专利名称：一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物中分离纯化药用活性成分的绿色化学制备方法，更具体涉及一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途。
背景技术：
在中国，荷叶资源丰富，价廉易得，药效明确，为不可多得的可以精深加工和综合开发利用的大宗天然药食两用植物资源。但在产地，大量荷叶被作为废弃物而未被合理利用，造成资源的极大浪费，也带来一定程度的环境污染。
睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)，为一种药食两用植物，在我国南北方均有种植，种植历史长达3000多年，目前盛产于福建、江西、湖北、湖南和浙江等省份，尤其以福建建宁出产的白莲(建莲)和湖南洞庭湖地区出产的红莲(湘莲)闻名遐尔于海内外。
荷叶(Nelumbo nucifera leaf)为莲的干燥叶，又名莲叶或藕叶，入选中国卫生部“既是食品，又是药品”的植物名录，民间广泛用作食物和药物，临床医学上也常以粗加工的复方制剂用于肥胖症和高脂血症的治疗，疗效明显，但较少对诸如荷叶黄酮和荷叶生物碱等有效部位群进行深入研究。
传统医学认为，荷叶性味寒，具有清暑利湿、减肥降脂、清心去热、止血利水的活性，可开发制成袋泡茶、饮料、冲剂、胶囊等保健食品。现代药理研究表明，荷叶所含的黄酮和生物碱等成分的生物活性较高，为荷叶中主要的药用活性成分，含量可分别达1.5％和0.3％。荷叶黄酮和荷叶生物碱具有明显的减肥、降脂、抑菌、抗病毒、解毒、戒毒、抗氧化等功能[孔文琦等，《中药研究与信息》，2005，7(6)22-24]。这些研究成果将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。研究荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途，对于荷叶的精深加工和系列产品开发具有一定的指导意义。
目前，提取荷叶黄酮的主要方法有水提取法[陈海光等，《食品科学》，2002，23(1)69-72]、水提取后采用大孔树脂富集吸附法[蔡为荣等，《江苏食品与发酵》，2002，24(4)1-5；赵骏等，《中药材》，2005，28(9)832-834]等。提取荷叶生物碱常用的方法有酸性水溶液提取法[陈海光等，《食品与机械》，2001，17(5)16-17；蒋益虹，《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2004，30(5)519-523；]、酸性水提取后采用大孔树脂富集吸附法[赵骏等，《中药材》，2003，26(9)669-670]。
由于荷叶化学成分复杂，既含有易溶于乙醇等极性溶剂的生物碱、黄酮等醇溶性药用活性成分，也含有易溶于水或缓冲液的蛋白质、酶、多糖等水溶性生物大分子杂质和鞣质、有机酸、低聚糖等水溶性生物小分子杂质，甚至还含有易溶于石油醚等非极性溶剂的叶绿素、脂类、树胶等脂溶性杂质成分。
采用水提取方法制备的荷叶提取物，虽然含有荷叶生物碱和荷叶黄酮等主要药用活性成分，但是也有大量的蛋白质、多糖、鞣质、叶绿素和有机酸等杂质成分存在，产品明显存在易吸湿、保存困难、生物碱和黄酮的纯度不高、药效不明显、产品的品质和市场竞争力不足等缺陷。
水提取后采用大孔树脂富集吸附法，虽然有助于荷叶提取物中生物碱和黄酮的纯度提高，但是由于荷叶提取物中尚存的蛋白质、多糖以及其它生物大分子杂质，将严重影响大孔吸附树脂对荷叶生物碱和荷叶黄酮的分离纯化效率和单位树脂饱和吸附量，甚至导致大孔吸附树脂的不可再生，将严重影响大孔吸附树脂的使用寿命，导致荷叶提取物产品收率较低、制备成本居高不下。
由于聚酰胺对富含羟基的黄酮类物质具有选择性吸附的作用，且其吸附能力取决于被吸附物质羟基的多少，故已经成为黄酮类物质良好的吸附剂。利用聚酰胺分离纯化黄酮和生物碱，能获得普通大孔树脂无法达到的产物纯度。
本发明利用聚酰胺对黄酮的特异性吸附特点，进行荷叶黄酮和荷叶生物碱的进一步分离纯化，分别制备高纯度的荷叶黄酮和荷叶生物碱产品，具有明显的创新性，可提供一种设备简单、分离纯化效果好、产品收率高、生产成本低的荷叶黄酮和荷叶生物碱制备方法，国内外未见文献报道。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种低成本、高收率、高品质、适合于工业生产的荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法。
本发明的目的之二在于将所制备的荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物、树脂分离纯化后的荷叶提取物、聚酰胺分离纯化后的荷叶黄酮和荷叶生物碱，进一步制成临床上可适用的任何一种具有减肥、降血脂、抑菌、抗病毒或者抗氧化作用的口服药剂，如胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
本发明的采用聚酰胺分离纯化的荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法是这样实现的包括荷叶粗提物的极性有机溶剂提取或水提取步骤，荷叶粗提物的膜分离除杂步骤，荷叶粗提物的大孔吸附树脂分离纯化步骤，其特征在于以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，未被聚酰胺吸附部分，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶生物碱产品。对上述步骤中吸附在聚酰胺上的荷叶黄酮进行回收，先用水洗去极性杂质和色素，再用极性有机溶剂水溶液洗脱荷叶黄酮，洗脱液经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶黄酮产品。
所述的极性有机溶剂提取的荷叶粗提物的制备方法是以荷叶为原料，采用10～20倍荷叶干重(W/W)的30～65％的极性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。
所述的水提取的荷叶粗提物的制备方法是以荷叶为原料，采用10～30倍荷叶干重(W/W)的水，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。
所述的膜分离除杂方法是以极性有机溶剂提取或水提取的荷叶粗提物为原料，加水，将荷叶粗提物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下经膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。
所述的大孔吸附树脂分离纯化方法是以荷叶粗提物或者膜分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用大孔吸附树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用4～8倍树脂量的30～60％的极性有机溶剂水溶液以1～3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成树脂分离纯化后的荷叶提取物。
所述的聚酰胺分离纯化荷叶生物碱的制备方法是以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，未被聚酰胺吸附部分，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶生物碱产品。
所述的聚酰胺分离纯化荷叶黄酮的制备方法是以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用6～10倍树脂量的40～70％终浓度的极性有机溶剂水溶液以1～3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶黄酮产品。
上述极性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂，优先选用甲醇或丙酮。这主要基于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮等极性有机溶剂的提取效果相当，但相对于其它极性有机溶剂而言，甲醇或丙酮的沸点更低、能耗更小，能显著降低产品的制备成本。
上述膜分离除杂过程可选用10000截留分子量～0.22μm膜孔径的分离膜。
上述膜分离除杂过程的分离膜材料可以是无机陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一种或几种混合膜材料，优先选用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
上述大孔吸附树脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一种或几种混合树脂，优先选用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818。
本发明制备工艺的主要优点之一在于组合采用极性有机溶剂提取、膜分离除杂、大孔吸附树脂富集和聚酰胺分离纯化的方法，不仅能工业化生产不同纯度与级别的荷叶提取物，而且能进一步工业化生产较高纯度与级别的荷叶黄酮和荷叶生物碱产品，用于后续的减肥、降脂功能产品的制备，更能真正地安全、简便、合理、经济地实现荷叶的全组分综合利用和系列产品的工业化生产，充分体现出绿色化学生产的理念和循环经济的策略，具有理论新颖、技术合理、操作安全、工艺简便、经济可行、环境友好等优点。
本发明制备工艺的主要优点之二在于采用中药现代化生产技术提取荷叶主要药用活性成分制成国际通行的各种纯度与级别的荷叶提取物，以及较高纯度与级别的荷叶黄酮和荷叶生物碱产品，具有现代中药产品的“三高”、“三小”和“三便”等优点，能适应和满足现代中医临床用药需求，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策。
具体实施例方式
本发明采用聚酰胺分离纯化的荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法，包括荷叶粗提物的极性有机溶剂提取或水提取步骤，荷叶粗提物的膜分离除杂步骤，荷叶粗提物的大孔吸附树脂分离纯化步骤，其特征在于以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，未被聚酰胺吸附部分，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶生物碱产品。对上述步骤中吸附在聚酰胺上的荷叶黄酮进行回收，先用水洗去极性杂质和色素，再用极性有机溶剂水溶液洗脱荷叶黄酮，洗脱液经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶黄酮产品。
极性有机溶剂提取的荷叶粗提物的制备方法是以荷叶为原料，采用10～20倍荷叶干重(W/W)的30～65％的极性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。
上述极性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂，优先选用甲醇或丙酮。这主要基于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮等极性有机溶剂的提取效果相当，但相对于其它极性有机溶剂而言，甲醇或丙酮的沸点更低、能耗更小，能显著降低产品的制备成本。
水提取的荷叶粗提物的制备方法是以荷叶为原料，采用10～30倍荷叶干重(W/W)的水，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。
膜分离除杂方法是以极性有机溶剂提取或水提取的荷叶粗提物为原料，加水，将荷叶粗提物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下经膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。
上述膜分离除杂过程可选用10000截留分子量～0.22μm膜孔径的分离膜。
上述膜分离除杂过程的分离膜材料可以是无机陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一种或几种混合膜材料，优先选用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
大孔吸附树脂分离纯化方法是以荷叶粗提物或者膜分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用大孔吸附树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用4～8倍树脂量的30～60％的极性有机溶剂水溶液以1～3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成树脂分离纯化后的荷叶提取物。
上述大孔吸附树脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一种或几种混合树脂，优先选用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818。
聚酰胺分离纯化荷叶生物碱的制备方法是以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，未被聚酰胺吸附部分，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶生物碱产品。
聚酰胺分离纯化荷叶黄酮的制备方法是以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用6～10倍树脂量的40～70％终浓度的极性有机溶剂水溶液以1～3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶黄酮产品。
本发明所述的荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物、树脂分离纯化后的荷叶提取物、聚酰胺分离纯化后的荷叶黄酮和荷叶生物碱的用途是可按照常规的制剂方法制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂。所述的口服药剂为胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
本发明各制备物的理化参数测定方法如下(1)荷叶黄酮的含量测定采用高效液相色谱法，以槲皮素为对照。色谱条件色谱柱选用Waters Nova-Pak C18柱(Φ3.9×15mm，4μm)，预柱C18(3.9mm×15mm)，流动相为甲醇∶0.2％磷酸水溶液(45∶55)，流速1.0mL/min，柱温34℃，检测波长365nm，进样量20μL。样品的测定取待测液4mL(或待测物粉末0.1g，溶于4mL溶剂中)，加甲醇6mL及12mol/L盐酸1mL，摇匀后置80℃水浴回流水解1h。而后将水解液转入50mL容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，作为HPLC待测液。HPLC测定过程中采用外标法定量，以槲皮素为对照，计算水解后各苷元的含量，统一用因子2.51计算荷叶黄酮含量。
(2)荷叶黄酮的定性判断采用铝盐比色法，以芦丁为对照。将试样溶液稀释到一定的倍数，取1mL到试管中，加入0.1mL 5％NaNO2溶液，摇匀，5min后加入0.1mL 10％Al(NO3)3溶液，6min后再加入1mL 1mol/L NaOH溶液，混匀，10min后若产生红色或紫红色表明存在荷叶黄酮，以试剂作为空白。
(3)荷叶生物碱的含量测定采用高效液相色谱法，以荷叶碱为对照。色谱条件为色谱柱选用Waters Nova-Pak C18柱(Φ3.9×15mm，4μm)，预柱C18(3.9mm×15mm)，流动相为甲醇∶H2O∶二乙胺(75∶25∶0.01，pH值9.0～10.5)，流速1.0mL/min，柱温34℃，检测波长270nm，进样量20μL。
(4)荷叶生物碱的的定性判断采用碘-碘化钾比色法，以荷叶碱为对照。将试样溶液稀释到一定的倍数，取1mL到试管中，加入1～2滴碘-碘化钾试剂溶液，摇匀，放置5min，若产生棕色或褐色沉淀表明存在荷叶生物碱，以试剂作为空白。
(5)多糖含量的测定采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖或D-半乳糖为对照。
(6)蛋白质含量的测定采用FoLin-酚法测定，以小牛血清白蛋白为对照。
(7)含水量采用快速水分测定仪测定。
本发明口服药剂制备方法如下(1)喷雾干燥条件为进料液浓度10～20波美度(60℃)，PG-5型喷雾干燥机进口温度160～250℃，出口温度60～110℃，离心转头工作压力1.6～3.0kgf/cm2。
(2)冷冻干燥条件为干燥温度-10～-60℃，升华温度35～70℃，压力0.05～0.18mbar，干燥时间20～40h。
(3)真空干燥条件干燥温度45～75℃，压力-0.06～-0.095MPa，干燥时间15～50h。
(4)胶囊剂制备按照常规的制剂方法，选择1号硬胶囊，每粒内容物装填量约0.30g，于NJP-1000B型全自动硬胶囊充填机上进行药粉充填，于JPB-25II B型平板式自动泡罩包装机上进行铝箔泡罩包装，可制成临床适用的荷叶提取物口服胶囊剂。
(5)颗粒剂制备按照常规的制剂方法，于SHK-220型高效湿法混合制粒机上造粒，于JXD-30A型颗粒自动包装机上进行包装，可制成临床适用的荷叶提取物口服颗粒剂。
(6)滴丸剂制备按照常规的制剂方法，调整TZDW-1型通用滴丸机的温度控制系统，使滴头温度保持在50～85℃，液体石蜡等冷却剂的温度保持在-4～40℃；取荷叶提取物及其1～9倍重量的甘油明胶，置于加热器中，在搅拌条件下加热制成混悬液，将其置于滴丸机的滴头罐内，通过滴头滴入冷却剂中，由滴丸机出口将收缩成型的滴丸取出，去掉表面的冷却剂，干燥成荷叶提取物口服滴丸剂。
本发明制备方法的实施例陈述如下实施例1以福建省建宁产荷叶为原料，将鲜荷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过16～20目筛得荷叶粉末，将3.0kg荷叶粉末放入提取罐中，用荷叶粉末10倍干重(W/W)的40％甲醇水溶液，于63℃条件下提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为96.7％，荷叶生物碱的提取率为95.9％。
接着，先将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.05，然后采用截留分子量为10000聚砜膜，在1.0MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为95.2％，荷叶生物碱回收率为95.6％，蛋白质去除率为96.1％，多糖去除率为96.9％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用HZ806大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用8倍树脂量的60％乙醇水溶液，以3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率96.2％，荷叶生物碱的回收率95.8％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.19，然后采用200目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用10倍树脂量的60％乙醇水溶液以3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经喷雾干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量4.6％，荷叶黄酮纯度64.0％、荷叶黄酮总收率68.8％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用喷雾干燥处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量3.8％，荷叶生物碱纯度85.5％、荷叶生物碱总收率78.5％。
实施例2将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末20倍干重(W/W)的30％甲醇水溶液，于50℃条件下提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为93.4％，荷叶生物碱的提取率为92.3％。
将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.18，然后采用截留分子量为60000的聚偏氟乙烯膜，在0.6MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为95.8％，荷叶生物碱回收率为95.9％，蛋白质去除率为94.6％，多糖去除率为96.2％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用HZ801大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用6倍树脂量的45％乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率97.2％，荷叶生物碱的回收率98.3％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.13，然后采用120目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用6倍树脂量的50％乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经冷冻干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量5.9％，荷叶黄酮纯度63.7％、荷叶黄酮总收率64.1％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用冷冻干燥处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量5.8％，荷叶生物碱纯度84.1％、荷叶生物碱总收率78.7％。
实施例3将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末17倍干重(W/W)的65％甲醇水溶液，于80℃条件下回流提取1小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为92.7％，荷叶生物碱的提取率为91.2％。
将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.30，然后采用膜孔径为0.22μm的无机陶瓷膜，在0.2MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖等大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为96.2％，荷叶生物碱的回收率为96.4％，蛋白质去除率为93.1％，多糖去除率为95.4％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用HZ816大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用8倍树脂量的30％乙醇水溶液以2倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率95.4％，荷叶生物碱的回收率95.9％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.12，然后采用60目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用9倍树脂量的40％终浓度的乙醇水溶液以2倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经真空干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量5.1％，荷叶黄酮纯度63.1％、荷叶黄酮总收率64.4％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用真空干燥方式处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量4.2％，荷叶生物碱纯度85.0％、荷叶生物碱总收率79.3％。
实施例4以福建省建宁产荷叶为原料，将鲜荷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过16～20目筛得荷叶粉末，将3.0kg荷叶粉末放入提取罐中，用荷叶粉末20倍干重(W/W)的65％乙醇水溶液，于80℃条件下提取1小时，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为92.1％，荷叶生物碱的提取率为90.4％。
先将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.15，然后采用截留分子量为80000聚偏氟乙烯膜，在0.4MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为96.0％，荷叶生物碱回收率为96.1％，蛋白质去除率为94.1％，多糖去除率为95.8％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用D101大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用4倍树脂量的40％甲醇水溶液以2倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率96.3％，荷叶生物碱的回收率96.4％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.14，然后采用120目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用8倍树脂量的45％甲醇水溶液以2倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经冷冻干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量6.1％，荷叶黄酮纯度63.5％、荷叶黄酮总收率67.7％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用冷冻干燥方式处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量5.8％，荷叶生物碱纯度84.2％、荷叶生物碱总收率82.0％。
实施例5将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末30倍干重(W/W)的自来水，于50℃条件下提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为92.1％，荷叶生物碱的提取率为90.5％。
将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.30，然后采用膜孔径为0.22μm的无机陶瓷膜，在0.2MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为96.3％，荷叶生物碱的回收率为96.2％，蛋白质去除率为93.4％，多糖去除率为95.3％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用DK110大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用6倍树脂量的30％甲醇水溶液以3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率93.9％，荷叶生物碱的回收率94.7％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.13，然后采用30目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用10倍树脂量的40％甲醇水溶液以3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经真空干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量4.9％，荷叶黄酮纯度63.4％、荷叶黄酮总收率64.5％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用真空干燥方式处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量4.8％，荷叶生物碱纯度84.9％、荷叶生物碱总收率78.3％。
实施例6将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末10倍干重(W/W)的38％乙醇水溶液，于50℃条件下提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为94.7％，荷叶生物碱的提取率为95.1％。
将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.05，然后采用截留分子量为20000的聚砜膜，在0.8MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为95.4％，荷叶生物碱回收率为95.9％，蛋白质去除率为94.8％，多糖去除率为96.4％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用AB-8大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用6倍树脂量的60％甲醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率95.7％，荷叶生物碱的回收率96.4％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.14，然后采用200目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用6倍树脂量的60％甲醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经喷雾干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量3.6％，荷叶黄酮纯度63.4％、荷叶黄酮总收率70.3％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用喷雾干燥方式处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量3.4％，荷叶生物碱纯度85.4％、荷叶生物碱总收率78.7％。
实施例7以福建省建宁产荷叶为原料，将鲜荷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过16～20目筛得荷叶粉末，将3.0kg荷叶粉末放入提取罐中，用荷叶粉末14倍干重(W/W)的30％丙酮水溶液，于50℃条件下提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为94.6％，荷叶生物碱的提取率为93.8％。
将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.30，然后采用膜孔径为0.22μm的聚偏氟乙烯膜，在0.3MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为96.2％，荷叶生物碱回收率为96.3％，蛋白质去除率为93.6％，多糖去除率为95.1％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用D113大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用4倍树脂量的30％丙酮水溶液以1倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率95.8％，荷叶生物碱的回收率96.1％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.13，然后采用30目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用6倍树脂量的40％丙酮水溶液以1倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经真空干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量5.2％，荷叶黄酮纯度63.1％、荷叶黄酮总收率64.0％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用真空干燥方式处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量4.5％，荷叶生物碱纯度84.7％、荷叶生物碱总收率77.5％。
实施例8将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末10倍干重(W/W)的65％丙酮水溶液，于80℃条件下回流提取2次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为93.2％，荷叶生物碱的提取率为92.1％。
将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.21，然后采用截留分子量为50000的聚砜膜，在0.5MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为95.2％，荷叶生物碱回收率为96.2％，蛋白质去除率为95.0％，多糖去除率为96.1％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用HZ802大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用4倍树脂量的60％丙酮水溶液以2倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率93.6％，荷叶生物碱的回收率94.3％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.13，然后采用200目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用8倍树脂量的60％丙酮水溶液以2倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经喷雾干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量3.9％，荷叶黄酮纯度63.6％、荷叶黄酮总收率68.4％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用喷雾干燥处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量3.5％，荷叶生物碱纯度85.8％、荷叶生物碱总收率77.0％。
实施例9将16～20目荷叶粉末2.5kg放入提取罐中，用荷叶粉末20倍干重(W/W)的自来水，于80℃条件下提取2小时，过滤，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。经测定，荷叶黄酮的提取率为90.8％，荷叶生物碱的提取率为90.1％。
将荷叶粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.16，然后采用截留分子量为100000的无机陶瓷膜，在0.3MPa下进行膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮回收率为96.0％，荷叶生物碱回收率为96.2％，蛋白质去除率为94.1％，多糖去除率为95.7％。
对膜分离纯化后的荷叶提取物，采用HZ803大孔吸附树脂，富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用8倍树脂量的45％丙酮水溶液以3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，回收溶剂后即得树脂分离纯化后的荷叶提取物。经测定，荷叶黄酮的回收率93.8％，荷叶生物碱的回收率94.2％。
加适量水，将树脂分离纯化后的荷叶提取物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.15，然后采用120目聚酰胺富集吸附荷叶黄酮至饱和，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用10倍树脂量的50％丙酮水溶液以3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，真空浓缩回收溶剂，经冷冻干燥后即得荷叶黄酮产品。经测定，荷叶黄酮产品含水量5.9％，荷叶黄酮纯度63.8％、荷叶黄酮总收率64.2％。
上述步骤中未被聚酰胺吸附部分，经真空浓缩回收溶剂后，进一步采用喷雾干燥、冷冻干燥、气流干燥、微波干燥或真空干燥方式处理后即得荷叶生物碱产品。经测定，荷叶生物碱产品含水量4.7％，荷叶生物碱纯度84.6％、荷叶生物碱总收率76.0％。
关于本发明荷叶提取物用途的说明将实施例1制备的荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物、树脂分离纯化后的荷叶提取物、荷叶黄酮和荷叶生物碱分别进行喷雾干燥，然后直接充填制成临床使用的口服减肥降脂胶囊剂，进行动物药效学评价。
1材料雌性小鼠(体重14～16g)，由福建医科大学动物中心提供。基础饲料，购自福建医科大学动物中心。高脂饲料(基础饲料92.5％、食盐2％、蛋黄粉2％、猪油3％、胆固醇0.5％)，本所自制。总胆固醇(TCH)试剂盒(CHOD-PAP法)，浙江东欧生物工程有限公司。甘油三酯(TG)试剂盒(GPO-PAP法)，浙江东欧生物工程有限公司。丙二醛(MDA)试剂盒(TBA法)，南京建成生物工程研究所。胆固醇，上海试一化学试剂有限公司。
2实验方法将70只小鼠以基础饲料饲养5天后随机分为A、B、C、D、E、F、G七组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。其中给药组A、B、C、D和E分别为荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物、树脂分离纯化后的荷叶提取物、聚酰胺分离纯化后的荷叶黄酮和荷叶生物碱，F组作为高脂阳性对照组，G组作为正常阴性对照组。A～F组采用高脂饲料造模，G组以基础饲料饲养，各组小鼠均在饲养7天后开始给药，各药物均配成1g/mL，给药量均为0.6ml/只·天，其中F组和G组改成生理盐水。分别给药42天，禁食12h后摘眼球取血并解剖，进行各项生化指标的测定。TCH、TG和MDA均用相应的试剂盒并严格按照说明书测定。数据用SPSS软件进行，采用Independent-Sample T Test方法对各组数据进行均值、标准误计算以及显著性检验。
3降脂动物药效学结果不同提取物对小鼠血浆总胆固醇、甘油三酯和MDA含量的影响见表1。
给药42天后，高脂阳性对照组小鼠血浆的胆固醇比正常阴性对照组显著提高了96.7％，说明本实验条件下小鼠高胆固醇模型已建模成功。同时发现，给药组A、B、C、D和E的小鼠血浆胆固醇含量均显著低于高脂阳性对照组，以A组效果最好，胆固醇含量显著减少了34.3％，B、C、D和E组胆固醇含量也显著减少25％以上，说明不同纯度的荷叶黄酮和荷叶生物碱样品均有明显的降血脂、降胆固醇效果。
表1不同纯度的荷叶黄酮和荷叶生物碱对小鼠血浆总胆固醇、甘油三酯和丙二醛含量(X±SD)的影响n＝10
A、B、C、D和E给药组分别为荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物、树脂分离纯化后的荷叶提取物、荷叶黄酮和荷叶生物碱样品；F高脂阳性对照组；G正常阴性对照组。与高脂阳性对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
以上实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。
本发明构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，药效明显，而且所制的荷叶黄酮和荷叶生物碱，明显具有现代中药产品的“三高”、“三小”和“三便”的优点，能适应和满足现代中医临床用药需求，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策，具有较大的推广价值，可产生显著的经济效益和社会效益。
权利要求
1.一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法，包括荷叶粗提物的极性有机溶剂提取或水提取步骤，荷叶粗提物的膜分离除杂步骤，荷叶粗提物的大孔吸附树脂分离纯化步骤，其特征在于以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，未被聚酰胺吸附部分，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶生物碱产品。
2.根据权利要求1所述的采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法，其特征在于，进一步制取荷叶黄酮的方法是对上述步骤中吸附在聚酰胺上的荷叶黄酮进行回收，先用水洗去极性杂质和色素，再用极性有机溶剂水溶液洗脱荷叶黄酮，洗脱液经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶黄酮产品。
3.根据权利要求1所述的采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法，其特征在于所述的极性有机溶剂提取的荷叶粗提物的制备方法是以荷叶为原料，采用10～20倍荷叶干重(W/W)的30～65％的极性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。所述的水提取的荷叶粗提物的制备方法是以荷叶为原料，采用10～30倍荷叶干重(W/W)的水，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。所述的膜分离除杂方法是以极性有机溶剂提取或水提取的荷叶粗提物为原料，加水，将荷叶粗提物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下经膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。所述的大孔吸附树脂分离纯化方法是以荷叶粗提物或者膜分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用大孔吸附树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用4～8倍树脂量的30～60％的极性有机溶剂水溶液以1～3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成树脂分离纯化后的荷叶提取物。所述的聚酰胺分离纯化荷叶生物碱的制备方法是以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，未被聚酰胺吸附部分，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶生物碱产品。
4.根据权利要求2所述的采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法，其特征在于所述的极性有机溶剂提取的荷叶粗提物的制备方法是以荷叶为原料，采用10～20倍荷叶干重(W/W)的30～65％的极性有机溶剂水溶液，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。所述的水提取的荷叶粗提物的制备方法是以荷叶为原料，采用10～30倍荷叶干重(W/W)的水，于50～80℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶粗提物。所述的膜分离除杂方法是以极性有机溶剂提取或水提取的荷叶粗提物为原料，加水，将荷叶粗提物搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下经膜分离除杂，去除蛋白质和多糖以及其它大分子杂质后即得膜分离纯化后的荷叶提取物。所述的大孔吸附树脂分离纯化方法是以荷叶粗提物或者膜分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用大孔吸附树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质，再用4～8倍树脂量的30～60％的极性有机溶剂水溶液以1～3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱目标物质，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成树脂分离纯化后的荷叶提取物。所述的聚酰胺分离纯化荷叶黄酮的制备方法是以荷叶粗提物、膜分离纯化后的荷叶提取物或者树脂分离纯化后的荷叶提取物为原料，加适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷叶黄酮，先用不少于4倍树脂量的水(V/V)洗去极性杂质和色素，再用6～10倍树脂量的40～70％终浓度的极性有机溶剂水溶液以1～3倍树脂量/小时的流速(V/V)洗脱荷叶黄酮，滤液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成荷叶黄酮产品。
5.根据权利要求1、2、3或4所述的荷叶提取物的制备方法，其特征在于所述极性有机溶剂是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或丙酮中的一种或几种混合溶剂，优先选用甲醇或丙酮。
6.根据权利要求1、2、3或4所述的采用膜分离技术分离纯化的荷叶提取物的制备方法，其特征在于膜分离除杂过程选用10000截留分子量～0.22μm膜孔径的分离膜。
7.根据权利要求1、2、3或4所述的采用膜分离技术分离纯化的荷叶提取物的制备方法，其特征在于膜分离除杂过程的分离膜材料可以是无机陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一种或几种混合膜材料，优先选用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
8.根据权利要求1、2、3或4所述的采用大孔吸附树脂分离纯化的荷叶提取物的制备，其特征在于大孔吸附树脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一种或几种混合树脂，优先选用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818。
9.一种如权利要求1、2、3或4所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途。
10.根据权利要求9所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途，其特征在于所述的口服药剂为胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
11.根据权利要求5所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途。
12.根据权利要求11所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途，其特征在于所述的口服药剂为胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
13.根据权利要求6所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途。
14.根据权利要求13所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途，其特征在于所述的口服药剂为胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
15.根据权利要求7所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途。
16.根据权利要求15所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途，其特征在于所述的口服药剂为胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
17.根据权利要求8所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途。
18.根据权利要求17所述的荷叶提取物用于制备具有减肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服药剂的用途，其特征在于所述的口服药剂为胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
全文摘要
本发明提供一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途。包括聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法，其特征在于以荷叶粗提物、膜分离除杂的荷叶提取物或树脂分离纯化的荷叶提取物为原料，加水搅成悬浮液，聚酰胺吸附荷叶黄酮，未被吸附部分经减压回收溶剂真空浓缩成荷叶生物碱；吸附在聚酰胺上的荷叶黄酮用水洗去极性杂质和色素并用极性有机溶剂水溶液洗脱，洗脱液经减压回收溶剂真空浓缩成荷叶黄酮；该法所制荷叶粗提物、荷叶提取物、荷叶黄酮和荷叶生物碱有制备减肥、降脂、抑菌、抗病毒或抗氧化作用口服药剂的用途。本发明构思新颖，工艺简单，提取效率高，能满足现代中医临床用药需求，具有较大推广性。
文档编号A61K36/62GK1923829SQ200610069039
公开日2007年3月7日 申请日期2006年9月21日 优先权日2006年9月21日
发明者陈剑锋, 陈浩, 郭养浩 申请人:福州大学