专利名称：：含硫二萜化合物、制备方法及其药物组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及从安徽贝母中的得到的含硫二萜化合物安徽贝母酸及其制备方法和以该化合物或其衍生物为活性成分的药物组合物，以及该化合物或其衍生物在制备抗炎药物中的应用。
背景技术：
：药用贝母是百合科(Liliaceae)贝母属(Fritillaria)多种植物的干燥鳞茎，是我国的主要中药，包括川贝母、浙贝母、平贝母、湖北贝母、安徽贝母等品种。贝母味苦、性寒，贝母主要具有镇咳、祛痰、平喘、抗菌、抗炎镇痛、抗溃疡、抗血小板凝集、抗肿瘤等药理活性。安徽贝母(FritillariaanhuiensisS.C.ChenetS.Ε.Yin)简称皖贝，主要产于安徽省大别山区，80年代经鉴定为百合科贝母属的新种，早在清朝光绪年间，安徽贝母就被载入物产史籍。根据文献资料，安徽贝母中主要含有浙贝甲素、浙贝乙素、贝母辛、异浙甲素、皖贝甲素等生物碱，以及多种二萜类化合物。炎症为具有血管系统的活体组织对局部损伤的反应；在炎症反应过程中，因损伤因子的作用，部分组织遭到破坏，部分组织的血管扩张、局部血量增多，而且血浆和白细胞从血管渗出增多，以稀释、杀伤和包围损伤因子，接着发生修复，受损伤组织的愈合和重建。由此可见，炎症反应与修复过程有紧密联系，炎症反应具有潜在的危害性，过度的炎症反应会造成机体的严重损伤，免疫系统、血液凝固系统和纤维蛋白溶解系统以及细胞因子都是炎症反应的必要因素。炎症反应与多种疾病密切相关。一氧化氮在炎症反应的许多环节发挥复杂的作用，炎症反应时，致炎物或炎症介质可诱导和增加局部一氧化氮的合成和释放，如果使用一氧化氮合酶抑制剂可以减轻炎症的损害程度。研究表明一氧化氮具有促进炎症的作用，一氧化氮促进炎症反应的作用包括使血管舒张、形成水肿和局部红斑、增加炎性渗出、促进败血症的发展、激活前列腺素合成酶以及参与包括系统性红斑狼疮和类风湿关节炎在内的许多免疫反应及免疫病理过程等。体内一氧化氮的大量释放，可以导致自身靶细胞的凋亡和溶解，引起自身性破坏，诱发多器官伤害。多种抗炎药物发挥其作用与降低体内一氧化氮的合成相关，传统中药有多种具有抗炎活性，根据现代药理学研究，贝母有较强的抗炎活性。现有技术没有提供任何与本发明提供的新的含硫二萜类化合物安徽贝母酸及其衍生物有关的信息。既没有化合物结构确证的公开报道，也没有从动、植物中提取分离或化学合成制备该化合物的方法的报道，更没有与该化合物有关的生物活性的公开报道。
发明内容本发明的目的在于提供一种新的含硫二萜类化合物。本发明的另一目的在于提供从安徽贝母中提取分离本发明的新化合物的方法。本发明的进一步的目的在于提供具有抗炎作用的药物组合物。本发明的另一目的在于提供本发明的新化合物和药物组合物在制备抗炎药物方面的用途。本发明的目的通过下列技术措施实现。本发明的含硫二萜类化合物安徽贝母酸化学结构式如下式(I)所示，其中R表示为氢。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本发明的二萜类化合物还包括上述化合物的衍生物，包括其药学上可接受的盐，如钾、钠、钙、镁、锌、铵等，或其酯，R为C1C8的烷基。本发明提供的含硫二萜类化合物安徽贝母酸是从安徽贝母(FritillariaanhuiensisS.C.ChenetS.E.Yin)的干燥鳞茎中提取分离，其制备方法包括以下步骤a.贝母粉粹后用溶剂提取，回收提取液，得到稠浸膏。b.稠浸膏用各种层析方法进行分离，得到目标化合物。上述步骤a中所说的提取溶剂可以是水、乙醇、甲醇、丙醇、丁醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯等溶剂或任意比例的醇、水混合溶剂。优选含水5%—100%的乙醇或甲醇。提取方法可以是煎煮、回流、冷浸、渗漉、微波提取或超声提取，优选冷浸和超声提取。上述步骤b中层析方法，稠浸膏可通过极性或非极性大孔吸附树脂柱，用水洗去杂质，用含水低于80%的乙醇或甲醇洗脱，将含有目标物的洗脱液浓缩，得到精制液。也可以用各类正相或反相硅胶，其中优选正相硅胶，用洗脱液洗脱，收集含有目标化合物的洗脱液浓缩，得到精制液。浓缩后的精制液可在硅胶或氧化铝等正相吸附材料中进行色谱分离，也可在硅烷键合硅胶、含有氨基或氨基的硅烷键合硅胶等反相分离材料或凝胶中进行色谱分离，收集含有目标物的洗脱液。洗脱液重结晶或蒸干溶剂后分别得到目标化合物。上述含硫二萜类化合物安徽贝母酸，按照化学领域中常规的方法酯化，可以得到该化合物的酯类衍生物，R表示C1C8的烷基。上述含硫二萜类化合物安徽贝母酸，按照化学领域中常规的方法成盐，可以得到该化合物的盐，如钾盐、钠盐、钙盐、镁盐、锌盐和铵盐。本发明的药物组合物含有有效治疗量的上述结构式(I)的化合物安徽贝母酸或其衍生物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。本发明的化合物可以用于制备抗炎药物。上述的药学上可接受的载体是指药学领域的药物载体，例如稀释剂、赋形剂如水、乙醇、甘露醇等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、海藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如碳酸钙和碳酸氢纳；吸收促进剂如季铵类化合物、十四酸异丙酯、氮酮等；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭士和皂粘土；润滑剂如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅料如香味剂、甜味剂等。本发明化合物可以组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠、肠胃外或经皮给药的方式进行给药。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂、缓释微丸、固体分散体、包含物等；制成液体制剂如混悬剂、乳剂、溶胶剂、糖浆剂、合剂、溶液剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性混悬剂、乳剂、脂质体、微囊、微球、毫微粒、冻干粉等。优先的形式是片剂、包衣片剂、胶囊、微丸、栓剂和注射剂。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如把活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。本发明的药物组合物优选含有活性成分占总重量比为0.99.9%，最优选含有活性成分占总重量比为0.5%95%。实验表明，本发明的化合物及药物组合物具有较明显的抗炎活性，通过抑制一氧化氮合成酶的活性阻止体内过量一氧化氮的产生发挥作用。图1.含硫二萜类化合物安徽贝母酸化学结构式(五)具体实施例下列实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1.含硫二萜类化合物安徽贝母酸的制备。安徽贝母干燥鳞茎5公斤，粉碎后用80%乙醇回流提取3次，每次15升，合并提取液、过滤，滤液减压回收溶剂，得稠浸膏(898g)。稠浸膏用正相硅胶进行柱层析分离，梯度洗脱、溶剂系统为石油醚-丙酮、丙酮、甲醇，根据薄层层析情况粗分成八个组份(A-H)。组份D(57g)经正相硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行洗脱，根据薄层层析结果合并为10个组份(1-10)，组份3再进行凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂，洗脱，得到安徽贝母酸(1.04g)，经高效液相检测，纯度为99.1%。安徽贝母酸无色针状结晶，熔点为158_161°C，比旋光度[α]24+53.2°(c0.23，三氯甲烷)。分子式C2tlH30O4S电喷雾质谱(ESI-MS):m/z367[M+H]+，365[Μ-ΗΓ。高分辨电喷雾质谱(HRESI-MS):m/z367.1944[M+H]+,(计算值367·1943)红外光谱(IR):(KBr压片)CnT13422，2934，2872，2853，1717，1693，1447，1304，1117,887ο核磁共振氢谱(1H-NMR)(400M氘代三氯甲烷)δ，ppm1.79(m,Η-la)，1.41(m,Η-lb)，1.80(m,H_2a)，1.53(m,H_2b)，2.12(m,H_3a)，1.08(m,H-3b)，1.48(m,H-5)，1.88(m,H_6a)，2.02(m,H_6b)，1.99(m,H_7a)，2.46(m,H_7b)，2.20(m,H-9)，1.75(m，H-lla)，2.00(m，H-llb)，3.67(m，H-12)，5·66(brs,Η-12),3.71(brs,H-14)，1.89(s，H-16)，4.94(s,H-17a)，4.46(s,H_17b)，1.22(s,H-18)，0.62(s,H-20)核磁共振碳谱(13C-NMR)(100M氘代三氯甲烷)δ，ppm38.5，(C-1仲碳)；20.0，(C-2仲碳)；37.9，(C-3仲碳)；44.4，(C-4季碳)；55.9，(C-5叔碳)；26.3，(C-6仲碳)；38.7，(C-7仲碳)；147.9，(C-8季碳)；52.5，(C-9叔碳)；40.9,(C-10季碳)；22.3，(C-11仲碳)；65.7，(C-12叔碳)；139.1，(C-13季碳)；117.0，(C-14叔碳)；55.8，(C-15仲碳)；18.3，(C-16伯碳)；106.6，(C-17仲碳)；29.2，(C-18伯碳)；184.1，(C-19季碳)；12.8，(C-20伯碳；实施例2.注射用脂肪乳剂活性成分20.Og注射用脂肪油140.Og注射用大豆卵磷脂20.Og泊洛沙姆F6820.Og制备方法取活性成分20.Og加140.Og注射用油中，搅拌加热至70°C，作为油相；泊洛沙姆F6820.Og及辅助表面活性剂适量加入800ml注射用水中，在70°C下将大豆卵磷脂20.Og经高速搅勻混恳于其中，作为水相；将油相缓缓加入水相中，20000rpm下高速搅拌制得初乳，加注射用水至IOOOml后经二步高压，第1次压力为20MPa，策2次为40MPa，循环5次，检验合格后，充氮灌装，流蒸汽灭菌30分钟，即得。实施例3.口服片剂活性成分20.Og乳糖90.Og可压淀粉810.Og硬脂酸镁40.Og聚乙烯吡咯烷酮40.Og制备方法将活性成分、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮和可压淀粉混合均勻，用水润湿，湿法制粒，过筛，干燥，在过筛，加入硬脂酸镁混合均勻，压片，即得。实施例4.注射用冻干粉活性成分20.Og羟丙基环糊精400.Og制备方法活性成分与羟丙基环糊精用乙醇溶解，减压抽去乙醇，使羟丙基环糊精将活性成分包埋，混合物再用注射用水溶解，加入活性碳，0.22um滤膜过滤，分装，冷冻干燥，压盖，即得。实施例5.透皮吸收凝胶活性成分100.Og95%乙醇680.Og卡波姆94010.Og十四酸异丙酯50.Og三乙醇胺8.Og制备方法活性成分与十四酸异丙酯用95%乙醇充分溶解，加入溶胀完全的卡波姆940溶液，搅拌均勻，加三乙醇胺调节pH值至中性，分装，即得。实施例6.含硫二萜类化合物安徽贝母酸及其衍生物抗炎活性的测定对数生长期的小鼠巨噬细胞系RAW264.7用完全RPMI培养液重悬沉淀，接种于24孔培养板，放在37°C、5%二氧化碳培养箱中进行培养，细胞贴壁生长后弃去培养基，用D-hanks液反复冲洗去除未贴壁细胞，每孔加入含2%NCS的RPMI培养液，用lug/ml的脂多糖(LPS)刺激细胞，或者在LPS刺激细胞的同时加入不同浓度(lug/ml、10ug/ml、IOOug/ml)的安徽贝母酸及其衍生物安徽贝母酸乙酯，分别于刺激后24小时收集细胞培养液的上清液，用于检测炎症介质。用Griess试剂检测一氧化氮(NO)的分泌，酶联免疫法检测肿瘤坏死因子(TNF-a)的水平，结果见下表1。表1二萜类化合物及其衍生物的抗炎活性<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>从上表中可以看出，脂多糖能够显著刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7释放炎症介质，而lOug/ml与lOOug/ml的安徽贝母酸及其衍生物安徽贝母酸乙酯可以抑制脂多糖对巨噬细胞系RAW264.7刺激作用，炎症介质分泌减少，其中lOOug/ml的浓度下显著抑制炎症介质的释放。这说明安徽贝母酸及其衍生物安徽贝母酸乙酯具有较好的抗炎活性。权利要求二萜化合物，其特征是从中草药安徽贝母中提取分离的安徽贝母酸，是一个含硫的半日花烷类二萜化合物，分子中含有一个砜基团，其具有下式(I)所示的化学结构式，其中R为氢，化学名称为12，15-砜基-8，17-半日花二烯-19-酸(12，15-sulfonyl-8(17)，13-labdadien-19-oicacid)。F2009100471032C0000011.tif2.权利要求1所示的化合物药学上可接受盐，如钾、钠、钙、镁、铵等药学上可接受的盐。3.权利要求1所示的化合物，其中R为C1C8的烷基。4.制备权利要求1所示化合物的方法，该方法包括以下步骤a.安徽贝母粉粹后用溶剂提取，回收提取液，得到稠浸膏。b.稠浸膏用各种层析方法进行分离，得到目标化合物。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于提取溶剂可以是水、乙醇、甲醇、丙醇、丁醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯等溶剂或任意比例的醇、水混合溶剂。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于用于层析分离的材料可以是硅胶、氧化铝、硅烷键合硅胶、含有氰基或氨基的硅烷键合硅胶、树脂、凝胶等分离材料。7.用于抗炎的药物组合物，其中包含有效治疗量的权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体。8.用于抗炎的药物组合物，其中包含有效治疗量的权利要求2所述的化合物的衍生物和药学上可接受的载体。9.根据权利要求7、8所述的药物组合物，其特征在于活性成分占总重量的0.199.9%。10.根据权利要求1的化合物在制备抗炎药物中的应用。11.根据权利要求2的化合物在制备抗炎药物中的应用。12.根据权利要求3的化合物在制备抗炎药物中的应用。全文摘要本发明涉及一种含硫二萜化合物、制备方法及其药物组合物。该化合物结构式如(I)所示，其中R为氢，其药学上可接受的盐，或R为C1～C8的烷基。本发明还涉及式(I)该化合物的制备方法、以该化合物为活性成分的药物组合物及其在抗炎方面的药物用途。文档编号A61K36/896GK101824025SQ20091004710公开日2010年9月8日申请日期2009年3月5日优先权日2009年3月5日发明者秦继红申请人:秦继红