专利名称：治疗神经系统障碍和病症的方法
技术领域：
本发明涉及选择性多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)，以及它们用于治疗某些神经系统障碍和病症、特别是包括血管舒缩症状(VMS)和慢性疼痛的方法。
背景技术：
目前人们公认血管舒缩不稳定和潮红(hot flush)是由性类固醇水平的波动引起的并且在男性和女性中都可能是破坏性的和会使人丧失能力的。潮红可持续多达30分钟并且其频率不同可以从一周几次至每天发生多次。当患者经历潮红时，其突然感到热从面部迅速扩散到胸部和后背，然后扩散到机体的其余部分。其通常伴有突然大量出汗。其有时一天发生几次，并且其常常发生于夜间。在夜间发生潮红和突然出汗可能会造成睡眠缺乏。所观察到的心理和情绪症状，例如神经质、疲劳、易怒、失眠、抑郁、记忆丧失、头痛、焦虑、神经质和/或注意力不集中被认为是由潮红和盗汗后的睡眠缺乏引起的(Kramer等人，InMurphy等人，第3版，Int′lSymposium on Recent Advances in Urological Cancer Diagnosis andTreatment-Proceedings，Paris，FranceSCI3-7(1992))。
由于下面一些原因，对乳腺癌进行治疗的女性的潮红可能更严重(1)许多乳腺癌的生存者使用他莫昔芬，而他莫昔芬最普遍的副作用是潮红；(2)由于化疗，对乳腺癌进行治疗的许多女性都过早经历绝经；(3)因为乳腺癌有复发的可能，所以有乳腺癌史的女性通常不能进行雌激素疗法。(Loprinzi等人，Lancet，2000，356(9247)2059-2063)。
在停用类固醇激素(雄激素)后，男性也可能经历潮红。这在年龄相关的雄激素下降的情况(Katovich等人，Proceedings of the Society forExperimental Biology & Medicine，1990，193(2)129-135)以及在与前列腺癌的治疗有关的激素缺乏的极端情况(Berendsen等人，European Journal ofPharmacology，2001，419(1)47-54)中便是如此。这些患者中的三分之一将持续并且频繁地经历严重程度足以引起显著不适和不便的症状。
人们还不清楚这些症状的精确机理，但是通常认为其表示了控制温度调节和血管舒缩活性的正常内环境稳定机理失调(Kronenberg等人，Can.J.Physiol.Pharmacol.，1987，651312-1324)。
雌激素治疗(例如雌激素代替疗法)缓解了所说症状的事实确定了这些症状和雌激素不足之间有关联。例如，生命中的绝经阶段与许多其它急性症状有关，所述症状如上所述，并且这些症状通常对雌激素有响应。
已经表明雌激素可以刺激去甲肾上腺素(NE)系统(Panek等人，J.Pharmacology & Experimental Therapeutics，1986，236(3)，646-652)、5-羟色胺能(5-HT)系统(McEwen，Recent Progress in Hormone Research，2002，57357-384)和多巴胺系统(Bosse等人，Cellular and Molecular Neurobiology，1996，16199-212.；Datla等人，Neuroreport，2003，1447-50.；DeMarinis等人，Hormone and Metabolic Resarch，1991，2330-4)的活性并提供了下丘脑中保持温度调节中枢正常活性的这些神经递质之间的平衡。在通过脑干/脊髓和肾上腺的自下丘脑到皮肤的下行途径有助于维持正常皮肤温度。
通过提高多巴胺传递可以导致温度调节恢复的机制是多方面的。多巴胺与涉及昼夜节律的内环境稳定过程有关(Wisor等人，Joural ofNeuroscience，1987，211787-94)。温度调节是由昼夜节律严格地调节的。多巴胺和去甲肾上腺素在保持昼夜节律中发挥着互相关联的作用。因此，昼夜节律的恢复可能将会恢复正常的温度调节。另外，虽然单胺转运抑制剂是选择性很高的，但是这些转运蛋白对它们的底物是没有选择性的(Eshleman等人，Journal of Pharmacology & Experimental Therapeutics，1999，289877-85；Horn，British Journal of Pharmacology，1973，47332-8.；Raiteri等人，European Journal of Pharmacology，1977，41133-43)。去甲肾上腺素转运蛋白(NET)可以转运多巴胺和去甲肾上腺素并对多巴胺的亲和性高于多巴胺转运蛋白(DAT)(Giros等人，J.Biol. Chem，1994，269，15985-15988)。因而，导致多巴胺的区域特异性升高的多巴胺重摄取抑制剂的应用可以影响肾上腺素能系统的神经传递。因此，应用多巴胺重摄取抑制剂治疗血管舒缩综合征可能通过在保持内环境稳定中直接作用于多巴胺转运蛋白(Gainetdinov等人，Brain Research Brain Research Reviews，1998，26148-53)以及通过去甲肾上腺素转运蛋白介导的间接作用而起作用。
由于温度调节多方面的性质，可以发展以血管舒缩不稳定为目标的多种治疗和方法。本发明集中在涉及通过使用多巴胺重摄取抑制剂恢复昼夜温度调节或间接地通过调节去甲肾上腺素能系统来恢复降低的多巴胺活性的方法。本发明涉及这些和治疗神经系统障碍和病症、特别是包括血管舒缩症状(VMS)、慢性疼痛和夏-德综合征的其它重要用途。
发明概述本发明涉及选择性多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)，以及它们用于治疗神经系统障碍和病症、特别是包括血管舒缩症状(VMS)和慢性疼痛的方法。
在一个实施方案中，本发明涉及在需要该治疗的个体中治疗至少一种神经系统障碍或病症的方法，其包括的步骤有给所述个体施用包含有效量的至少一种选择性多巴胺重摄取抑制剂的组合物；其中所述的神经系统障碍或病症是血管舒缩症状、慢性疼痛、夏-德综合征或它们的组合。
可以由下面的详细描述和形成本发明一部分的附图来更充分地理解本发明。
图1表示在卵巢切除术诱导的温度调节功能障碍的遥测术大鼠模型中以1剂量(30mg/kg，皮下注射)施用(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷的结果(在实施例2中涉及)。
图2表示在卵巢切除术诱导的温度调节功能障碍的遥测术大鼠模型中以1剂量(30mg/kg，皮下注射)施用1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909；也称为伐诺司林)的结果(在实施例2中涉及)。
图3在施用外消旋的1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(比西发定)、(+)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷，加巴喷丁和溶媒后30、60、100、180和300分钟逆转％的图(在实施例3中涉及)。
发明详述本发明涉及选择性多巴胺重摄取抑制剂，(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(也称为(1S，5R)-1-((4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷，以盐酸盐测量)、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)，以及它们用于治疗神经系统障碍和病症、特别是包括血管舒缩症状(VMS)、慢性疼痛和夏-德综合征的方法。
以下提供的定义用来帮助全面理解本说明书中所用的术语和缩略语。
除非上下文明确说明，否则在本文和所附权利要求书中所用的单数形式包括复数含义。因此，例如，“一种拮抗剂”的含义包括该拮抗剂的复数，以及“一种化合物”的含义是一种或多种化合物以及本领域技术人员已知的其等价的含义，等等。
说明书中的缩略语如下那样与度量单位、技术单位、性质单位或化合物单位相对应“min”指分钟，“h”指小时，“μL”指微升，“mL”指毫升，“mM”指微摩尔，“M”指摩尔，“mmole”指毫摩尔，“cm”指厘米，“SEM”指平均值的标准差以及“IU”指国际单位。“ED50值”指引起所观察的情况或作用减轻50％(50％平均最大终点)的剂量。除非特别说明，否则化合物的旋光度是以其HCl盐形式进行测量的。
“去甲肾上腺素转运蛋白”缩写为NET。
“人去甲肾上腺素转运蛋白”缩写为hNET。
“5-羟色胺转运蛋白”缩写为SERT。
“人5-羟色胺转运蛋白”缩写为hSERT。
“去甲肾上腺素重摄取抑制剂”缩写为NRI。
“选择性去甲肾上腺素重摄取抑制剂”缩写为SNRI。
“5-羟色胺重摄取抑制剂”缩写为SRI。
“选择性5-羟色胺重摄取抑制剂”缩写为SSRI。
“去甲肾上腺素”缩写为NE。
“5-羟色胺”缩写为5-HT。
“皮下”缩写为sc。
“腹膜内”缩写为ip。
“口服”缩写为po。
本文中所用的术语“处理”包括防止(例如预防)、治愈或减轻性处理并且本文中所用的“治疗”也包括防止、治愈和减轻性处理。
本文中所用的术语“有效量”指的是对于一定剂量和一定的时期内可有效获得治疗神经系统障碍或病症的预期结果所必需的量。对于血管舒缩症状而言，“有效量”特别是指能增加多巴胺水平以在受血管舒缩症状折磨的个体中部分或完全补偿类固醇利用度不足的化合物或化合物的组合物的量。激素水平的变化将影响本发明所需化合物的量。例如，由于激素水平高于围绝经期状态，所以绝经前状态可能需要化合物的水平较低。
应当意识到本发明组分的有效量不仅将因为所选择的特定化合物、组分或组合物、施用途径、所说组分(单独或与一种或多种组合药物联合)在个体体内引发所需响应的能力而在患者与患者间存在差异，而且还将随着以下因素而变化被缓解的疾病状态或病症的严重程度、激素水平、个体的年龄、性别、体重、患者所处的状态以及被治疗病理学病症的严重程度，特定患者的同时用药情况或特殊饮食以及本领域技术人员认可的其它因素，最终将由主治医师来考虑决定适宜的剂量。可以对剂量方案进行调节以提供改善的治疗响应。有效量还是所说组分的治疗有效作用可以抵销其任何毒性或有害作用的量。
本发明方法中所用的化合物优选地以一定的剂量施用并且施用一定时间以便与开始进行治疗前VMS的数目相比降低VMS，特别是潮红的数目。与开始治疗前VMS的严重程度相比，该类治疗还可以有益地降低任何VMS、特别是仍然经历的潮红的整体严重程度或强度分布。对于慢性疼痛和夏-德综合征，将本发明方法中所用的化合物以一定剂量施用并且施用一定时间以便预防、缓解或消除症状或病症。
例如，对于受折磨的患者而言，选择性多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)优选地可以以约0.1mg/天至约200mg/天、更优选约1mg/天至约150mg/天、更优选约1mg/天至约100mg/天并且最优选约1mg/天至50mg/天的剂量施用一定时间，该时间足以降低和/或可以基本消除神经系统障碍或病症，例如，VMS的数目和/或严重程度和/或慢性疼痛或夏-德综合征的持续时间和/或严重程度。
本文中所用的术语“化合物的组合物”、“化合物”、“药物”、“治疗剂”、“药理学活性剂”、“活性剂”和“药物”在本文中可以互换使用，指的是当施用于个体(人或动物)时可以通过局部和/或全身作用诱导所需的药理学和/或生理学作用的化合物或物质的组合物。
本文中所用的术语“调节”指的是增强或抑制生物学活性或过程，例如受体结合或发信号活性的功能性的能力。在发生特定事件如信号转导途径的活化时，该类增强或抑制可能是偶然性的，和/或可能仅在特定的细胞类型中表现出来。所述调节剂旨在包括任何化合物，例如抗体、小分子、肽、寡肽、多肽或蛋白，优选小分子或肽。
本文中所用的术语“抑制剂”旨在包括通过抑制、禁止、压制或降低特定的活性，如5-羟色胺重摄取活性或去甲肾上腺素重摄取活性而对哺乳动物表现出部分、完全、竞争和/或抑制作用的任何化合物或试剂，例如，抗体、小分子、肽、寡肽、多肽或蛋白，优选小分子或肽。在某些实施方案中，该术语优选地指的是人去甲肾上腺素重摄取的抑制剂或5-羟色胺重摄取和去甲肾上腺素重摄取的抑制剂，从而其可以减少或阻断，优选减少内源性去甲肾上腺素重摄取或5-羟色胺重摄取和去甲肾上腺素重摄取的一些或全部生物学作用。
本发明中，多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)可以制备成可药用盐形式。本文中所用的术语“可药用盐”指的是由可药用的无毒的酸制得的盐，包括无机盐和有机盐。适宜的非有机盐包括无机酸和有机酸如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、苹果酸、马来酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸(pamoic acid)、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等的盐。特别优选的是盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸的盐，并且最优选的是盐酸盐。
本文中所用的术语“施用”指的是直接施用本发明的化合物或组合物，或者施用将在体内形成等量的活性化合物或物质的前药、衍生物或类似物。
本文中所用的术语“个体”或“患者”指的是用本发明的组合物和/或方法可治疗的包括人类在内的动物。除非特定表明其性别，否则术语“个体”旨在既包括男性又包括女性。因此，术语“患者”包括可以从神经系统障碍或病症、特别是包括血管舒缩症状和/或慢性疼痛的治疗获益的任何哺乳动物，例如人，特别是如果所述哺乳动物是女性时，其处于绝经前期、围绝经期或绝经后期。此外，术语患者还包括包括人在内的雌性动物，并且对人而言，不仅包括已经经历过绝经的老年女性，而且还包括经历了子宫切除术的女性或者由于其它原因雌激素产生受到抑制的女性，如长期施用皮质类固醇的女性、患有库欣综合征的女性或者具有性腺发育不全的女良、casualgia、丘脑综合征、神经根撕脱或由导致外周和/或中枢敏化的损伤引起的神经损害，如幻肢痛、反射交感性营养不良或胸廓切开术后疼痛、癌症、化学损伤、毒素、营养缺乏或病毒或细菌感染如带状疱疹或HIV感染，或者它们的组合。应用本发明化合物的方法还包括其中神经性疼痛是转移性浸润、痛性肥胖症、烧伤或与丘脑病症有关的中枢疼痛病症或它们的组合的继发病症的治疗。
本文中所用的术语“痛觉过敏”指的是其中对典型的有害刺激的敏感性增加的疼痛。
本文中所用的术语“异常性疼痛”指的是对典型的非有害刺激的敏感性增加。
本文中所用的术语“副作用”指的是所用试剂或方法对特别是组织或器官产生的结果，如药物产生的不利作用，该结果并非通过施用所寻求的有益的结果。在例如单独使用高剂量NRIs或NRI/SRI化合物的情况中，术语“副作用”可以指的是例如呕吐、恶心、出汗和潮红之类的病症(Janowsky等人，Journal of Clinical Psychiatry，1984，45(10 Pt 2)3-9)。
本文中所用的短语“基本不含(+)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷或其可药用盐”指的是包含不高于该组合物总重量约5％重量(w/w)的(+)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷或其可药用盐的组合物，所说物质的含量优选为低于组合物总重量的约2％w/w，并且更优选为低于约1％w/w。
本文中所用的短语“基本不含(+)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷或其可药用盐”指的是包含不高于该组合物总重量约5％重量(w/w)的(+)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(也被称为(1R，5S)-1-((4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷)或其可药用盐的组合物，所说物质的含量优选为低于组合物总重量的约2％w/w，并且更优选地低于约1％w/w。
本文中所用的术语“选择性多巴胺重摄取抑制剂”和“选择性DRI”指的是通过抑制中枢和/或外周神经系统和/或外周系统的神经元的DA摄取而改变多巴胺(DA)水平的化合物，并且化合物具有DAT∶NET或DAT∶SERT活性的选择比(以EC50值或通过人类转运蛋白特异性结合的性。总之，术语“患者”并不旨在限于雌性动物。
本文中所用的术语“血管舒缩症状”、“血管舒缩不稳定症状”和“血管舒缩失调”包括，但不局限于特别是由温度调节功能障碍引起的潮红、失眠、睡眠紊乱、心境障碍、易怒、过度出汗、盗汗、疲劳等。
本文中所用的术语“潮红”是本领域公认的术语，其指的是个体体温的短暂紊乱，代表性地包括皮肤突然潮红，通常伴有出汗。
本文中所用的术语“过早绝经”或“人工绝经”指的是在40步前发生的原因不明的卵巢衰竭。其可能与吸烟、生活在高海拔处或者营养状态差有关。人工绝经可能是由卵巢切除术、化疗、骨盆辐射或损害卵巢供血的任何过程所引起的。
本文中所用的术语“绝经前”指的是绝经之前，术语“围绝经期”指的是绝经期间并且术语“绝经后”指的是绝经之后。“卵巢切除术”指的是除去卵巢并且可以根据Merchenthaler等人，Maturitas，1998，30(3)307-316所述的方法进行。
本文中所用的术语“慢性疼痛”指的是集中的或周边的疼痛，其在性质上可以是强烈的、局部的、尖锐的或者激烈的和/或钝性、疼痛、扩散性或烧灼性的，并且长期存在(即持续性的)，对于本发明的目的而言，其包括神经性疼痛和癌症疼痛。慢性疼痛包括神经性疼痛、痛觉过敏和/或异常性疼痛。
本文中所用的术语“神经性疼痛”指的是由外周或中枢神经系统中的损害或病理性改变引起的慢性疼痛。与神经性疼痛有关的病理性改变的实例包括长时间的外周或中枢神经元敏化、与神经系统抑制和/或兴奋(exhibitory)功能损害以及副交感神经和交感神经系统之间的异常相互作用有关的中枢敏化。许多临床病症可能都与神经性疼痛有关或者形成了神经性疼痛的基础，所述病症包括例如糖尿病、切断术的创伤后疼痛、下背痛、癌症、化学损伤或毒素、其它大手术、由于创伤性损伤压迫引起的外周神经损害、营养缺乏或感染(如带状疱疹或人免疫缺陷病毒(HIV)感染)。神经性疼痛例如可能与糖尿病性神经病、外周神经病、带状疱疹后神经痛、三叉神经痛、腰或颈神经根病、纤维肌痛、舌咽神经痛、反射交感性营养不自主性神经病、法布里病、乳糜泻或由导致外周和/或中枢敏化的损伤引起的神经损害(如幻肢痛、反射交感性营养不良或胸廓切开术后疼痛)、癌症(包括由化疗剂或用于治疗所说疾病的其它试剂引起的神经病)、化学损伤、毒素(如砷中毒性神经病)、营养缺乏或病毒或细菌感染(如带状疱疹或与HIV有关的神经病)或它们的组合。应用本发明化合物的方法还包括其中神经性疼痛是转移性浸润、痛性肥胖症、烧伤或与丘脑病症有关的中枢疼痛病症的继发病症的治疗。
在一些情况中，上述神经性疼痛还可以被分类为“疼痛的小纤维神经病”(如先天性小纤维疼痛感觉神经病)或“疼痛的大纤维神经病”(如脱髓鞘神经病或轴突神经病)或它们的组合。在例如J.Mendell等人，N. Engl.J.Med.2003，3481243-1255中对该神经病进行了更详细的描述，其在这里以其全部并入本文作为参考。
在一些实施方案中，在功能性的去甲肾上腺素重摄取生物试验中，选择性多巴胺重摄取抑制剂具有大于约0.5μM活性的去甲肾上腺素重摄取抑制活性，优选的是，在功能性的去甲肾上腺素重摄取生物试验中，选择性多巴胺重摄取抑制剂基本上不具有去甲肾上腺素重摄取抑制活性，即不大于约1μM活性。
在一些实施方案中，在功能性的5-羟色胺重摄取生物试验中，选择性多巴胺重摄取抑制剂具有大于约0.5μM活性的5-羟色胺重摄取抑制活性，优选的是，在功能性的5-羟色胺重摄取生物试验中，选择性多巴胺重摄取抑制剂基本上不具有5-羟色胺重摄取抑制活性，即不大于约1μM活性。
在一些实施方案中，在功能性的去甲肾上腺素和5-羟色胺重摄取生物试验中，选择性多巴胺重摄取抑制剂具有大于约0.5μM活性的双重去甲肾上腺素和5-羟色胺重摄取抑制活性，优选的是，在功能性的去甲肾上腺素和5-羟色胺重摄取生物试验中，选择性多巴胺重摄取抑制剂基本上不具有双重去甲肾上腺素和5-羟色胺重摄取抑制活性，即不大于约1μM活性。
选择性多巴胺重摄取抑制剂优选为(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、氯苯咪吲哚、哌甲酯、1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909，也称为伐诺司林)或其可药用盐。可以用本领域已知的技术鉴定选择性多巴胺重摄取抑制剂化合物，例如在下列试验中对该化合物进行试验包括多巴胺摄取转运蛋白结合试验、膜结合试验以及如在下面的实施例部分描述的放射性配体结合试验。
本发明包括多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)的前药。本文中所用的术语“前药”指的是在体内可以通过代谢方式(例如水解)转化为选择性多巴胺重摄取抑制剂的化合物。例如Bundgaard，(ed.)，Design of Prodrugs，Elsevier(1985)；Widder等人(ed.)，Methods inEnzymology，vol.4，Academic Press(1985)；Krogsgaard-Larsen等人(ed.).“Design and Application of Prodrugs”，Textbook of Drug Design andDevelopment，chapter 5，113-191(1991)，Bundgaard等人，Journal of DrugDeliver Reviews，1992，81-38，Bundgaard，J.of Pharmaceutical Sciences，1988，77285 et seq.；以及Higuchi和Stella(ed.)Prodrugs as Novel DrugDelivery Systems，American Chemical Society(1975)中所讨论的那样，在本领域中已知存在多种形式的前药。
另外，多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)可以以未溶剂化形式以及与可药用溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在。
可以用许多本领域技术人员已知的方法来制备用于本发明方法的化合物。例如，可以用如下所述的方法或本领域技术人员可以意识到的其变通方法来合成所述化合物。在本发明化合物的制备中所用的试剂可以是商购获得的或者可以用文献中所述的标准方法来制备。预期本发明所公开的所有方法都可以在任何规模下实施，包括在毫克、克、数克、千克、数千克或商业化工业规模下实施。
正如容易理解的那样，在合成过程中，存在的官能团可以包含保护基团。保护基团本身被称为可以选择性被添加和从官能度(如羟基和羧基)上被除去的化学官能团。在化合物中存在这些基团可以使得该官能度在化合物接触的化学反应条件下存在惰性。本发明可以使用各种保护基团。本发明所用的保护基团可以是Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，ProtectiveGroups in Organic Synthesis 2d.Ed.，Wiley & Sons，1991中所述的基团。
多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷或其可药用盐例如可以如US-A-4,131,611、US-A-4,435,419、US-B-6,204,284、US-B-6,372,919、US-B-6,569,887和US-B-6,716,868中所述的那样来制备，其公开内容并入本文作为参考。
化合物1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909，伐诺司林)或其可药用盐可以通过常规的合成方法制备并且是从例如Sigma Chemical Co.(St Louis，MO)可商购的。化合物氯苯咪吲哚和哌甲酯是可商购的。
可以用本领域技术人员已知的任何方法将用于本发明方法中的多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷和(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷从其外消旋混合物中分离出来，所述方法包括高效液相色谱法(HPLC)以及手性盐的形成和结晶，或者其可以用本文中所述的方法进行制备。见，例如，US-B-6,372,912；Jacques等人，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley Interscience，New York，1981)；Wilen，S.H.等人，Tetrahedron，332725(1977)；Eliel，E.L.Stereoch emistry of Carbon Compounds，(McGraw-Hill，NY，1962)；Wilen，S.H.Tables of Resolving Agents and OpticalResolutions，p.268(E.L.Eliel，Ed.，University of Notre Dame Press，Notre Dame，IN 1972)。
在一些实施方案中，应用手性多糖固定相和有机洗脱剂通过将外消旋的1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷或外消旋的1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷拆分得到(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷或(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷。多糖优选为淀粉或淀粉衍生物。可以使用手性HPLC柱，例如Diacel制造并从Chiral Technologies，Inc.，Exton，Pennsylvania可商购的CHIRALPAKTMAD HPLC柱，更优选为1cm×25cm的CHIRALPAKTMAD HPLC柱。优选的洗脱剂是用可混溶的极性有机溶剂对其极性进行了调节的烃溶剂。有机洗脱剂优选地包含约95％至约99.5％(体积/体积)的非极性烃溶剂和约5％至约0.5％(体积/体积)的极性有机溶剂。在优选的实施方案中，烃溶剂是己烷并且可混溶的极性有机溶剂是异丙胺。
用于本发明方法的多巴胺重摄取抑制剂，包括氮杂二环己烷可以以纯组合物的形式使用或者可以以包含至少一种可药用载体的组合物的形式使用。通常，多巴胺重摄取抑制剂，包括氮杂二环己烷或其可药用盐的存在水平为组合物总重量的约0.1％重量至约90％重量。多巴胺重摄取抑制剂，包括氮杂二环己烷或其可药用盐的存在水平优选为组合物总重量的至少约1％重量。多巴胺重摄取抑制剂，包括氮杂二环己烷或其可药用盐的存在水平更优选为组合物总重量的至少约5％重量。多巴胺重摄取抑制剂，包括氮杂二环己烷或其可药用盐的存在水平甚至更优选为组合物总重量的至少约10％重量。多巴胺重摄取抑制剂，包括氮杂二环己烷或其可药用盐的存在水平甚至更优选地为组合物总重量的至少约25％重量。
该类组合物可以根据可接受的药学方法，如在Remington′sPharmaceutical Sciences，17th edition，ed.Alfonoso R.Gennaro，MackPublishing Company，Easton，PA(1985)中所述的方法制备。可药用的载体是那些可以与制剂中的其它成分相容并且生物学可接受的载体。
本发明的化合物可以以本身的形式或者与常规的药用载体一起口服或非肠道施用。适用的固体载体可以包括一种或多种也可以作为矫味剂、润滑剂、增溶剂、助悬剂、填充剂、助流剂、压制助剂、粘合剂或片剂崩解剂或胶囊材料的物质。在散剂中，该载体是与分割得很细的活性成分混合的分割得很细的固体。在片剂中，将所述活性成分与适宜比例的具有所需压制性的载体进行混合并将其压制成所需的形状和大小。散剂和片剂优选地包含至多99％的活性成分。适宜的固体载体包括例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、糖类、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点石蜡以及离子交换树脂。
液体载体可以应用于制备溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂和酏剂。可DA摄取％测量)至少约为1∶1，优选至少约为2∶1，更优选至少约为5∶1，更优选至少约为10∶1，甚至更优选至少为20∶1，且更优选的是至少约为50∶1。
本发明涉及选择性多巴胺重摄取抑制剂，包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(也称为(1R，5S)-1-((4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷)、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909，也称为伐诺司林)，以及它们用于治疗神经系统障碍和病症、特别是包括血管舒缩症状(VMS)和慢性疼痛、特别是神经性疼痛并且更特别是除慢性后背疼痛外的神经性疼痛的方法。认为所述的本发明代表了在治疗、缓解、抑制和/或预防神经系统障碍和病症、特别是包括血管舒缩症状、慢性疼痛、特别是神经性疼痛并且更特别是除慢性后背疼痛外的神经性疼痛、夏-德综合征或它们的组合的领域中的一个重大突破。
在一个实施方案中，本发明涉及在需要该治疗的个体中治疗至少一种神经系统障碍或病症的方法，其包括的步骤有给所述个体施用包含有效量的至少一种选择性多巴胺重摄取抑制剂的组合物；其中所述的神经系统障碍或病症是血管舒缩症状、慢性疼痛、夏-德综合征或它们的组合。
在优选的实施方案中，神经系统障碍或病症为血管舒缩症状或慢性疼痛，特别是神经性疼痛，并且更特别是除慢性后背疼痛外的神经性疼痛。
神经性疼痛可能与下列疾病有关例如糖尿病性神经病、带状疱疹后神经痛、三叉神经痛、复杂的局部疼痛综合征、腰或颈神经根病、纤维肌痛、舌咽神经痛、反射交感性营养不良、casualgia、丘脑综合征、神经根撕脱、未明意义的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)性神经病、结节性多发性神经病、由多种原因导致的与HIV有关的神经病(如由用于治疗HIV的药物导致的与HIV有关的神经病)、外周神经病(如具有结缔组织疾病的外周神经病)、肿瘤相关性感觉神经病、家族性淀粉样多发性神经病、获得性淀粉样多发性神经病、遗传性神经病、具有肾衰竭的神经病、遗传性感觉和以将本发明的活性成分溶解或混悬于可药用的液体载体如水、有机溶剂、二者的混合物或可药用的油或脂肪中。液体载体可以包含其它适宜的药用添加剂如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、矫味剂、助悬剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂。用于口服和非肠道施用的液体载体的适宜实例包括水(特别是包含上述添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇类(包括单羟基醇和多羟基醇例如二元醇)及其衍生物以及油(例如经级分的椰子油和花生油)。对于非肠道施用而言，载体还可以是油性酯如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。在用于非肠道的无菌的液体形式的组合物中使用无菌的液体载体。
为无菌溶液剂或混悬剂的液体药物组合物例如可以通过肌内、腹膜内或皮下注射施用。无菌溶液剂还可以静脉内施用。口服施用可以以液体或固体组合物的形式进行。
药物组合物优选为单位剂型，例如片剂、胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂或栓剂。在该形式中，组合物可以被再分为包含适宜数量活性成分的单位剂量；单位剂型可以是包装的组合物，例如包装的散剂、小瓶、安瓿、预填充的注射器或包含液体的小药囊。单位剂型例如可以是胶囊剂或片剂本身，或者其可以是适宜数目的包装形式的任何该类组合物。
在本发明的另一个实施方案中，用于本发明方法的化合物可以与一种或多种其它药学活性剂(如用于治疗哺乳动物中存在的任何其它医学病症的那些活性剂)一起施用于哺乳动物。该类药学活性剂的实例包括缓解疼痛剂、抗血管生成剂、抗肿瘤剂、抗糖尿病剂、抗感染剂或胃肠剂或它们的组合。
一种或多种其它的药学活性剂可以以治疗有效量与一种或多种本发明的化合物同时(如在相同的时间单独或者在药物组合物中一起)和/或相继施用。
术语“联合治疗”指的是施用两种或多种治疗剂或化合物来治疗本公开中所述的障碍或病症，例如潮红、出汗、与温度调节有关的病症或障碍等。该施用包括以并行的方式使用各种类型的治疗剂。在任何一种情况中，治疗方案将在治疗本文中所述病症或障碍中提供药物联合的有益作用。
施用途径可以是可有效将活性多巴胺重摄取抑制剂，包括氮杂二环己烷或其可药用盐转运到适宜或所需的作用部位的任何途径，如口服、鼻、肺、经皮(如被动或离子转运)或非肠道(如直肠、储库式、皮下、静脉内、尿道内、肌内、鼻内、眼用溶液剂或软膏剂)。此外，多巴胺重摄取抑制剂，包括氮杂二环己烷或其可药用盐与其它活性成分的施用可以是并行或同时的。
在下面的实施例中进一步说明了本发明，其中除非特别说明，否则所有的份数和百分比均以重量计算并且度是摄氏度。应当清楚的是，虽然这些实施例表示了本发明优选的实施方案，但是，给出这些实施例仅用于说明。从上面的讨论和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且可以在不脱离本发明宗旨和范围的情况下对本发明进行多种变化和修饰以使其适应多种用途和条件。
实施例细胞系、培养试剂和试验将用人hNET(Pacholczyk，T.，R.D.Blakely和S.G.Amara，Nature，1991，350(6316)p.350-4)稳定转染的MDCK-Net6细胞在包含高葡萄糖DMEM(Gibco，Cat.No.11995)、10％FBS(进行了透析和热灭活，USBio-Technologies，Lot FBD1129HI)和500μg/mL G418(Gibco，Cat.No.10131)的生长培养基中进行培养。将这些细胞以300,000/T75培养瓶的数量进行接种，这些细胞每周分裂两次。JAR细胞系(人胎盘绒毛膜癌)购自ATCC(Cat.No.HTB-144)。将这些细胞在包含RPMI 1640(Gibco，Cat.No.72400)、10％FBS(Irvine，Cat.No.3000)、1％丙酮酸钠(Gibco，Cat.No.1136)和0.25％葡萄糖的生长培养基中进行培养。将细胞以250,000/T75培养瓶的数量进行接种并每周分裂两次。对于所有试验而言，将这些细胞接种至Wallac 96孔无菌板(PerkinElmer，Cat.No.3983498)中。
多巴胺摄取转运蛋白结合试验用重组人多巴胺转运蛋白(hDAT)进行的多巴胺摄取转运蛋白结合试验可以用来评价对多巴胺转运蛋白的结合亲和力。
对于单个浓度监测而言，配制10mM化合物溶液并用溶剂(即DMSO、50％DMSO水、乙醇、水)将其逐级稀释到浓度为1mM。将化合物在结合缓冲液(用试验缓冲液将2.1μL的1mM储备液稀释到100μL)中进一步稀释并将5μL等分量溶液转移至含有hDAT膜的96孔试验板中使其最终试验浓度为1μM。至少抑制60％3H-WIN 35,428结合的化合物将会进一步评价以确定IC50值。
对于IC50值的确定而言，通过将10mM储备液逐级稀释来制备不同浓度的储备液。进一步用结合缓冲液稀释化合物并将5μL等分量溶液转移至96孔试验板中使其最终浓度范围为1-1000nM(全或半对数增量)。
选择性多巴胺重摄取抑制剂(DRI’s)、S-514(氯苯咪吲哚)和S-266(哌甲酯)以及选择性去甲肾上腺素重摄取抑制剂(NRI)、AHR-9543(地昔帕明)用作验证该试验的参照化合物。选择性DRI’s和选择性NRI被选作参照化合物以说明该试验区分两种类型的化合物的能力。所有参照化合物均为可商购的。
在10μM氯苯咪吲哚存在下测定非特异性结合。制备1mM氯苯咪吲哚的DMSO储备液，用试验缓冲液稀释，并将5μL等分量溶液转移至96孔试验板中使其最终浓度为10μM。
本试验中使用的放射性配体为3H-WIN 35,428(PerkinElmer Cat.No.NET1033，SA 60-87 Ci/mmol)并且在单点试验和竞争试验中以15-20nM的终浓度被释放。
膜购买自表达重组人多巴胺转运蛋白(hDAT)的细胞制备的膜(PerkinElmer Cat.No.RBHDATM)，该膜于包含100个试验孔的蛋白的管中。将每个管用结合缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.4；100mM NaCl)稀释至7.5mL，用组织捣碎机(Polytron PT 1200C，Kinematica AG)匀浆并且以75μL的体积将膜转移至聚丙烯96孔试验板的各孔中。取决于特异性膜的种类，产生的蛋白浓度为约每孔30μg。
放射性配体结合试验
自由商购的膜(PerkinElmer Cat.No.RBHDATM)[1，2]提供的方案信息修改本方法。修改的方案的详述如下。
结合反应在聚丙烯96孔板(Costar Cat.Nos.3359，3930)上进行。以75μL的体积将匀化的膜制剂转移到试验板的各孔中。通过将10mM储备液逐级稀释来产生几个浓度的化合物溶液。如上述描述，用结合缓冲液将化合物溶液进一步稀释至所需的转移浓度。按照化合物稀释方案进行稀释，以使得每个浓度和每个试验孔的溶剂溶液标准化。向含有匀浆后的膜的孔中加入5μL等分量的试验化合物。开始结合反应之前，将匀浆过的膜和化合物在4℃下预温育20分钟。通过加入25μL用结合缓冲液稀释的、最终反应浓度为15-20nM的3H-WIN 35,428来开始结合反应。在4℃下，通过在摇床上低速振摇试验板来将反应物温育2小时。
用Millipore MultiScreen-FB不透明96孔过滤板(Millipore玻璃纤维B，Cat.No.MAFBN0B)将游离放射性配体从结合物中分离出来。在开始结合反应之前，将这些过滤板在室温下与175μL/孔的0.5％聚乙烯胺/H2O(PEI；Sigma Cat.No.P-3143)预温育至少2小时以减少非特异性放射性配体结合。在对该反应板进行收获前，用多头抽真空装置(MilliporeMutiscreen Filtration System，Cat.No.MAVM0960R)将PEI溶液从滤板中吸出。用Zymark Rapid Plate-96自动移液管装置将各反应物的等分样品(每100μL反应孔90μL)从该反应板转移到滤板中。通过经过滤板真空过滤(5-10Hg)来终止结合反应。用12通道抽吸/洗涤系统将该板用200μL冰冷的洗涤缓冲液(50mM Tris-HCl，0.9％NaCl，pH7.4)洗涤9次以除去未结合的放射性配体。从滤板中取出塑料的底部支撑物并将这些板放到塑料夹持器中。将该板风干10分钟，然后加入50μL/孔闪烁液(PackardUltimaGold，Cat.No.6013329)。用粘性膜(Packard TopSeal-A，Cat.No.6005185)将各板的顶部密封并且将板剧烈振摇10至15分钟以保证闪烁液的充分溶解。用Wallac Microbeta计数器(PerkinElmer)对该板进行计数并且以Microsoft Excel形式收集cpms/孔作为数据流。
对以单浓度(1μM)进行试验的化合物，每个试验板至少有3个孔测定总的结合(定义为在测定缓冲液单独存在时的结合)和至少3个孔测定非特异性结合(定义为在10μM氯苯咪吲哚存在时的结合)。用应用下面的公式的Microsoft Excel电子表格计算每个药物孔的化合物活性(表达为3H-WIN35,428结合的抑制百分比(％I))抑制百分比(％I)＝((总结合孔的平均cpm-药物孔的cpm)/(总结合孔的平均cpm-非特异性结合孔的平均cpm))×100在以1μM浓度试验时，至少抑制60％3H-WIN 35,428结合的化合物将会进一步通过确定IC50值来评价。
对于IC50的确定，原始cpm值是作为数据流从Wallac Microbeta计数器产生的。将数据下载到Microsoft Excel统计应用程序中，用该程序计算估计的IC50值。应用我们的Biometrics Department编写的logistic剂量响应程序计算IC50值。这个统计程序应用仅包含缓冲液的孔确定最大结合值(总结合)并且应用含有10μM氯苯咪吲哚的孔确定最小结合值(非特异性结合)。从对数刻度得到估算的IC50值并且在最大和最小结合值之间进行线性拟合。如果用Microsoft Excel评价数据表明通过对数转换过的数据产生了更好的拟合，那么在数据线性拟合之前将进行对数转换。最高试验浓度没有超过50％结合抑制的情况中，数据将会以最高试验浓度的最大抑制百分比报告。
1.Pristupa，Z.B等人，Pharmacological heterogeneity of the clonedand native human dopamine transporterdisassociation of[3H]WIN35,428 and[3H]GBR 12,935 binding.Molecular Pharmacology，1994，45(1)125-135.
2.Shimada，S等人，Cloning and expression of a cocaine-sensitivedopamine transporter complementary DNA[erratum appears in Science1992 Mar 6；255(5049)1195].Science，1991，254(5031)576-578.
去甲肾上腺素(NE)摄取试验在第1天，将细胞以3,000个细胞/孔的数量接种于生长培养基中并将其保存在细胞培养器(37℃，5％CO2)中。在第2天，将生长培养基用200μL包含0.2mg/mL抗坏血酸和10μM帕吉林的试验缓冲液(25mM HEPES；120mM NaCl；5mM KCl；2.5mM CaCl2；1.2mM MgSO4；2mg/mL葡萄糖(pH7.4，37℃))代替。使这些包含具有200μL试验缓冲液的细胞的板在37℃下平衡10分钟，然后向其中加入化合物。在DMSO中制备地昔帕明的储备液(10mM)并一式三份地将其转移到包含细胞的孔中，使其最终的试验浓度为1μM。用得自这些孔的数据来定义非特异性NE摄取(最小NE摄取)。在DMSO中制备试验化合物(10mM)并根据试验范围(1至10,000nM)用试验缓冲液对其进行稀释。将25微升试验缓冲液(最大NE摄取)或试验化合物一式三份地直接加入到包含细胞(于200μL试验缓冲液中)的孔中。将于具有试验化合物的试验缓冲液中的细胞在37℃下培养20分钟。为了开始NE摄取，以25μL等分量将用试验缓冲液稀释的[3H]NE(试验终浓度为120nM)转移至各孔中并将这些板培养5分钟(37℃)。通过将上清液从板中倾泻出来来终止该反应。将包含细胞的板用200μL试验缓冲液(37℃)洗涤两次以除去游离的放射性配体。然后，将这些板倒转，使其干燥2分钟，然后将其复位并再风干10分钟。使这些细胞在25μL0.25 N NaOH溶液(4℃)中裂解，将其放置在振动台上并剧烈振摇5分钟。在细胞裂解后，向各孔中加入75μL闪烁混合物并用薄膜带将这些板密封。将这些板放回到振动台上并剧烈振摇最少10分钟以确保有机溶液和水溶液充分分配。在Wallac Microbeta计数器(PerkinElmer)上对这些板进行计数以收集原始cpm数据。
5-羟色胺(5-HT)摄取试验用之前文献中报道(Prasad等人，Placenta，1996.17(4)201-7)的方法，对用JAR细胞系进行的5-HT功能性重摄取方法进行修改。在第1天，将细胞以15,000个细胞/孔的数量接种至包含生长培养基(具有10％FBS的RPMI 1640)的96-孔板中并将其保存在细胞培养器(37℃，5％CO2)中。在第2天，用星形孢菌素(40nM)对这些细胞进行刺激以增加5-HT转运蛋白的表达。在第3天，在试验前2小时将这些细胞从细胞培养器中取出并将其放置在室温下以使生长培养基平衡至环境氧气浓度。随后，将该生长培养基用200μL包含0.2mg/mL抗坏血酸和10μM帕吉林的试验缓冲液(25mM HEPES；120mM NaCl 5 mM KCl 2.5 mM CaCl2；1.2mM MgSO4；2mg/mL葡萄糖(pH7.4，37℃))代替。在DMSO中制备帕罗西汀(AHR-4389-1)的储备液(10mM)并一式三份地将其转移到包含细胞的孔中，使其最终的试验浓度为1μM。用得自这些孔的数据来定义非特异性5-HT摄取(最小5-HT摄取)。在DMSO中制备试验化合物(10mM)并根据试验范围(1至1,000nM)用试验缓冲液对其进行稀释。将25微升试验缓冲液(最大5-HT摄取)或试验化合物一式三份地直接加入到包含细胞(于200μL试验缓冲液中)的孔中。将这些细胞与化合物一起培养10分钟(37℃)。为了开始反应，以25μL的等分量将用试验缓冲液稀释的[3H]羟基色胺肌酸酐硫酸盐转移至各孔中，使其试验终浓度为15nM。将细胞与该反应混合物一起在37℃下培养5分钟。通过倾泻出试验缓冲液来终止该5-HT摄取反应。将细胞用200μL试验缓冲液(37℃)洗涤两次以除去游离的放射性配体。将这些板倒转，使其干燥2分钟，然后将其复位并再风干10分钟。随后，使这些细胞在25μL0.25 N NaOH溶液(4℃)中裂解，然后，将其放置在振动台上并剧烈振摇5分钟。在细胞裂解后，向各孔中加入75μL闪烁混合物，用薄膜带将这些板密封并将这些板放回到振动台上放置至少10分钟。在Wallac Microbeta计数器(PerkinElmer)上对这些板进行计数以收集原始cpm数据。
结果评估对于各实验而言，将由Wallac Microbeta计数器收集的cpm值的数据流下载到Microsoft Excel统计应用程序中。用Wyeth BiometricsDepartment编写的转化的双侧对数剂量响应(transformed-both-sideslogistic dose response)程序来计算EC50值。该统计学程序使用得自表示最大结合或摄取(试验缓冲液)的孔的平均cpm值和得自表示最小结合或摄取((1μM地昔帕明(hNET)或1μM帕罗西汀(hSERT))的孔的平均cpm值。在对数(log)刻度下完成EC50值的估算并在最大和最小结合或摄取值之间进行线性拟合。所有图中所示的数据都是通过以最大和最小结合或摄取值为基础将各数据点归一化至平均百分比来产生的。通过汇集各实验的原始数据并将所汇集的数据作为一个实验进行分析来计算得自多次试验的EC50。
遥测术模型这种模型是对之前所报道的描述雌激素对昼夜尾部皮肤温度(TST)调节方案(Berendsen等人，European Journal of Pharmacology，2001，419(1)47-54)的改进模型。在24小时的时期中，经历了整个昼夜循环的大鼠在活动(黑暗)期中的TST下降并且在非活动(光亮)期中的TST升高。在卵巢切除(OVX)的大鼠中，TST在整个24小时内都升高，因此，其丧失了在活动(黑暗)期中通常发生的TST降低，因此，用其来检查化合物恢复这种活动期中TST的降低的能力。将温度和物理活动传感器(PhysioTel TA10TA-F40，Data Sciences International)皮下植入背侧肩胛区域并将温度探针的尖端从尾巴根部皮下穿过2.5cm。在7天的恢复期后，在该研究剩余的时间中连续记录TST读数。每隔5分钟用在10秒的取样期内获得的值来收集各动物的尾部皮肤温度读数。在试验前一天，通过将在12小时活动(黑暗)期中记录的温度读数平均来计算各动物的平均基线TST值。在这些研究中，在开始黑暗循环前大约40分钟对动物进行给药。
统计分析在遥测术模型中化合物恢复TST的正常降低的能力的评估是用计算的各动物每小时的TST值来进行分析的，所述每小时的TST值是通过将在记录时间内每隔5分钟获得的12个温度读数平均获得的。为了对遥测术模型中的ΔTST进行分析，进行双因素重复测量ANOVA。用于分析的模型是ΔTST＝GRP(组)+HR(小时)+GRP*HR+基线。因此，所报告的最小平方平均值是在两组都具有相同基线值的条件下的期望平均值。每小时GRP*HR样本的Post-hoc检验是每小时组间差异的t检验。为了保守一些，除非p值＜0.025，否则不认为结果有显著差异。所有的分析都是用SAS PROC MIXED(SAS，Carey，NC)进行的。
实施例1(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)的功能性重摄取生物试验。
(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)的对多巴胺转运蛋白(DAT)的多巴胺重摄取抑制、去甲肾上腺素转运蛋白(NET)的去甲肾上腺素重摄取抑制和5-羟色胺转运蛋白(SERT)的5-羟色胺重摄取抑制的IC50值是通过在体外用匀浆的大鼠脑测定的。结果如下
实施例2(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)的遥测术试验。
给大鼠皮下注射溶媒(2％吐温/0.5％甲基纤维素)或皮下注射30mg/kg溶解于2％吐温/0.5％甲基纤维素的试验化合物。通过对这种模型中的如下参数进行评估来测量试验化合物的作用作用开始、对TST影响的持续时间、在化合物作用持续期内TST的最大变化和TST的平均变化。
(-)-1-(4-甲基苯)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)，30mg/kg皮下注射，在OVX-诱导的温度调节功能障碍遥测术模型(遥测术模型)中恢复了正常的TST。
在卵巢切除术-诱导的温度调节功能障碍的遥测术大鼠模型中，以1剂量(30mg/kg，皮下注射)施用(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪(GBR12909)的结果分别如图1和图2所示。
实施例3在神经性疼痛的脊神经结扎(SNL)模型中对试验化合物进行的评估材料和方法动物维护和研究是根据the National Research Council在Guide for theCare and Use of Laboratory Animals中概括的处理和使用实验室动物的政策和方针来进行的。实验室设施得到了the United States Department ofAgriculture的许可并且被the American Association for Accreditation ofLaboratory Animal Care特许。研究方案得到了the Wyeth InstitutionalAnimal Care and Use Committee的批准，其与the Committee for Researchand Ethical Issues of IASP(Zimmermann，1983)的方针一致。
个体.将在抵达时重150至200g的雄性Sprague-Dawley大鼠(Indianapolis，IN)单独饲养在气候受控房间中的铁丝网笼子中。进行12小时的光/暗循环(在0630时开灯)，允许其自由进食进水。
手术-脊神经结扎.以1L/min的速度将大鼠用O2中的3.5％的氟烷麻醉并且在手术期间用O2中的1.5％的氟烷来维持麻醉。通过在左侧脊柱旁肌肉上切口来进行L5和L6神经的结扎。将与脊柱毗邻的左侧L5和L6脊神经分离出并用6-0号缝合丝线在背根神经节末梢将其紧紧结扎。用4-0号缝合丝线和创伤夹将伤口逐层闭合。在手术后7天开始进行试验。
触觉超敏反应评估.将动物放置在被抬高的铁丝网笼子中并给其45至60分钟的时间来适应进行试验的房间。在开始手术前0至3天，用一系列进行了校准的von Frey单丝(Stoelting；Wood Dale，IL)来对基线触觉敏感性进行评估。将Von Frey单丝以连续上升或降低的顺序应用到后爪足底中部，根据需要，可以尽可能地在接近响应阈值的值附近进行。用引起对该刺激产生敏锐收回响应的最小的力来表示阈值。因此，出现收回响应时下一次刺激采用较轻微的刺激，没有收回响应时下一次采用更强的刺激。将基线阈值＜10g力的大鼠从本研究中剔除。在手术后3至4周，对触觉敏感性重新进行评估，将不能表现出随后的触觉超敏性(阈值≥5g)的动物从进一步的试验中剔除。将这些个体假随机地分成7个试验组，使得各组的平均基线和手术后敏感性相似。用一种时程方法(time course procedure)对单剂量试验化合物逆转确定的超敏性的能力进行评估。在这种方法中，将30mg/kg试验化合物或溶媒腹膜内注射施用并在施用后30、60、100、180和300分钟对其敏感性重新进行评估。
将结果表示为用Dixon非参数检验进行了评估的50％阈值(以克力为单位的50％阈值)的形式。用15克力作为最大的力。将各触觉超敏性阈值平均，从而得到平均响应(±1 SEM)。用单侧方差分析(ANOVA)来进行统计分析。用随后的最小显著差异分析对显著的主要作用进行分析。显著差异的判断标准是p＜0.05。
将触觉超敏性的逆转定义为回归至触觉敏感性的基线并且可以根据下面的方程来进行计算 其中50％阈值药物+手术后是在神经受损个体用药后以g力为单位的50％阈值，50％阈值手术后是神经受损个体以g力为单位的50％阈值，以及50％阈值手术前是在神经损伤前以g力为单位的50％阈值。100％逆转的最大作用表示在该实验条件下的个体恢复至手术前阈值平均值。
外消旋的1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(比西发定)、(+)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、加巴喷丁和溶媒的结果如图3所示，该图为施用外消旋的1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(比西发定)、(+)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、加巴喷丁和溶媒后30、60、100、180和300分钟逆转％的图。
当一些范围在本文中被用于物理性质(如分子量)或化学性质(如化学式)时，本发明也旨在包括范围的所有组合和亚组合的特定实施方案。
在本文中所引用或描述的各专利、专利申请和出版物的公开内容均以其全部并入本文作为参考。
本领域技术人员将意识到可以对本发明优选的实施方案进行多种变化和修改，并且该类变化和修改可以在不脱离本发明宗旨的情况下作出。因此，所附的权利要求书覆盖了所有落入本发明宗旨和范围的该类等价变化。
权利要求
1.在需要该治疗的个体中治疗至少一种神经系统障碍或病症的方法，其包括的步骤有给所述个体施用包含有效量的至少一种选择性多巴胺重摄取抑制剂的组合物；其中所述的神经系统障碍或病症是血管舒缩症状、慢性疼痛、夏-德综合征或它们的组合。
2.权利要求1的方法，其中在功能性的去甲肾上腺素重摄取生物试验中，所述的选择性多巴胺重摄取抑制剂具有大于约0.5μM的去甲肾上腺素重摄取抑制活性。
3.权利要求2的方法，其中所述的选择性多巴胺重摄取抑制剂基本上不具有去甲肾上腺素重摄取抑制活性。
4.权利要求1的方法，其中在功能性的5-羟色胺重摄取生物试验中，所述的选择性多巴胺重摄取抑制剂具有大于约0.5μM的5-羟色胺重摄取抑制活性。
5.权利要求4的方法，其中所述的选择性多巴胺重摄取抑制剂基本上不具有5-羟色胺重摄取抑制活性。
6.权利要求1的方法，其中所述的选择性多巴胺重摄取抑制剂具有双重的在功能性的去甲肾上腺素重摄取生物试验中大于约0.5μM的去甲肾上腺素重摄取抑制活性和在功能性的5-羟色胺重摄取生物试验中大于约0.5μM的5-羟色胺重摄取抑制活性。
7.权利要求6的方法，其中所述的选择性多巴胺重摄取抑制剂基本上不具有双重的去甲肾上腺素和5-羟色胺重摄取抑制活性。
8.权利要求1的方法，其中所述组合物包括选自下列的化合物(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪或其可药用盐或它们的组合。
9.权利要求1的方法，其中所述的组合物包括(-)-1-(3，4-二氯苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷或其可药用盐。
10.权利要求1的方法，其中所述的组合物包括(-)-1-(4-甲基苯基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷或其可药用盐。
11.权利要求1的方法，其中所述的组合物包括1-[2-[二(4-氟苯基)甲氧基]乙基]-4-(3-苯基丙基)哌嗪或其可药用盐。
12.前述任意一项权利要求的方法，其中所述的神经系统障碍或病症是血管舒缩症状。
13.前述任意一项权利要求的方法，其中所述的血管舒缩症状是潮红。
14.前述任意一项权利要求的方法，其中所述的个体是人。
15.权利要求14的方法，其中所述的人是女性。
16.权利要求15的方法，其中所述的女性是绝经前的女性。
17.权利要求15的方法，其中所述的女性是围绝经期的女性。
18.权利要求15的方法，其中所述的女性是绝经后的女性。
19.权利要求14的方法，其中所述的人是男性。
20.权利要求19的方法，其中所述的男性是天然、化学或手术性男性更年期的男性。
21.权利要求1至11任意一项的方法，其中所述的神经系统障碍或病症是慢性疼痛。
22.权利要求21的方法，其中所述的神经系统障碍或病症是神经性疼痛。
23.权利要求1至11任意一项的方法，其中所述的神经系统障碍或病症是夏-德综合征。
24.选择性多巴胺重摄取抑制剂在制备用于在需要该治疗的个体中治疗至少一种神经系统障碍或病症的药物中的用途，其中所述的神经系统障碍或病症是血管舒缩症状、慢性疼痛、夏-德综合征或它们的组合。
全文摘要
本发明涉及选择性多巴胺重摄取抑制剂，包括(－)－1－(3，4－二氯苯基)－3－氮杂二环[3.1.0]己烷、(－)－1－(4－甲基苯基)－3－氮杂二环[3.1.0]己烷、氯苯咪吲哚、哌甲酯和1－[2－[二(4－氟苯基)甲氧基]乙基]－4－(3－苯基丙基)哌嗪，以及它们用于治疗某些神经系统障碍和病症、特别是包括血管舒缩症状(VMS)、慢性疼痛和夏－德综合征的方法。
文档编号A61P25/28GK101022794SQ200580031230
公开日2007年8月22日 申请日期2005年7月21日 优先权日2004年7月22日
发明者D·C·迪谢尔, M·A·阿布-加尔比亚 申请人:惠氏公司