专利名称：一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法
技术领域：
本发明涉及一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法。
背景技术：
大蒜属百科科葱属蔬菜植物，其营养丰富，是很重要的食用和药用植物，因此在我国被广泛栽培种植。大蒜中含有丰富的黄酮类物质，Biljana Bozin (2008)等的研究认为大蒜鳞茎中的总黄酮含量在4. 16±0. 03到6. 99±0. 01 μ g QE/g之间。大蒜的抗氧化活性与黄酮类物质的含量有显著相关的关系。酚类物质，特别是黄酮，基于它们的抗氧化性能，通常与人类健康联系在一起讨论(Hertog and Katan 1997)。陈玉霞等(2007)认为，蔬菜的抗氧化活性总黄酮含量显著相关，相关系数达到O. 7967 (P=O. 001)。蔬菜的抗氧化活性与总黄酮含量显著相关，而与维生素C含量则没有显著相关性，这也印证了 Cao G等(1996)的研究。Naoaki Morihara (2011)等的研究指出，老化大蒜提取物中含有丰富的水溶性高 分子半胱氨酰成分，其组成部分能够利用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶和人类中性粒细胞清除超氧阴离子，具有很强的抗氧化能力，另外老化大蒜提取物中水溶性化合物的含量相对较高，油溶性化合物含量低，同时此老化大蒜也含有丰富的S-烯丙基半胱氨酸以及溶于水的含硫化合物；H0rie等(1992)的研究表明，老化大蒜的组成部分能够保护细胞膜不受脂质过氧化反应的损害；而Brenya Griff in和Michael Selassie(2000)的文章则指出，老化大蒜的抗氧化活性已得到证明，具有延缓衰老的性能；Stephanie A. Dillon等(2003)的研究表明，老化大蒜能清除超氧阴离子和减少脂质过氧化物的形成，是一种有效的抗氧化剂，同时，老化大蒜提取液也具有铜离子螯合的能力，因此，大蒜在预防动脉粥样硬化疾病的发展和产生中发挥着一定的作用。Borek Carmia (2001)指出，将新鲜大蒜提取物经过延长提取处理后，得到的老化大蒜含有抗氧化性的生物化学物质，可以阻止氧化性损伤的产生。老化大蒜通过清除活性氧(ROS)发挥抗氧化活性,增强细胞抗氧化酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧酶的活性，增加细胞中谷胱甘肽的含量。老化大蒜可以抑制脂质过氧化反应，在延缓脑衰老，增强记忆，延长寿命方面发挥着重要的作用。老化大蒜可以阻止由阿霉素引起的心脏中毒和肝脏的碳中毒，能够治疗由氧化性损伤引起的疾病。但是，由于黄酮类物为酚类物质的二级结构，分子量很低(Boca Raton et al.1990)，利用有机溶剂很难有效提取出新鲜大蒜鳞茎中的黄酮类物质，因此，目前急需寻找出有效提取出大蒜鳞茎中黄酮类物质的方法。
发明内容
本发明是为了解决上述技术背景的不足，提供一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，其通过对大蒜鳞茎进行老化处理，可大大提高大蒜鳞茎中总黄酮的提取效率，有效提取出大蒜鳞茎中的黄酮类物质。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)以大蒜鳞茎为材料，以蒸馏水为提取剂，选取液料比，老化时间和老化温度三个因素为自变量，分别设计不同的水平，以总黄酮含量为因变量，根据Box-Benhnken模型，得到响应面试验设计；
(2)根据响应面试验设计组合，进行总黄酮含量测定，利用响应面分析软件，进行数据分析；
(3)根据响应面分析结果，得到大蒜鳞茎中总黄酮提取的液料比、老化时间和老化温度组合。所述步骤(I)称取的去皮后的大蒜鳞茎，切成薄片，置于试管中，再分别加入蒸馏水，密封，放入相应温度的恒温水浴锅中老化处理，处理4000 r/min离心10 min,转移上清至离心管中，一 20°C贮存备用，其中液料比(mL/g)的为1:1、2:1、3:1 ;老化时间的为3d、12d、21d ;老化温度的为 68°C、70°C、72°C。
所述步骤(2)鳞茎中总黄酮含量的测定方法为吸取待测提取液I mL，加入O. 5mol/L 的 NaNO2 溶液 200 μ L，静置 5 min,再加入 O. 3 mol/L 的 Al (NO3) 3 溶液 200 μ L，同样静置5 min,最后加入I mol/L的NaOH溶液I mL,室温避光反应10 min后,在510 nm波长处测吸光度，根据芦丁标准曲线方程求出提取液中总黄酮的质量浓度(mg rutin Dff/g,(rutin equivalent)表示芦丁效物)。所述步骤(3)根据响应面软件分析结果，得到大蒜鳞茎中总黄酮含量的回归方程方差分析，进而得到大蒜鳞茎中总黄酮含量的预测模型，并得到液料比、老化时间和老化温度三个因素两两因素交互作用对总黄酮含量的影响，根据预测模型及因素间交互作用的影响，最后得到大蒜鳞茎中总黄酮提取的液料比、老化时间和老化温度的组合。与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下
(1)操作简便，易于掌握；
(2)适应范围广，本发明可用于多个大蒜品种，如在本课题组的43个大蒜品种的鳞茎中均可有效提取出黄酮类物质；
(3)可用于其它大蒜产品，结果可信，如在本课题组中利用该方法可有效提取出32个大蒜品种的蒜臺和3个品种蒜苗的黄酮类物质。
图I为液料比和老化时间两两因素交互作用对总黄酮提取量影响的等高线 图2为液料比和老化时间两两因素交互作用对总黄酮提取量影响的响应面 图3为液料比和老化温度两两因素交互作用对总黄酮提取量影响的等高线 图4为液料比和老化温度两两因素交互作用对总黄酮提取量影响的响应面 图5为老化时间和老化温度两两因素交互作用对总黄酮提取量影响的等高线 图6为老化时间和老化温度两两因素交互作用对总黄酮提取量影响的响应面图。
具体实施例方式一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，包括以下步骤
(I)以苏联大蒜鳞茎为材料，以蒸馏水为提取剂，选取液料比，老化时间和老化温度三个因素为自变量，分别设计不同的水平，以总黄酮含量为因变量，根据Box-Benhnken模型，得到响应面试验设计；(2)根据响应面试验设计组合，进行总黄酮含量测定，利用响应面分析软件，进行数据分析；
(3)根据响应面分析结果，得到大蒜鳞茎中总黄酮提取的液料比、老化时间和老化温度组合。具体包括以下步骤
I、准确称取一定量去皮后大蒜鳞茎(去皮后大蒜鳞茎为蒜瓣)，切成薄片，置于试管中，再分别加入相应量的蒸馏水，密封，放入相应温度的恒温水浴锅中老化处理，处理一定时间后，4000 r/min离心10 min，转移上清至离心管中，一 20°C贮存备用。其中，液料比(mL/g)的为(水平有)1:1、2:1、3:1 ;老化时间的为(水平有)3(1、12(1、21(1 ;老化温度的为(水平有)68。。、70。。、72。。。2、吸取待测提取液I mL，加入O. 5 mol/L的NaNO2溶液200 yL，静置5 min，再加入O. 3 mol/L的Al (NO3) 3溶液200 μ L,同样静置5 min,最后加入I mol/L的NaOH溶液ImL，室温避光反应10 min后，在510 nm波长处测吸光度。根据芦丁标准曲线方程求出提取液中总黄酮的质量浓度(mg rutin Dff/g, (rutin equivalent)表示芦丁等效物)。3、根据响应面软件分析结果，得到大蒜鳞茎中总黄酮含量的回归方程方差分析，进而得到大蒜鳞茎中总黄酮含量的预测模型，并得到液料比、老化时间和老化温度三个因素两两因素交互作用对总黄酮含量的影响，根据预测模型及因素间交互作用的影响，最后得到大蒜鳞茎中总黄酮提取的最佳液料比、老化时间和老化温度的组合。其中三个因素液料比、老化时间和老化温度的因素编码及水平表I, Box-Behnken试验设计及结果见表2 ;利用Design Expert 7. O软件,对表2的试验数据进行处理,得到回归方程方差分析表，见表3 ;同时利用该软件进行非线性回归分析，得到预测模型如下Y=O. 71+0. 14A+0. 057B — O. 034C — O. 033AB — O. IOAC — O. 011BC+0. 017A2 — O. 26B2 —
O.18C2 ①
权利要求
1.一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤 (1)以大蒜鳞茎为材料，以蒸馏水为提取剂，选取液料比，老化时间和老化温度三个因素为自变量，分别设计不同的水平，以总黄酮含量为因变量，根据Box-Benhnken模型，得到响应面试验设计； (2)根据响应面试验设计组合，进行总黄酮含量测定，利用响应面分析软件，进行数据分析； (3)根据响应面分析结果，得到大蒜鳞茎中总黄酮提取的液料比、老化时间和老化温度组合。
2.根据权利要求I所述的一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，其特征在于所述步骤(I)称取的去皮后的大蒜鳞茎，切成薄片，置于试管中，再分别加入蒸馏水，密封，放入相应温度的恒温水浴锅中老化处理，处理4000 r/min离心10 min，转移上清至离心管中，一20°C贮存备用，其中液料比(mL/g)的为1:1、2:1、3:1 ;老化时间的为3d、12d、21d ;老化温度的为 68°C、70°C、72°C。
3.根据权利要求I或2所述的一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，其特征在于所述步骤(2)鳞茎中总黄酮含量的测定方法为吸取待测提取液I mL，加入0. 5 mol/L的NaNO2溶液200 iiL，静置5 min，再加入0.3 mol/L的Al (NO3) 3溶液200 U L，同样静置5 min，最后加入I mol/L的NaOH溶液I mL，室温避光反应10 min后，在510 nm波长处测吸光度，根据芦丁标准曲线方程求出提取液中总黄酮的质量浓度(mg rutin Dff/g, (rutin equivalent)表示芦丁效物)。
4.根据权利要求3所述的一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法，其特征在于所述步骤(3)根据响应面软件分析结果，得到大蒜鳞茎中总黄酮含量的回归方程方差分析，进而得到大蒜鳞茎中总黄酮含量的预测模型，并得到液料比、老化时间和老化温度三个因素两两因素交互作用对总黄酮含量的影响，根据预测模型及因素间交互作用的影响，最后得到大蒜鳞茎中总黄酮提取的液料比、老化时间和老化温度的组合。
全文摘要
本发明涉及一种提取大蒜鳞茎中总黄酮的方法。该方法步骤为(1)以苏联蒜鳞茎为材料，以蒸馏水为提取剂，选取液料比，老化时间和老化温度三个因素为自变量，分别设计不同的水平，以总黄酮含量为因变量，根据Box-Benhnken模型，得到响应面试验设计；(2)根据响应面试验设计组合，进行总黄酮含量测定，利用响应面分析软件，进行数据分析；(3)根据响应面分析结果，得到大蒜鳞茎中总黄酮提取的最佳液料比、老化时间和老化温度组合。本发明通过对大蒜鳞茎进行老化处理，可大大提高大蒜鳞茎中总黄酮的提取效率，有效提取出大蒜鳞茎中的黄酮类物质。
文档编号A61P39/06GK102805798SQ20121030222
公开日2012年12月5日 申请日期2012年8月23日 优先权日2012年8月23日
发明者陈书霞, 房玉林, 程智慧, 杜俊娜, 孟焕文 申请人:西北农林科技大学