专利名称：Nestorone在制备治疗帕金森氏病的药物用途的制作方法
技术领域：
本发明属于神经学和药理学领域，涉及Nestorone (16-亚甲基-17α -こ酰氧基-19-失碳-孕甾-4-烯-3，20- ニ酮，Nes)在制备治疗帕金森氏病的药物中的用途。
背景技术：
帕金森氏病(Parkinson, s disease,PD)的发病率也呈上升趋势,是目前公认的第二大老年中枢神经系统退行性疾病。帕金森氏病的主要病理改变是中脑黑质致密部多巴胺(dopamine，DA)能神经元进行性变性和坏死，引起黑质-纹状体通路神经递质多巴胺水平显著降低。流行病学研究、病理学分析和生化鉴定表明95%的帕金森氏病是散发性、 迟发性的[Tanner CM. Adv Neurol 2003，91 :133-142]。另外病理学和神经放射学研究证明[Tansey MG, et al. Front Biosci 2008,13:709-717]帕金森氏病患者在明显的神经元丢失前若干年已有一定程度的神经变性改变。帕金森氏病患者中，男性比例多于女性；如果女性提早停经，帕金森氏病患病率会升高[Ragonese P, et al. Neurology 2004,62(11)2010-2014]。Nestorone(16-methylene_17-a -acetoxy-19 norpregn-4-ene,3,20-dioneo,Nes) (16-亚甲基-17 α-こ酰氧基-19-失碳-孕甾-4-烯_3，20-ニ酮，Nes)是ー种新型人工合成的19-去甲黄体酮衍生物，不与性激素结合球蛋白结合，对孕激素受体亲和力高，不与雌激素受体结合，对雄激素受体的作用可忽略，并且无糖皮质激素活性[SchindlerAE, et al. Maturitas. 2008 ；61 (1-2) 171-180. ]。Nestorone 是目前国内外新投入使用的避孕药物，孕激素效应特异性更强，虽然Nestorone与孕酮的部分代谢通路相同，但Nestorone在不同脑区产生效应的差异更明显[Lenzi E, et al. J Steroid Biochem MolBiol, 2009 ；116(1-2) :15-20.]。抗卵巢水平的Nestorone水平不会改变雌激素对情绪和行为等的有益作用，并对抗海马神经元中的谷氨酸毒性[Liu L, et al. Endocrinology2010 ；151(12) :5782-94.]，还剂量依赖性地促进神经髓鞘的形成[Ghoumari A，et al. 40thAnnual Meeting of the Society for Neuroscience, Cnicago, IL, 0ctober20 ；2009.Abstract (640. 11/R18).]。所以Nestorone对神经系统作用的特异性更强，引起的毒副作用可能会更小。但除本研究所外尚未见有关Nestorone与帕金森氏病的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种Nestorone (16-亚甲基-17 α -こ酰氧基-19-失碳-孕甾-4-烯-3，20-ニ酮，Nes)在改善和治疗帕金森氏病的神经保护药物中的应用。王要是以1_甲基~4~苯基-1, 2, 3,6-四氧卩比淀(l-methyl-4-phenyl-l ,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)建立帕金森氏病小鼠模型,皮下注射Nestorone进行造模前预处理合并造模后干预，通过爬杆实验观测小鼠的行为学变化，用免疫组织化学法检测酪氨酸轻化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acdicprotein, GFAP)的表达情况,用高效液相色谱-电化学检测(high performance liquidchromatography-electrochemical detection, HPLC-ECD)法检测纹状体多巴胺的含量，酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测黑质肿瘤坏死因子-a (TNF- α )的水平。本发明在细胞层面上对Nestorone作为改善和治疗帕金森氏病的神经保护药物及其应用作了论证。本发明的有益之处(I)与孕酮相比，Nestorone在改善和治疗帕金森氏病方面疗效更强。(2)与孕酮相比，Nestorone在神经系统的毒副作用更小。
图I是帕金森氏病小鼠黑质多巴胺能神经元TH的表达。上排从左到右依次为Con、MocUVeh 组，下排从左到右依次为 Pro L、Pro H、Nes L、Nes H 组(X100)。图2是帕金森氏病小鼠黑质星形胶质细胞GFAP的表达。上排从左到右依次为Con、MocUVeh 组，下排从左到右依次为 Pro L、Pro H、Nes L、Nes H 组(X100)。具体实例方式本发明结合附图和实施例作进ー步的说明。此外应理解，下面的优选具体实施方案仅仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。实施例I :以MPTP建立帕金森氏病小鼠模型，皮下注射Nestorone进行造模前预处理合并造模后干预84只C57小鼠，体重18g_25g，随机分为7组。正常对照组(Con):每日两次皮下注射生理盐水(O. Olml · g-1)共11山第6(1另外腹腔注射生理盐水(O. Olml · g_04次；模型组(Mod):每日两次皮下注射生理盐水(O. Olml · g—1)共11山第6(1腹腔注射1^^ ;溶剂组(Veh):每日两次皮下注射 10% (O. Olml .g—1)共 lld，第 6d 腹腔注射 MPTP ；Nestorone低剂量组(O. 08mg · kg-1 · (Γ1, Nes L):姆日两次皮下注射 Nestorone O. 04mg · kg-1 共 lid,第6d腹腔注射MPTP ；Nestorone高剂量组(O. 2mg · kg—1 · d-1，Nes H):每日两次皮下注射NestoroneO. Img · kg-1共lid,第6天腹腔注射MPTP。第6天IlAM开始，除Con组腹腔注射生理盐水外，其余组均进行腹腔注射MPTP 15mg · kg—1，间隔2h，共注射4次。结果表明，给予MPTP 3_5min后，小鼠出现逐渐加重的运动減少、弓背、竖毛、立尾、后肢张カ减弱、步态不稳、易激惹、偶然震颤等急性异常表现，个别出现癫痫样发作，约30-60min后症状逐渐减轻；但随着给药次数的増加，这些表现渐进性加重，视为模型成功。实施例2 :爬杆实验检测小鼠的运动协调能力分别于造模前、给药五天造模后和继续给药五天后自制高50cm、直径1cm、表面粗糙的金属爬杆，垂直固定于底座上，杆顶端有一直径2. 5 cm的小木球,金属杆和小球外面紧裹纱布以防止小鼠打滑。根据其中描述的方法并加以改进，于给药前Id、给予MPTP后Id、给药结束后Id测定将小鼠头水平置于杆顶的小球上，前肢开始接触杆体至前肢接触地面的时间。结果表明，造模后，Mod组和Veh组的爬杆时间比Con组明显延长，预防性给予孕激素的4组小鼠，其爬杆时间比Mod组缩短，但仍长于Con组，其中Nes L组的保护作用最大；继续治疗后，Nes L组与Con比较无统计学意义。(见表I)表I各组小鼠三次平均爬杆时间(秒，η = 6，Xぉ)
权利要求
1.ー种16-亚甲基-17 α-こ酰氧基-19-失碳-孕留-4-烯_3，20-ニ酮在制备改善和治疗帕金森氏病的神经保护药物中的应用，所制备的药物含有制剂允许的药物赋形剂或载体。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于，所述药物的制剂形式为液体制剂、颗粒剂、缓释剂、冲剂、片剂或胶丸。
全文摘要
本发明提供一种Nestorone(16-亚甲基-17α-乙酰氧基-19-失碳-孕甾-4-烯-3,20-二酮，Nes)在制备改善和治疗帕金森氏病的神经保护药物中的应用。本发明所制备的药物含有制剂允许的药物赋形剂或载体。药物的制剂形式包括液体制剂、颗粒剂、缓释剂、冲剂、片剂或胶丸。本发明在细胞层面上对Nestorone作为改善和治疗帕金森氏病的神经保护药物及其应用作了论证，与孕酮相比，本发明在改善和治疗帕金森氏病方面的疗效更强，且在神经系统的毒副作用更小。
文档编号A61K31/57GK102688247SQ20121011029
公开日2012年9月26日 申请日期2012年4月15日 优先权日2012年4月15日
发明者李晓珩, 林函, 苏颖, 葛仁山, 连庆泉, 金元 申请人:温州医学院