专利名称：：一种中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种属于中药制剂用途领域，具体涉及一种中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。
背景技术：
：骨质疏松症是以骨量减少，骨的微观结构退化为特征，致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。随着社会老龄化进程，骨质疏松症的发病率逐年升高。据我国流行病学调查报告，骨质疏松症50岁60岁发病率为21%，60岁70岁发病率为58%;尤其是绝经后妇女，骨质疏松症和骨折并发症发病率更高，男女比率约1:8。骨质疏松症主要分为原发性和继发性两大类。原发性骨质疏松是由于年龄增加或妇女绝经后骨组织发生的一种生理性变化。因某些疾病(如内分泌紊乱钙吸收障碍等慢性疾病)、营养不良及药物诱发的骨质疏松称为继发性骨质疏松症。国内外治疗骨质疏松症通常采用钙制剂或雌激素替代疗法。但钙制剂大多吸收不好或吸收后钙磷不能在骨骼中沉积。雌激素替代疗法，能直接改善绝经后妇女骨代谢，有效地防止绝经后头几年骨的进行性丢失，但短期服用，其疗效难以持久，长期服用容易导致各种并发症(如乳腺癌、子宫内膜癌等)。
发明内容本发明的目的是为了提供一种中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。—种中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用，所述中药组合物包含以下重量份配比的原料药狗脊600份黑老虎360份千斤拔144份桑寄生180份女贞子30份鸡血藤360份金樱子192份牛大力240份菟丝子30份制备方法为取狗脊、鸡血藤、金樱子、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓縮成稠膏；黑老虎(皮部)与其余桑寄生等四味粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀；加入辅料制成临床上可接受的剂型。—种中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用，所述中药组合物还可以是由以下重量份配比的原料药组成狗脊600份黑老虎360份千斤拔144份桑寄生180份女贞子30份鸡血藤360份金樱子192份牛大力240份菟丝子30份延胡索26份两面针26份乳香12份没药20份。制备方法取狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，滤过，合并滤液，浓縮成稠膏；其余牛大力等八味及黑老虎(皮部)共粉碎成粗粉，加入上述稠膏，3混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀；加入辅料制成临床上可接受的剂型。上述治疗骨质疏松症的药物剂型可以是丸剂、胶囊剂和片剂。经药效学试验表明，本发明所涉及的中药组合物对老龄去势老龄SD大鼠骨质疏松症均有一定的提高骨质疏松大鼠血清钙、磷含量的作用，提高骨形成指标碱性磷酸酶，降低骨吸收的指标羟脯氨酸、抗酒石酸酸性磷酸酶的作用；骨生物力学试验也表明壮腰健肾丸高剂量组雄性大鼠左侧股骨弯曲试验中最大荷载有增加的趋势；从骨组织计量学看，能明显提高雌性大鼠骨小梁面积百分比及骨小梁的厚度。因此，从给药后动物的组织计量学、生物力学以及试验中测试的众多指标综合分析，能对骨质疏松症有明显的治疗作用。具体实施例方式本发明所涉及的中药组合物是得到国家食品药品监督管理局批准的壮腰健肾丸和舒筋健腰丸。壮腰健肾丸是由以下重量份配比的原料药组成(在本发明实施例中，重量份的单位是g):狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女贞子30g、鸡血藤360g、金樱子192g、牛大力240g、菟丝子30g。舒筋健腰丸是由以下重量配比的原料药组成狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女贞子30g、鸡血藤360g、金樱子192g、牛大力240g、菟丝子30g、延胡索26g、两面针26g、乳香12g、没药20g。药效学试验1.试验方法剂量设计根据其临床拟用法用量，本专题选用壮腰健肾丸低剂量1.Og/kg、壮腰健肾丸高剂量3.Og/kg，舒筋健腰丸低剂量1.35g/kg、舒筋健腰丸高剂量4.Og药丸/kg进行药效学筛选(壮腰健肾丸、舒筋健腰丸低、高剂量组按等效剂量折算法均约相当于成人临床日用量的1、3倍)。阳性药选用已上市的仙灵骨葆胶囊，该药是在贵州民间验方的基础上发掘整理而成的苗族药，该产品疗效明确，销售状况良好，故选用其为阳性对照药。给药剂量为1.0g/kg(均按药丸计，按等效剂量折算法约相当于成人临床日用量的4倍，临床人用最大剂量为3g/天)。以上各组给药途径均为灌胃给药，给药容积均为15ml/kg。2.分组与给药试验选用检疫合格11-12月龄SD大鼠分为7组除伪手术组外，其余大鼠行去势手术后2周按体重进行随机均衡分组模型对照组，阳性药组(仙灵骨葆胶囊)，壮腰健肾丸高、低剂量组，舒筋健腰丸高、低剂量组。各组在检疫期结束后施行去势手术雌性大鼠切除双侧卵巢及输卵管；雄性大鼠摘除两侧睾丸。伪手术组仅切除包裹卵巢的一小团脂肪组织。除伪手术组、去势模型组给予等量蒸馏水外，其余各组每天给药一次，本试验给药周期设为连续给药12周。3.动物的末次处理试验结束前大鼠禁食一夜，次日上午用10%水合氯醛腹腔注射麻醉动物(拟定剂量为3.Oml/kg，具体的剂量麻醉人员可以根据动物的情况作相应的调整)腹主动脉采血制备血清，采血后尽快分离血清。血清样本在-2(TC保存待测。血清用于测定血清钙(Ca)、磷(IP)、碱性磷酸酶(ALT)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、羟辅氨酸(HOP)、骨钙素等指标。采血后腹主动脉放血处死大鼠，制作骨标本取下大鼠左右股骨，胫骨，除净附在骨上的肌肉和软组织。取胫骨在室温下，于4%福尔马林中固定用于骨组织计量学的检测，其余骨标本制取后用生理盐水纱布包裹，置于_201:低温冰箱保存待测。4.统计分析方法由于考虑到12月龄的雌性大鼠与雄性大鼠体重相差太大，相应的雌雄大鼠之间骨指数、生物力学及组织计量学应该进行雌雄分开统计，而血清生化指标由于雌雄之间差异较小，故合并进行统计。统计时所有数据均输入EXCEL2003统计软件进行相应的统计处理，各组计量数据均采用又土S表示。对SD大鼠血清生化指标的影响1.试验从_201:冰箱中取出动物末次处理后保存的血清，分别检测血清f丐(Ca)、血清磷(IP)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(Cre)活性采用生化自动分析仪测定。血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及羟脯氨酸(HOP)，血清骨钙素根据试剂盒使用说明书测定。本试验骨吸收的指标选血清抗酒石酸酸性磷酸酶(StrACP)及羟脯氨酸(HOP)，骨形成的指标选血清碱性磷酸酶及骨钙素。2.结果(附表1)附表1壮腰健肾丸、舒筋健腰丸对老龄去势大鼠血清生化指标的影响(X土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与模型对照组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。试验结果表明本实验中与伪手术组相比，模型组大鼠血清钙、磷水平稍低于伪手术组，壮腰健肾丸、舒筋健腰丸高剂量均有一定的提高骨质疏松大鼠血清钙或血清磷的作用，推测壮腰健肾丸、舒筋健腰丸高剂量可能是通过提高钙、磷水平途径从而增加骨的强度。与模型对照组相比，壮腰健肾丸高剂量组血清羟脯氨酸、抗酒石酸酸性磷酸酶明显减少，碱性磷酸酶明显升高，骨钙素亦有增加的趋势；舒筋健腰丸高剂量组抗酒石酸酸性磷酸酶明显减少，碱性磷酸酶明显升高，上述试验结果提示，壮腰健肾丸、舒筋健腰丸高剂量组均具有一定的降低骨吸收的作用和提高骨形成的作用。对SD大鼠骨组织计量学的测定1材料与仪器病理图像分析软件Image-ProPlus6.O，编制单位MediaCybernetics公司2骨病理片的制作对于动物末次处理后的胫骨，骨病理片采用脱钙法制作。制作方法如下①取右侧胫骨近端1/3，室温置于10%福尔马林中固定24h，流水冲洗24小时后移入10%EDTA溶液中脱钙，至骨组织无气泡发生或软化为宜，或用大头针轻轻能剌进为度，自来水冲洗24小时(脱f丐过程注意避光)，②然后转入70%酒精内脱水3小时，再以80%酒精脱水3小时，90%、95%酒精三次脱水各1小时，100%酒精三次脱水各1小时，③投入苯甲酸甲酯中透明过夜，浸石蜡50分钟包埋，切片厚度5iim。⑤H-E染色。3.结果在显微镜下可见伪手术组的胫骨近端骨小粱较为密集，互相连接成立体网状，骨小梁表面光滑，骨小粱的间距小，而模型对照组动物的骨小梁大多数表现为骨小梁数量明显减少，骨小粱排列稀疏.骨小梁之间的间隙增宽，骨髓腔扩大，并出现骨小梁的空缺区域。骨小粱粗细不均.有较多的骨吸收陷窝，部分区域的骨小粱出现断裂、残端游离，骨小粱的连接中断，三维结构受到破坏。伪手术祖及去势大鼠骨小梁之间的间隙中均有较多的脂肪细胞。试验结果(附表2、3):附表2.壮腰健肾丸、舒筋健腰丸对老龄去势雌性大鼠组织计量的影响(X土S)组别剂量(g/kg)动物数骨小梁面积百分比(％)骨小梁厚度骨小梁数目(个/mm2)骨小梁分离度(拜)伪手术-922.49±4.13**57.05±10.843.98±0.60**199.91±37.42*模型对-813.26±4.5552.48±9.172.48±0.69398.13±199.37阳性对1.01012.55±3.4653.32士6.512.38±0.7713±I34.29壮腰健肾丸高3.01120.49±5.7广64.96±6.17**3.18±0.81270.52±85.02壮腰健肾丸低1.0914.91±3.1756.28±9.842.67±0.53335息69.54舒筋健腰丸高4.01115.16±4.7754.46±10.892.82±0.95344.57±141.94剂量组舒筋健腰丸低1.35917.79±4.2551.44±3.693.44±0.73*255.01±75.33与模型对照组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。附表3.壮腰健肾丸、舒筋健腰丸对老龄去势雄性大鼠组织计量的影响(文土S)7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与模型对照组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。本试验的骨组织形态计量学显示模型组雌雄大鼠均表现出骨小梁面积百分数、骨小梁数目明显减少，骨小梁分离度明显增大，雌、雄性大鼠的骨小梁厚度都有减少的趋势。本试验结果提示雌雄老龄大鼠去势后成功地复制了骨质疏松症模型。经治疗后，壮腰健肾丸高剂量组雌性骨质疏松大鼠的骨小梁面积百分数、骨小梁厚度明显增加，骨小梁数目有增加趋势和骨小梁分离度有减少的趋势；壮腰健肾丸低剂量组雌性骨质疏松大鼠的骨小梁数目明显增加，骨小梁面积百分比有增加和骨小梁分离度有减少的趋势；壮腰健肾丸低剂量组雄性骨质疏松大鼠的骨小梁厚度明显增加；试验结果提示壮腰健肾丸高剂量、舒筋健腰丸低剂量能减少雌性大鼠去势所引起的骨丢失，改善骨小梁的形态，起到的骨质疏松症的目的。对SD大鼠骨生物力学的影响1材料与仪器YLS-16A小动物骨骼强度测定仪，山东省医学科学院设备站生产。2方法与结果从-2(TC冰箱中取出股骨、胫骨和腰椎骨，室温自然解冻。方法使用YLS-16小动物骨骼强度测定仪依照使用说明进行下列测定①左侧股骨最大荷载测试(三点弯曲试验)。③左侧胫骨骨最大荷载测试(三点弯曲试验)。每个样本放置在仪器上的位置及方向保持一致。试验结果(附表4、5):附表4.壮腰健肾丸、舒筋健腰丸对老龄去势雌性大鼠生物力学指标d土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与模型对照组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。附表5.壮腰健肾丸、舒筋健腰丸对老龄去势雄性大鼠生物力学指标(^土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与模型对照组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。试验结果(附表4、5)表明在本实验中，模型组雄性大鼠的股骨、胫骨弯曲试验最大负荷均显著低于伪手术组，表明雄性大鼠去势后可导致大鼠骨生物力学性能的降低；与模型组相比，壮腰健肾丸高、低剂量组雄性大鼠左侧股骨、胫骨弯曲试验(折断)的最大荷载有增加的趋势。以上试验结果表明壮腰健肾丸、舒筋健腰丸均有一定的提高骨质疏松大鼠血清钙、磷含量的作用，提高骨形成指标碱性磷酸酶，降低骨吸收的指标羟脯氨酸、抗酒石酸酸性磷酸酶的作用；从生物力学试验也表明壮腰健肾丸高剂量组雄性大鼠左侧股骨弯曲试验中最大荷载有增加的趋势；从组织计量学看，壮腰健肾丸高剂量组明显提高雌性大鼠骨小梁面积百分比及骨小梁的厚度。因此，从给药后动物的组织计量学、生物力学以及试验中测试的众多指标综合分析，在本试验条件下，对12月龄的老龄SD大鼠去势所致的骨质疏松经壮腰健肾丸、舒筋健腰丸14周的给药后的表现出一定的抗骨质疏松的作用，其中壮腰健肾丸高剂量组的作用强于其它给药剂量组，壮腰健肾丸的抗骨质疏松作用亦优于阳性药仙灵骨葆胶囊。具体实施例如下所示实施例1狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女贞子30g、鸡血藤360g、金樱子192g、牛大力240g、菟丝子30g。取狗脊、鸡血藤、金樱子、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓縮成稠膏；黑老虎(皮部)与其余桑寄生等四味粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀；每100g粉末用炼蜜115135g制成大蜜丸；或每100g粉末用炼蜜5060g，用适量水泛丸，制成水蜜丸。实施例2狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女贞子30g、鸡血藤360g、金樱子192g、牛大力240g、菟丝子30g。取狗脊、鸡血藤、金樱子、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓縮成稠膏；黑老虎(皮部)与其余桑寄生等四味粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀；加入适量硬脂酸镁，用压片机压制成片剂。实施例3狗脊600、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女贞子30g、鸡血藤360g、金樱子192g、牛大力240g、菟丝子30g、延胡索26g、两面针26g、乳香12g、没药20g。取狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，滤过，合并滤液，浓縮成稠膏；其余牛大力等八昧及黑老虎(皮部)共粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀；每100g粉末用炼蜜3540g，用适量的水泛丸制成水蜜丸。实施例4狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女贞子30g、鸡血藤360g、金樱子192g、牛大力240g、菟丝子30g、延胡索26g、两面针26g、乳香12g、没药20g。取狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，滤过，合并滤液，浓縮成稠膏；其余牛大力等八味及黑老虎(皮部)共粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀；将粉末装入胶囊，制成胶囊剂。权利要求一种中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用，其特征在于所述中药组合物包含以下重量份配比的原料药狗脊600份黑老虎360份千斤拔144份桑寄生180份女贞子30份鸡血藤360份金樱子192份牛大力240份菟丝子30份。2.根据权利要求1所述的中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用，其特征在于所述中药组合物还包含以下重量份配比的原料药延胡索26份两面针26份乳香12份没药20份。3.根据权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用，其特征在于所述治疗骨质疏松症的药物剂型可以是丸剂、胶囊剂或片剂。全文摘要本发明是关于一种中药组合物在制备治疗骨质疏松症药物中的应用，所述中药组合物包含以下重量份配比的原料药狗脊600份、黑老虎360份、千斤拔144份、桑寄生180份、女贞子30份、鸡血藤360份、金樱子192份、牛大力240份、菟丝子30份。本发明从给药后动物的组织计量学、生物力学以及试验中测试的众多指标综合分析，能对骨质疏松症有明显的治疗作用。文档编号A61K36/758GK101791341SQ20101013950公开日2010年8月4日申请日期2010年3月30日优先权日2010年3月30日发明者何风雷,李卓璐,莫国强,郭钟慧申请人:广州陈李济药厂