专利名称：：新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种口腔护理组合物用于增强牙齿的牙釉质从而提供对牙齿的保护以免于酸侵蚀(acidicchallenges)的用途，所述口腔护理组合物包括微粒氧化锌，任选地与氟化物离子源一起。这样的组合物用于抗(即，有助于预防、抑制和/或治疗)牙侵蚀和/或牙磨损。这样的组合物用于抗龋齿。另外，这样的组合物可以用于抗那些可以用锌盐治疗受益的口力空卫生病症，包:fe噬斑、牙垢、逸艮炎、牙周病和口腔恶臭。
背景技术：
：牙结石主要由羟基磷灰石钙Cau)(P04)6(OH)2组成，其可以部分地被阴离子比如碳酸根离子或氟化物离子和阳离子比如锌或镁离子取代。牙结石也可包含非磷灰石矿物相，比如磷酸八钙和碳酸钙。牙齿丧失是龋齿的结果，其是一种多因素疾病，其中细菌产酸比如乳酸使得下表面脱矿质(其并不完全再矿化)，导致进行性组织丧失，最终形成龋洞。菌斑生物膜的存在是龋齿的必要条件，当易发酵性糖类比如蔗糖的水平持续上升一段时间，产酸细菌比如变形链球菌可变成致病菌。即使没有患病，作为酸侵蚀和/或物理牙齿磨损的结果，可出现牙齿硬组织丧失；据信这些过程是协同进行的。牙齿硬组织暴露于酸引起脱矿质，导致表面软化和矿物密度降低。在正常生理条件下，脱矿质组织通过唾液的再矿化作用进行自修复。唾液对钓和磷酸盐是过饱和的，健康人中的唾液分泌起洗去酸侵蚀，并升高pH以便改变平衡使有利于矿物沉积。牙侵蚀(即酸侵蚀或酸磨损)是一种包括脱矿质的表面现象，最终导致牙齿表面被非细菌来源的酸全部溶解。最通常地，酸来源于饮食，比如柠檬酸来自水果或碳酸饮料，磷酸来自可乐饮料，乙酸比如来自香醋瓶汁。牙侵蚀也可以由反复接触由胃产生的盐酸(HC1)引起，该盐酸可以通过自然反应比如胃食管反流，或者通过如可以是贪食症患者遭受的诱导反应进入口腔。3牙磨损(即物理牙磨损)是由磨耗和/或磨损引起。当牙齿表面彼此摩擦时发生磨耗，一种两体磨损形式。一种常见的明显实例是在患有磨牙症的受试者中观察到的，磨牙症是一种磨牙习惯，其作用力大，以加速磨损为特征，特别是在咬合面上。磨擦典型地是三体磨损的结果，最常见的实例是与使用牙膏刷牙有关的。就完全矿化的牙釉质而言，由市售可获得的牙膏引起的磨损水平是最小的，几乎没有临床后果。然而，如果牙釉质暴露于侵蚀环境中已经被脱矿质和软化，牙釉质对牙磨损将变得更敏感。牙本质比牙釉质软得多，因此对磨损更敏感。牙本质暴露的受试者应当避免使用磨擦剂高的牙膏，比如基于氧化铝的那些。另外，由侵蚀环境造成的牙本质软化将增加组织对磨损的敏感性。牙本质是极其重要的组织，根据其位置，在体内通常被牙釉质或牙骨质所覆盖，即分别指代牙冠对牙根。牙本质具有比牙釉质高得多的有机质含量，其结构特征在于存在充满液体的小管，该小管从牙本质-牙釉质的表面或牙本质-牙骨质接合处流至成牙质细胞/牙髓接触面。广泛地公认牙本质超敏反应得起因涉及暴露小管中流体流动的变化(流体动力学理论)，其导致被认为位于成牙质细胞/牙髓接触面附近的机械感受器受到刺激。并不是所有暴露的牙本质都是敏感的，因为其通常被涂层所覆盖；咬合混合物主要包括来源于牙本质自身的矿物质和蛋白质，但也包含来自唾液的有机组分。随着时间推移，小管腔可能逐渐被矿物化组织所堵塞。响应牙髓创伤或化学性刺激而形成修复性牙本质也得到了良好的证实。但是，侵蚀性挑战可以除去涂层和小管"填料"，引起牙本质流体向外流动，使得牙本质对外界刺激比如热、冷和压力更加敏感。如前所指出的，侵蚀性挑战也可以使得牙本质表面对磨损更加敏感。另外，随着包括小管的直径增加，牙本质超敏反应加剧，并且因为小管直径朝向成牙质细胞/牙髓接触面方向增加，所以进行性牙本质磨损可导致超敏反应增加，特别是在牙本质快速磨损的情况下。侵蚀和/或酸介导的磨损造成保护性牙釉质层丧失将暴露出下面的牙本质，因此其是牙本质超敏反应发展中的主要病因学因素。现在主张增加饮食酸的摄取和减少正餐次数已经伴随牙侵蚀和牙磨损的发病率上升。筌于此，帮助预防牙侵蚀和牙磨损的口腔护理组合物将是有利的。WO94/26245(Church&Dwight)描述了包括亚微粒或聚集亚微粒氧化锌微粒的口腔组合物，其中所述微粒具有的第一粒径小于1微米，聚集的第二粒径为50微米或更小，据说该组合物显示出增强的抗菌斑性质。据表明当菌斑细菌代谢糖并释放酸时，锌离子从菌斑中俘获的聚集氧化锌微粒中释放出。这些锌离子被认为抑制磷酸4丐晶体的成核，因此预防牙垢的形成。其描述了进一步包括氟化物离子源的口腔卫生组合物。EP-A-737470(Quest)描述了包括抗菌斑剂比如胶体氧化锌的口腔组合物，所述胶体氧化锌可以用包含糖或肽结构的聚合物涂层，该糖或肽结构可特异性地被细菌粘附素所识别。这样的试剂可以靶向于人类口腔的特异位点，然后，在酸性pH下，释放出所述抗菌斑剂。据表明也可以包括抗龋齿剂比如氟化盐。WO99/59539(Boots)描述了包括含有高表面积的氧化锌的口腔卫生组合物的气味吸收组合物，其具有的微粒直径为0.1至200jLim,优选0.1至20.5ym。其描述了进一步包括氟化物离子源的口腔卫生组合物。WO2007/013937(Colgate)描述了包括锌离子源比如非聚集纳米微粒形式的氧化锌的口腔组合物，其可以具有的平均粒子尺寸为1至250nm。据建议可以使用较低数量的非聚集锌纳米微粒与标准锌离子源比较，同时保持或增加已表明包括抗菌斑、抗结石和除臭性质的锌的有利作用。其描述了进一步包括氟化物离子源的口腔卫生组合物。锌盐在防止龋齿中的作用是不确定的。两个体外试验表明锌可以增加包括氟化物离子源的口腔组合物的抗龋齿性质，然而两个另外的体外试验报道了相反的结果。锌盐有利的抗龋齿作用描述在US专利6120754(ChesebroughPond)中，其中描述了一种用双相口腔护理产品再矿化牙齿的方法，所述口腔护理产品提供钙源源和氟化物离子源,其可以任选地包含锌盐。在实施例8B)中提供的数据表明在基于脱矿质和再矿化循环研究的体外龋齿模型中，包含的柠檬酸锌可以增加这样的双相口腔护理产品的再矿化的程度(如通过牙齿硬度的增加来测量)。在美国专利6471946(Sunstar)中报道了另一个阳性研究，其中描述了一种使用口腔组合物再矿化具有下表面龋齿损伤的牙齿的方法，所述口腔组合物包4舌isomaltdisaccharide(帕4i金4唐醇(palatinit))与再石广^^促进成分的组合，所述再矿化促进成分规定为氟化物、锌、磷或钙化合物5或其混合物。在表4中提供的数据表明在基于脱矿质和再矿化循环研究的体外龋齿冲莫型中，虽然在不存在帕拉金糖醇或氟化物化合物下，氧化锌具有最小的再矿化性质，但是增加氧化锌的量可以增加帕拉金糖醇与氟化物化合物的组合再矿化的能力。在表5中描述了包括氟化钠和具有平均粒径为0.04jum至0.5iam的小粒径氧化锌的牙膏。据说粒径应当小于0.3jum，以减少由锌化合物引起的收敛作用。与这些阳性体外结果相反，Mellberg等人(JDentRes62(2):145-147,1983)以前报道了杵檬酸锌抑制人工龋齿损伤的氟化物摄取，其中其假定锌盐形成不溶的磷酸锌，从而涂布羟基磷灰石表面和阻断氟化物摄取。而且，White等人(CariesRes1987:21:40-47)提出了在体外龋齿研究中，在氯化锌或柠檬酸锌存在下，可减少氟化物摄取进入脱矿质的牙釉质中。虽然这些体外试验可以表明锌盐对于氟化物的抗龋齿功效具有积极作用或副作用，两个体内试验表明在在实际中锌对于氟化物活性可具有很少的影响。Ingram等人(AdvDentRes8(2);158-165,1994)综述了这些，其认为尽管已经表明当锌被吸收在磷灰石物质上时其限制随后的晶体生长，但它似乎不会相反地影响氟化物的作用，包括再矿化。表明这可能是由于锌的摄取是可逆的。在该综述中，Ingram等人指出尽管用锌盐处理羟基磷灰石可以降低矿物质在酸中的溶解度，但没有证据表明锌在龋齿的过程中起作用。如Ingram等人(JDentRes63:4911984)所报道的,在大鼠中，氟化物的抗龋齿活性不受包含的锌的影响，这点受到Stephen等人在人类实验中的证实(CommunityDentOralEpidemiol16:321-325,1988)。Takatsuka等人(DentalMaterials2005,21,1170-1177)报道了氧化锌可以抑制牙本质脱矿质，因而可以有效地预防牙根龋齿。锌盐在防止牙4曼蚀中的作用描述在WO2004/O54529(Procter&Gamble)中，其中描述了一种防止牙侵蚀的方法，包括给药一种包括聚合矿物表面活性剂(比如多磷酸)和/或选自锡、锌和铜的金属离子源的口腔护理组合物。据说这样的金属离子形成了不溶性化合物或复合物，在使用后，其立即沉积在牙齿表面上，从而形成一层膜或涂层，保护牙齿免于侵蚀损伤持续至少一小时。其中列出了合适的锌盐的许多实例，包括氧化锌，但是柠檬酸锌和乳酸锌被指出是特别优选的。还表明这样的口腔组合物可以任选地包括氟化物离子源。在该P&G专利申请中，所述的这样的锌盐防止牙侵蚀的用途是基于体外侵蚀循环实验设计，其提供在表3中的数据表明在减小矿物质从反复酸侵蚀之后的牙齿表面上完全丧失中，柠檬酸锌比安慰剂稍好一些(柠檬酸锌为10.7jum,安慰剂为13.9jLim—完全矿物质丧失的深度)。Brudevold等人(Arch,oralBiol.,8:135-144,1963)也报道了体外锌盐抗酸侵蚀的有利作用，在141页的表5中给出的数据证实在降低用pH4.5的酸性乙酸盐緩冲液对羟基磷灰石的酸溶解中，乙酸锌几乎与氟化钠同样有效。本发明是基于发现了微粒氧化锌可以抗牙侵蚀，并且也可以与氟化物离子源结合，而不会相反地影响氟化物向牙齿的牙釉质的递送。这是令人惊奇的，因为在WO2004/054529中提出的锌盐的抗酸作Mellberg等人的7见点，预期其可以妨碍氟化物摄入牙釉质。似乎微粒氧化锌能够提供给牙齿的牙釉质抗饮食酸的保护屏障，其可以增加氟化物的防腐功效(已知增强牙釉质的再矿化和减少脱矿质)。微粒氧化锌和氟化物离子源的双重作用固化了牙齿。而且,虽然WO2004/054529^是议可以^吏用任何水溶性的或孩i溶性的锌盐来保护牙齿抗侵蚀，但是在其表3中存在的数据证实柠檬酸锌，其指出一种特别优选的锌盐，实际地相当差，如上所述，在提供任何有效保护方面仅仅比安慰剂稍微好一些。因此，这些在先公布文件的技术人员将预期包括氧化锌的锌盐不是优选的，其在保护牙齿抗酸性侵蚀中甚至无效。另外，现在发现在不存在帕拉金糖醇下，微粒氧化锌抗龋齿，并且与氟化物离子离子源组合可能是有利的。看来微粒氧化锌能够提供给牙釉质抗细菌生酸的保护屏障，其可以增加氟化物的已知的抗龋齿功效。通过微粒氧化锌和氟化物离子源的双重作用可固化牙齿。发明概述因此，在第一个方面，本发明提供一种用于抗牙侵蚀和/或牙磨损的口腔护理组合物，其包括微粒氧化锌。在第二个方面，本发明提供一种用于抗龋齿的口腔护理组合物，其包括在不存在帕拉金糖醇下的微粒氧化锌。发明详述微粒氧化锌指具有平均粒径为少于5jum,合适地为lnm至2|um的氧化锌微粒。合适地，氧化锌为纳米微粒形式，具有的平均粒径小于l]Lim,例如1至750nm,2nm至500nm,5nm至250nm和10至100nm。氧化锌的存在量可以为总组合物的0.001至10.0%重量，合适地为总组合物的0.01至5%,例如0.1至3.0%重量。合适地，将氧化锌与分散剂一起配制，分散剂可以吸附在氧化锌微粒的表面上遗体供空间或离子屏障，从而有助于防止它们的凝聚或聚集。合适的分散剂为表面活性剂，包括增溶剂或润湿剂或水溶性聚合物比如聚电解质。合适地，所述分散剂选自多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、山梨醇、甘露醇或木糖醇)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或其衍生物(例如乙烯基吡硌烷酮乙酸乙烯酯共聚物或乙烯基吡硌烷酮乙烯醇共聚物)、多磷酸盐(例如环状磷酸盐比如六偏磷酸钠)或水溶性共聚物，该水溶性共聚物具有吸引至氧化锌微粒的聚合物片段和具有使其为水溶性的聚合物片l爻(例如，在WO2004/000916(Nanophase)中描述类型的水溶性共聚物)。合适的分散剂的实例包括丙二醇、PVP或六偏磷酸钠。市售可获得的纳米樣i粒氧化锌水性悬浮液为乂人NanophaseTechnologies,1319MarquetteDrive,Romeoville,IL60446.USA可获得的，其实例为NanoshieldZN-3008C和NanoshieldZN-3014A,这两个实例分别用阳离子或阴离子分散剂稳定的纳米氧化锌悬浮液。合适地，所述口腔护理组合物进一步包括氟化物离子源。氧化锌和氟化物离子源的组合不仅能够固化并从而保护牙齿抗酸侵蚀或龋齿，而且能够再硬化被酸侵蚀或龋齿软化的牙釉质。本发明所用的氟化物离子源的实例包括碱金属氟化物比如氟化钠，碱金属单氟磷酸盐比如单氟磷酸钠，氟化亚锡或胺氟化物，其含量为能提供25至M00pm的氟化物离子，优选100至l500ppm氟化物离子。一种合适的氟化物源是碱金属氟化物，比如氟化钠，例如所述组合物可以包含0.1至0.5%重量的氟化钠，例如0.205%重量(等于927ppm氟化物离子)、0.2542%重量(等于l"0ppm氟化物离子)或0.315%重量(等于1426ppm氟化物离子)。合适地，本发明所用的组合物不包含isomaltdisaccharide,其在上述SunstarUS专利中被称为帕拉金糖醇。本发明所用的组合物可以进一步包括用于抗牙本质超壽丈反应的脱敏剂。脱敏剂的实例包括小管阻断剂或神经脱敏剂及其混合物，例如如在WO02/15809中描述的。合适的脱敏剂包括锶盐，比如氯化锶、乙酸锶或硝酸锶，或钾盐比如衧檬酸钾、氯化钾、碳酸氬钾、葡糖酸钾，特别是硝酸钾。钾盐的脱壽丈量通常为总组合物的2至8%重量，例如可以〗吏用5%重量的硝酸钾。本发明中所用的组合物应包含合适的配制试剂，比如磨擦剂、表面活性剂、增稠剂、湿润剂、矫味剂、甜味剂、遮光剂或着色剂、防腐剂和水，选自在用于这样的目的的口腔护理组合物中通常使用的那些。这样的试剂的实例为如在EP929287中描述的。将本发明所用的组合物典型地配制成牙膏、喷雾剂、漱口水、凝胶、4定剂、口香糖、片剂、软4定剂、速溶并分剂(instantpowders)、口腔条(oralstrips)和口月空贴剂。本发明所用的组合物可以通过以任意方^f更的顺序混合合适相对量的成分来制备，如有必要，调节pH以获得预期值，例如5.5至9.0。在进一步的方面，氧化锌可以加入到在WO2006/100071中描述类型的牙膏组合物中，将其内容引入本文作为参考。因此，本发明进一步提供一种第一牙膏组合物，其中该组合物包括如上所述的微粒氧化锌、如上所述的氟化物离子源和二氧化硅牙齿磨擦剂，该牙膏具有的相对牙本质磨损(RDA)值为20至60,pH在5.5至9.0的范围内，且不含正磷酸盐緩沖剂或CuM8烷基硫酸盐的水溶性盐。所指的pH是当将牙膏组合物用水按组合物与水1:3的重量比匀浆时所测量的。合适地，将所述微粒氧化锌与如上描述的分散剂一起配制。合适地，本发明的第一牙膏组合物不包括钙盐，其可能降低游离氟化物离子的利用率。合适的二氧化硅牙齿磨擦剂的实例包括分别由Huber、Degussa、Ineos和Rhodia以下述商品名Zeodent、Sident、Sorbosil或Tixosil销售的那些。所述二氧化硅磨擦剂的存在量应当足以确保牙膏的RDA在20至60，例如25至50，或者25至40,以确l呆牙膏足够清洁牙齿，同时不会加速牙齿的磨损，特别是患有牙侵蚀或已经被酸软化的牙齿。所述二氧化硅磨擦剂的存在量通常为总组合物的至多15%重量，例如2至10%重量，通常为总组合物的至少5%,例如5至7%重量，适当地为6%重量。减少二氧化硅磨擦剂的水平具有如下优点不仅降低牙膏的摩擦性，而且减小磨擦剂(或磨擦剂中痕量的杂质)与氟化物离子的任何相互作用，从而提高了游离氟化物离子的利用率。本发明的第一牙膏组合物所用的合适的表面活性剂包括两性表面活性剂，例如长链烷基甜菜石咸，比如由Albright&Wilson以商品名'EmpigenBB，销售的产品，优选长《连烷基酰氨基烷基《t菜石咸，比如可可酰氨基丙基甜菜碱，或低离子表面活性剂，比如甲基可可基牛磺酸钠，其为由Croda以商品名AdinolCT销售的，或其混合物。两性表面活性剂可以作为单一表面活性剂单独使用，或者可以与低离子表面活性剂组合使用。合适地，所述表面活性剂的存在量为总组合物的0.1至10%范围，例如0.1至5%，比如0.5至1.5%重量。合适的增稠剂包括，例如非离子增稠剂比如，例如(Cl-6)烷基纤维素醚，例如甲基纤维素；羟基(Cl-6)烷基纤维素醚，例如羟乙基纤维素和羟丙基纤维素；(C2-6)烯化氧改性的(Cl-6)烷基纤维素醚，例如羟丙基曱基纤维素；及其混合物。也可以使用其它增稠剂，比如天然胶合合成胶或胶状物质，比如鹿角菜胶(IrishMoss)、黄原胶、黄蓍树胶、角叉菜胶、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸聚合物(卡波姆)、淀粉和增稠性二氧化硅。合适地，所述增稠剂是增稠性二氧化硅和黄原胶，任选地与角叉菜胶和/或卡波姆的混合物。合适地，所述增稠剂的存在量为总组合物的0.1至30%范围，例如0.1至20%,比如5至15%重量。合适的湿润剂包括，例如甘油、木糖醇、山梨醇丙二醇或聚乙二醇或其混合物；其中湿润剂的存在量可以为总组合物的10至80%范围，例如20至60%,比如25至50%重量。为了抗牙本质超敏反应，本发明的第一牙膏组合物可以进一步包括如上描述的脱敏剂，特别是硝酸钾。硝酸钾的存在有利地可以提供增强的除污作用，其对于降低制剂的摩擦性特别有益，否则，可以预期其具有相对低的清洁性能。本发明的第一牙膏组合物的pH可以为6.0至8.0的范围，合适地为6.5至7.5,其可以通过加入石咸比如氢氧化钠来节。在进一步的方面，本发明提供第二牙膏组合物，其包括如上描述的微粒氧化锌、如上描述的氟化物离子源(例如碱金属氟化物)、增稠系统，该增稠系统包括增稠性二氧化硅与黄原胶任选地与角叉菜胶和/或卡波姆的组合、阴离子表面活性剂(例如CnM8烷基硫酸盐的水溶性盐，比如十二烷基硫酸钠)和含量为总组合物的至多20%(合适地为5至20%,例如10至16%)重量的二氧化硅牙齿磨擦剂，该牙膏具有的pH为5.5至9.0的范围(合适地，6.0至8.5,例如6J至7.5),且不含正磷酸盐緩冲剂或钙盐。如果期望，这样的牙膏组合物也可包括如上描述的脱敏剂。本发明还提供一种用于抗牙侵蚀和/或牙磨损的方法，其包括向需要其的个体施用有效量的如上定义的组合物。本发明还提供微粒氧化锌在制备用于抗牙侵蚀和/或牙磨损的如上定义的口腔护理组合物中的用途。本发明还提供一种用于抗龋齿的方法，其包括向需要其的个体施用有效量的如上定义的组合物。本发明还提供微粒氧化锌在制备用于抗龋齿的如上定义的口腔护理组合物中的用途。通过下述实施例进一步阐述本发明。ii<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>施例l(纳米ZnO)、实施例2(纳米ZnO+氟化物)、比较实施例A(包含氟化物的阳性对照)和比较实施例B(不包含纳米ZnO和氟化物的阴性对照)，之后将其在P/。的柠檬酸(pH3.8)中培养。在处理和侵蚀过程之间，用水洗涤样品。研究的酸暴露时间为10、20和30分钟，在用蒸馏水充分洗涤样品之后，在每个时间点进行显微硬度测量。对于每个牙釉质样品，在所有时间点，包括基准时，获得六个压痕(indents)。每次处理对于六个独立的样品(11=6)都进行。.将软化研究的结果概述在图1和表1中。将牙釉质硬度值相对于独立的基准显微硬度值标准化，因此，在随后时间点的数据反映出牙釉质的软化。在图1中的误差代表标准偏差。在预防柠檬酸诱导的牙釉质表面软化中，在实-验的20和30分钟时间点，包含纳米氧化锌和/或氟化物的牙膏处理(实施例1、2和A)在统计学上优于不包含任一种活性成分的安慰剂牙膏(实施例B)。在酸暴露20分钟后，实施例1、2和A的牙膏提供的保护是在统计学上相当的。在30分钟的酸暴露后，用实施例A的牙膏处理定向地(directionally)而不是在统计学上优于用实施例1和2的4壬一种牙膏的处理，实施例1和2的牙膏在该体外模型中的这一时间点的保护在统计学上是彼此相当的。在10分钟的酸处理后，用实施例2和A的包含氟化物的牙膏处理的牙釉质与用实施例B的安慰剂牙膏处理的牙釉质之间存在统计学显著的差异。实施例2和A在统计学上是彼此相当的，定向地优于实施例1的牙膏。所有这些数据都表明包含纳米氧化锌而不含氟化物的牙膏提供了与包含氟化物的牙膏类似的抗酸侵蚀的保护。而且，包含氟化物的牙膏抗牙侵蚀的功效似乎不会受到包含的纳米微粒氧化锌的显著地损害，因此，其能提供给牙釉质抗饮食酸的保护屏障，而不会相反地影响氟化物摄取进入牙齿的牙釉质。13图1.在用实施例l、2、A或B的牙膏制剂处理后，暴露于柠檬酸的人类牙釉质的相对显微硬度值Q酸处理时间为10分钟B酸处理时间为20分钟口酸处理时间为30分钟ZnO(1)ZnO+氟化物(2)氟化物(A)对照(B)表l.在用实施例l、2、A或B的牙膏制剂处理后，暴露于柠檬酸的人类牙釉质的相对显微硬度值。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>实施例4用于在存在或不存在氟化物下，比4支纳米孩i粒氧化锌NanoshieldZN-3008C和NanoshieldZN-3014A的稳定悬浮液作为抗4曼蚀剂的作用的轻基磷灰石微量培养板方法用高溶解的羟基磷灰石(HA)粉末的浓悬浮液(在200ml的丙酮中20g的HA)充满96-孔200ji1樣i量培养板的各孔。将所述板在搅动下(在定轨振荡器上，50rpm)干燥，接着用去离子水充分洗涤，以除去任何释放的HA。对于侵蚀试验，用去离子水充满HA涂布的微量培养板的各孔，并静置水合60分钟。然后，除去水，用200jul待试验的试剂之一充满微量培养板的单道的每8个孔。每个板包含12个道，所以可以在每个微量培养板中试验6种试剂，一式双份(11=8)。在搅动下，将活性成分置于各孔中30分钟，在该时间后，再次用去离子水充分洗涤所述板。该研究所用的侵蚀是橙汁模拟物，1%的柠檬酸，pH3.8。将所述板的各孔暴露于200pl的棕檬酸溶液中，在搅拌下暴露30分钟。在酸侵蚀之后，从没孔中除去50jul的种檬酸，将其置于新的96-孔微量培养板的相应孔中。然后，向每孑L中力口入50ju1的4目酸机(vanadomolybdate)i式剂，在5分钟之后，使用微量培养板读数器读取各孔中的溶液在450nm的吸光度。使用该技术评价的试验试剂是在水中0.5wt%，用阴离子和阳离子的分散剂稳定的纳米微粒氧化锌水性悬浮液(分别为NanoshieldZN3008C和NanoshieldZN-3014A，都是70nm的平均粒子尺寸，且都从Nan叩haseTechnologies,1319MarquetteDrive,Romeoville,IL60446.USA获得)。图2显示了微量培养板侵蚀研究的数据。该图包含来自一个微量培养板的数据，所述微量培养板已经如上所述进行了处理，一式双份，每次11=8。已经检验了在存在或不存在氟化物下，阳离子和阴离子稳定的纳米孩￡粒ZnO的作用。当存在氟化物时，在300ppm氟化物溶液(4吏用氟化钠)中制备0.5%的悬浮液。使用的阳性对照是300ppm氟化物，阴性对照是去离子水。结果清楚地显示出在该体外模型中，在预防羟基磷灰石的脱矿质方面，用阳离子或离子分散剂稳定的纳米微粒氧化锌与300ppm氟化物是近似相当的。另外，当所述纳米微粒氧化锌与氟化物一起存在于溶液中时，两种抗侵蚀活性成分的作用是叠加的，表明氧化锌不会相反地影响氟化物摄取进入羟基磷灰石中。<image>imageseeoriginaldocumentpage16</image>实施例5评价在存在和不存在氟化物下，纳米微粒氧化锌的HMP稳定悬浮液作为抗侵蚀剂的功效的羟基磷灰石微量培养板方法如在实施例4中描述的进4亍另一个试-验，其中用于纳米孩i粒氧化锌(在水中0.5wt。/。的悬浮液)的稳定剂是六偏磷酸钠(HMP),存在量为相对于氧化锌的2wt。/o(即，存在量为0.0lwt%)。图3显示了得到的数据。在存在或不存在氟化物和在两个不同的pH值(pH7和pH9)下，再次试-验纳米微粒氧化锌。所述数据显示出虽然在pH7或9的单独的纳米微粒学上不如单独的225ppm氟化物)，但是，在这方面，氧化锌和225ppm氟化物的组合在统计学上优于单独的225ppm氟化物。在pH7的所述组合定向地优于在pH9的组合。图2.评价在存在和不存在氟化物下，纳米微粒氧化锌的稳定悬浮液的抗侵蚀功效的羟基磷灰石微量培养板的侵蚀数据0.400.350.30"|0.250.200.15-0.10-0.05壬<image>imageseeoriginaldocumentpage17</image>实施例620天体外侵蚀循环研究碾磨人类牙釉质样品(3x3mm),并使用碳化硅砂纸抛光。使用1200-粒度砂纸碾磨所述样品的上部，然后4吏用4000-粒度砂纸，之后4吏用l-mm金刚砂抛光悬浮液连续抛光。使用超强力胶水将每个样品固定在丙烯酸杆(l/4"直径x2"长)的末梢。用环氧树脂包覆每个样品的侧面，以便只暴露牙釉质表面。该研究使用每组十八个样品。每组由3个亚组的6个样品组成。使用维氏硬度压头，通过施加200g的负荷15秒来测定可靠样品的初始硬度。/人每个样品表面上的四个缺口测定平均样品显微硬度。仅仅具有合理的(sound)表面硬度300至350的样品是可接受的。在所有处理方案中，4吏用集中的人类唾液和矿物质溶液的50:50混合物作为再矿化培养基，所述脱矿质溶液为1%的柠檬酸，pH3.8。考虑的四个治疗组为组A)去离子水，组B)300ppm氟化物，组C)在去离子水中的0.50wt%的ZnO,组D在300ppm氟化物中的0.50wt%的ZnO。图3.评价在存在和不存在氟化物下，纳米微粒氧化锌的HMP稳定悬浮液的抗侵蚀功效的羟基磷灰石微量培养板的侵蚀数据所用的氟化物源是氟化钠，氧化锌是如上在实施例4中所述的NanoshieldZN-3008C。所述循环治疗方案包括五个两分钟的软化溶液中的酸^f曼蚀和三个两分钟的处理期(以350rpm搅拌)。在每次处理后，用流动的去离子水洗涤样品，然后，再放回到所述唾液再矿化系统中。重复该方案10，在其后的时间，通过重新测定它们的显微硬度来分析样品。然后，再进行10天的循环，测定20天的显微硬度值。在表2中给出了用于该试验的处理时间表，将得到的数据显示在下面图4和表3中。表28:00-8:02a.m.处理18:02-10:00a.m.唾液处理10:00-10:02a.m.酸侵蚀1(1.0%的柠檬酸，pH3.75)10:02-11:00p.m.唾液处理11:00-11:02p.m.酸侵蚀2(1.0%的柠檬酸，pH3.75)11:02-12:00p.m.唾液处理12:00-12:02p.m.处理212:02-1:00p.m.唾液处理1:00-1:02p.m.酸侵蚀3(1.0%的柠檬酸，pH3.75)1:02-2:00p.m.唾液处理2:00-2:02p.m.酸侵蚀4(1.0%的柠檬酸，pH3.75)2:02-3:00p.m.唾液处理3:00-3:02p.m.酸侵蚀5(1.0%的柠檬酸，pH3.75)3:02-4:30p.m.唾液处理4:30-4:32p.m.处理34:32p.m,8:00a.m.唾液处理18图4.评价在存在或不存在氟化物下，纳米微粒氧化锌的稳定悬浮液的抗侵蚀功效的20-天体外循环侵蚀数据用单向方差分析，使用SigmaStat(3.0)软件进行在图4中的上述数据的统计分析。ANOVA显示出显著性差异，因此进行各组之间的成对比较(StudentNewmanKeuls试验)。统计分析表明在预防人类牙釉质的去矿化/促进人为侵蚀损伤的再矿化方面，纳米氧化锌和氟化物的组合优于单独的氟化物(或单独的氧化锌)。510152025时间(天)oo49陽■oo陽19表3.评价在存在或不存在氟化物下，納米微粒氧化锌的稳定悬浮液的抗侵蚀功效的20-天体外循环侵蚀数据<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>实施例7用于比较在存在或不存在氟化物下，多种锌化合物作为抗侵蚀剂的作用的羟基磷灰石微量培养板方法如在上述实施例4中描述的进行试验，使用羟基磷灰石微量培养板的一个面0=8)。在这种情况下评价的试验试剂是a)在水中的0.5wt。/o的NanoshieldZN-3008C,b)0.5wt。/o的乙酸锌，c)0.5wt。/。的柠檬酸锌和d)0.5wt。/。的氧化锌(批量物质)。对于第一个试验，在去离子水中制备这些锌化合物，对于第二个试l全，在225ppm氟化物溶液(使用氟化钠)中制备它们。所使用的阳性和阴性对照分别是225ppm氟化物和去离子水。图5.评价多种锌化合物的抗侵蚀功效的轻基磷灰石微量培养板侵:蚀数据070"JO別-0.40-0.30"I0.00柠檬纳米7gft钱225ppm水酸锌加乙峻F图5和6包含来自对于单独的锌化合物(图5)和与225ppm氟化物(图6)进行的试验的数据。这些数据清楚地表明在该体外才莫型中预防羟基磷灰石的脱矿质方面，阳离子分散剂稳定的纳米微粒氧化锌与225ppm氟化物在统计学上是相当的。另外，当所述纳米氧化锌与225ppm氟化物一起存在于溶液中时，这两种试剂的作用是累加的，如图6所示。根据上述图5,似乎提供相对于水的任何益处的唯一待试^r的其它锌化合物(在不存在氟化物下)是乙酸锌，在预防羟基磷灰石的脱矿质方面，其在统计学上不如稳定的纳米微粒氧化锌和225ppm氟化物，但是在统计学上优于水。图6显示出乙酸锌和225ppm氟化物的组合是定向地优于，^E在统计学上相当于单独的225ppm氟化物。在预防羟基磷灰石的脱矿质方面，柠檬酸锌和氧化锌(批量物质)与氟化物的组合在统计学上优于水，但在统计学上不如单独的氟化物，表明这两种锌盐对于氟化物的活性具有有害作用。图6.评价在氟化物的存在下，多种锌化合物的抗侵蚀功效的羟基磷灰石微量培养板侵蚀数据￡孤-娜-买施例8用于评价在氟化物的存在下，纳米微粒氧化锌的PVP和丙二醇稳定的悬浮液作为抗侵蚀剂的功效的羟基磷灰石微量培养板方法如在实施例4和5中描述的进行最后的羟基磷灰石微量培养板试验，其中用于纳米微粒氧化锌的稳定剂是聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或丙二醇。图7显示了得到的数据。在每种情况下，在氟化物的存在下试验所述纳米微粒氧化锌。所述数据显示出在预防羟基磷灰石的脱矿质方面，用PVP与氟化物的组合稳定的纳米微粒氧化锌在统计学上优于单独的氟化物或水。然而，当用丙二醇稳定纳米微粒氧化锌时，在这方面，氧化锌和氟化物的组合在统计学上优于水，但^又^又定向地优于单独的氟4b物。在预防脱矿质方面，聚乙烯吡咯烷酮与氟化物的组合(没有纳米微粒氧化锌)在统计学上不如单独的氟化物，并且在统计学上与水相当。将ZN-3008C物质与氟化物的组合包括在该研究中用于比较，并且优于所有其它的试验试剂/组合。S'邻固-G孤a汰加柠稽酸,纳米乙酸辟22您c;"F水22说明书第21/24页图7.用于评价在氟化物的存在下，纳米微粒氧化锌的PVP和丙.醇稳定的悬浮液的抗侵蚀功效的羟基磷灰石微量培养板数据0.25-0.20-0.050.00ZI^3008C纟内AZnO纟内i^ZnOFVP-+FFVP+FPG+F300ppmF7jC实施例9用于比较在存在和不存在氟化物下，纳米微粒氧化锌的稳定的悬浮液作为抗龋齿剂的作用的羟基磷灰石溶出度降低方法(HASR)用5ml的调节至pH7的试验试剂的悬浮液处理50mg量的"高溶出"羟基磷灰石(HA)2分钟。过滤该悬浮液，并用5ml的去离子水洗涤两次。用0.1M乳酸，pH4.5进一步侵蚀所述HA2分钟。过滤样品，收集滤液并用1:10的去离子水稀释。通过离子色谱法测定产生的o-醋盐W又JIBL的量,图8和表4包含来自所述HASR抗龋齿研究的数据。已经检验了在存在或不存在300ppm氟化物下，所述阳离子和阴离子稳定的纳米微粒ZnO(如在实施例4中描述的)的作用。使用的阳性对照是300ppm氟化物，阴性对照是去离子水。0.15-0.10-处理在HA溶出中的y。降4氐SEM水0.001.61300ppm氟化物39.780.24ZnO(阴离子)31.500.65ZnO(阳离子)74.920.83ZnO+300ppm氟化物(阴离子)66.360.66ZnO+300ppm氟化物(阳离子)85.931.55图8.评价在存在和不存在氟化物下，纳米微粒氧化锌的稳定悬浮液的抗龋齿功效的羟基磷灰石溶出度降低数据100.0090.0080.0070.00^60.00g50.00-40.0030.0020.0010.000.00表4.评价在存在和不存在氟化物下，纳米微粒氧化锌的稳定悬浮液的抗龋齿功效的羟基磷灰石溶出度降低数据结果清楚地显示出在该体外模型中，在预防羟基磷灰石的脱矿质方面，用阳离子或离子分散剂稳定的纳米微粒氧化锌在统计学上优于阴性对照，另外，阳离子稳定的纳米微粒氧化锌也在统计学上优于氟化物。当所述纳米微粒氧化锌与氟化物一起存在于溶液中时，两种抗龋齿活性成分的作用是叠加的，表明氧化锌不会相反地影响氟化物摄取进入羟基磷灰石中。实施例1024+1t裙BJQJZ用于评价在存在和不存在氟化物下，纳米微粒氧化锌作为抗龋齿剂的功效的牙釉质抗龋齿软化的显微硬度研究进行的研究包括用下述四种制剂之一处理人类牙釉质2分钟(A)纳米ZnO的0.5Q/。悬浮液，(B)补充有300ppm氟化物(氟化钠)的纳米ZnO的0.5%悬浮液，(C)300ppm氟化物(氟化钠)溶液，(D)去离子水，之后将其在0.1M乳酸緩冲液(pH4.5)中培养。使用的氧化锌是如在实施例4中描述的NanoshieldZN-3008C。在处理和4曼蚀过程之间用水洗涤样品。酸曝光时间为两小时，之后，在去离子水中洗涤样品，并用合适的制剂再处理2分钟。然后，将样品再放置在乳酸中2小时。在酸侵蚀后，将起用去离子水充分洗涤，并测量显微硬度。对于每个牙釉质样品，获得六个压痕。每次处理对于六个独立的样品(11=6)都进行。将该软化研究的结果概括在图9和表5中。将牙釉质硬度值相对于独立的基准显微硬度值标准化，因此，在随后时间点的数据反映出牙釉质的软化。在图9中的误差代表标准偏差。图9.用纳米氧化锌悬浮液、含有氟化物溶液的纳米氧化锌悬浮液、氟化物溶液和水处理人类牙釉质之后，将其暴露于生龋齿的乳酸緩冲液中的相对显微硬度值结果显示出0.5%的纳米氧化锌悬浮液得到了与300ppm氟化物溶液25类似的保护，两者都提供了抗乳酸緩冲液侵蚀的约70%的保护。然而，0.5%的纳米氧化锌悬浮液与300卯m氟化物溶液的组合得到了显著的保护益处，其提供了抗乳酸緩冲液侵蚀的约84%的保护。所有这些数据都表明包含纳米微粒氧化锌而不含氟化物的制剂提供了与包含氟化物的溶液类似的抗生龋齿侵蚀的保护。而且，在抗生龋齿的酸侵蚀的保护方面，与氟化物溶液相比，纳米微粒氧化锌制剂与氟化物累加的功效提供了显著的增强作用。表5.用纳米氧化锌悬浮液、含有氟化物溶液的纳米氧化锌悬浮液、氟化物溶液和水处理人类牙釉质之后，将其暴露于生龋齿的乳酸緩冲液中的相对显微硬度值<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>权利要求1.一种用于抗牙侵蚀和/或牙磨损的口腔护理组合物，其包括微粒氧化锌。2.—种用于抗龋齿的口腔护理组合物，其包括在不存在帕拉金糖醇下的微粒氧化锌。3.根据权利要求1或2的组合物，其中所述氧化锌为纳米微粒形式。4.根据权利要求1至3中任一项的组合物，其中所述氧化锌的存在量为基于全部组合物的0.001至10.0%重量。5.根据权利要求1至4中任一项的组合物，其包括分散剂。6.根据权利要求1至5中任一项的组合物，其包括氟化物离子源。7.根据权利要求6的组合物，其中所述氟化物离子源为碱金属氟化物、碱金属单氟磷酸盐、氟化亚锡或氟化胺。8.根据权利要求1至7中任一项的组合物，其包括脱壽丈剂。9.根据权利要求8的组合物，其中所述脱敏剂为锶盐或钾盐。10.—种牙膏组合物，其包括微粒氧化锌、氟化物离子源和二氧化硅牙齿摩擦剂，所述牙膏具有的相对牙本质磨损(RDA)为20至60,pH在5.5至9.0的范围内，且不含正磷酸盐緩冲剂或水溶性010-18烷基硫酸盐。11.一种牙膏组合物，其包括微粒氧化锌、氟化物离子源、增稠系统、阴离子表面活性剂和二氧化硅牙齿磨擦剂，所述增稠系统包括增稠二氧化硅与黄原胶的组合，任选地含有角叉菜胶和/或卡波姆，二氧化硅牙齿磨擦剂的含量为总组合物的至多20%重量，所述牙膏具有的pH在5.5至9.0的范围内，且不含正磷酸盐緩冲剂或钙盐。全文摘要本发明描述了一种口腔护理组合物用于抗牙侵蚀和/或牙磨损的用途，所述口腔护理组合物包括任选地在氟化物离子源的存在下的微粒氧化锌(合适地为纳米微粒形式)。这样的组合物也用于抗龋齿。文档编号A61K8/21GK101677918SQ200880011195公开日2010年3月24日申请日期2008年4月3日优先权日2007年4月5日发明者C·福勒申请人:葛兰素集团有限公司