专利名称：：杞蓉片中淫羊藿苷的含量测定方法
技术领域：
：本发明涉及杞蓉片的质量控制方法，特别是涉及一种杞蓉片中淫羊藿苷的含量测定方法。
背景技术：
：杞蓉片是由枸杞子、肉苁蓉、锁阳、蛇床子、女贞子、五味子、金樱子、淫羊藿和菟丝子九种原料制备而成，其处方和制法如下处方枸杞子70g肉苁蓉140g锁阳210g蛇床子42g女贞子56g五味子42g金樱子56g淫羊藿98g菟丝子84g制法以上九味，锁阳粉碎成细粉，过筛；五味子、蛇床子第一次加10倍量60%乙醇加热回流提取2小时，第二次加8倍量60%乙醇加热回流提取1小时，合并提取液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.281.30的清膏，备用；其余枸杞子等六味加水煎煮二次，第一次8倍量煎煮3小时，第二次6倍量煎煮2小时，合并煎液，静置，取上清液浓縮至适量，加入上述五味子清膏充分搅匀，浓縮成稠膏，加入锁阳细粉，混匀，制成颗粒，干燥。压制成1000片，包糖衣或薄膜衣，即得。快速，准确地测定杞蓉片中各种原料的含量是控制产品质量的重要指标之一。
发明内容本发明的目的在于提供一种有效控制杞蓉片产品质量的杞蓉片中淫羊藿苷的含量测定方法。本发明的技术方案为—种杞蓉片中淫羊藿苷的含量测定方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行测定，其包括如下步骤1)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；30:70的乙腈_水为流动相；检测波长为270nm;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000;2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；3)供试品溶液的制备取杞蓉片样品，除去包衣，精密称定，研细，再次精密称定，置容器中，精密加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；4)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测定，即得。上述超声处理功率250W，频率50KHz，超声处理2040分钟。本发明以淫羊藿苷为对照品，用高效液相色谱法测定杞蓉片中淫羊藿苷的含量，作为控制杞蓉片的质量依据。按照本发明的方法，结果样品中淫羊藿苷色谱峰与相邻色谱峰分离良好，阴性对照(取淫羊藿)无干扰，本发明的含量测定方法简便、快捷，经方法学验证，该法准确度、精密度、专属性、耐用性、重现性均良好，达到国家药品质量标准。下面为本发明的方法性验证l准确度取同一批已知含量(批号(20070107，含量1.1644mg/g)的供试品6份，每份取样量为供试品取量的50%(即0.25g)，以当前取样含量的l:l，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(0.1036mg/ml)3ml，按含量测定方法测定，计算淫羊藿苷的回收率。结果平均回收率为98.1%，RSD=0.9%(见表1)。表1准确度试验结果试验取样量含量加入量测定结果回收率平均值RSD序号(g)(mg)(mg)(mg)(%)(%)(%)10.26100.30390.31080.608698.020.26130.30420.31080.604496.630.26400.30740.31080.614698.898.10.940.26420.30760.31080.613498.450.26570.30940.31080.617599.160.26320.30650.31080.616697.82精密度2.l重复性取同一批供试品(批号20070107)6份，按含量测定方法测定。结果重复性良好(见表2)。表2重复性试验结果试验号取样量(g)含量(mg/片)平均值(mg/片)RSD%10.51800.45420.49550.44630.48340.4410.4471.140.50820.44350.49680.44860.50920.4522.2中间精密度取同一批供试品(批号20070107)6份，分别由A、B、C三人，在不同的时间，用同一台设备，按含量测定方法测定。结果精密度良好(见表3)。表3中间精密度试验结果4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>3专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20iU，分别注入液相色谱仪，按含量测定的方法测定。结果未见阴性对照溶液有干扰。4线性考察分别精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(0.1036mg/g)3、5、10、15、20iil，注入液相色谱仪，按含量测定的方法测定，以对照品的浓度为横坐标，测得的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=2182.5113X+5.81649，r=0.9999。结果表明，淫羊藿苷对照品溶液在0.31082.072iig之间与其峰面积呈良好的线性关系(见表4)。表4线性考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>5测定范围部颁标准规定的最低限度为每lg含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4。015)计，不得少于1.10mg。故按限度的70%和300%(即0.773.30mg)考察测定范围的准确度。范围准确度取同一批已知含量(批号20070107，含量1.1644mg/g)的供试品12份，按范围限度的50%取样，其中低限取6份，每份0.34g，高限取6份，每份1.46g，按当前取样含量约1:1分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(0.1036mg/ml)，低限2ml，高限8ml，按含量测定方法测定，计算淫羊藿苷的回收率。结果低限平均回收率为96.84%，RSD=0.8%;高限平均回收率为97.22%，RSD=0.8%(见表5)。表5范围准确度试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>—(含量测定取样量*拟测定的高低限度浓度)x0.5已知样品的含量浓度根据线性、精密度和准确度的试结果，本方法适合检测含量在0.773.30mg/g的供试品。6耐用性6.!稳定性试验取同一份供试品溶液，自制备后，按含量测定方法，分别在0、2、4、6、8小时进样测定。结果供试品溶液自制备后8小时内测定基本稳定(见表6)。表6稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>6.2不同色谱柱的比较取同一批样品(批号20070107)2份，按含量测定法，分另U用PhenomenexGeminiC18(250mmX4.6mm，5iim，柱号399977—11)、AgillentzorbaxeclipseC18(250mmX4.6mm，5um，柱号990967-902)、WaterssymmetryC18(250mmX4.6mm，5ym，柱号02103612413670)三种品牌的色谱柱测定，结果无明显差别(见表7)。表7不同色谱柱的测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>具体实施例方式下面所例举的具体实施例仅仅是对本发明的解释说明，不构成对本发明的任何限制。照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(30:70)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.lmg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，再次精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率50KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各101，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40015)计，不得少于0.33mg。权利要求一种杞蓉片中淫羊藿苷的含量测定方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行测定，其包括如下步骤1)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；30∶70的乙腈-水为流动相；检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000；2)对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；3)供试品溶液的制备取杞蓉片样品，除去包衣，精密称定，研细，再次精密称定，置容器中，精密加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；4)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.按照权利要求所述的杞蓉片中淫羊藿苷的含量测定方法，其特征是上述超声处理功率250W，频率50KHz，超声处理2040分钟。全文摘要本发明涉及一种杞蓉片中淫羊藿苷的含量测定方法，该方法采用高效液相色谱法进行测定，以淫羊藿苷为对照品，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，30∶70的乙腈-水为流动相的高效液相色谱法。按照本发明的方法，结果样品中淫羊藿苷色谱峰与相邻色谱峰分离良好，阴性对照(取淫羊藿)无干扰，本发明的含量测定方法简便、快捷，经方法学验证，该法准确度、精密度、专属性、耐用性、重现性均良好，达到国家药品质量标准。文档编号A61K31/7048GK101791358SQ20101013980公开日2010年8月4日申请日期2010年4月7日优先权日2010年4月7日发明者丁建宝,亓伟,冯梅,孙志刚,田文荣申请人:宁夏启元国药有限公司