专利名称：小花棘豆总生物碱和氮己环酮衍生物的制药用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及小花棘豆总生物碱和氮己环酮衍生物的制备方法，以及它们作为抗心率失常和抗高血压药物的应用。
小花棘豆为棘豆科植物Oxytropis Glabra Lam.，文献报道它含有毒的生物碱，能引起人和动物中毒[1]。到目前为止，尚未发现关于小花棘豆的总生物碱和氮己环酮衍生物有抗心率失常和抗高血压作用，也没有小花棘豆的总生物碱和氮己环酮衍生物作为药物应用的报道。
本发明的目的，是寻找小花棘豆具有抗心律失常和抗高血压的有效成分，追踪有效成分中具有抗心律失常和抗高血压的单体化合物；开发效成分和单体化合物及其衍生物的医药用途。
本发明首次发现小花棘豆总生物碱具有抗心律失常和抗高血压的作用；首次从该总生物碱中分离得到一个氮己环酮类单体化合物(化合物A)药理实验研究表明，总生物碱提和化合物A均具有非常明显的抗心律失常和抗高血压作用，其有效的剂量是口服3～300mg/kg，腹腔和静脉注射具有同样的药理作用，但剂量要低3～7倍。以总生物碱或化合物A作为主要成分，可制成新抗心律失常和抗高血压药物。
本发明将小花棘豆用有机溶剂提取得到总生物碱、将总生物碱用硅胶柱层析进行分离得到单体化合物A，药理研究表明，总生物碱和化合物A在动物体内外，均具有明显的抗心律失常和抗高血压作用，这些都是没有先例的。
本发明的单体化合物A经过现代光谱学(质谱、核磁、红外和紫外等)测定，其结构式如下图，名称3，3，5，5-四甲基-氮己环酮3，3，5，5-tetramethyl-nitrilohexacyclenone。
3，3，5，5-四甲基-氮己环酮3，3，5-tetramethyl-nitrilohexacyelenone本发明还需指出，化合物A的无机酸(如盐酸，硫酸，硝酸等)或有机酸(柠檬酸、酒石酸等)所成的盐，具有同样的抗心律失常和抗高血压的药用作用。由于总生物碱和化合物A经口服和静脉注射均有良好的抗心律失常和抗高血压的作用，因此本发明发现和认定总生物碱和化合物A可以与药物载体制成液体制剂(如口服液，注射剂，液鼻滴)，固体制剂(如片剂，胶囊剂，缓释剂)和外用制剂(如贴剂，喷雾剂等)。
本发明发现，总生物碱口服50～1000mg/kg，在麻醉大鼠和猫的模型上，具有非常明显的抗心律失常和抗高血压降压效果。化合物A静脉注射10～200mg/kg在麻醉的大鼠和猫的模型上，也具有非常明显的抗心律失常和抗高血压降压效果。维持的时间均大于8小时。
本发明发现，，化合物A在浓度为2×10-4-8×10-2mg/ml的范围内，均能缓慢地松弛豚鼠的平滑肌，至1～5分钟内完全松弛，其松弛的时间可以保持6～8小时(每间隔10分钟冲洗一次)。
本发明还发现，总生物碱口服50～1000mg/kg，化合物A口服10～200mg/kg对抗心律失常有非常显著得效果。
实施例实施例1小花棘豆总生物碱和化合物A的制备小花棘豆药材1KG粉碎过60目筛，筛过物用10倍量的PH＝2～3盐酸水提取，酸水用氢氧化钠碱化至PH＝8～9，减水用氯仿提取5次，合并氯仿液，减压蒸干得到总生物碱50g。总生物碱呈深褐色，不溶于水，易溶于氯仿、乙醇、丙酮等有机溶剂，对生物碱试剂(碘化铋钾，硅钨酸等)和硫酸苯酚试剂呈现阳性，经硅胶薄层层析(TLC)检查，在展开剂氯仿/甲醇/氨水(10/1/0.1)系统中，显示出5个斑点，其Rf值分别是0.13、0.24、0.47、0.55、0.81。
将总生物碱10g，经过硅胶柱层析(柱床φ50×100mm)，洗脱剂氯仿/甲醇/氨水(10/1/0.1)，用TLC进行定性检查合并。得到单体化合物A。
实施例2化合物A的结构鉴定化合物A为白色粉末，熔点43～58℃(分解)，沸点205℃，能溶于丙酮，甲醇，乙醇和水元素分析C(％)69.48，H(％)10.96，0(％)10.12；分子式C9H17NO。
MS(+FAB)m/z156.23，149.2，102.2，98.2，83.1，74.0。确证其分子量为155.23。
IR(KBr)cm-13319.13，2911.01，1728.98，1625.68，1726，26，1728.13，1726.23，2317.12。
UVλMcOHMAXnm264.3(ε13256)。
1H-NMR(DMSO，TMS，400MHz)δppm1.47[S，12H，(CH3)4，3’和5’位]；2.62[S，4H，(CH2)2，2和6位]；9.68(S，1H，NH，4位)。
13C-NMR(DMSO-D6，TMS，400MHz)δppm27.21[(CH3)4，3’和5’位]；49.78[(CH2)2，2和6位]；59.12[C，3和5位]；204.29[C＝0，1位]。
实施例3化合物A盐的制备本别取化合物A 5g(32.21mmol)，分别置于配备有回流冷凝管、搅拌器、内部温度计和滴液漏斗的300ml三口圆底烧瓶中，加入200ml丙酮，在搅拌、80℃的水浴中令其完全溶解，慢慢滴加等摩尔量的盐酸，硫酸，柠檬酸和酒石酸溶液，当滴加完全后，静止10分钟，回收丙酮溶液至干，残渣用200ml氯仿溶液，在过滤，分别放置5小时，过滤结晶，分别得到化合物A的盐酸盐，硫酸盐，柠檬酸盐和酒石酸盐的结晶。
实施例4总生物碱和化合物A对豚鼠回肠平滑基的作用。
精密称取总生物碱和化合物A1g左右，用蒸馏水溶解，制成约10mg/ml的样品溶液。取豚鼠回肠部，用预冷的台氏营养液冲洗肠管，剪成长5cm，用蛙心夹夹住，置灌流槽中，下端固定于槽的底部，上端蛙心夹用线连接二道生理记录仪的拉力换能器，记录回肠段的自动节律收缩，浴槽中的台氏营养液恒温35℃，回肠段挂上取时加1.5g的拉力，平衡20分钟后，每10min换一次台氏营养液。先记录一段回肠正常收缩的曲线，以异丙肾上腺素为阳性对照药，记录回肠的收缩曲线，结果见表1。
表1总生物碱和化合物A对豚鼠回肠平滑基的作用
实施例5总生物碱和化合物A对兔主动脉条的作用将新西兰白兔胸主动脉，放入与冷的LOCK氏液，洗净血污，制成主动脉条。取2cm的主动脉条，用蛙心夹夹住置于恒温的38℃灌流槽中，通入氧气，用线连接二道生理记录仪的拉力换能器，用生理记录仪记录血管条的收缩力，动脉条在灌流浴槽中平衡60分钟开始试验。其中，每间隔10分钟更换一次LOCK液，加入1.3×10-6mg/ml肾上腺素，待到收缩高度不在变时，冲洗4次，30分钟后，加入不同浓度的总生物碱和化合物A作用10分钟，然后再加入浓度为1.3×10-6mg/ml肾上腺素，，结果见表2。本试验表明，总生物碱和化合物A在一定浓度范围，可以是肾上腺素对血管的收缩力，明显地降低。
表2不同样品对兔主动脉条的作用
实施例6化合物A对大鼠的降血压作用化合物A对自发性高血压大鼠(SHR)，将血压换能器连接到计算机控制的三通道生理药理记录系统，分离大鼠的右股静脉并插管，供注射药物用。待血压平稳后(即血压收缩曲线平直后)开始静脉给药。其结果见
图1。表明化合物A在50mg/kg可以明显地降低高血压大鼠的收缩压和舒张压。
图1.化合物A(静脉给药50mg/kg)对猫的降压作用
实施例7总生物碱对猫的降血压作用取2.5～3.2kg的猫6只，经口服给总生物碱250mg/kg，测定收缩压和舒张压，正常猫不给药作为对照组，结果表明，它们均有非常显著抗高血压作用。见图2图2总生物碱口服(250mg/kg)对猫的降压作用
实施例7总生物碱和化合物A对大鼠心动过速的影响将动物分成5组，每组10只，分别为对照组、心得安组(10mg/kg)、病理组(三碘甲状腺原素0.5mg/kg)、总生物碱组(250mg/kg)和化合物A(50mg/kg)组，各每天皮下注射1次，给药1周。在麻醉的条件分别测定各组的心律，结果如表3。结果表明总生物碱和化合物A均能显著地降低高甲状腺心动过速模型的大鼠心律，并且与优于心得安组。
表3总生物碱和化合物A对大鼠心动过速的影响
**与病理组比较P＜0.01参考文献[1]陈绍淑，赵保玉，何生虎，等；中国兽医科技1994(34)12 77-79
权利要求
1.小花棘豆Oxytropis Glabra Lam.及其总生物碱和单体化合物3，3，5，5-四甲基-氮己环酮3，3，5，5-tetramethyl-nitrilohexacyclenone(化合物A)，作为抗心率失常和抗高血压防治药物的应用。 3，3，5，5-四甲基-氮己环酮3，3，5，5-tetramethyl nitrilohexacyc lenone
2.根据权力1要求的总生物碱的提取方法和抗心率失常和抗高血压防治药物的应用；根据权力1要求的化合物A作为抗心率失常和抗高血压防治药物的应用。
3.根据权利要求1和2所述的药物应用，其特征是抗心律失常和高血压的防治药物，经口服和注射均有抗心律失常和抗高血压的作用。
4.根据权利要求3所述及的含有药物载体的总生物碱和化合物A的药物组合物。其中包括总生物碱和化合物A与盐酸、硫酸、柠檬酸和酒石酸成盐的药物组合物。
5.根据权力1～4所述及的总生物碱和化合物A的药物组合物的制剂，包括液体制剂(注射剂，口服液，滴鼻液)、固体制剂(片剂，胶囊剂、颗粒剂和缓释剂等)，外用制剂(如贴剂，喷雾剂等)，气溶胶剂和涂布剂等，上述各种制剂的产品。
6.权利要求5所述的药物载体为构成固体药物的辅料包括崩解剂、稀释剂、黏合剂、润滑剂等和构成液体药物的辅料包括溶媒、pH调节剂、渗透压调节剂、抗氧剂、金属络合剂、防腐剂、矫味剂等。
全文摘要
本发明涉及小花棘豆Oxytropis Glabra Lam.总生物碱和氮己环酮衍生物的制备方法，以及它们作为抗心率失常和抗高血压药物的应用。本发明首次发现小花棘豆总生物碱具有抗心律失常和抗高血压的作用；首次从该总生物碱中分离得到一个氮己环酮类单体化合物A，经过现代光谱学(质谱、核磁、红外和紫外等)测定确定了它的结构，其分子式为C
文档编号A61P9/12GK1985821SQ20051013194
公开日2007年6月27日 申请日期2005年12月22日 优先权日2005年12月22日
发明者赵洪, 黄桂兰, 陶立杰 申请人:杨兴