专利名称：蛇孢菌素类二倍半萜化合物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蛇孢菌素类二倍半萜化合物及其制备方法与应用。
背景技术：
蛇孢菌素(ophiobolin)类二倍半職烯化合物已有一些文献报道,该类化合物显示了广谱的抗菌活性，如抗线虫、抗真菌及抗细菌等。据报道，该家族的ophiobolin A能抑制钙离子活化的环核苷酸磷酸二酯酶的活性并导致小鼠白血病细胞L1210细胞的凋亡。到目前为止已发现该类化合物30余种，该类化合物的结构特征均具有一个5-8-5三环结构。此外，有14、17位形成环氧结构的，如ophiobolin A、ophiobolin J等(Evidente A, Andolfi A, Cimmino A, Vurro M, Fracchiolla M, Charudattan R, MottaA.0phiobolin E and 8~ep1-ophiobolin J produced by Drechslera gigantea，apotential mycoherbicide of weedy grasses.Phytochemistry.2006.67(20):2281-7.)；有 16、17 位双键被氣化而饱和的，如 ophiobolins B_D、ophiobolin F、ophiobolin M等(Tsipouras A， Adefarati AA, Tkacz JS, etal.0phiobolin M and analogues，noncompetitive inhibitors of ivermectin binding with nematocidal activity.Bioorg Med Chem.1996.4⑷:531-6.)；有5、21位之间形成内酯环或半缩酮的，如ophiobolin A lactone、ophiobolin H、ophiobolin L 等(Wei, H ;Itoh，T ;Kinoshita，M ；Nakai, Y ;Kurotaki，M;Kobayashi，M；Cytotoxic sesterterpenes，6-epi_ophiobolin Gand 6-ep1-ophiobolin N， from marine derived fungus Emericella variecolor GF10.Tetrahedron.2004.60(28):6015-9)。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗肿瘤活性的新化合物及其制备方法。本发明所提供的化合物是首次从地衣内生真菌Ulocladium sp.的发酵物中分离的结构新颖的蛇孢菌素(ophiobolin)类二倍半職烯化合物,其结构式如式I所示:
权利要求
1.结构式如式I所示化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物:
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物，其特征在于:所述化合物为下述I)-5)中的任意一种: 1)式I中，C3与C4之间形成碳碳双键、R2为4-甲基-3，4-二羟基-戊烯基的化合物，其结构式如式II所示； 2)式I中，C3与C4之间形成碳碳双键、R2为3-甲氧基-4-甲基-4-羟基-戊烯基的化合物，其结构式如式III所示； 3)式I中，C3与C4之间形成碳碳单键且R1为羟基、R2为3-甲氧基-4-甲基-4-羟基-戊烯基的化合物，其结构式如式IV所示； 4)式I中，C3与C4之间形成碳碳双键、民为2-(2’，2’，4’，4’-四甲基_1’，3’ -二氧戊环基)-乙烯基的化合物，其结构式如式V所示； 5)式I中，C3与C4之间形成碳碳双键、R2为2，2-二甲基-2，5- 二氢呋喃环基的化合物，其结构式如式VI所示；
3.制备权利要求1中式I所示化合物的方法，包括下述步骤: 1)将Ulocladiumsp.进行发酵培养,得到菌丝体和发酵液的发酵培养物； 2)将所述发酵培养物中的菌丝体和发酵液分离，所得菌丝体破碎后用丙酮水溶液浸提，将丙酮水溶液浸提液浓缩至不含丙酮，水层用乙酸乙酯进行萃取，对萃取液浓缩得菌丝体浸膏；再将所述发酵液浓缩后用乙酸乙酯进行萃取，对萃取液浓缩得发酵液浸膏；将所述菌丝体浸膏和发酵液浸膏合并，即为粗提物； 3)将所述粗提物经硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮为溶剂进行梯度洗脱，收集石油醚-丙酮体积比为10: I梯度的洗脱物；将收集的洗脱物经凝胶柱层析，以氯仿-甲醇体积比为1:1的溶剂为洗脱剂；洗脱产物再经反相硅胶柱层析，以甲醇-水为溶剂进行梯度洗脱，收集甲醇-水体积比为70: 30梯度的洗脱产物；将所述洗脱产物经制备HPLC柱分离纯化，以甲醇-水为溶剂进行梯度洗脱，得到式I所示的化合物； 所述经制备HPLC柱分离纯化的过程中，以甲醇-水为溶剂进行梯度洗脱时，起始洗脱溶剂为甲醇-水体积比为20: 80的混合溶剂，终止洗脱溶剂为100%甲醇，洗脱时间为60分钟。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于:步骤I)中所述发酵培养的培养基组成为:每升培养基含土豆200g、葡萄糖20g，其pH值为6.5 ; 所述发酵培养的条件为:在25-30°C静置培养14-21天； 所述Ulocladium sp.，它的保藏编号为CGMCC N0.5507 ； 步骤2)中所述丙酮水溶液中丙酮的体积分数60-90%，具体为70%。
5.权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物在制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂中的应用或在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于:所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞，所述癌细胞具体为宫颈癌细胞、肺癌细胞、口腔表皮样癌细胞或肝癌细胞。
7.权利要求5所述的应用，其特征在于:所述肿瘤为癌；所述癌具体为宫颈癌、肺癌、口腔癌或肝癌。
8.—种药物，它的有效成分为权利要求1或2中所述化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物；所述药物为抑制真核生物肿瘤细胞增殖的药物或预防和/或治疗肿瘤的药物。
9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于:所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞具体为宫颈癌细胞、肺癌细胞、口腔表皮样癌细胞或肝癌细胞； 所述肿瘤为癌；所述癌具体为宫颈癌、肺癌、口腔癌或肝癌。
10.Ulocladium sp.，其保藏号为 CGMCC N0.5507。
全文摘要
本发明公开了一种蛇孢菌素类二倍半萜化合物及其制备方法与应用。本发明所提供的化合物的结构式如式I所示，其中，R2为-CH＝CH-R3、含氧杂环基或烷基取代的含氧杂环基；所述R3为烃基或含氧杂环基或烷基取代的含氧杂环基；C3与C4之间形成碳碳单键或碳碳双键，当C3与C4之间形成碳碳双键时，R1不存在；当C3与C4之间形成碳碳单键时，R1为羟基。上述化合物是分离得到地衣内生真菌Ulocladium sp.经过液体发酵，对发酵产物进行分离纯化得到的。经实验证实，该类化合物可作为细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂。
文档编号A61P35/00GK103172507SQ20111043175
公开日2013年6月26日 申请日期2011年12月21日 优先权日2011年12月21日
发明者刘宏伟, 张立新, 王全新, 郭良栋 申请人:中国科学院微生物研究所