规模化培育北冬虫夏草子实体及其保健和制药应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供规模化培育的北冬虫夏草子实体，包含北冬虫夏草子实体虫草素0.3%~3%、虫草多糖8%~30%、腺苷0.055%~0.25%和蛋白质10%~35%，所述规模化培育系通过可控光培养架调控光照强度和光照周期进行光照培养以提高子实体内有效成分含量。本发明还提供含规模化培育北冬虫夏草子实体的保健品，以及该规模化培育北冬虫夏草子实体在制备保肝药物、益肾药物、制备促进免疫细胞生长药物和制备增强机体非特异性抵抗力药物上的应用。
【专利说明】规模化培育北冬虫夏草子实体及其保健和制药应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及规模化培育的北冬虫夏草子实体，含规模化培育北冬虫夏草子实体的保健品及规模化培育北冬虫夏草子实体在制药上的应用。
【背景技术】[0002]北冬虫夏草，又名蛹虫草，蛹草，北虫草，蛹草菌等，在吉林省首次发现，经鉴定它与冬虫夏草为同一属，故定名为蛹草。分类学上属于真菌门，子囊菌亚门，核菌纲，球壳目，麦角菌科，虫草属。北冬虫夏草作为传统珍贵中药材，我国人民对其药用价值早有认识。李时珍在《本草纲目》中指出，蝉花能主治“小儿天吊惊痫，夜啼，心悸”。据考证，当时的“蝉花”包括了蝉虫草和蛹虫草等多种寄生于虫体或蛹体上的虫草。赵学敏在《本草纲目拾遗》中把虫草类的药用归之为“能治百虚百损”。《新华本草纲要》称，蛹草“全草:味甘，性平。有益肺肾，补精髓，止血化痰的功能”，可见其功效与冬虫夏草近似，故一些医家将其作为冬虫夏草的替代品入药应用。北冬虫夏草人工栽培成功以来，随着人们对北冬虫夏草的滋补保健功效和多种药用价值的认识，其开发利用研究倍受关注。人们在药理和毒理等方面进行了大量的研究，研究表明，北冬虫夏草内含有虫草素、虫草酸、多糖、腺苷等多种有效成分，在降血脂，防止动脉硬化，保护心、脑组织，镇静催眠，增强巨噬细胞的活性，抗炎、抗癌、抗菌、抗衰老等方面都有良好功效。
[0003]本 申请人:早先申请的中国专利申请CN 102037854A公开了一种北冬虫夏草子实体的培养方法。该方法将接种后的培养容器排列堆放于可控光培养架上置组培室中培养，在避光培养后通过可控光培养架调控光照强度和光照周期进行光照培养，从而满足了北冬虫夏草正常生长对光照的需求，使出草率提高，生物转化率提高，并通过调节出草管理阶段的光照强度和光照周期使子实体内有效成分含量提高和增加子实体内生物量的积累。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供规模化培育的北冬虫夏草子实体、其制备保肝药物、益肾药物、促进免疫细胞生长药物和增强机体非特异性抵抗力药物的应用，及含北冬虫夏草子实体的保健品。
[0005]本发明提供的规模化培育的北冬虫夏草子实体包含北冬虫夏草子实体虫草素
0.3%~3%、虫草多糖8%~30%、腺苷0.0559Π).25%和蛋白质10%~35%，所述规模化培育系通过可控光培养架调控光照强度和光照周期进行光照培养以提高子实体内有效成分含量。
[0006]本发明对规模化培育的北冬虫夏草子实体的临床前药理学研究显示:
[0007]1.规模化培育的北冬虫夏草子实体1000、500、250mg/kg剂量对CCL4诱发的小鼠肝脏ALT升高有一定的降低作用，其作用程度优于野生冬虫夏草，试验结果表明北冬虫夏草子实体对CCL4所致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。尤其高剂量组与联苯双酯比较，作用相当。
[0008]2.规模化培育的北冬虫夏草子实体对庆大霉素诱发的小鼠急性肾损伤导致的BUN和Cr升高有一定的保护作用。北冬虫夏草子实体对庆大霉素诱发的小鼠急性肾损伤导致的尿液异常有缓解作用。试验结果表明北冬虫夏草子实体对庆大霉素诱发的小鼠急性肾损伤有一定的保护作用。同剂量北冬虫夏草子实体与野生冬虫夏草相比作用程度相当。
[0009]3.规模化培育的北冬虫夏草子实体1000、500、250mg/kg三个剂量组均明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖，有一定量效关系，野生冬虫夏草与同剂量北冬虫夏草子实体效应相当。北冬虫夏草子实体三个剂量组和野生冬虫夏草均能明显激活NK细胞的活性，有一定量效关系，北冬虫夏草子实体的作用优于同剂量野生冬虫夏草。
[0010]4.规模化培育的北冬虫夏草子实体1000、500、250mg/kg剂量能明显延长小鼠在水中的持续游泳时间，三个剂量与对照组比较，均有显著性差异，能提高体力和耐力，具有增强抗疲劳作用。尤其高剂量组与野生冬虫夏草同剂量比较，作用相当。
[0011]5.规模化培育的北冬虫夏草子实体1000、500、250mg/kg剂量对小鼠在常压下有耐缺氧作用，能增强机体非特异性抵抗能力，中高剂量与对照组比较，有显著差异，尤其高剂量组与野生冬虫夏草同剂量比较，作用相当。
[0012]规模化培育的北冬虫夏草在保护肝脏损伤、肾脏损伤、耐缺氧、抗疲劳、增强免疫力方面优于或与同剂量野生冬虫夏草相当，故能作为野生冬虫夏草的替代品。
[0013]因此，本发明提供规模化培育北冬虫夏草子实体在制备保肝药物上的应用。
[0014]本发明提供规模化培育北冬虫夏草子实体在制备益肾药物上的应用。
[0015]本发明提供规模化培育北冬虫夏草子实体在制备促进免疫细胞生长药物上的应用。
[0016]本发明还提供规模化 培育北冬虫夏草子实体在制备增强机体非特异性抵抗力药物上的应用。
[0017]本发明还提供包含规模化培育北冬虫夏草子实体的保健品。所述保健品可只包含规模化培育北冬虫夏草子实体，也可进一步包含选自人参、黄芪、当归、党参、枸杞、茯苓、灵芝、红率中的一种或几种。
[0018]所述保健品中包含北冬虫夏草子实体0.5_2g;包含选自人参、黄芪、当归、党参、枸杞、获茶、灵芝、红率中的一种或几种时，其量各为l-5g,红率可为3-5枚。
[0019]所述保健品可用于煲汤或作茶饮。可根据需要，将北冬虫夏草子实体与选自人参、黄芪、当归、党参、枸杞、茯苓、灵芝、红枣中的一种或几种中药材或其饮片包装成小袋。用于煲汤或作茶饮时，连袋或拆开放于鸡/鸭/肉等各种汤中同煮，或与茶叶一起冲泡。
[0020]根据需要，所述保健品也可制成胶囊、颗粒剂、片剂或口服液。
[0021]在一个实施方式中，将北冬虫夏草子实体与选自人参、黄芪、当归、党参、枸杞、茯苓、灵芝、红枣中的一种或几种中药材粉碎、筛取细粉，充填胶囊；或将北冬虫夏草子实体粉碎成细粉后，与选自人参、黄芪、当归、党参、枸杞、茯苓、灵芝、红枣中的一种或几种中药材的浸膏混合，粉碎，干燥，充填胶囊。
[0022]在另一个实施方式中，将北冬虫夏草子实体粉碎成细粉后，与选自人参、黄芪、当归、党参、枸杞、茯苓、灵芝、红枣中的一种或几种中药材的浸膏混合，粉碎，干燥，制成颗粒剂。
[0023]在另一个实施方式中，将北冬虫夏草子实体粉碎成细粉后，与选自人参、黄芪、当归、党参、枸杞、茯苓、灵芝、红枣中的一种或几种中药材的浸膏混合，粉碎，干燥，制粒，压片，制成片剂。
[0024]在还有一个实施方式中，将北冬虫夏草子实体与选自人参、黄芪、当归、党参、枸杞、茯苓、灵芝、红枣中的一种或几种中药材混合，用水浸泡，过滤，浓缩，灌装，灭菌，制成口服液。
【专利附图】
【附图说明】
[0025]图1A~IF分别是正常动物组、模型组(NS)、联苯双酯组(200mg/kg)、野生虫草组(1000mg/kg)和规模化培育的北冬虫夏草子实体两个剂量组(1000、250mg/kg)的小鼠肝脏组织切片图。
[0026]图2A~2F分别是正常动物组、模型组、野生虫草组和规模化培育的北冬虫夏草子实体三个剂量组小鼠在实验第8天时的肾脏组织切片图。
[0027]图3A~3F分别是正常动物组、模型组、野生虫草组和规模化培育的北冬虫夏草子实体三个剂量组小鼠在实验第15天时的肾脏组织切片图。
【具体实施方式】
[0028]以下用实施例和实验例对本发明作进一步阐述。本【技术领域】普通技术人员应当认识到，这些实验例仅仅用于举例说明本发明而不对本发明的范围构成任何限制，对本发明所作的任何改变，只要不违背本发明的精神实质，都将落在权利要求范围内。
[0029]实施例1:北冬虫夏草子实体的规模化培育
[0030]将接种C.militaris后的培养容器排列堆放于可控光培养架上置组培室。在避光培养后进行光照培养，按照北冬虫夏草的各个生长时期用可控光培养架调控光照强度和光照周期:`
[0031]菌丝转色期:于20°C -22°C环境温度、60% -70%相对湿度下，控制光照强度为IOOlux — 3001ux，光照周期为 12/12—24/0 (光 / 暗，h)；
[0032]子实体生长期的原基分化形成期:于20°C -22°C环境温度、70% -75%相对湿度下，控制光照强度为2001ux—6501ux,光照周期为8/16—9/15 (光/暗，h)；
[0033]子实体生长期的子座生长期:于20°C -22°C环境温度、65% -75%相对湿度下，控制光照强度为2001ux — 8001ux，光照周期为8/16-9/15光/暗，h)；
[0034]子实体生长期的子实体生长旺盛期:于20°C -22°C环境温度、65% -75%相对湿度下，控制光照强度为7001ux — lOOOlux，光照周期为8/16 — 9/15 (光/暗，h)；
[0035]子实体生长期的子实体生殖生长期:于20°C -23°C环境温度、65% _80%相对湿度下，控制光照强度为lOOOlux — 15001uX，光照周期为8/16 — 9/15 (光/暗，h)。
[0036]实施例2:北冬虫夏草子实体保健品的制备
[0037]将北冬虫夏草子实体0.5_2g、枸杞l_5g混合包装成小包。
[0038]实施例3:北冬虫夏草子实体保健品的制备
[0039]将北冬虫夏草子实体0.5_2g、枸杞l_5g、红枣3_5枚混合包装成小包。
[0040]实施例4:北冬虫夏草子实体保健品的制备
[0041]将北冬虫夏草子实体0.5_2g、黄芪、当归、枸杞各l_5g、红枣3-5枚混合包装成小包。[0042]实施例5:北冬虫夏草子实体保健品的制备
[0043]将北冬虫夏草子实体0.5_2g、党参、黄芪、当归、枸杞各l_5g、红枣3-5枚混合包装成小包。
[0044]实施例6:北冬虫夏草子实体保健品的制备
[0045]将北冬虫夏草子实体0.5_2g、人参、茯苓、当归各l_5g、红枣3-5枚混合包装成小包。
[0046]实施例7:北冬虫夏草子实体保健品的制备
[0047]将北冬虫夏草子实体0.5_2g、人参、灵芝、枸杞各l_5g、红枣3-5枚混合包装成小包。
[0048]实验例1:规模化培育的北冬虫夏草子实体对CCU引起的小鼠急性肝损伤的保护麵
[0049]1.实验材料
[0050]I)受试药物:规模化培育的北冬虫夏草子实体(以下简称北冬虫夏草子实体，上海国宝企业发展中心产品)，研磨成粉末后用蒸馏水配至所需浓度；
[0051]2)阳性对照药1:野生虫草(蔡同德堂药号，产地西藏)，研磨成粉末后用蒸馏水配至所需浓度；
`[0052]3)阳性对照药2:联苯双酯片(江苏鹏鹞药业有限公司，批号1010071，25mg/片)，研磨成粉末后用蒸馏水配至所需浓度；
[0053]4)其他=CCl4 (国药集团化学试剂有限公司)，以植物油稀释。
[0054]2.实验动物
[0055]雄性ICR小鼠，18_20g (上海西普尔-必凯实验动物有限公司)
[0056]生产许可证号:SCXK(沪)2008-0016
[0057]使用许可证号:SYXK(沪)2009-0068
[0058]3.试验方法
[0059]雄性健康ICR小鼠70只，随机分为6组:北冬虫夏草子实体两个剂量组(1000、250mg/kg);野生虫草阳性对照组(1000mg/kg);联苯双酯片(200mg/kg)阳性对照组；模型组(NS)和正常动物组。除正常动物组外，其余各组小鼠分别经胃管给予北冬虫夏草子实体、野生虫草、联苯双酯和生理盐水，0.5ml/20g体重，每天一次，连续灌胃14天。末次给药后即刻腹腔注射CCL4油溶液(0.15%，10ml/kg)。
[0060]于注射CCL4后21小时全部受试动物摘眼球采血，分离血清,测定血清ALT。计算平均值，比较给药组和对照组之间差异的显著性。各组小鼠均作组织病理学检查。
[0061]4.试验结果
[0062]正常组10个小鼠肝脏均正常，模型组10个动物肝脏发白，纹理变粗，边缘增厚。北冬虫夏草子实体两个剂量组、野生虫草组和联苯双酯组的动物肝脏基本正常，与正常组小鼠肝脏无明显差异。
[0063]正常对照组小鼠ALT为29.80，模型组为100.60，给予北冬虫夏草子实体1000、250mg/kg的小鼠ALT分别为62.56、68.33，缓解率分别为37.82、32.07% ;野生虫草组ALT为118.56，缓解率为0 ;联苯双酯组小鼠ALT为51.60，缓解率为48.71%。
[0064]组织病理学检查发现，模型组动物肝细胞轻度浊肿，可见单个肝细胞坏死和炎症细胞局灶性浸润；北冬虫夏草子实体各组、野生虫草组、联苯双酯组动物肝细胞变性程度明显轻于模型组，炎症细胞浸润不明显。
[0065]试验结果见表1和图1A~1F。
[0066]表1.北冬虫夏草子实体对CCL4引起的小鼠急性肝损伤的保护作用
[0067]
【权利要求】
1.规模化培育的北冬虫夏草子实体，包含北冬虫夏草子实体虫草素0.3%~3%、虫草多糖8%~30%、腺苷0.0559Π).25%和蛋白质10%~35%，所述规模化培育系通过可控光培养架调控光照强度和光照周期进行光照培养以提高子实体内有效成分含量。
2.权利要求1所述北冬虫夏草子实体在制备保肝药物上的应用。
3.权利要求1所述北冬虫夏草子实体在制备益肾药物上的应用。
4.权利要求1所述北冬虫夏草子实体在制备促进免疫细胞生长药物上的应用。
5.权利要求1所述北冬虫夏草子实体在在制备增强机体非特异性抵抗力药物上的应用。
6.含权利要求1所述北冬虫夏草子实体的保健品。
7.如权利要求6所述的保健品,其中还包含选自人参、黄苗、当归、党参、枸杞、获茶、灵芝、红枣中的一种或几种。
8.权利要求6或7所述保健品在煲汤和茶饮上的应用。
9.如权利要求6或7所述保健品，所述保健品为胶囊、片剂或口服液。
【文档编号】A61K38/00GK103479683SQ201210191457
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2012年6月12日 优先权日:2012年6月12日
【发明者】唐永范, 唐亮 申请人:上海国宝企业发展中心, 上海国宝生物工程研究所