专利名称：螺旋藻多糖在制备防治有机磷农药所致雄性生殖毒性的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及涉及螺旋藻多糖的应用，具体涉及螺旋藻多糖在制备预防与治疗因有机磷农药所致雄性生殖毒性疾病的药物中的应用。
背景技术：
有机磷农药(OPs)是一类高效、低残留的农药，已经成为当今中国使用的最广谱农药。有机磷农药的使用为农、林、渔业的增产丰收立下了汗马功劳，但随着有机磷农药的广泛使用，其在蔬菜水果等食物中的残留现象也较为普遍。虽然大多数人已经注意预防有机磷农药的急性中中毒，但有机磷农药的长期、低剂量、慢性暴露对人类健康的影响，尤其是对男性生殖力影响，还未引起人们的足够重视。有机磷农药具有生殖毒性，对男性生殖系统的影响更为显著。国内外流行病学研究发现，在长期遭受有机磷农药污染的地区或者农药厂的工人，男性精子的数量和质量均受到影响，造成精子数量减少、精子存活率和活动度下降、精子畸形率增加，最终导致男性不育人数明显增多(Recio-Vega R, Ocampo-Gomez G, Borja-Aburto VH, etal.Organophosphorus pesticide exposure decreases sperm quality-associationbetween sperm parameters and urinary pesticide levels. J Appl Toxicol,2008Jul,28 (5) =674-680.)。我们和国内外多位学者的研究发现，有机磷农药对雄性生殖生殖系统具有损伤作用，有机磷农药可直接作用于睾丸、附睾、前列腺、精囊等组织，破坏其结构，最终导致男性生殖力的下降(Koureas M, Tsakalof A, Tsatsakis A, et al. Systematic reviewof biomonitoring studies to determine the association between exposure toorganophosphorus and pyrethroid insecticides and human health outcomes. ToxicolLett,20110ct 15.)。因此探讨有机磷农药的雄性生殖毒性作用机制，寻找有效的干预药物，对于保护我国人民的身体健康及优生优育至关重要。螺旋藻多糖(Spriulina polysacchrides)是采用现代生物化学技术与工艺,从螺旋藻中提取的，含多种且生物活性更高的纯天然生物制品。螺旋藻多糖对体内腹水型肝癌细胞有显著的抑制作用；螺旋藻多糖对电离辐射的损伤具有明显的防护效果，还能显著减轻小鼠骨髓细胞的辐射遗传损伤；螺旋藻多糖通过抑制机体内自由基氧化反应，降低脂质过氧化作用，减少组织脂褐质的形成，可以达到减缓机体衰老的作用；螺旋藻多糖还具有增强骨髓细胞增殖活力、促进DNA修复合成作用，有良好抗辐射功能和降低放疗、化疗副作用；螺旋藻多糖能提高机体非特异性的细胞免疫功能，而且能促进机体转异性体液免疫功能，提高低御病菌、病毒入侵的能力；螺旋藻多糖还可作为肝炎、糖尿病、胃溃疡的辅助治疗。螺旋藻多糖无任何毒副作用，可以长期服用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种螺旋藻多糖的新用途，即在制备防治因有机磷农药所致雄性生殖毒性疾病的药物中的应用。更进一步的说是在制备抑制因有机磷农药所致精子活率降低、精子畸形率升高、睾丸组织SOD活性升高、睾丸组织MDA含量增多、睾丸组织LDH活性下降的药物中的应用。其中所述疾病为因有机磷农药所致的雄性生殖毒性疾病，主要包括精子数量降低、精子活动性下降、变性精子数量增多、精液减少、精子畸形率升高、生殖器畸变、睾丸疾病、前列腺疾病、精囊疾病、男性不育等。本发明所述有机磷农药为久效磷、辛硫磷、对氧磷、三唑磷等常用有机磷农药。本发明所属药物是指以螺旋藻多糖为主要活性成分，与可药用载体制成的医疗上可接受的制齐U，如片剂、丸剂或胶囊剂等。本发明通过动物实验研究发现服用螺旋藻多糖可达到防治低浓度有机磷农药所 致雄性生殖毒性的效果，螺旋藻多糖的治疗有效量，应按照治疗者的年龄、身体状况、接触有机磷农药量等确定。本发明所述的螺旋藻多糖是螺旋藻的主要活性成分，其具有免疫调节活性，能起至IJ抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗细菌、抗电离辐射、降低放疗、化疗副作用等作用，并且目前尚未发现其有任何毒副作用。螺旋藻多糖可以通过市售得到，也可以通过多种方法提取获得，提取方法成熟。本发明人以高毒有机磷农药久效磷和低毒有机磷农药辛硫磷为代表，研究了低浓度有机磷农药的雄性生殖毒性作用，发现有机磷农药的雄性生殖毒性作用主要是引起雄性小鼠睾丸脏器系数和附睾脏器系数下降；精子数量减少、精子活率降低、精子畸形率增加；诱导睾丸组织SOD活性升高、LDH活性降低、MDA含量降低引起，睾丸组织氧化损伤，从而引起如精子数量降低、精子活动性下降、变性精子数量增多、精液减少、生殖器畸变、睾丸疾病、前列腺疾病、精囊疾病、男性不孕等一系列疾病。 本发明通过动物实验观察了有机磷农药对雄性小鼠的生殖毒性作用，以及螺旋藻多糖对有机磷农药雄性生殖毒性的抑制作用。经研究发现，螺旋藻多糖能抑制(如久效磷和辛硫磷)有机磷农药所致的雄性小鼠睾丸脏器系数和附睾脏器系数下降；精子数量减少、精子活率降低、精子畸形率增加；睾丸组织SOD活性升高、LDH活性降低、MDA含量降低引起，睾丸组织氧化损伤；螺旋藻多糖能抑制有机磷农药的雄性生殖毒性，有较好的剂量依赖性。本发明的有益效果在于1.本发明提供了有机磷农药对雄性生殖毒性作用的直接证据，并以此寻找有效的干预药物。2.本发明提供了螺旋藻多糖的医药新用途，其对有机磷农药引起的雄性生殖毒性具有很好的抑制和保护作用。螺旋藻多糖能抑制有机磷农药(如久效磷和辛硫磷)所致的雄性小鼠睾丸脏器系数和附睾脏器系数下降；精子数量减少、精子活率降低、精子畸形率增加；睾丸组织SOD活性升高、LDH活性降低、MDA含量降低引起，睾丸组织氧化损伤；螺旋藻多糖能抑制有机磷农药的雄性生殖毒性，有较好的剂量依赖性。
3、本发明对长期接触有机磷农药的人尤其是农药厂的工人和农民具有深远的意义，能起到保护男性及其子代身体健康、提高生活质量、降低不孕不育、优生优育、延长寿命等作用。
具体实施例方式以下通过试验例来进一步阐述本发明中螺旋藻多糖的医药新用途及其有益效果，但不用来限制本发明的范围。试验例I :螺旋藻多糖抑制久效磷所致雄性生殖毒性的试验研究I材料与方法I. I 材料久效磷(40%的水溶性制剂，青岛农药厂)，螺旋藻多糖(中国海洋大学生命学院提供)，超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒均购自南京建成生物公司。I. 2实验动物及分组选择健康SPF级雄性昆明小鼠90只，体重在(25 ± 2) g之间，购自新乡医学院动物实验中心。适应性饲养7d，室温(25±2)°C，湿度50%-55%。将小鼠随机分为6组，每组15只。分别为正常对照组(A)、螺旋藻多糖对照组(B)、久效磷对照组(C)、螺旋藻多糖低剂量保护组(D)、螺旋藻多糖中剂量保护组(E)。其中对照组(A)不给药，给予蒸馏水，螺旋藻多糖对照组(B)给予螺旋藻多糖200mg/kg，久效磷对照组(C)给予O. 20mg/kg,螺旋藻多糖低剂量保护组(D)给予螺旋藻多糖100mg/kg+久效磷 O. 20mg/kg,螺旋藻多糖中剂量保护组(E)给予螺旋藻多糖200mg/kg+久效磷O. 20mg/kg,螺旋藻多糖高剂量保护组(F)给予螺旋藻多糖400mg/kg+久效磷O. 20mg/kg。并保证充足的饮水和饲料供应。在连续60d采用灌胃方式进行染毒，染毒剂量为10ml/kg，每天I次。I. 3统计学方法采用SPSS 10. O软件进行统计学分析。计量资料实验数据均以x±s进行表示，多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析(One Way AN0VA)。进一步进行组间两两比较时，若方差齐时，采用SNK检验；若方差不齐时，采用Games-Howell检验。计数资料实验数据均以率表示，组间两两比较采用X2检验。以P <0.05为差异有统计学意义。2方法与结果染毒60天后，称量体重，处死小鼠，立即取出双侧睾丸及附睾，剥离周围脂肪组织和结缔组织准确称量睾丸和附睾的重量，计算睾丸及附睾的脏器系数；将双侧附睾置于盛有生理盐水的培养皿中剪碎，制备精子悬液。采用血细胞计数法计数上述精子悬液中的精子数，并换算为每克附睾精子数；取混匀的精子悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片于光镜下观察精子活动力，按WHO推荐的方法，按精子的泳动状态将精子活动度分为四级1级直线运动明显活跃，活动良好；11级直线运动，活动稍差；ΙΠ级精子向前移动的能力差，在原处移动或作旋转运动;IV级:精子无任何活动，每只至少检查400个精子，计算精子活率(精子活率=Ι+ΙΙ+ΙΠ级精子数/I+II+III+IV级精子数X100% );将部分精子悬液作涂片，空气干燥后，用甲醇固定5min，干燥后用2%伊红水溶液染色lh，用水轻冲，干燥，在光镜下，每只小鼠检查至少检查400个精子，记录精子的畸形类型和数量，凡精子轮廓不清，有头无尾，或头部与其它精子或碎片重叠，或两个以上精子重叠，或明显属人为剪碎者均不计算，畸形类型主要分为无钩、香蕉形、无定形、胖头、尾折叠、双头、双尾等，畸形率以百分率表示(％);取睾丸组织加入适量的冰生理盐水，在冰浴条件下用玻璃匀浆器研磨制成睾丸组织匀浆，然后在低温(4°C)条件下以2000rpm，离心lOmin，静置片刻，取上清液，参照试剂盒说明书，检测睾丸匀浆液中SOD、LDH活性和MDA含量。表I螺旋藻多糖对久效磷所致小鼠睾丸和附睾脏器系数下降的保护作用(η = 15)睾丸脏器系数附睾脏器系数
组别
(g/100g 体重)(g/100g 体重)A0·76±0·07Δ0·26±0·03Δ
B0.78±0.05Λ0.27±0.06Λ
C0.63±0.09*O. 18±0.05*D0.66±0.04* O. 21±0.07*E0·69±0·03Λ 0·23±0·04Λ
F0.72±0.06Λ 0.24±0.02Λ注与A组比较*Ρ < O. 05，与C组比较Λ P < O. 05。表I显示，与正常对照组(A)相比，久效磷对照组(C)睾丸脏器系数和附睾脏器系数均下降，差异有统计学意义(P <0.05)。螺旋藻多糖保护组能抑制久效磷染毒引起的小鼠睾丸脏器系数和附睾脏器系数下降，以螺旋藻多糖高剂量保护组(F)作用最显著，螺旋藻多糖高剂量保护组(F)睾丸脏器系数和附睾脏器系数，与久效磷对照组(C)相比有显著差异(P <0.05)，与正常对照组(A)相比，没有显著差异(Ρ>0.05)。表2螺旋藻多糖对久效磷所致小鼠精子数量、精子活率下降及畸形率升高的保护作用(η = 15)
精子数暈计数精子数精子活率精子畸形率
组別
(Χ106)(个)(%)(%)
A72·36±17·42Λ600078· 7±7·21Λ 7·37±0. 72Λ
B74. 63土丄8. 37Λ600080. 68±6. 82Λ 6. 53±0. 5iA
C44. 86±6. 21*600048. 74±7. 29* 26. 37±4.67*
D51. 73±7. 08*Λ600060. 36±8. 32*Λ 17. 74±2. 39*
E59. 55±10. 23*Λ600069. 15± 10. 37*Λ 11. 58±0. 92*Λ
F67. 79±15.64Δ600074.89±8. 54Λ 8.54Λ注与A组比较*Ρ < O. 05，与C组比较Λ P < O. 05。表2可见，与正常对照组(A)相比，久效磷磷对照组(C)小鼠精子数量和精子活率下降，精子畸形率升高，差异有统计学意义(P <0.05)。螺旋藻多糖保护组能抑制久效磷染毒引起的小鼠精子数量和精子活率下降及精子畸形率升高，以螺旋藻多糖高剂量保护组(F)作用最显著，螺旋藻多糖高剂量保护组(F)小鼠精子数量、精子活率及精子畸形率，与久效磷对照组(C)相比有显著差异(P < O. 05)，与正常对照组(A)相比，没有显著差异(P> O. 05)。
表3螺旋藻多糖对久效磷所致小鼠睾丸组织氧化损伤的保护作用(η = 15)
权利要求
1.一种螺旋藻多糖在制备防治因有机磷农药所致雄性生殖毒性疾病的药物中的应用。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述雄性生殖毒性疾病为精子数量降低、精子活动性下降、变性精子数量增多、精液减少、生殖器畸变、睾丸疾病、前列腺疾病或精囊疾病。
3.根据权利要求I所述的应用，其特征在于螺旋藻多糖在制备抑制因有机磷农药所致精子活率降低的药物中的应用。
4.根据权利要求I所述的应用，其特征在于螺旋藻多糖在制备抑制因有机磷农药所致精子畸形率升高的药物中的应用。
5.根据权利要求I所述的应用，其特征在于螺旋藻多糖在制备抑制因有机磷农药所致睾丸组织SOD活性升高的药物中的应用。
6.根据权利要求I所述的应用，其特征在于螺旋藻多糖在制备抑制因有机磷农药所致睾丸组织MDA含量增多的药物中的应用。
7.根据权利要求I所述的应用，其特征在于螺旋藻多糖在制备抑制因有机磷农药所致睾丸组织LDH活性下降的药物中的应用。
8.根据权利要求1-7任一项所述的应用，其特征在于所述的有机磷农药为久效磷、辛硫磷、对氧磷或三唑磷。
全文摘要
本发明涉及一种螺旋藻多糖在制备防治因有机磷农药所致雄性生殖毒性疾病的药物中的应用，更进一步的说是在制备抑制因有机磷农药所致精子活率降低、精子畸形率升高、睾丸组织SOD活性升高、睾丸组织MDA含量增多、睾丸组织LDH活性下降的药物中的应用。以高毒有机磷农药久效磷和低毒有机磷农药辛硫磷为代表，研究了螺旋藻多糖对因低浓度有机磷农药暴露所致的雄性生殖毒性的预防和治疗作用，证明螺旋藻多糖能抑制有机磷农药的雄性生殖毒性，有较好的剂量依赖性，从而提出螺旋藻多糖作为活性物质在制备因有机磷农药所致的雄性生殖毒性药物中的应用。
文档编号A61P15/00GK102631366SQ20121009588
公开日2012年8月15日 申请日期2012年4月1日 优先权日2012年4月1日
发明者周亚莉, 孙春莉, 屈艳, 张莉莉, 牛志国, 王艳华, 闫建国, 马玉龙, 魏纪东 申请人:新乡医学院