0001至0.2wt％。
4.权利要求3的方法，其中三环化合物的药物有效量为0.01至0.2wt％。
5.权利要求1的方法，其中三环化合物为式I化合物。
6.权利要求1的方法，其中三环化合物为式II化合物。
7.权利要求1的方法，其中三环化合物为式III化合物。
8.权利要求1的方法，其中眼、耳或鼻的变应性疾病选自变应性结膜炎、春季结膜炎、春季角膜结膜炎、巨乳头状结膜炎、变应性鼻炎、变应性鼻窦炎和咽鼓管瘙痒。
全文摘要
公开了采用三环化合物局部治疗眼、耳或鼻的变应性疾病的方法。
文档编号A61K31/5377GK1976694SQ200580021373
公开日2007年6月6日 申请日期2005年6月27日 优先权日2004年6月28日
发明者M·R·赫勒贝格 申请人:爱尔康公司