专利名称：一种炮制大黄或/和生大黄的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种炮制大黄或/和生大黄的检测方法,本发明还涉及一种九制大黄的质量检测方法。
背景技术：
大黄为寥科植物药用大黄Rheum officinale Baill.、掌叶大黄RheumpalmatumL.或唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim, ex Balf.的干燥根及根莖。大黄为临床常用中药，具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经的功能。然而，生大黄的剧烈泻下、腹痛的副作用比较突出，因此，历代对大黄多采用酒炒、醋炒、清蒸、制炭、酒蒸、蜜蒸、醋蒸、九蒸九晒等手段进行炮制。一般认为，大黄酒炒后泻下稍缓，善清上焦血分热毒。酒熟大黄泻下缓和，减轻腹痛、恶心、呕吐等不良反应，增强活血祛瘀作用。大黄炭泻下极弱，并有止血作用。·醋大黄泻下稍缓，善于消积化瘀。其中，九制大黄为大黄的干燥根及根茎经九蒸九晒后所得，经过九蒸九晒的炮制过程，九制大黄的部分结合性蒽醌衍生物转变为游离性蒽醌衍生物，九制大黄与生大黄相t匕，强烈的腹痛、泻下副作用得到缓解，而生大黄的降血脂、改善血液流变学的作用得到保留，故历代医药学家对副作用低的九制大黄的疗效给予肯定和推崇。九制大黄的传统炮制工艺为取生大黄片加10%的黄酒与适量水，拌匀，闷透过夜(约18h)，于次日常温下蒸2h，取出，晒至七八成干时，把剩余药汁拌入，混匀，晒干，如此反复九蒸九晒即得九制大黄。虽然九制大黄疗效显著，但因其炮制工艺繁琐，工时较长，能耗大，不适应于大生产，因此生产该炮制品的厂家日益减少，处于濒临灭绝的境地，故市场上该炮制品种严重匮乏。专利号200910264893. X，发明名称一种醋五味子的炮制方法，该专利中指出，传统醋蒸五味子需要蒸制1-2天，耗时长，而该发明中采用高压蒸制方法，不仅保证了产品质量，而且还节约了炮制时间，降低了能耗。高压蒸制法，为目前新兴的炮制方法之一，目前还未见将高压蒸制法用于炮制生大黄的系统性研究报道。随着中药化学的逐渐发展,人们开始对生大黄和九制大黄的化学成分就行研究，希望从化学成分的差异上来说明生品和炮制品的区别。有学者对大黄中多糖、鞣质含量进行了统计，认为九制大黄与六制大黄相当，即九制大黄只须蒸晒6次即可(胡昌江，等，九制大黄炮制过程中多糖和鞣质的含量变化研究，中成药，1999年21卷8期)。然而，大黄主要成分为结合性蒽醌、游离性蒽醌、芪类化合物、鞣质、多糖等，在经过炮制后，其有效成分的化学结构发生较大改变，而炮制方法中的细小差异很有可能会导致炮制品质量的差异，因此，为了规范九制大黄的产品质量，急需建立一种准确可行的质量检测方法。目前，对生大黄的质量检测方法有较多的报道，刘氏等研究了大黄饮片的HPLC指纹图谱，采用C 18柱，柱温40°C，以乙腈-O. 1%磷酸进行梯度洗脱，最终分离得出25个共有峰，该法重复性好，为大黄药材质量控制提供了依据(刘翠玲等，大黄饮片HPLC指纹图谱的方法学研究，中药新药与临床药理，2009年20卷5期)。然而，生大黄在经九蒸九晒的炮制过程后，其化学成分发生较大变化，能否采用现有生大黄的色谱条件对九制大黄进行质量检测，还无法论证；同时，上述方法采用乙腈为有机相，乙腈售价较高，且对人体危害较为严重，加之该方法检测时间在96分钟以上，乙腈用量较大，不利于检测成本的节省和对环境的保护。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以有效检测炮制大黄或/和生大黄的方法；本发明的另一目的是提供一种采用指纹图谱对九制大黄的质量检测方法；本发明的另一目的是提供一种制备九制大黄的新方法，用以取代传统九制大黄繁琐的工艺步骤；本发明还提供了一种九制大黄的检测方法。本发明提供了一种炮制大黄或/和生大黄的检测方法，它是采用高效液相色谱法进行检测的，色谱条件如下色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；紫外检测器，检测波长为254±5nm ;流动相为甲醇-(O. 1%-0. 3%) V/V磷酸水溶液系统，梯度洗脱，梯度条件如下
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O进一步地，检测波长为254nm ;流动相为甲醇-O. 1%V/V磷酸水溶液系统。进一步地，所述高效液相色谱法中，柱温为25-35 °C。进一步地,色谱柱为Kromasil C18, 250mm X 4. 6mm, 5 μ m0进一步地，所述高效液相色谱法中，样品溶液的制备方法如下精密称取炮制大黄或生大黄样品粗粉，以50-100%v/v甲醇提取后，定容，制备得到样品溶液。进一步地,所述高效液相色谱法中，以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚中的一种化合物或两种以上的混合物为对照品。本发明还提供了九制大黄的质量检测方法，它包括如下操作步骤(I)样品溶液的制备精密称取九制大黄样品粗粉，加入适量甲醇，浸泡后，超声提取，提取液放冷至室温，过滤，定容，微滤后，取续滤液作为样品溶液；(2)参照品溶液制备用甲醇或流动相溶液溶解大黄酚，微滤，滤液作为参照品溶液；(3)色谱条件色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；紫外检测器，检测波长为254±5nm ;流动相为甲醇-0.1%V/V磷酸水系统，梯度洗脱，梯度条件如下
权利要求
1.一种炮制大黄或/和生大黄的检测方法，其特征在于它是釆用高效液相色谱法进行检测的，色谱条件如下 色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；紫外检测波长为254±5mn;流动相为甲醇-(0. 1%-0. 3%) V/V磷酸水溶液系统，梯度洗脱，梯度条件如下
2.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于检测波长为254nm;流动相为甲醇-0. 1%V/V磷酸水溶液系统。
3.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于所述高效液相色谱法中，柱温为25-35 °C。
4.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在干色谱柱为KromasilCIS，250mmX 4. 6mm，5 u m。
5.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于所述高效液相色谱法中，样品溶液的制备方法如下 精密称取炮制大黄或生大黄样品粗粉，以50-100%v/v甲醇提取后，定容，制备得到样品溶液。
6.根据权利要求I所述的检测方法，其特征在于所述高效液相色谱法中，以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚中的ー种化合物或两种以上的混合物为对照品。
7.九制大黄的质量检测方法，其特征在于它包括如下操作步骤 (1)样品溶液的制备 精密称取九制大黄样品粗粉，加入适量甲醇，浸泡后，超声提取，提取液放冷至室温，过滤，定容，微滤后，取续滤液作为样品溶液； (2)參照品溶液制备 用甲醇或流动相溶液溶解大黄酚，微滤，滤液作为參照品溶液； (3)色谱条件 色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；紫外检测器，检测波长为254±5nm;流动相为甲醇-0. 1%V/V磷酸水系统，梯度洗脱，梯度条件如下
8.根据权利要求7所述的质量检测方法，其特征在于步骤(I)中，甲醇用量为九制大黄的50倍W/V，浸泡12h，超声提取30min。
9.根据权利要求7所述的质量检测方法，其特征在于所述标准指纹图谱如图I所示。
10.一种制备九制大黄的方法，其特征在于具体方法如下 (1)取生大黄，加黄酒水溶液闷润，黄酒水=3:7V/V，至药材润至透心； (2)取步骤(I)闷润后的药材，高压蒸制；所述高压蒸制的温度为110-120°C，蒸制次数为1-3次，毎次蒸制2-6小吋； (3)蒸制完成后，取出，干燥，即得大黄炮制品。
11.根据权利要求10所述的炮制方法，其特征在于步骤(2)中，所述高压蒸制的温度为120°C，蒸制次数为2-3次，毎次蒸制3小时；或，所述高压蒸制的温度为120°C，蒸制次数为I次，毎次蒸制6小吋。
全文摘要
本发明公开了一种检测炮制大黄或/和生大黄的方法；本发明还公开了一种九制大黄的质量检测方法以及九制大黄新的制备方法。本发明九制大黄或/和生大黄的检测方法，以甲醇为有机相用于对九制大黄和生大黄的鉴别和检测，各成分分离度良好，能够较好地对九制大黄和生大黄实现质量控制，同时，本方法中采用甲醇为有机相，不仅极大地节省了检测成本、保护了环境。九制大黄的质量检测方法，能够清楚地鉴别到九制大黄与其他炮制品或生大黄的差别，为九制大黄的使用提供了安全保证。本发明炮制方法，将传统的九蒸九晒减少至1-3次的高压蒸制，极大地减少了操作步骤，缩短了工时，为中药大黄的炮制提供了一种新方法和思路。
文档编号A61K36/708GK102788859SQ201210296450
公开日2012年11月21日 申请日期2012年8月20日 优先权日2011年8月31日
发明者张然, 胡昌江 申请人:成都中医药大学