专利名称：喹啉衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的喹啉衍生物作为CLK-1抑制剂。更具体地说，本发明涉及新的喹啉衍生物或其可药用盐或前体药物作为CLK-1抑制剂，包括其的药物组合物，以及用于预防和/或治疗从CLK-1抑制中受益的病症或其相关症状的方法。
背景技术：
clk-1和CLK-1的作用 clk-1基因编码21kDa线粒体蛋白，其在真核生物当中是保守的，鼠和人序列之间的序列同一性为85％，秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)的同源序列为50％。CLK-1参与泛醌生物合成的最后步骤之一并且负责脱甲氧泛醌(DMQ)的羟基化作用。其中CLK-1是非活性的突变株不合成可检测量的泛醌(Q)，而是积聚DMQ(Miyadera等人，2001)。
Q在细胞中具有许多功能。其牵涉内部线粒体膜、质膜和溶酶体膜的电子传递。其还是若干细胞酶(例如二氢乳清酸脱氢酶，其是核酸生物合成所必需的)和其它蛋白质和复合物如调节代谢性产热的线粒体解偶蛋白(UCP)和调节细胞程序死亡的线粒体渗透性转导孔(MPTP)的辅助因子。
DMQ是可以转运电子的醌类，尽管不如泛醌那么有效。其中已经剔除clk-1同系物(mclk-1)的鼠胚胎也积聚DMQ，并且不能存活。(Levavasseur等人，2001)，但是mclk-1的鼠杂合体显示了增加的生命期表型。在剔除小鼠中CLK-1的转基因表达援救了致命性表型，并允许泛醌的合成(Nakai等人，2004)。有趣地是，在生长迟缓的coq7(酵母clk-1)酵母突变株中秀丽隐杆线虫CLK-1的异源表达具有作用，并援救酵母生长迟缓表型(Ewbank等人，1997)。总之，这些观察表明CLK-1是在被研究有机体中的唯一的DMQ羟化酶，并且没有对于CLK-1活性的功能补偿机制。
在秀丽隐杆线虫中，CLK-1活性的降低也转变为生命期的增加。生命期是在蠕虫生理学中将各种变异整合的积累表型，并且其对环境信号和基因突变是敏感的。因而，延长生命期的条件通常被认为是有益的。例如，有利的修复对损伤的平衡会通过增加生命期而自身表现(Hekimi等人，2001)。
年龄相关病症 年龄相关疾病是指随着年龄的增加发病率和/或患病率增加的疾病。这些疾病包括例如癌，脑血管疾病(卒中)，神经变性疾病，肺炎，呼吸系统疾病，关节炎，心脏病，糖尿病，听力障碍，视力障碍和肾病。
CLK-1活性和年龄相关病症 CLK-1的抑制在小鼠和线虫中具有相似的延长生命期的效果。这强烈地显示了在CLK-1生物活性和生理学老化过程之间的因果联系。普遍接受的是生理学老化是许多疾病(所谓的年龄依赖性疾病)的危险因素。许多这些疾病是致命的并限制了生命期。已经表明当小鼠CLK1(mCLK1)蛋白水平在mclk1+/-杂合体中减少一半时(Levavasseur等人，2001)，其在三个不同的实验中增加了这些动物的平均生命期、中值生命期和最大生命期。每个实验在不同的遗传背景下进行(129SV/j，C57BL/6和129SV/j x Balb/c)(Liu等人，2005)。在这些背景下的动物已知死于各种年龄依赖性疾病，其模式在每个背景下是不同的(Blackwell等人，1995；Cosgrove等人，1978；Frith等人，1983；Smith等人，1973)。在所有的三个实验中，大部分野生型动物和突变动物在相对较短的时段内死亡，这是基因型(mclk1+/+或mclk1+/-)的典型表现(Liu等人，2005)。Mclk1减少在不同的遗传背景下起作用的事实以及最大生命期和中值生命期被增加的事实表明所有的或大部份的致命性原因必定被这一减少所部分地压制。实际上，当单一的生命期的原因受到基因操作如癌影响时，生命期仅仅最低限度地延长或更根本不延长(Matheu等人，2004；Miller，2005)。相比之下，诸如热量限制和生长激素信号转导降低的操作(其已知使生理学老化减慢)降低年龄依赖性疾病的发病率(Bartke，2005；Berrigan等人，2002；Hursting等人，2004)。另外，其中老化过程得以促进的动物显示了疾病患病率增加和疾病早发(Fenton等人，2004；Takeda等人，1997)。这些观察连同clk-1/mclk1对生命期的进化保守性(Liu等人，2005)表明降低mCLK1活性使生理学老化减慢，因此CLK-1的抑制可以延迟年龄依赖性疾病的发病和严重性。公知减慢生理学老化是降低各种疾病的发病率和严重性的最好的方法(Finkel，2005；Miller，2005)。
因此，通过使用可用作CLK-1抑制剂的化学品抑制CLK-1导致预防或降低年龄相关疾病。
喹啉衍生物 喹啉衍生物类型的化合物公开在CA 2.493.536A1、US2006/0074104A1和WO 2004/087160A1中，用于治疗、改善和/或预防神经病学病况，特别是与氧化应激有关的或被其促进的那些病况。考虑在内的神经病学病症包括任何导致认知损伤如早期或轻度认知损伤或记忆丧失的任何病况。
尽管上述的喹啉衍生物已经表明是有用的氧化应激调节剂，据称它们主要通过金属螯合作用发挥其疗效。目前为止没有现有技术文献表明相似的化合物可用于预防和/或治疗从CLK-1抑制中受益的年龄相关病症。
在这方面，本发明人已经开发了新的一族具有抑制CLK-1活性的化合物。这些化合物对年龄相关病症以及缺血再灌注损伤和炎症病症具有活性。
发明概述 因此，本发明的目的是提供新的式A的喹啉衍生物，其具有CLK-1抑制活性。
更具体地说，本发明涉及如下定义的式A的化合物，或其可药用盐或其前体药物；
其中X＝H，甲基或卤素，并且取代基R1和R2的定义如下所述 a)当R2为氢时，则R1为H或卤素，或者R1选自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羟基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基； 或者R1为-CH(R3)NR4R5，其中 ·R4＝H或C1-C4烷基； ·R5＝H或
并且R6选自C1-C6烷基，C5-C6芳基，苄基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和 ·R3选自H，甲基，苯基，苄基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-异丙基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(吗啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羟基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基； 或者R1为
且R7为-(CH2)n-R8，其中R8为任选地被1或2个甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者 b)当X和R1都表示氢原子时，则R2选自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羟基苯基乙酰胺基，4-羟基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苄基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基； 限制条件是式A的每个化合物不是附件1中所指出的化合物之一。
本发明的式A的化合物当包括至少一个不对称中心时，为其旋光异构体如对映体之一的形式，或者为包括例如外消旋物的其混合物形式。
本发明还涉及用于在细胞中抑制CLK-1活性的方法，该方法包括以下步骤a)提供其中需要抑制CLK-1活性的细胞，b)使该细胞接触如下定义的式(B)的化合物、或其可药用盐或前体药物；
其中X、R1和R2具有与前述相同的定义； 式(B)的化合物当包括至少一个不对称中心时，为其旋光异构体之一的形式或其混合物的形式；和 c)测定细胞中的CLK-1活性。
本发明还涉及用于在动物中预防和/或治疗从CLK-1抑制中受益的病症或其相关症状的方法，该方法包括以下步骤a)鉴定罹患从CLK-1抑制中受益的病症的动物；和 b)对所述动物给用式(B)的化合物、其可药用盐或前体药物。
本发明还涉及药物组合物，其包括本发明的式A化合物、其可药用盐或前体药物，以及至少一种可药用的载体。
本发明还涉及药物组合物，其包括药学有效量的如上定义的式A或式B的化合物、其可药用盐或前体药物，以及至少一种可药用的载体，以有效地降低和/或完全地或部分地抑制CLK-1活性。
图1显示用CLK-1抑制剂处理后在醌曲线中DMQ减少的HPLC曲线。小鼠巨噬细胞(RAW264.7)用a)非活性化合物或b)活性化合物135(1μM)处理24小时，然后进行细胞溶解并用己烷/乙醇提取醌。将样品在带有UV检测器的HPLC上用甲醇/乙醇梯度洗脱，从而测定泛醌(Q)及其前体脱甲氧泛醌(DMQ)的水平。
图2显示在用a)DMSO或b)10μM的化合物7处理的RAW264.7细胞中相对的醌峰值的HPLC曲线(Q泛醌，DMQ脱甲氧泛醌)。
图3显示在用a)1μM的或b)3μM的化合物23处理的RAW264.7细胞中相对的醌峰值的HPLC曲线(Q泛醌，DMQ脱甲氧泛醌)。
图4显示在用a)5μM的或b)10μM的化合物69处理的RAW264.7细胞中相对的醌峰值的HPLC曲线(Q泛醌，DMQ脱甲氧泛醌)。
图5显示在用a)5μM的或b)10μM的化合物47处理的RAW264.7细胞中相对的醌峰值的HPLC曲线(Q泛醌，DMQ脱甲氧泛醌)。
图6显示在用a)5μM的或b)10μM的化合物53处理的RAW264.7细胞中相对的醌峰值的HPLC曲线(Q泛醌，DMQ脱甲氧泛醌)。
图7CLK-1抑制剂的特异性。化合物7对a)小鼠CLK-1(JF496-mclk1供试系统)和b)细菌DMQ羟化酶UbiF(JF496-ubiF供试系统)的作用。表达a)小鼠CLK-1和b)细菌DMQ-羟化酶UbiF的JF496细菌用化合物7处理5小时。提取醌并使用HPLC进行分析。HPLC曲线表明CLK-1活性被化合物7所抑制，因为泛醌(Q)合成降低并伴随脱甲氧泛醌(DMQ)的增加。与此相比，UbiF活性不受影响，并且Q是被检测到的主要的醌物质。这表明化合物7具有特异性的CLK-1抑制活性。
图8CLK-1抑制剂的特异性。化合物52对a)小鼠CLK-1(JF496-mclk1供试系统)和b)细菌DMQ羟化酶UbiF(JF496-ubiF供试系统)的作用。表达a)小鼠CLK-1和b)细菌DMQ-羟化酶UbiF的JF496细菌用化合物52处理5小时。提取醌并使用HPLC进行分析。HPLC曲线表明CLK-1活性被化合物52所抑制，因为泛醌(Q)合成降低并伴随脱甲氧泛醌(DMQ)的增加。与此相比，UbiF活性不受影响，并且Q是被检测到的主要的醌物质。这表明化合物52具有特异性的CLK-特异抑制活性。
图9CLK-1抑制剂(7和135)的ROS降低作用。(A)表明在小鼠巨噬细胞中关于CLK-1抑制剂的醌曲线的表格；(B)与CLK-1抑制剂预温育的细胞用荧光标记物DCF处理，其当被细胞ROS氧化时产生绿色荧光。在细胞中使用H2O2诱导ROS，并且使用CLK-1抑制剂观察到的降低以相对于对照的百分数表示；和(C)使用从细胞核漏出的DNA的荧光尾部的COMET试验测量由ROS诱导的DNA损伤。再次使用H2O2诱导ROS，并且数据用具有尾部的细胞与对照相比较的百分数表示。表明了在CLK-1抑制剂存在的条件下显示彗星的细胞的减少(总细胞的％)。
图10在缺血-再灌注大鼠模型中化合物7或52对血清肌酸酐水平的作用。
图11在缺血-再灌注大鼠模型中化合物7或52对血液尿素氮(BUN)水平的作用。
图12在缺血-再灌注大鼠模型中化合物7或52对肌酸酐清除率的作用。
图13在缺血-再灌注大鼠模型中化合物7或52对尿蛋白浓度(g/L)的作用。
图14在用脂多糖(LPS)诱导的肺损伤的大鼠中化合物7对脂氧合酶(LPO)水平的作用。
图15在用LPS诱导肺损伤的大鼠中化合物7对蛋白质含量的作用。
图16在用LPS诱导肺损伤的大鼠中化合物7对总细胞水平和嗜中性粒细胞水平的作用。
图17在用LPS诱导肺损伤的大鼠中化合物7对TNF-α水平的作用。
图18在TBS级分中在hAPP751SL转基因小鼠中通过ELISA测定的用多种剂量的化合物138处理对可溶Aβ1-40的作用。
图19在TBS级分中在hAPP751SL转基因小鼠中通过ELISA测定的用各种剂量的化合物138处理对可溶Aβ1-42的作用。
图20在Triton X-100级分中在hAPP751SL转基因小鼠中通过ELISA测定的用各种剂量的化合物138处理对可溶Aβ1-40的作用。
图21在Triton X-100级分中在hAPP751SL转基因小鼠中通过ELISA测定的用各种剂量的化合物138处理对可溶Aβ1-42的作用。
图22在FA级分中在hAPP751SL转基因小鼠中通过ELISA测定的用多种剂量的化合物处理对结合型Aβ1-40的作用。
图23在FA级分中在hAPP751SL转基因小鼠中通过ELISA测定的用多种剂量的化合物处理对结合型Aβ1-42的作用。
发明详述 本发明获得了意想不到的发现，即，包括如下定义的式A的喹啉衍生物的新化合物类别，其表现出CLK-1抑制活性。
定义 本文使用的可药用盐意欲包括本发明化合物的任何盐，该盐适于接触人和低等动物的组织而无不适当的毒性、刺激性或变态反应并且与合理的风险/益处比相称。可药用盐是本领域公知的(PharmaceuticalSalts Properties，Selection，and Use，Stahl，P.Heinrich/Wermuth，CamilleG.(编辑)，2002.Monograph-ISBN 3-906390-26-8-Verlag HelveticaChimica Acta，Zurich)。可药用盐可在最后分离和纯化本发明化合物期间原地制备，或者单独地通过使本发明化合物的游离碱官能团与适当的酸反应制备或者通过使本发明化合物的游离酸官能团与适当的碱反应制备，包括但不限于可药用的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐。可药用的酸加成盐包括但不限于乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，柠檬酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，二葡糖酸盐，甘油磷酸盐，半磺酸盐，庚酸盐，己酸盐，富马酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，烟酸盐，2-萘磺酸盐，草酸盐，双羟萘酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸酯，酒石酸盐，硫氰酸盐，硝酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，酸式磷酸盐，谷氨酸，碳酸氢盐，对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。另外，包含碱性氮的基团可以被诸如以下物质季铵化烷基卤化物例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸酯；长链卤化物例如癸基、月桂基、十四烷基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；和芳基烷基卤化物例如苄基和苯基乙基的溴化物。可药用盐还包括但不限于基于碱金属或碱土金属的阳离子的盐，如铝、钙、锂、镁、钾、钠的盐等。
本文使用的前体药物是指这样的化合物，该化合物在体内给药时被代谢或以其它方式转化为母体化合物的生物学、药学或治疗学活性形式的化合物，例如通过在血液内水解。为了得到前体药物，将药学活性化合物进行修饰从而活性化合物将通过代谢过程再次被生成。前体药物可被设计用于改变药物的代谢稳定性或转运特征(包括改善生物利用度)，掩蔽副作用或毒性，改善药物的味道或改变药物的其它特征或性质。依靠体内药代动力学过程和药物代谢的知识，本领域技术人员当得知药学活性化合物时可以设计出该化合物的前体药物。
本发明还涵盖了通过式A或B的化合物的体内变形形成的代谢物。术语代谢物是指式A或B的化合物经由氧化、还原、水解或结合进行体内生物转化而形成的化合物。
本文使用的术语烷基是指饱和的脂族基，包括直链烷基、支链烷基和环烷基(脂环族)基团。
本文使用的术语芳基包括5和6元单环芳族基，其可包含0-4个杂原子(S、N、O)，例如为未被取代的或被取代的苯，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，噻唑，三唑，吡唑，吡啶，吡嗪，哒嗪和嘧啶等。
本文使用的术语卤素是指F，Cl，Br或I。
本文使用的术语旋光异构体是指所要求保护的化合物的任何异构形式，诸如但不限于对映体，非对映异构体，外消旋物或其混合物。
可药用的载体是指不干扰组合物的活性成分即式A化合物的生物活性的有效的并且对宿主或患者无毒性的载体介质。另外，该载体有利地是具有被治疗受试者的免疫系统所排斥的最小可能性的化合物。适当的载体是本领域技术人员的常识并且不再另外详述。
本文使用的术语治疗是指一种方法，通过该方法，从CLK-1抑制中受益的病症或其相关症状被缓解或被完全消除。例如，可以认为所述治疗可以例如通过以适当剂量给用在适当制剂形式中的本发明的化合物至具有疾病的高风险/或疾病早期的患者而减轻或完全消除疾病或其相关症状。
本文使用的术语预防是指一种方法，通过该方法，病症或其相关症状，包括但不限于年龄相关病症，被阻碍、延迟或预防。
本文使用的表述从CLK-抑制中受益的病症是指已知或预期从CLK-1抑制中受益的病症或其相关症状。更特别地，该表述是指当CLK-1被抑制时病症或其相关症状被减轻或消除。甚至更特别地，该表述是指但不限于炎症病症，由氧化应激和/或自由基诱导的损伤所引起或加重的病症，包括ROS介导的疾病如缺氧/富氧损伤和缺血/再灌注损伤。该表述还涵盖了年龄相关病症。
本文使用的表述年龄相关病症是指随着年龄的增加发病率和/或患病率增加的病症，包括但不限于心血管疾病，例如动脉粥样硬化，冠状动脉病和卒中；周围性血管疾病；代谢病症，诸如II型糖尿病，脂质异常血症和高甘油三酯血症；癌，诸如皮肤癌，乳头状瘤和年龄依赖性癌；缺血/再灌注损伤，诸如肾、心脏、脑缺血和放射造影诱导的肾病；炎症；神经变性病症和痴呆，诸如阿尔茨海默病，帕金森症，亨廷顿舞蹈病，记忆障碍和精神病；膀胱和肾病症，诸如肾炎，肾病，晚期肾病(ESRD)；糖尿病综合征，诸如神经病变，伤口愈合差和视网膜病；眼病，诸如年龄相关性黄斑变性，干眼病，青光眼，色素性视网膜炎和白内障；肺和呼吸系统病症，诸如慢性阻塞性肺病(COPD)和特发性肺纤维化(IPF)；肌与骨的病症，诸如炎性关节炎，痛风和骨质疏松症；以及皮肤病况，诸如皮肤癌，和皮肤老化如光老化。
本文使用的术语炎症是指由组织的损伤或破坏引起的局部保护性应答，其足以破坏、减弱或阻断有害物质和受损组织，特征在于由疼痛、发热、发红、肿胀和功能丧失的标准续发事件表示的急性形式，并在组织学上牵涉系列复杂事件，包括小动脉、微血管和小静脉扩张，渗透性和血流增加，包括血浆蛋白质在内的流体渗出，以及白细胞移行进入炎症性病灶。其特征还在于大量释放TNF-α。
本文使用的表述缺血/再灌注损伤是指组织或器官当失去血流而遭受的病况，最主要地由于营养和氧的不充分所导致。再灌注损伤是指当在通常超过约十分钟的缺血时段后恢复血流时遭受的组织损伤。缺血和再灌注可导致对经历该过程的组织造成严重的或致命的损伤。
本发明的喹啉衍生物是具有以下通式(A)结构的化合物，或其可药用盐或其前体药物
其中X＝H，甲基或卤素，并且取代基R1和R2的定义如下所述 a)当R2为氢时，则R1为H或卤素，或者R1选自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羟基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基； 或者R1为-CH(R3)NR4R5，其中 R4＝H或C1-C4烷基； R5＝H或
并且R6选自C1-C6烷基，C5-C6芳基，苄基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和 R3选自H，甲基，苯基，苄基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-异丙基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(吗啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羟基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基； 或者R1为
且R7为-(CH2)n-R8，其中R8为任选地被1或2个甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者 b)当X和R1都表示氢原子时，则R2选自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羟基苯基乙酰胺基，4-羟基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苄基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基； 限制条件是式A的每个化合物不是附件1中所指出的化合物之一。
包括至少一个不对称中心的本发明的式(A)的化合物为其对映体之一的形式或其混合物的形式。
更优选地，式(A)的化合物是这样的化合物，其中R4为H或甲基，R6选自甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基，苯基，苄基，二甲基氨基甲基，苯基乙基，环己基，二苯基甲基，吡啶-2-基和吡啶-3-基，其它取代基具有如上定义的相同含义。
根据另一个优选方案，式(A)的化合物选自以下 N-((3，4-二甲氧基苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺2， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)苯甲酰胺3， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-N-甲基乙酰胺8， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-2，2-二苯基乙酰胺11， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-2-苯基乙酰胺12， 7-(氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-醇13， N-(1-(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)-2-苯基乙基)乙酰胺14， N-((2-丁基-1H-咪唑-4-基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺15， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)乙酰胺16， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(喹啉-4-基)甲基)乙酰胺17， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(2-吗啉-4-基吡啶-3-基)甲基)-乙酰胺18， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(喹啉-3-基)甲基)乙酰胺19， 4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)甲基苯甲酸酯21， 3-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)甲基苯甲酸酯22， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-氰基苯基)甲基)乙酰胺23， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-吡啶-2-基苯基)甲基)乙酰胺24， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)甲基)乙酰胺25， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-羟基苯基)甲基)乙酰胺26， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3-羟基苯基)甲基)乙酰胺27， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)乙酰胺28， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-2-基)甲基)乙酰胺29， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-4-基)甲基)乙酰胺30， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-4-基)甲基)乙酰胺盐酸盐31， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺32， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺盐酸盐33， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(8-羟基喹啉-2-基)甲基)乙酰胺34， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(6-吗啉-4-基吡啶-3-基)甲基)-乙酰胺35， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(1H-吲哚-3-基)甲基)乙酰胺36， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(1H-吲哚-4-基)甲基)乙酰胺37， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(1H-吲哚-7-基)甲基)乙酰胺38， 4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)-N，N-二甲基-苯甲酰胺39， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-(吗啉-4-基羰基)苯基)甲基)-乙酰胺40， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)吡啶-2-甲酰胺41， 4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)-N-(3-甲氧基丙基)-苯甲酰胺44， 4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)-N-甲基苯甲酰胺45， N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-N，N-二甲基-甘氨酰胺46， N-(1-(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)乙基)乙酰胺47， N-((8-羟基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺48， N-(2-呋喃基甲基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺53， N-(2-噻吩基甲基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺54， N-(2-甲氧基苄基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺55， 5-氯-7-(3-羟基苯基)喹啉-8-醇57， 5-氯-7-(4-羟基苯基)喹啉-8-醇58， N-(2-(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)苯基)乙酰胺59， 5-氯-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉-8-醇61， 5-氯-7-吡啶-4-基喹啉-8-醇盐酸盐62， N-(3，4-二甲氧基苯基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺63， N-(3-甲氧基苯基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺64， N-(3-甲氧基苄基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺65， N-(3，4-二甲氧基苄基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺66， N-(2-甲氧基苯基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺67， N-(吡啶-3-基甲基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺68， N-(8-羟基喹啉-2-基)吡啶-2-基甲酰胺69， N-(8-羟基喹啉-2-基)-2-吡啶-2-基乙酰胺70， 2-(3-羟基苯基)-N-(8-羟基喹啉-2-基)乙酰胺71， 2-(4-羟基苯基)-N-(8-羟基喹啉-2-基)乙酰胺72， N-(8-羟基喹啉-2-基)-2-(2-噻吩基)乙酰胺73， 2-(((3-甲氧基苄基)氨基)甲基)喹啉-8-醇74， 2-(((3-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇75， 2-(((2-噻吩基甲基)氨基)甲基)喹啉-8-醇76， 2-(((2-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇77， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]乙酰胺78， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]乙酰胺79， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-异丙基苯基)甲基]乙酰胺80， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]丁酰胺81， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-异丙基苯基)甲基]丁酰胺82， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-甲基苯基)甲基]-3-苯基丙酰胺92， N-[(2-氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]-3-苯基丙酰胺93， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]-3-甲基丁酰胺94， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(苯基)甲基]-3-甲基丁酰胺110， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-甲氧基苯基)甲基]-3-苯基丙酰胺111， N-[(3，4-二甲氧基苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]-3-甲基丁酰胺112， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]-3-甲基丁酰胺113， N-[(4-氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]环己烷甲酰胺121， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]丙酰胺122， N-[(3，4-二甲氧基苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]-3-苯基丙酰胺124， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]戊酰胺125， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-异丙基苯基)甲基]戊酰胺126， N-[[4-(二乙基氨基)苯基](8-羟基喹啉-7-基)甲基]戊酰胺127， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-甲氧基苯基)甲基]环己烷甲酰胺128， N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]丁酰胺129， N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-甲基苯基)甲基]环己烷甲酰胺130，和 N-[(8-羟基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]环己烷甲酰胺131。
根据优选方案，本发明的式(A)的化合物的前体药物相当于其中在喹啉部分的8位上的羟基被以下基团之一取代的化合物
其中M选自Li、Na、Ca和K。
根据另一个优选方案，上面定义的二氢磷酸酯前体药物为其盐酸盐或二盐酸盐的形式。
本发明的优选的前体药物如下 ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯5， ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二钠6， ((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯136， ((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二钠137， ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯二盐酸盐138，和 ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯盐酸盐139。
如上所述，本发明的化合物可存在不对称中心或手性中心。本发明涵盖了式(A)的化合物的多种旋光异构体及其混合物。例如，本发明化合物的单独的对映体从市售的包含不对称中心或手性中心的起始材料合成制得或者通过制备对映体化合物的混合物然后通过本领域技术人员公知的拆分方法制得。这些拆分方法的例子为a)将对映体的外消旋混合物结合到手性助剂上，通过重结晶或色谱法分离所得的非对映异构体，并将旋光纯产物从助剂上分离出来或b)在手性色谱柱上直接分离光学对映体的混合物。
本发明还涉及用于在细胞中抑制CLK-1活性的方法，该方法包括以下步骤 a)提供其中需要抑制CLK-1活性的细胞， b)使该细胞接触式(B)的化合物
其中X＝H，甲基或卤素，并且取代基R1和R2如下定义 i)当R2为氢时，则R1为H或卤素，或者R1选自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羟基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基； 或者R1为-CH(R3)NR4R5，其中 ·R4＝H或C1-C4烷基； ·R5＝H或
并且R6选自C1-C6烷基，C5-C6芳基，苄基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和 ·R3选自H，甲基，苯基，苄基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-异丙基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(吗啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羟基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基； 或者R1为
且R7为(CH2)n-R8，其中R8为任选地被1或2个甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者 ii)当X和R1都表示氢原子时，则R2选自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羟基苯基乙酰胺基，4-羟基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苄基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基； 式(B)的化合物当包含至少一个不对称中心时，为其对映体之一的形式或其混合物的形式；和 c)测定细胞中的CLK-1活性。
有利地是，用于在细胞中抑制CLK-1活性的式(B)的化合物选自表1中所指出的化合物。
甚至更有利地是，用于在细胞中抑制CLK-1活性的式(B)的化合物选自以下 N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺7， 5-氯-7-碘喹啉-8-醇52， 5-氯-7-(2-羟基苯基)喹啉-8-醇56， 5-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇60，和 N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(2-呋喃基)甲基]乙酰胺135。
本发明还涉及用于在动物中预防和/或治疗从CLK-1抑制中受益的病症或其相关症状的方法，该方法包括以下步骤 a)鉴定罹患从CLK-1抑制中受益的病症的动物；和b)对所述动物给用如上定义的式(B)的化合物、其可药用盐或前体药物。
有利地是，用于在动物中预防和/或治疗从CLK-1抑制中受益的病症或其相关症状的式(B)的化合物、其盐或其前体药物或旋光异构体选自表1中所指出的化合物。
甚至更有利地是，用于在动物中预防和/或治疗从CLK-1抑制中受益的病症或其相关症状的式(B)的化合物、其盐或其前体药物选自 ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯5， ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二钠6， N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺7， N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(2-呋喃基)甲基]乙酰胺135， ((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯136， ((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二钠137， ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯二盐酸盐138，和 ((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯盐酸盐139。
根据优选方案，从CLK-1抑制中受益的病症为缺血/再灌注损伤，炎症或神经变性疾病或痴呆。
更优选地，但不限于，缺血/再灌注损伤是肾、心脏、心肌、肺、脑或脊髓的缺血/再灌注损伤。
根据优选方案，炎症是肺炎症，肝脏炎症或任何其它器官的炎症以及任何的其中该炎症被促进的临床适应症。
根据另一个实施方案，神经变性病症是阿尔茨海默病。
因为先前已经表明在小鼠中抑制CLK-1活性使生理学老化减慢(Liu等人，2005)，这证明了在动物中抑制CLK-1活性可以延迟年龄依赖性疾病的发病和严重性。
在这方面，本发明人现在公开了本发明的式(B)的化合物也可有效用于治疗或预防年龄相关病症或其相关症状。因此，更优选地，本发明涉及用于在动物中预防和/或治疗年龄相关病症或其相关症状的方法，该方法包括以下步骤a)鉴定罹患年龄相关病症的动物；和 b)对所述动物给用式(B)的化合物、其可药用盐或前体药物； 限制条件是所述的式(B)的化合物不是以下化合物之一、其可药用盐或前体药物 5-氯-7-碘喹啉-8-醇52， 5-氯-7-(2-羟基苯基)喹啉-8-醇56，或 5-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇60。
根据优选方案，以上所述的方法用于预防和/或治疗选自以下的年龄相关病症或其相关症状心血管疾病，诸如动脉粥样硬化，冠状动脉病和卒中；周围性血管疾病；代谢病症，诸如II型糖尿病，脂质异常血症和高甘油三酯血症；癌，诸如皮肤癌，乳头状瘤和年龄依赖性癌；缺血/再灌注损伤，诸如肾、心脏、脑缺血和放射造影诱导的肾病；炎症；神经变性病症和痴呆例如阿尔茨海默病，帕金森症，亨廷顿舞蹈病，记忆障碍和精神病；膀胱和肾病症，诸如肾炎，肾病，晚期肾病(ESRD)；糖尿病并发症，诸如神经病变，伤口愈合差和视网膜病；眼病，诸如相关黄斑变性，干眼病，青光眼，色素性视网膜炎和白内障；肺和呼吸系统病症，诸如慢性阻塞性肺病(COPD)和特发性肺纤维化(IPF)；肌与骨病症例如炎性关节炎，痛风和骨质疏松症；和皮肤病况，诸如美容学和皮肤病学病况，包括皮肤老化，如光老化和皮肤癌。
用本发明的式(B)化合物治疗的动物可以是人或任何市售的或国内价值的动物，包括但不限于牛、马、猪、豚鼠、仓鼠、羊、兔、鸡、狗、猫和禽类。更优选被治疗的动物是人。
本发明还涉及药物组合物，其包括如上定义的式(A)的化合物、其可药用盐或前体药物，或如上定义的前体药物5、6、136、137、138和139中的任一种，其与一种或多种无毒的可药用载体进行配制。
本发明人还表明本发明的式(A)或(B)的化合物具有CLK-1抑制活性。
因此，本发明还涉及药物组合物，其包括药学有效量的如上定义的式(A)或式(B)的化合物、其可药用盐或前体药物，以有效地降低和/或抑制CLK-1活性。
本发明还涉及药物组合物，其包括药学可接受量的前体药物5、6、136、137、138和139中的任一种以有效地降低和/或抑制CLK-1活性。
根据优选方案，本发明的化合物可以与其它的已知具有治疗年龄相关病症或其相关症状的活性的药物联合使用，诸如例如与用于治疗脂质异常血症的他汀类药物联合使用。
本发明的药物组合物可以被特别地配制成固体或液体形式用于经口给药，用于非肠道注射，用于直肠给药或局部给药。本发明的药物组合物可以通过经口、直肠、非肠道、池内、阴道内、腹膜内、局部(如粉剂、霜剂、膏剂或滴剂)、经颊、或作为口或鼻喷雾剂形式被给药至人和其它动物。这些组合物还可包含助剂，诸如防腐剂，润湿剂，乳化剂和分散剂。通过引入多种抗细菌药和抗真菌药例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等可确保预防微生物的作用。可通过引入延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和白明胶实现可注射药物形式的延长吸收。
在一些情况下，为了延长药物的作用，希望减慢药物从皮下和肌肉内注射的吸收。这可通过采用具有较差水溶性的结晶或无定形物质的液体悬浮液来实现。因此药物的吸收速率根据其溶出速度的不同而异，而溶出速度又根据晶体大小和晶形的不同而异。作为替代，非肠道给药的药物形式的延迟吸收可通过将药物溶解或悬浮在油媒介物中来实现。
用于经口给药的固体剂型包括胶囊，片剂，丸剂，粉剂和颗粒剂。在该固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的可药用赋形剂或载体诸如枸橼酸钠或磷酸二钙和/或填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇混合。
用于经口给药的液体剂型包括可药用的乳剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型可包含本领域通常使用的惰性的稀释剂，诸如例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸抑制，苄醇，丙二醇，甘油，四氢呋喃醇，聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯，及其混合物。
本发明的化合物还可以从磷脂或其他的脂类物质获得的脂质体形式进行给药。脂质体由分散在含水介质中的单片或多片状的水合液体结晶形成。可以使用任何无毒的、生理学可接受的和可代谢的能形成脂质体的液体。优选的脂质是磷脂和磷脂酰胆碱，二者都是天然的或人造的。
用于本发明化合物局部给药的剂型包括粉剂、喷雾剂、膏剂和吸入剂。活性化合物在无菌条件下与可药用的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂和可需要的发射剂混合。
本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可改变，从而获得对特定的患者、组合物和给药方式而言有效实现所需治疗应答的量的活性化合物。所选剂量水平将根据特定化合物的活性、给药途径、被治疗病况的严重性和被治疗患者的病况和早先病历的不同而异。然而，其处在本领域技术人员已知的范畴内，从低于实现所需疗效的水平的起始剂量的化合物开始并逐渐增加该剂量直到实现所需疗效。
本发明将根据以下实施例并参考附图进行容易地理解。这些实施例示例性说明本发明的广泛的适用性范围，并不意欲限制本发明的范围。可进行改变和变化而不脱离本发明的精神和范围。尽管可以使用与本文所述那些相似的或等价的方法和材料用于实践本发明，但是描述了优选的方法和材料。
实施例 实施例1CLK-1抑制剂的特异性 在真核类中通过CLK-1进行脱甲氧泛醌(DMQ)羟基化和在真细菌类中通过UbiF进行脱甲氧泛醌(DMQ)羟基化。在被修饰的JF496大肠埃希氏杆菌菌株中试验了CLK-1抑制剂分子，该菌株在ubiF基因中有突变并且缺乏DMQ羟基化活性。该菌株被补充有小鼠clk-1基因或大肠埃希氏杆菌ubiF基因。该补充是起作用的并且恢复了DMQ羟基化。因此，被援救的菌株能够合成泛醌(Q)而不是积聚DMQ。使用两种经过修饰的菌株评价了供试分子对Q合成抑制的特异性。
材料和方法 菌株和培养基 大肠埃希氏杆菌菌株JF496(ubiF-)用包含小鼠clk-1基因或大肠埃希氏杆菌ubiF基因的质粒转染。对于一般生长，每个菌株的无性繁殖系在37℃下在5ml补充有氨苄西林(50μg/ml)的LB中生长过夜。培养物以1/10被稀释并测量OD600。将培养物稀释到在M9-LB(0.5/0.5v/v)中OD600为0.03。该混合物油补充有(1mM MgSO4，20μM CaCl2，0.5μg/mL硫胺，0.12％酸水解酪素，40μg/mL D-L-蛋氨酸，100μg/mL L-天冬酰胺，痕量金属，0，5％的葡萄糖)的M9培养基和LB培养基组成。包含氨苄西林(50μg/mL)的培养基用于质粒选择。对于醌的HPLC分析，将JF496-ubiF和JF496-mclk-1菌株从过夜的预培养物稀释到M9-LB(0.5/0.5v/v)中达OD600为0.03。750μl体积的细菌被转移到15毫升试管中，将细菌培养物在37℃和振摇下温育5小时。
醌的提取 通过离心作用收获细胞，用蒸馏水洗涤并再次离心。颗粒在-80℃下冷冻过夜。然后将细胞解冻并再悬浮在1毫升磷酸钠缓冲液(0,1M，pH 7.0)中，加入50ng的Q6作为醌的提取对照。为了提取醌，加入1毫升乙醇并将细胞涡流30秒。随后加入1毫升己烷，然后将细胞涡流2分钟并进行离心处理。收集上面的相(己烷)，下面的相再次进行提取并进行离心处理。然后收集上面的相并将其加入到先前的提取物中。将上面的相冷冻干燥大约1小时，并将颗粒保持在-80℃下。将颗粒再悬浮在300μl的流动相中，然后进行HPLC分析。
HPLC方法 使用带有光电二极管阵列检测器和Beckman UltrasphereODSS(4.6mm×25cm)柱的Beckman System Gold HPLC分析样品。使用32Karat软件(Beckman)对数据进行分析。使用甲醇-乙醇(开始为70％甲醇-30％乙醇，6分钟后，为30％甲醇-70％乙醇)，以1毫升/分钟的流速进行流动相洗脱达20分钟来分离醌。在275纳米下检测脱甲氧泛醌(DMQ)和泛醌(Q)的峰。
关于药物特异性试验的结果和简短讨论 表示小鼠CLK-1和细菌DMQ-羟化酶UbiF的JF496细菌用化合物7处理(图1)和用化合物52处理(图2)。由这些处理得到的醌分布使用HPLC进行分析。似乎化合物7和52可以抑制CLK-1DMQ羟化酶活性，这得到DMQ前体的积聚的支持。与此相比，UbiF活性不受到任何化合物的攻击，因为DMQ不在被处理的细胞中积聚。这一差别效果表征了与UbiF相比对CLK-1作用的特异性，即使这两种酶传送相同的功能DMQ羟基化。在大肠埃希氏杆菌中观察到的对CLK-1的效果不是由于化合物的一些非特异性活性所导致，因为CLK-1和UbiF二者都在相同的细菌遗传背景下被表达。
实施例2测量CLK-1抑制 为了证实在细菌筛选中被确定为是阳性的化合物是CLK-1的真正抑制剂，本发明人采用基于HPLC的二次实验来测量哺乳动物细胞中的醌含量。CLK-1是脱甲氧醌(DMQ)羟化酶，其催化Q生物合成中的倒数第二步。CLK-1的抑制导致反应前体DMQ的积聚。该试验测量了Q及其前体DMQ的内源细胞水平。在供试的全部细胞中，DMQ的存在水平通常是微不足道的，因此对CLK-1的强烈抑制导致被处理细胞的HPLC醌曲线的深入改变。
材料和方法 将从细菌筛选中鉴定的化合物的新鲜的稀释物以10mM的浓度溶解在二甲基亚砜(DMSO)中过夜。化合物的稀释物(在DMSO中)被加入到RAW264.7细胞的孔中，该细胞是Abelson鼠白血病病毒转化的鼠巨噬细胞的细胞系统。在化合物处理的前一天，将细胞铺板(每孔1×105个细胞)在Dulbecco氏改性伊格尔培养基(补充有10％胎牛血清，1％青霉素/链霉素，100μM丙酮酸钠)，并置于湿润的CO2保温箱(5％CO2，37℃)中过夜。加入化合物后，将板在湿润的CO2(5％CO2，37℃)下温育24小时。
24小时后，从孔中吸出培养基；细胞用PBS洗涤，然后向每孔中加入500μl RIPA缓冲液(15分钟，室温)并温和地振摇。之后，将样品移入到1.5毫升微量离心管中。向每个管中加入500μl的HPLC级乙醇，然后加入500μl的HPLC级己烷，然后将离心管剧烈涡流1分钟，然后离心(3000×g，15分钟，室温)。离心后，每个管中可见两个明显的层。将上层小心地移入新的微量离心管中，用针状油孔盖盖住，然后进行冷冻干燥。当样品干燥后，向每个管中加入320μl的70％HPLC级甲醇30％乙醇(v/v)。然后将管剧烈涡流20秒，离心10秒(14000xg)，然后将样品转移到被盖住的HPLC小瓶中。然后对每个样品进行HPLC分析。通过使样品流过250mm C18 ODS柱，使用乙醇∶甲醇梯度，并使用光二极管矩阵检测器在275纳米下检测醌来进行分析。使用色谱的肉眼检查来确定多个剂量的每个感兴趣的化合物的活性。
表1显示了经过测定作为具有活性的CLK-1抑制剂的化合物列表。
在哺乳动物细胞中CLK-1抑制的结果和简短讨论 图3显示了从RAW 264.7小鼠巨噬细胞的样品的醌提取物中获得的典型的HPLC曲线。上图代表从未经处理的巨噬细胞中提取的醌，其中明显的主要物质是泛醌-9或Q。当用CLK-1抑制剂处理细胞时，观察到出现第二个奎宁峰，其表示Q前体的积聚。这一曲线表示用化合物135处理的细胞。因此，通过用肉眼清楚和简单地分析用假定的候选抑制剂处理的细胞的HPLC曲线可容易地识别CLK-1抑制剂。检测了多种人和鼠的细胞系，在它们之间除了内源泛醌水平不同之外没有主要差别。
这意味着可以检测细胞中Q损失的唯一想得到的方式是CLK-1的抑制。该二次试验因此极其有用并且在其迅速鉴定CLK-1抑制剂的能力方面非常强大。图4-8显示了用不同浓度的化合物7、23、69、47或53处理的鼠巨噬细胞的HPLC曲线。观察到增加化合物浓度对被处理细胞中的DMQ9和Qg的分布的效果。
实施例3测量CLK-1抑制的效果 CLK-1活性可通过调节Q的细胞含量来影响细胞ROS水平，Q通过电子传递链和ROS清除对ROS生成有贡献。因此，预期CLK-1的抑制将导致细胞ROS水平的改变。另外，细胞内作为ROS的靶标的大分子之一是DNA，导致DNA损伤。可预期DNA损伤也可由于CLK-1抑制而被降低。因此本发明人使用两个试验来测量活细胞中的这些因子，如下所示。
材料和方法 ROS试验 使用DCF-DA(2，7-二氯荧光素二乙酸酯)来评价细胞的ROS水平。亲脂性的DCF-DA被运输通过细胞膜到达细胞质，并通过细胞质酯酶被酶促转化为亲水性的2，7-二氯荧光素(DCFH)。细胞的ROS将DCFH氧化成DCF，其是发荧光的分子。为了评价CLK-1抑制对ROS生成的效果，首先，将接种(每孔1×105个)在96孔板中的鼠巨噬细胞(RAW264.7)用CLK-1抑制剂处理24小时。然后将细胞与20μM的DCF-DA在Hanks平衡盐液(HBSS)中在37℃下温育30分钟。然后使用荧光读板器(激发波长488纳米和发射波长520纳米)来监控得自细胞DCF的荧光。在供试孔中的蛋白质的量使用市售的BCA蛋白测试试剂盒进行测定。随后将细胞的ROS水平表示为得自3个重复实验的荧光/mg蛋白的平均DCF。
COMET试验 在存在/缺乏CLK-1抑制性化合物的条件下在12孔板中接种(每孔2.5×106个细胞)RAW264.7细胞。24小时后，细胞用1mM H2O2处理1小时，以诱导ROS介导的DNA损伤。然后将细胞在冰冷的PBS中洗涤两次，然后刮入575μl的冰冷的PBS中。将75μl的该混合物取出并加入到750μl的冰冷的PBS中。取出10μl小份并与90μl的熔融的低熔点琼脂糖混合。将75μl的该细胞-琼脂糖混合物用移液管移出到载玻片上，载玻片平放于4℃下并避光达15分钟。
之后，将载玻片浸入预先冷却的裂解液中并在4℃下放置1小时，避光。然后，取出载玻片并在除去过量的裂解液后，将其浸没在新制备的碱性溶液(pH 13)中。然后在室温下放置载玻片1小时，避光。
除去过量的碱性溶液，然后将载玻片在室温下浸没在1XTris-Borate/EDTA缓冲液(TBE)中达5分钟。再次避光，将载玻片置于充满1x TBE的电泳装置中并施加电压20分钟。20分钟后取出载玻片并避光浸没在70％乙醇中达5分钟，然后在37℃下空气干燥直到琼脂糖在载玻片上形成薄层。
在该37℃温育后，在暗处向每个干燥的琼脂糖碟形物中加入50μl的稀释的SYBR绿达10分钟，然后通过浸没在蒸馏水中而洗调染料。吸干过量的水，然后将载玻片在暗处再次进行空气干燥。当完全干燥后，在荧光显微镜下观察载玻片并检测显示细胞核踪迹的DNA尾部(彗星)的存在。数据通常用包含彗星的细胞的百分数表示，计数了10个视野。
CLK-1抑制剂对细胞ROS水平的效果的结果和简短讨论 在醌曲线，细胞ROS水平和DNA损伤方面显示显示原型CLK-1抑制剂即化合物7和135的三个图如图9所示。这些分子被发现降低巨噬细胞中H2O2对ROS的诱导，化合物7的效力更强(图B)。这些分子在巨噬细胞中对由H2O2诱导的DNA损伤具有相当的对抗效果(图C)，化合物7极其有效。这些数据强调了本发明人降低了ROS的细胞水平以及随后所产生的损伤。
实施例4在大鼠中CLK-1抑制剂可用于治疗肾的缺血-再灌注损伤。
以下研究评价了CLK-1抑制剂的给药在肾缺血模型中用于预防和/或减少再灌注损伤的实用性。
简要说明和实验方法 成年(9到11周大)雄性Sprague-Dawley大鼠被麻醉并通过中线剖腹术进行右侧肾切除术。通过阻塞左肾动脉和静脉达60分钟实现左肾动脉的暂时性缺血。在外科手术之前第三天开始每天一次腹膜内(Lp.)给用15个连续日对所有组进行治疗(假无缺血，接受盐水(0.9％NaCI)，首次用于实验缺血加媒介物，治疗缺血加化合物7或52)。治疗组接受2.5mg/kg/天Lp.(1mg/ml)的化合物7或20mg/kg/天(4mg/ml)的化合物52。在第0、3、7、11和14天通过测定血清中的肌酸酐和血脲氮(BUN)和尿中的肌酸酐和蛋白质含量评价肾功能。使用公式CrCI＝(uCr*uV)/(sCr x 1440x重量)计算肌酸酐清除率(ml/min/100g)。使用Coomassi方法测定尿样中在24小时内的尿蛋白浓度。通过光学显微术分析肾组织的组织病理改变(苏木紫和曙红；H&E着色载玻片)，根据Racusen(2)的建议观察血管上皮细胞坏死，血管扩张，蛋白质管形，和髓充血。使用单因素方差分析然后当指出时使用Turkey post-hoc试验对收集的数据进行统计分析。p＜0.05的结果被认为在统计上有显著意义。
缺血-再灌注损伤结果的简要说明 肾功能血清肌酸酐 初始结果显示每组中血清肌酸酐水平在第0天没有统计学差别。在用化合物7或处理的组中，在第3-14天的血清肌酸酐显著低于首次用于实验的组(图10)。
肾功能血脲氮(BUN) 初始结果显示每组在第0天BUN没有统计学差别。在用化合物7和52处理的组中，在第3、7、11和14天，BUN显著低于首次用于实验的组(图11)。
肾功能肌酐清除率 每组中，在第0天的肌酐清除率没有统计学差别。在用化合物7或化合物52处理的组中，在第3和7天肌酐清除率显著高于首次用于实验的组。在用化合物7或52处理的组中，在第11和14天，肌酐清除率与首次用于试验的组没有统计学差别，然而，在第14天公寓首次用于试验的组(图12)。
肾功能尿蛋白 每组中，在第0天，24小时尿蛋白没有统计学差别。在用化合物7或52处理的组中，在第3天，24小时尿蛋白显著低于首次用于实验的组。在用化合物7或52处理的组中，在第7和4天，24小时尿蛋白与首次用于实验的组相比没有统计学差别。在用化合物7和52处理的组中，在第11天，24小时尿蛋白显著低于首次用于实验的组(P＝0.033)(图13)。
CLK-1抑制剂对肾缺血-再灌注损伤的作用的简要讨论 肾功能数据(血清肌酸酐。血脲氮(BUN)。肌酐清除率和尿蛋白)表明再缺血事件前三天开始一天一次用化合物7(2.5mg/kg)和化合物52(20mg/kg)治疗并持续11个连续日，与用首次用于实验的对照组相比，在60分钟缺血后的一个肾大鼠模型以类似程度有效地预防肾缺血/再灌注损伤。在所有情况下，假组中的肾功能不受影响。在缺血/再灌注后第3和7天，对肾功能的一些参数的保护效果特别显著。
实施例5CLK-1抑制剂对脂多糖诱导的急性肺损伤的效果。
以下研究评价了CLK-1抑制剂在通过系统给药脂多糖(LPS)诱发的急性肺炎症的体内相关大鼠模型中的应用。
实验方法的简要说明 将重225到250克(n＝5到10只/组)的雄性Sprague-Dawley大鼠用脂多糖(LPS)处理以诱导肺损伤。用药物治疗的大鼠腹膜内(i.p.)接受化合物7或作为参考物的N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)。化合物在包含DMA/PG/Tween 80和水的媒介物中被i.p.给药。一天给用一次剂量，持续3个连续日，最后一次剂量给药在接触LPS前1小时。对照大鼠接受所示的药物媒介物。新制备的药物以5或10ml/kg或5ml/kg的体积给用。在i.p.LPS或盐水给药后的24小时，通过过量服用乌拉坦处死小鼠，并收集血液肺泡流体(BALF)用于总细胞计数和差别细胞计数，LPO和TNF-α测定和蛋白质含量蛋白质含量。
LPS诱导的肺损伤结果的简要说明和讨论 显示在LPS(6mg/kg，Lp.)之前三天一天一次Lp.给药化合物7(5mg/kg or 10mg/kg)对得自暴露于saline(对照)或LPS下的大鼠的总细胞计数和嗜中性粒细胞计数、蛋白质和TNF-α含量，BALF中LPO水平的效果如图14-17所示。N-乙酰基半胱氨酸(NAC；0.5g/kg，Lp.，LPS前三天一天一次)作为参考化合物被给药。简短地说，化合物7有效地降低BALF总细胞和嗜中性白细胞的增加到可与在用NAC治疗的大鼠中的观察水平相比的水平。这一化合当单独给用时不对BALF总细胞计数产生任何作用。类似地，化合物7有效地降低BALF中LPO的增加到可与在用NAC治疗的大鼠中的观察水平相比的水平。化合物7不降低BALF蛋白质的增加。化合物7(10mg/kg)有效用于显著降低BALFTNF-α水平。另外，组织学分析(未显示)显示了5mg/kg，Lp的化合物7有效用于降低间隙图形的强度(在被治疗的肺中肺泡壁厚度较薄)和炎性应答(炎性细胞的数目较少)。
总而言之，这些实验显示了化合物7在用LPS攻击的大鼠中降低BALF总细胞计数和嗜中性粒细胞计数、脂质氢过氧化物、和组织学肺病变(未显示)的应用。TNF-α水平降低也在i.p.剂量给药10mg/kg的化合物7时被观察到。
因为嗜中性粒细胞流入和LPO是受到CLK-1抑制剂保护的公知的炎症标记物，新型的喹啉衍生物用于这种炎症得以促进的临床适应症的应用代表了特别有用的实施方案。
实施例6用化合物138进行治疗对hAPP751SL转基因小鼠的脑β-淀粉样蛋白1-40和β-淀粉样蛋白1-42水平的作用。
动物在研究的起始日雄性的hAPPSL转基因(tg)小鼠(C57BL/6background)达5月龄(±2周)。转基因hAPP751SL动物构成性外部表达人APP751，在神经元组织特异性鼠-Thy-1促进剂的调控下具有London(V717I)和Swedish(K670M/N671L)突变。由于London突变，在整个脑内β-淀粉样蛋白1-42以高水平表达，但是主要发生在皮层和海马中。高水平的β-淀粉样蛋白1-42与从3个月开始的早得多的年龄下在CNS中的淀粉状蛋白斑块形成有关。在该小鼠模型中观察到的脑Aβ1-42水平的增强与较早的斑块形成有关。Aβ1-42促进淀粉状蛋白沉积并促进致密沉积物的形成；尽管Aβ1-40也许具有相反的效果。因此，影响这一致命性淀粉状蛋白肽的产生可以是有利的，特别是关于可能的对阿尔茨海默病患者的治疗方面。
治疗将化合物138配制在羧甲基纤维素(CMC)中并分别一天一次和一天两次(最高剂量)口服(p.o.)给药至动物，达60个连续日。治疗剂量分别为5、20、50和2×50mg/kg b.w./天，或使用媒介物(CMC)。
组织制备将转基因小鼠心脏内灌注生理(0.9％)盐水直到全血流尽；然后迅速地取出脑并将右半球浸渍固定在新鲜的4％多聚甲醛中1小时。然后，将半球转移到15％蔗糖溶液中用于cryprotection。第二天，将脑在干冰上冷冻并在-80℃下保存。将左脑半球在干冰上立刻快速冷冻以测定在4个脑匀浆级分中的β-淀粉样蛋白1-40和β-淀粉样蛋白1-42， 测量使用每只动物的一个脑半球(包括嗅球但是没有小脑)用来评价4个脑级分(其是TBS、Triton X-100和FA)中的脑Aβ1-40和Aβ1-42。Aβ1-40和Aβ1-42使用由瑞士的The GENETICS Company制造的高灵敏度ELISA试剂盒(TK40HSTM；TK42HSTM)。
结果 可溶性Aβ1-40和Aβ1-42的水平 TBS提取物级分保安脑组织的水溶性Aβ1-40和Aβ1-42级分，尽管在Triton x-100级分中，类似原纤维的更小聚合物被溶解。甲酸(FA)级分包含不溶性聚合Aβ。结果如图18-23所示。化合物138显著降低TBS(5和20mg/kg；图19)和Triton X-100级分(5、20和50mg/k；图21)中的Aβ1-42水平。在TBS级分(图18和19)中，但是不在Triton级分(图20和21)中，类似的但不显著的效果可以在测定Aβ1-40中被观察到，其中在两个化合物138的组中所有单个的数据点非常密集。
在FA级分中，所有剂量的平均Aβ1-42值都低于媒介物对照的值，从而在5和20mg/kg浓度下的效果是显著的(图23)。
因此，化合物138对APP加工和Aβ肽的生成具有显著效果，尽管该效果对Aβ1-42更显著。明显的Aβ1-42降低效果在多种脑级分中都被观察到，其达标了β-淀粉状蛋白的不同的聚合状态(单体，低聚物，原纤维)。
结论 在脑中，可观察到化合物138的明显的Aβ-淀粉状蛋白1-42降低效果。最惊人的和独特的结果是化合物138能透过脑级分(单体，低聚物，原纤维)以降低Aβ1-42水平。结果的重要性通过该模型被强调，Aβ1-42水平极高，甚至与其它的转基因模型诸如Tg2576小鼠相比。因此，即使在这一攻击性的模型中，化合物138降低整个脑级分中的Aβ1-42水平。尽管关于Aβ1-42的效果最清楚，化合物138还在某种程度上降低脑级分中的Aβ1-40。化合物138对毒性Aβ1-42肽的更显著的效果导致Aβ1-42/Aβ1-40的比降低，这具有治疗益处。
实施例7从顺序A合成化合物。
在顺序A中的化合物可以通过采用以下所述的策略制得。除了5-Cl之外的基团，如F或Me，在该化学中同样被允许。
实施例7.1N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺(化合物7){方法A_1}
5-氯-8-羟基喹啉(1.5g，8.7mmol)、3，4-二甲氧基苯甲醛(2.85g，17.4mmol)和乙酰胺(1.03g，17.4mmol)的密切混合物被密封在微波反应容器中，将容器置于微波反应器(Biotage Initiator)中并加热到180℃达1小时，将冷却的反应混合物与乙酸乙酯研磨，滤出所得的固体。该固体进一步与乙醇研磨，得到标题化合物，为白色固体(2.2g，65％)。MS387(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.28(bs，1H)，8.93-8.97(m，1H)，8.74(d，1H)，8.47(d，1H)，7.69-7.75(m，2H)，6.91-6.94(m，1H)，6.87(d，1H)，6.74(d，1H)，6.62(d，1H)，3.70(s，3H)，3.71(s，3H)，1.94(s，3H)。
实施例7.2N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(喹啉-3-基)甲基)乙酰胺(化合物19){方法A_1}
5-氯-8-羟基喹啉(0.25g，1.4mmol)、喹啉-3-甲醛(0.44g，2.8mmol)和乙酰胺(0.165g，2.8mmol)的密切混合物被密封在微波反应容器中，将该容器置于微波反应器(Biotage Initiator)中并加热到180℃达0.5小时，将冷却的反应混合物与乙酸乙酯研磨并滤出所得的固体，该固体进一步与乙醇研磨得到标题化合物，为白色固体(0.236g，44％)。MS 377(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.52(bs，1H)，8.96-9.01(m，2H)，8.85(s，1H)，8.51(d，1H)，8.11(s，1H)，7.95-8.01(dd，2H)，7.71-7.79(m，4H)，7.58(t，1H)，6.87(d，1H)，2.01(s，3H)。
实施例7.3N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺(化合物32){方法A_1}
5-氯-8-羟基喹啉(0.25g，1.4mmol)、3-吡啶甲醛(0.299g，2.8mmol)和乙酰胺(0.165g，2.8mmol)的密切混合物被密封在微波反应容器中，将该容器置于微波反应器(Biotage Initiator)中并加热到180℃达0.5小时，将冷却的反应混合物与乙酸乙酯研磨并滤出所得的固体，该固体进一步与乙醇研磨得到标题化合物，为白色固体(0.123g，27％)。MS 327(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.49(bs，1H)，8.97(s，1H)，8.90(d，1H)，8.47-8.51(m，3H)，7.72-7.77(m，2H)，7.64(d，1H)17.33-7.36(dd，1H)，6.70(d，1H)，1.97(s，3H)。
实施例8从序列B1合成化合物 在序列B1中的化合物可以采用以下描述的策略制得。其是对由序列A化合物所采用的合成的补充并且特别适于其中R1是烷基或芳基的化合物。除了5-C1之外的基团，如F或Me，在该化学中同样被允许。
方法B1_1中间体2-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮的合成
将2-(羟基甲基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(14.8g，83mmol)滴加到充分搅拌并被冷却到0℃的5-氯-8-羟基喹啉(15g，83mmol)在浓硫酸(150ml)中的溶液中，加料完毕后，将反应加热到100℃过夜，使混合物回温到室温，然后倾入到碎冰(1000ml)上，过滤所得的黄色沉淀物，用水洗涤并真空干燥过夜，该固体与乙醇和己烷研磨，得到灰白色固体(16.7g，59％)。MS 338(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.24(bs，1H)，8.95(d，1H)，8.48(d，1H)，7.41-7.92(m，4H)，7.72(dd，1H)，7.57(s，1H)，4.96(s，2H)。
方法B1_2中间体2-((8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)甲基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮的合成
将2-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(16.68g，49mmol)、溴苄(12.63g，73.5mmol)和碳酸钾(13.61g，98mmol)溶解/悬浮在二甲基甲酰胺(250ml)中并加热到60℃达1.5小时，将反应倾入到冷水(1000ml)中并过滤灰白色沉淀物，用水充分洗涤。该固体真空干燥，得到纯的化合物(20.8g，98％)。MS 446([M+H2O]+)；1HNMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.09(d，1H)，8.55(d，1H)，7.83-7.91(m，4H)，7.75(dd，1H)，7.64(s，1H)，7.55-7.61(m，2H)，7.347.44(m，3H)，5.53(s，2H)，4.96(s，2H)。
方法B1_3中间体1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)甲胺的合成
将一水合肼(2.28ml，46.6mmol)加入到2-((8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)甲基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(2.0g，4.7mmol)在甲醇(50ml)中的悬浮液中，将混合物回流1小时，然后真空除去溶剂，将残余物与热乙醇(～10ml)研磨并热过滤，浓缩乙醇得到浅棕色固体(1.1g，79％)，其无需任何进一步的纯化可用于随后的反应。MS 299(MH+)；1HNMR(CDCl3)，400MHz δ9.02(d，1H)，8.54(d，1H)，7.59(s，1H)，7.51(dd，1H)，7.41-7.44(m，2H)，7.31-7.39(m，3H)，5.50(s，2H)，3.87(s，2H)。
方法B1_4中间体1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)-N-(二苯基亚甲基)甲胺的合成
将1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)甲胺(407mg，1.36mmol)和二苯甲酮亚胺(247mg，1.36mmol)的混合物一起在60℃下加热，1小时后，将所得的固体与甲醇研磨并过滤，得到标题化合物，为浅褐色固体(480mg，76％)。MS 463(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.06(d，1H)，8.57(d，1H)，7.96(s，1H)，7.73(dd，1H)，7.54-7.62(m，5H)，7.39-7.48(m，3H)，7.20-7.31(m，7H)，5.29(s，2H)，4.61(s，2H)。
方法B1_5中间体1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)-N-(二苯基亚甲基)乙胺的合成
将碘甲烷(147mg，1.03mmol)和1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)-N-(二苯基亚甲基)甲胺(480mg，1.03mmol)溶解在无水四氢呋喃(0.5ml)中并冷却到0℃，向该混合物中滴加叔丁醇钾(128mg，1.16mmol)在四氢呋喃(0.13ml)中的溶液，将混合物回温到室温并在1小时后浓缩反应物。将残余物溶解在乙酸乙酯中并用水和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥有机提取物并真空浓缩，得到标题化合物，为白色固体(480mg，97％)。MS 477(M+)；1H NMR(CDCl3)，400MHzδ8.89(d，1H)，8.47(d，1H)，8.15(s，1H)，7.60(d，2H)，7.42(dd，1H)，7.15-7.38(m，10H)，7.03-7.09(m，3H)，5.20(d，1H)，5.18(q，1H)，4.81(d，1H)，1.23(d，3H))。
方法B1_6中间体1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)乙胺的合成
向1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)-N-(二苯基亚甲基)乙胺(550mg，1.15mmol)在甲醇(5ml)中的溶液中加入盐酸羟胺(144mg，2.07mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜，浓缩反应物并将剩余物用盐酸(5ml，5％水溶液)处理，并用乙酸乙酯提取以除去二苯甲酮，水层用氢氧化钠溶液(5M)碱化并用乙酸乙酯提取(3×5ml)，合并的有机提取物用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物(230mg，64％)。MS313(M+)；1H NMR(CDCl3)，400MHzδ9.00(d，1H)18.49(d，1H)，7.68(s，1H)，7.51(dd，1H)，7.31-7.44(m，5H)，5.50(q，2H)，4.59(q，1H)，1.46(bs，2H)，1.26(d，3H))。
方法B1_7中间体N-(1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)乙基)乙酰胺的合成
向用冰冷却的1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)乙胺(220mg，0.7mmol)和三乙胺(0.12ml，0.84mmol)在二氯甲烷(2.5ml)中的搅拌的溶液中滴加乙酰氯(66mg，0.84mmol)在二氯甲烷(0.5ml)中的溶液，反应物在室温下搅拌过夜，然后用二氯甲烷(5ml)稀释，混合物连续地用饱和碳酸钠溶液、水和盐水洗涤，并用无水硫酸镁干燥，真空除去溶剂，得到标题化合物(240mg，96％)。MS 354(M+)；1H NMR(CDCl3)，400MHzδ8.90(d，1H)，8.44(d，1H)，7.54(d，2H)，7.40-7.45(m，2H)，7.26-7.37(m，3H)，6.22(bd，1H)，5.61(d，1H)，5.46(d，1H)，5.36(q，1H)，1.77(s，3H)，1.36(d，3H)。
实施例8.1N-(1-(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)乙基)乙酰胺(化合物47)的合成
向冰冷却的N-(1-(8-(苄基氧基)-5-氯喹啉-7-基)乙基)乙酰胺(0.7g，1.97mmol)在二氯甲烷(20ml)中的搅拌的溶液中在氮气氛下加入三氯化硼(1M，在二氯甲烷中，4ml，4mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液。混合物然后在室温下搅拌3小时，然后将反应物小心地倾入到用冰冷却的水(100ml)中并用二氯甲烷提取，合并的有机提取物用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩，粗物质通过硅胶色谱法纯化(0-10％MeOH100-90％EtOAc)，得到标题化合物，为白色固体(0.45g，86％)。MS265(M+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.17(bs，1H)，8.95(d，1H)，8.47(d，1H)，8.39(d，1H)，7.70(dd，1H)，7.64(s，1H)，5.41(q，1H)，1.88(s，3H)，1.35(d，3H)。
实施例9从序列B2合成化合物 序列B2中的化合物可通过以下描述的任一方法制得
方法B2_1
方法B2_2 实施例9.1N-(8-羟基喹啉-2-基)吡啶-2-甲酰胺(化合物69){方法B2_2}
向处在0℃下的氯化甲基吡啶盐酸盐(89mg，0.5mmol)在四氢呋喃中的悬浮液中加入三乙胺(0.42ml，3mmol)和2-氨基-8-羟基喹啉(160mg，1.0mmol)，将混合物回温到室温并搅拌过夜，真空除去溶剂，粗物质通过HPLC纯化，得到所需产物(15mg，11％)。MS 265(M+)；1HNMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.79(bs，1H)，9.70(bs，1H)，8.81(d，1H)，8.53(d，1H)，8.43(d，1H)，8.28(d，1H)，8.16(t，1H)，7.75-7.80(m，1H)，7.36-7.41(m，2H)，7.08(d，1H)。
实施例9.2N-(8-羟基喹啉-2-基)-2-吡啶-2-基乙酰胺(化合物70){方法B2_1}
将4-吡啶基乙酸盐酸盐(87mg，0.5mmol)溶解在二甲基甲酰胺(4ml)中，向该溶液中加入羟基苯并三唑(68mg，0.5mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(96mg，0.5mmol)和三乙胺(0.28ml，2.0mmol)，将混合物在室温下搅拌30分钟，向反应中加入2-氨基-8-羟基喹啉(80mg，0.5mmol)并搅拌过夜，真空除去溶剂，将残余物溶解在二氯甲烷(2ml)中并用水洗涤，真空浓缩有机相，粗物质通过HPLC纯化，得到所需产物(11mg，8％)。MS 280(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ11.00(bs，1H)，9.48(bs，1H)，8.52(d，2H)，8.27(d，1H)，8.21(d，1H)，7.39(d，2H)，7.28-7.34(m，2H)，7.07(d，1H)，3.88(s，2H).(10mg，7％)。MS280(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHz δ10.92(bs，1H)，9.35-9.55(bs，1H)，8.53(d，1H)，8.17-8.29(m，2H)，7.78(t，1H)，7.44(d，1H)，7.26-7.35(m，3H)，7.08(d，1H)，4.04(bs，2H)。
实施例9.32-(3-羟基苯基)-N-(8-羟基喹啉-2-基)乙酰胺(化合物71){方法B2_1}
根据以上实施例9.2中所述方法B21类似地制备标题化合物。收率＝12mg(9％)。MS 295(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHz δ10.84(bs，1H)，9.43(bs，1H)，9.34(bs，1H)，8.21-8.28(dd，2H)，7.27-7.35(m，2H)，7.11(t，1H)，7.07(d，1H)，6.81(s，1H)，6.79(d，1H)，6.64(d，1H)，3.70(s，2H)。
实施例10从序列B3合成化合物 序列B3中的化合物可以采用如下描述的方案制得
方法B3_1中间体5-氯-7-碘-8-异丙氧基喹啉的合成
向5-氯-7-碘-8-羟基喹啉(18g，58.9mmol)在二甲基亚砜的悬浮液中滴加碳酸钾(32.57g，235.6mmol)和2-溴丙烷(10.87g，88.4mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜然后将其倾入到饱和氯化铵溶液中，该混合物用二氯甲烷提取(3×300ml)，合并的有机提取物先后地用氢氧化钠(2M)、水和盐水洗涤，并用无水硫酸镁干燥，真空除去溶剂并用乙酸乙酯∶己烷的混合物进行硅胶色谱洗脱，得到所需化合物(11.0g，55％)。MS347(M+)；1H NMR(CDCl3)，400MHzδ8.92(d，1H)，8.50(d，1H)，7.97(s，1H)，7.51(dd，1H)，5.38(sept，1H)，1.42(d，6H)。
方法B3_2中间体3-(5-氯-8-异丙氧基喹啉-7-基)苯酚的合成
将5-氯-7-碘-8-异丙氧基喹啉(500mg，1.7mmol)、(3-羟基苯基)硼酸(238mg，1.7mmol)和PdPCy3(18mg，0.028mmol)溶解/悬浮在乙腈/水(分别为4ml∶1ml)的混合物中，并加入碳酸钠溶液(2M，5ml)，然后将混合物在氮气下加热到80℃并同时搅拌1小时，TLC表明起始的磺化合物完全耗尽，真空除去溶剂，将残余物溶解/悬浮在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，有机相用无水硫酸镁干燥并真空浓缩，得到大体上纯的产物(TLC和NMR)(350mg，77％)。MS 314(MH+)；1H NMR(CDCl3)，400MHz δ9.01(bs，1H)，8.92(d，1H)，8.51(d，1H)，7.55(s，1H)，7.47(dd，1H)，7.35(t，1H)，7.32(s，1H)，6.97-7.02(m，2H)，4.36(sept，1H)，1.12(d，6H)。
实施例10.15-氯-7-(3-羟基苯基)喹啉-8-醇(化合物57){方法B3_3}
将3-(5-氯-8-异丙氧基喹啉-7-基)苯酚(475mg，1.52mmol)溶解在二氯甲烷(4ml)中并在氮气下冷却到-78℃，滴加三氯化硼二甲基硫醚的复合物在二氯甲烷(2M，3.04ml，6.08mmol)中的溶液，并将混合物在-78℃搅拌2小时，小心地加入甲醇(20ml)并将反应物回温到室温，真空除去溶剂并加入另外一份甲醇(20ml)，再次真空浓缩，该过程再重复进行两次以得到粗产物，其通过HPLC纯化得到标题化合物(315mg，76％)。MS 272(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.5-10.5(vbs，1H)，9.02(d，1H)，8.56(d，1H)，7.78(dd，1H)，7.72(s，1H)，7.29(t，1H)，7.17(bs，1H)，7.11(d，1H)，6.80(d，1H)。
方法B3_2中间体5-氯-8-异丙氧基-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉的合成
根据上述方法B3_2相似地制备标题化合物。MS 329(MH+)；1HNMR(CDCl3)，400MHzδ8.96(d，1H)，8.54(d，1H)，8.21(d，1H)，7.77(d，1H)，7.63(s，1H)，7.48-7.53(dd，1H)，6.99-7.02(dd，1H)，4.57(sept，1H)，3.97(s，3H)，1.06(d，6H)。
实施例10.25-氯-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉-8-醇(化合物61.){方法B3_3}
根据上述实施例10.1中的方法B3_3从5-氯-8-异丙氧基-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉相似地制备标题化合物。MS 288(MH+)；1HNMR(DMSO-d6)，400MHzδ10.15(bs，1H)，9.00(d，1H)，8.54(d，1H)，8.23(d，1H)，7.76-7.81(m，2H)，7.64(s，1H)，7.12(dd，1H)，3.86(s，3H)。
方法B3_2中间体4-(5-氯-8-异丙氧基喹啉-7-基)-N，N-二甲基苯胺的合成
根据上述方法B3_2相似地制备标题化合物。MS 341(MH+)；1HNMR(CDCl3)，400MHzδ8.95(d，1H)，8.49(d，1H)，7.69(s，1H)，7.63(d，2H)，7.43-7.46(dd，1H)，6.80(d，2H)，4.51(sept，1H)，3.02(s，6H)，1.11(d，6H)。
实施例10.35-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇(化合物60){方法B3_3}
根据上述实施例10.1中的方法B3_3从4-(5-氯-8-异丙氧基喹啉-7-基)-N，N-二甲基苯胺相似地制备标题化合物。MS 300(MH+)；1HNMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.02(d，1H)，8.57(d，1H)，7.77-7.86(m，4H)，7.55-7.68(bs，2H)，3.13(s，6H)。
实施例11从序列B4合成化合物 序列B4中的化合物可以采用如下描述的方案制得
方法B4_1 实施例11.12-(((2-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇(化合物77){方法B4_1}
向8-羟基喹啉-2-甲醛(87mg，0.5mmol)在1，2-二氯乙烷(2ml)的溶液中加入2-甲氧基苯胺(62mg，0.5mmol)，并将混合物搅拌30分钟，然后加入三乙氧基硼氢化钠(95mg，45mmol)，然后将反应物在室温下搅拌过夜，然后真空蒸干，将残余物溶解在二氯甲烷中并用水洗涤，水相用二氯甲烷反提取，合并的有机提取物经过干燥和真空浓缩，得到粗产物，其通过HPLC纯化(74mg，53％)。MS 281(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.51(bs，1H)，8.22(d，1H)，7.52(d，1H)，7.32-7.43(q，2H)，7.09(d，1H)，6.83(d，1H)，6.67(t，1H)，6.48-6.56(dd，2H)，5.96(t，1H)，4.59(d，2H)，3.84(s，3H)。
实施例11.22-(((3-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇(化合物75){方法B4_1}
根据上述实施例11.1中的方法B41相似地制备标题化合物。收率＝71mg(51％)。MS 281(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)，400MHzδ9.74(bs，1H)，8.27(d，1H)，7.53(d，1H)，7.36-7.45(q，2H)，7.11(d，1H)，7.08(t，1H)，6.70(t，1H)，6.36(d，1H)，6.32(s，1H)，6.16(d，1H)，4.54(d，2H)，3.69(s，3H)。
实施例12磷酸酯前体药物的合成 磷酸酯前体药物(化合物5) 本节中讨论的方案和规程可同样被应用于该序列中的其他的化合物。
合成路线
a)NaHCO3，n-Bu4NHSO4，H2O-CH2Cl2，0℃～RT.； b)K2CO3，DMF，25℃； c)1，4-环己二烯，10％Pd/C，EtOH， 苄基氯甲基磷酸酯A的合成
将磷酸二苄酯(2.64g，9.48mmol)、碳酸氢钠(3.18mL，11.97mmol)和四正丁基硫酸氢铵(3.2g，9.48mmol)溶解在水(80ml)中，加入二氯甲烷(DCM，90mL)，将混合物在0℃剧烈搅拌10分钟，然后加入在DCM(15mL)中的氯代硫酸氯甲酯(1.17mL，11.37mmol)同时在室温下连续地剧烈搅拌过夜，分离有机层，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，将残余物通过使用乙酸乙酯/己烷(1∶1)作为洗脱液的闪硅胶柱色谱纯化，得到1.39g(44.8％)的纯物质。MS 327(MH+)；H NMR(CDCl3)，400MHz δ5.09(d，2H，J＝8Hz)，5.62(d，2H，J＝16Hz)，7.41-7.28(m，10Hz)。
前体药物衍生物的合成 化合物5的合成
规程将化合物7(0.5g，1.29mmol)、碳酸钾固体(0.36g，2.58mmol)悬浮在无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF，5mL)中，然后加入溶解在DMF(2mL)中的苄基氯甲基磷酸酯(A，0.42g，1.29mmol)，并在氮气氛下在0℃搅拌，将反应混合物在室温下在氮气氛下搅拌16小时，将反应混合物倾入到水(50mL)中，用EtOAc提取(3×25mL)，合并的提取物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸干。粗残余物的LC-MS小时油状残余物在254nm下是97％纯的。因此此时不用另外进行纯化，该油状残余物可用在后面步骤中，MS 677(MH+)和同位素模式是符合的；1HNMR(DMSO)，400MHzδ1.99(s，3H)，3.64(s，3H)，3.68(s，3H)，4.72(d，1H，J＝4Hz)，4.74(d，1H，J＝3.5Hz)，4.89(d，2H1J＝7.8Hz)，5.96-6.05(m，2H)，6.47(d，1H，J＝8.08Hz)，6.58(d，1H，J＝8.33Hz)，6.64(dd，1H，J＝8.58&2.02Hz)，6.80(d，1H，J＝2.02Hz)，7.10-7.23(m，10H)，7.43(dd，1H，J＝8.58&8.58Hz)，7.54(s，1H)，7.55(d，1H，J＝8.33Hz)，8.45(dd，1H，J＝6.82&1.76Hz)，8.80(dd，1H1J＝4.04&1.76Hz)。
化合物5的合成
规程在氮气氛下向10％Pd/C在EtOH中的悬浮液中滴加B在EtOH(3mL)中的溶液，然后滴加环己二烯(0.25mL；10eq，2.58mmol)，将反应混合物在室温下搅拌12小时，在硅藻土上滤出催化剂，并将滤液蒸发几乎至干(蒸发后仍保留～10％的EtOH)，然后将粗残余物与无水乙醚研磨，滤出沉淀的固体，并用乙醚漂洗，得到0.065g(60％)的纯物质。MS 497(MH+)和同位素模式是符合的；1H NMR(DMSO)，400MHzδ1.52(s，3H)，3.3(s，3H)，3.49(s，3H)，5.63(m，2H)，6.40(d，1H，J＝9.8Hz)，6.61(m，2H)，6.88(s，1H)，7.46(m，2H)，8.29(d，1H，J＝8.58Hz)，8.74(d，1H，J＝3.2Hz)，8.83(d，1H，7.7Hz)。
磷酸酯前体药物(化合物138) 步骤1P(OBut)2(＝O)(OCH2Cl)I的合成 根据以下路线合成I
步骤2138的合成 I(8.8g)与化合物7(如实施例7.1中合成)在K2CO3存在的条件下在二甲基甲酰胺(DMF)中反应，形成((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二叔丁基磷酸酯II(9.6g，HPLC收率为96％)，然后II(5.0g)与HCl在EtOAc/Et2O的混合物中反应，形成138，收率85％。
表1
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权利要求
1.式(A)的化合物、其可药用盐或前体药物，
其中X＝H，甲基或卤素，并且取代基R1和R2的定义如下所述
a)当R2为氢时，则R1为H或卤素，或者R1选自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羟基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基；
或者R1为-CH(R3)NR4R5，其中
■R4＝H或C1-C4烷基；
■R5＝H或
并且R6选自C1-C6烷基，C5-C6芳基，苄基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和
■R3选自H，甲基，苯基，苄基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-异丙基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(吗啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羟基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基；
或者R1为
且R7为-(CH2)n-R8，其中R8为任选地被1或2个甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者
b)当X和R1都表示氢原子时，则R2选自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羟基苯基乙酰胺基，4-羟基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苄基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基；
限制条件是所述式(A)的化合物不是附件1中所指出的化合物之一；
所述式(A)的化合物当包括至少一个不对称中心时，为其旋光异构体之一的形式或其混合物的形式。
2.权利要求1的化合物，其中R4为H或甲基，且R6选自甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基，苯基，苄基，二甲基氨基甲基，苯基乙基，环己基，二苯基甲基，吡啶-2-基和吡啶-3-基。
3.权利要求2的化合物，选自以下
N-((3，4-二甲氧基苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺2，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)苯甲酰胺3，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-N-甲基乙酰胺8，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-2，2-二苯基乙酰胺11，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-2-苯基乙酰胺12，
7-(氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-醇13，
N-(1-(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)-2-苯基乙基)乙酰胺14，
N-((2-丁基-1H-咪唑-4-基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺15，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)乙酰胺16，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(喹啉-4-基)甲基)乙酰胺17，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(2-吗啉-4-基吡啶-3-基)甲基)-乙酰胺18，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(喹啉-3-基)甲基)乙酰胺19，
4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)甲基苯甲酸酯21，
3-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)甲基苯甲酸酯22，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-氰基苯基)甲基)乙酰胺23，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-吡啶-2-基苯基)甲基)乙酰胺24，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)甲基)乙酰胺25，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-羟基苯基)甲基)乙酰胺26，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3-羟基苯基)甲基)乙酰胺27，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)乙酰胺28，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-2-基)甲基)乙酰胺29，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-4-基)甲基)乙酰胺30，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-4-基)甲基)乙酰胺盐酸盐31，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺32，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(吡啶-3-基)甲基)乙酰胺盐酸盐33，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(8-羟基喹啉-2-基)甲基)乙酰胺34，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(6-吗啉-4-基吡啶-3-基)甲基)-乙酰胺35，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(1H-吲哚-3-基)甲基)乙酰胺36，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(1H-吲哚-4-基)甲基)乙酰胺37，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(1H-吲哚-7-基)甲基)乙酰胺38，
4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)-N，N-二甲基-苯甲酰胺39，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(4-(吗啉-4-基羰基)苯基)甲基)-乙酰胺40，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)吡啶-2-甲酰胺41，
4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)-N-(3-甲氧基丙基)-苯甲酰胺44，
4-((乙酰基氨基)(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)甲基)-N-甲基苯甲酰胺45，
N-((5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-N，N-二甲基-甘氨酰胺46，
N-(1-(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)乙基)乙酰胺47，
N-((8-羟基喹啉-7-基)甲基)乙酰胺48，
N-(2-呋喃基甲基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺53，
N-(2-噻吩基甲基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺54，
N-(2-甲氧基苄基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺55，
5-氯-7-(3-羟基苯基)喹啉-8-醇57，
5-氯-7-(4-羟基苯基)喹啉-8-醇58，
N-(2-(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)苯基)乙酰胺59，
5-氯-7-(2-甲氧基吡啶-3-基)喹啉-8-醇61，
5-氯-7-吡啶-4-基喹啉-8-醇盐酸盐62，
N-(3，4-二甲氧基苯基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺63，
N-(3-甲氧基苯基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺64，
N-(3-甲氧基苄基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺65，
N-(3，4-二甲氧基苄基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺66，
N-(2-甲氧基苯基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺67，
N-(吡啶-3-基甲基)-8-羟基喹啉-7-基甲酰胺68，
N-(8-羟基喹啉-2-基)吡啶-2-基甲酰胺69，
N-(8-羟基喹啉-2-基)-2-吡啶-2-基乙酰胺70，
2-(3-羟基苯基)-N-(8-羟基喹啉-2-基)乙酰胺71，
2-(4-羟基苯基)-N-(8-羟基喹啉-2-基)乙酰胺72，
N-(8-羟基喹啉-2-基)-2-(2-噻吩基)乙酰胺73，
2-(((3-甲氧基苄基)氨基)甲基)喹啉-8-醇74，
2-(((3-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇75，
2-(((2-噻吩基甲基)氨基)甲基)喹啉-8-醇76，
2-(((2-甲氧基苯基)氨基)甲基)喹啉-8-醇77，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]乙酰胺78，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]乙酰胺79，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-异丙基苯基)甲基]乙酰胺80，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]丁酰胺81，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-异丙基苯基)甲基]丁酰胺82，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-甲基苯基)甲基]-3-苯基丙酰胺92，
N-[(2-氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]-3-苯基丙酰胺93，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]-3-甲基丁酰胺94，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(苯基)甲基]-3-甲基丁酰胺110，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-甲氧基苯基)甲基]-3-苯基丙酰胺111，
N-[(3，4-二甲氧基苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]-3-甲基丁酰胺112，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]-3-甲基丁酰胺113，
N-[(4-氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]环己烷甲酰胺121，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]丙酰胺122，
N-[(3，4-二甲氧基苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]-3-苯基丙酰胺124，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]戊酰胺125，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-异丙基苯基)甲基]戊酰胺126，
N-[[4-(二乙基氨基)苯基](8-羟基喹啉-7-基)甲基]戊酰胺127，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-甲氧基苯基)甲基]环己烷甲酰胺128，
N-[(2，4-二氯苯基)(8-羟基喹啉-7-基)甲基]丁酰胺129，
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(4-甲基苯基)甲基]环己烷甲酰胺130，和
N-[(8-羟基喹啉-7-基)(2-噻吩基)甲基]环己烷甲酰胺131。
4.选自以下的前体药物
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯5，
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二钠6，
((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯136，
((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二钠137，
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯二盐酸盐138，和
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯盐酸盐139。
5.用于在细胞中抑制CLK-1活性的方法，该方法包括以下步骤
a)提供其中需要抑制CLK-1活性的细胞，
b)使该细胞接触式(B)的化合物
其中X＝H，甲基或卤素，并且取代基R1和R2如下定义
i)当R2为氢时，则R1为H或卤素，或者R1选自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羟基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基；
或者R1为-CH(R3)NR4R5，其中
■R4＝H或C1-C4烷基；
■R5＝H或
并且R6选自C1-C6烷基，C5-C6芳基，苄基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和
■R3选自H，甲基，苯基，苄基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-异丙基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(吗啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羟基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基；
或者R1为
且R7为(CH2)n-R8，其中R8为任选地被1或2个甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者
ii)当X和R1都表示氢原子时，则R2选自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羟基苯基乙酰胺基，4-羟基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苄基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基；
式(B)的化合物当包含至少一个不对称中心时，为其对映体之一的形式或其混合物的形式；和
c)测定细胞中的CLK-1活性。
6.权利要求5的方法，其中所述式(B)的化合物选自表1中所指出的化合物。
7.权利要求6的方法，其中所述式(B)的化合物选自
N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺7
5-氯-7-碘喹啉-8-醇52，
5-氯-7-(2-羟基苯基)喹啉-8-醇56，
5-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇60，和
N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(2-呋喃基)甲基]乙酰胺135。
8.用于在动物中预防和/或治疗从CLK-1抑制中受益的病症或其相关症状的方法，该方法包括以下步骤
a)鉴定罹患从CLK-1抑制中受益的病症的动物；和
b)对所述动物给用式(B)的化合物、其可药用盐或前体药物，
其中X＝H，甲基或卤素，并且取代基R1和R2如下定义
i)当R2为氢时，则R1为H或卤素，或者R1选自氨基(3，4-二甲氧基苯基)甲基，2-羟基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-二甲基氨基苯基，吡啶-4-基，2-甲氧基吡啶-3-基和2-乙酰胺基苯基；
或者R1为-CH(R3)NR4R5，其中
■R4＝H或C1-C4烷基；
■R5＝H或
并且R6选自C1-C6烷基，C5-C6芳基，苄基，二甲基氨基甲基，苯基乙基和二苯基甲基；和
■R3选自H，甲基，苯基，苄基，2-氯苯基，2-甲氧基苯基，4-氯苯基，4-甲基苯基，4-异丙基苯基，3-羟基苯基，4-羟基苯基，4-甲氧基苯基，4-氰基苯基，4-二甲基氨基-苯基，4-二乙基氨基-苯基，2，4-二氯苯基，3，4-二甲氧基苯基，4-甲氧基羰基苯基，3-甲氧基羰基苯基，N-甲基苯甲酰胺基，N-(3-甲氧基丙基)苯甲酰胺基，N，N-二甲基苯甲酰胺基，4-(吗啉-4-基羰基)苯基，4-(吡啶-2-基)苯基，4-(1H-吡唑-1-基)苯基，吡啶-2-基，吡啶-3-基，吡啶-4-基，6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-(吗啉-4-基)吡啶-3-基，2-甲氧基吡啶-3-基，4-甲氧基吡啶-3-基，2-噻吩基，2-丁基-1H-咪唑-4-基，喹啉-3-基，喹啉-4-基，8-羟基喹啉-2-基，1H-吲哚-3-基，1H-吲哚-4-基和1H-吲哚-7-基；
或者R1为
且R7为(CH2)n-R8，其中R8为任选地被1或2个甲氧基取代的C5-C6芳基，且n＝0或1；或者
ii)当X和R1都表示氢原子时，则R2选自吡啶-2-基甲酰胺基，吡啶-2-基乙酰胺基，3-羟基苯基乙酰胺基，4-羟基苯基乙酰胺基，((2-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苯基)氨基)甲基，((3-甲氧基苄基)氨基)甲基，2-噻吩基乙酰胺基和((2-噻吩基甲基)氨基)甲基；
式(B)的化合物当包含至少一个不对称中心时，为其对映体之一的形式或其混合物的形式。
9.权利要求8的方法，其中所述式(B)的化合物选自表1中所指出的化合物。
10.权利要求8的方法，其中所述式(B)的化合物选自
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯5，
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二钠6，
N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基]乙酰胺7，
N-[(5-氯-8-羟基喹啉-7-基)(2-呋喃基)甲基]乙酰胺135，
((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯136，
((7-((乙酰基氨基)(2-呋喃基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基磷酸酯二钠137，
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯二盐酸盐138，和
((7-((乙酰基氨基)(3，4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氯喹啉-8-基)氧基)甲基二氢磷酸酯盐酸盐139。
11.权利要求8的方法，其中所述病症是缺血/再灌注损伤或炎症。
12.用于在动物中预防和/或治疗年龄相关病症或其相关症状的方法，该方法包括以下步骤
a)鉴定罹患年龄相关病症的动物；和
b)对所述动物给用权利要求8中的式(B)的化合物、其可药用盐或前体药物；
限制条件是所述式(B)的化合物不是以下化合物之一、其可药用盐或前体药物
5-氯-7-碘喹啉-8-醇52，
5-氯-7-(2-羟基苯基)喹啉-8-醇56，或
5-氯-7-(4-(二甲基氨基)苯基)喹啉-8-醇60。
13.权利要求12的方法，其中所述年龄相关病症选自心血管疾病，周围性血管疾病，代谢病症，癌，神经变性病症，痴呆，膀胱和肾病症，糖尿病并发症，眼病，肺和呼吸系统病症，肌与骨病症和皮肤病况。
14.权利要求13的方法，其中所述神经变性病症是阿尔茨海默病。
15.权利要求11的方法，其中所述缺血/再灌注损伤是肾、心脏、心肌、肺、脑或脊髓的缺血/再灌注损伤。
16.权利要求11的方法，其中所述炎症是肺炎症或任何其它器官的炎症。
17.权利要求8的方法，其中所述动物是人。
18.权利要求12的方法，其中所述动物是人。
19.药物组合物，其包括权利要求1的式(A)的化合物、其可药用盐或前体药物，以及至少一种可药用载体。
20.药物组合物，其包括权利要求2的式(A)的化合物、其可药用盐或前体药物，以及至少一种可药用载体。
21.药物组合物，其包括权利要求3的式(A)的化合物、其可药用盐或前体药物，以及至少一种可药用载体。
22.药物组合物，其包括权利要求4的前体药物以及至少一种可药用载体。
23.药物组合物，其包括药学有效量的权利要求1的式(A)的化合物、其可药用盐或前体药物以有效地降低和/或抑制CLK-1活性。
24.药物组合物，其包括药学有效量的权利要求8的式(B)的化合物、其可药用盐或前体药物以有效地降低和/或抑制CLK-8活性。
25.权利要求22的药物组合物，其包括药学有效量的前体药物以有效地降低和/或抑制CLK-1活性。
附件全文摘要
本发明涉及新的喹啉衍生物作为具有活性的CLK-1抑制剂。更具体地说，本发明的CLK-1抑制剂是式(A)的化合物。本发明还涉及包括该化合物的药物以及用于预防和/或治疗从CLK-1抑制中受益的疾病或其其相关症状的方法。
文档编号A61K31/5377GK101611009SQ200780034613
公开日2009年12月23日 申请日期2007年7月25日 优先权日2006年7月25日
发明者瑟格弗雷德·赫吉米, 凯文·迈克波里德, 阿布德尔玛德基德·K·熙熙, 一兰纳耶·卡尼可卡, 颖 王, 斯蒂芬·李奥纳多·海耶斯, 玛丽-皮尔勒·谷曼德, 盖伊·思维格尼, 丹尼尔·杜马斯, 朱莉安·史密斯 申请人:伊维沃制药股份有限公司