专利名称：注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属药物制剂领域，涉及注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂及其制备方法。
背景技术：
近年来，肿瘤的发病率急剧上升，其治疗难度大、死亡率高，己成为人类死亡的第二大病因。据报道，全世界每年约有600万人死于恶性肿瘤，其中，中国癌症患者约450万人，死亡率逾30%，已成为严重的社会问题。目前，临床上治疗恶性肿瘤通常采用手术、化疗及放疗等手段；对于早期肿瘤，手术切除辅以其它疗法往往可取得较好的治疗效果；而对 于晚期肿瘤，多以放、化疗综合治疗以延缓病情的发展，但均伴随严重的免疫系统抑制或毒副作用，难以有效提高患者的生存率和生活质量。因此，探寻疗效好、不良反应较小的治疗手段或药物一直是肿瘤治疗领域的研究热点和努力方向。已知紫杉烷类药物对多种肿瘤具有较强的抗肿瘤活性，其作用是强化微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，导致形成稳定的非功能性微管束，从而抑制细胞的有丝分裂和增殖。其中多烯紫杉醇(docetaxel)是近年开发的新一代紫杉烷类药物，其作用机制与紫杉醇类似，但是抗肿瘤活性是紫杉醇的I. 3^12倍，对乳腺癌、非小细胞肺癌、脑肿瘤等均有明显疗效。目前，尽管紫杉烷类具有较好的抗肿瘤作用，但治疗实践显示其仍存在以下缺陷
(I)由于药物难溶于水(紫杉醇在室温下水中溶解度为0. 0005mg/mL,多烯紫杉醇在水中几乎不溶))，临床所用注射剂均需添加大量的表面活性剂，如紫杉醇采用Cremophor EL助溶，多烯紫杉醇采用吐温80助溶等，导致所述注射剂在临床应用中毒副作用较大，容易引起并发症，如过敏反应、骨髓抑制、神经毒性、心血管毒性、脱发等；(2)由于药物进入体内后快速分布和代谢，使得血药浓度快速降低，从而需要经常性给药，且长期服用；(3)由于药物为细胞毒类药物，不具有靶向性，常规注射剂给药后药物全身分布，产生全身性的毒副反应，而目前对其结构改造以减少不良反应的尝试尚无较大进展。现有技术已公开有较多有关紫杉烷类药物的制剂，但尚未见相关专利或文献报道能够同时克服上述缺陷。专利CN201010128467.6采用乙醇增溶紫杉烷类药物，但尚未制备为纳米制剂，因此不具有肿瘤靶向和缓释效果。专利CN200510084055. 6将多烯紫杉醇制备为脂肪乳剂，虽然有望缓释药物，但是含药量低，含油量高，输入人体后易导致脂肪酸在组织器官内聚集；且脂肪乳剂平均粒径在500nm,不具备良好的肿瘤祀向性。专利CN200710170414. 9，CN200980128786. 2将紫杉烷类药物制备为乳剂，同样不
具备肿瘤靶向性。专利CN200910011752. 7将这类药物制备为自微乳，虽然该乳剂的粒径降到IOOnm
左右，但是该乳剂中仍然存在具有较大毒性的表面活性剂。专利CN200710158464. 5，CN200710158466. 4，CN200810234186. 1，CN200910112717. 4,CN201010151501. I,CN200910187234. 0,CN201010268907. 8 将这类药物
制备为脂质体、纳米粒等，虽然具有较好的肿瘤靶向作用，但是现有技术仍存在不足，且该类制剂稳定性差，载药量低，制备方法繁琐，尚无法进行工业化大生产。专利CN03112082. 2虽然将紫杉烷类药物制备为不含表面活性剂Cremophor EL和吐温80的制剂，但是其中紫杉烷类药物仅是复方中的一种药物，属于药物组合物领域，而非对紫杉烷类药物制剂的研究。并且该类研究仅仅提高了药物的溶解度，却并不具有肿瘤靶向和缓释效果。中国发明申请CN200380109606. 9、CN97199720. 9、CN20031023461. X、CN02811017.X、CN03108361. 7、CN200610077006. 4、及发明专利 ZL01119258. 5、ZL03108361. 7 公开了白
蛋白宁用于制备纳米粒，但其中涉及的产品和技术仅仅是采用人血清白蛋白，且制备过程中采用大量有机溶剂，且需要高压均质，较为繁琐。
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磷脂常用于脂质体的制备中，已有专利采用脂质体作为载药系统包载活性药物。专利CN200710132056. 2，CN200910011910. 9虽采用磷脂作为组成物，但其中磷脂仅用于增加药物溶解度，且在用前加入水化介质形成亚微粒混悬液，并未事先制备为纳米颗粒，不具备肿瘤靶向作用。中国发明申请CN200610037609. I、CN02129204. 3、CN02160028. 7和发明专利ZL94191101. 2、ZL96190332. 5中构建了蛋白与磷脂的组合物，但其中的蛋白仅作为活性药物。迄今为止，有关紫杉烷类药物的基础和应用基础研究中，主要集中于其作为模型药物的靶向研究和药物合用的研究，尚未见有效地以白蛋白纳米粒将其制备为纳米制剂的文献报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种紫杉烷类白蛋白纳米粒，尤其是注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂及其制备方法，本发明中将难溶性紫杉烷类药物制备为注射用肿瘤靶向白蛋白纳米粒，与现有制剂相比具有较高的载药量，良好的肿瘤靶向效果和缓释效果，且制备工艺简便，适宜工业化大生产。本发明所述的可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂以磷脂为稳定剂，紫杉烷类药物与白蛋白结合后经磷脂分散并使其稳定。本发明利用紫杉烷类药物与白蛋白结合率高的特性，使两者自然形成并制成白蛋白纳米粒，再采用磷脂分散、稳定所述的纳米粒子(使其具有极高的水溶性)，最终制得可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂。本发明制剂与现有技术的本质的区别在于，将磷脂作为分散稳定药物和白蛋白复合物的介质，与药物和白蛋白共同构成稳定的纳米制剂，所述磷脂并不单独形成脂质体。具体而言，本发明的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，由紫杉烷类药物、白蛋白、磷脂及药剂学上必要的辅料制成，其中，紫杉烷类药物、白蛋白、磷脂和辅料所占的质量比分别为I 30%，5 70%，5 95%，0. 01 1%，优选的，所述的紫杉烷类药物、白蛋白、磷脂和辅料所占的质量比分别为2 5%，10 25%，50 75%，0. 02 0. 5%。本发明中，所述的紫杉烧类药物选自紫杉醇和多烯紫杉醇(docetaxel)的一种或者两种的组合；本发明中，所述的白蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、羊血清白蛋白、驴血清白蛋白、马血清白蛋白、兔血清白蛋白、猪血清白蛋白及其他种类白蛋白，优选人血清白蛋白或牛血清白蛋白；本发明中，所述的磷脂选自蛋黄卵磷脂(EPC)、大豆磷脂(SPC)、氢化豆磷脂(HSPC)、二月桂酰卵磷脂(DLPC)、二硬脂酰卵磷脂(DSPC)U-肉豆蘧酰_2_棕榈酰卵磷脂(MPPC)U-棕榈酰-2-肉豆蘧酰卵磷脂(PMPC)U-棕榈酰-2-硬脂酰卵磷脂(PSPC)U-硬脂酰-2-棕榈酰卵磷脂(SPPC)、二油酰基卵磷脂(D0PC)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二棕榈酰甘油(DPPG)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、二棕榈酰神经鞘磷脂(DPSP)、二棕榈酰卵磷脂(DPPC)、二棕榈酰磷脂酰二丝氨酸(DPPS)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二油酰磷脂酰甘油(D0PG)、二肉豆蘧酰磷脂酸(DMPA)、二肉豆蘧酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、脑磷脂酰丝氨酸(PS)、二肉豆蘧酰卵磷脂(DMPC)、二肉豆蘧酰磷脂酰丝氨酸(DMPS)、脑神经鞘磷脂(BSP)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二硬脂酰神经鞘磷脂(DSSP)或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)中的一种或多种；优选EPC、SPC或HSPC ；本发明中，所述的药剂学上必要辅料主要为抗氧化剂如维生素E、维生素C、反丁烯二酸、苹果酸、没食子酸丙酯、亚硫酸氢钠和偏亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸和L-异亮氨酸；·优选维生素E、维生素C和亚硫酸氢钠；本发明采用乳化法制备注射用白蛋白纳米粒，初乳已经具有适合注射的粒径，可选择性采用超声或高压均质工艺进一步控制粒径。本发明的一个实施例中，分别将表I处方I 30中的紫杉烷类溶于适量乙醇或其他合适溶剂中，将磷脂溶于适量二氯甲烷中，将二者混合后作为油相；将白蛋白和抗氧化剂溶于适量去离子水中(水相)，于室温或冰水浴中将油相滴入磁力搅拌的水相中，并继续搅拌一定时间，然后40° C水浴旋转蒸发除去乙醇和二氯甲烷，制得载紫杉烷类药物的白蛋白纳米粒。本发明中，所述的紫杉烷类药物制备为白蛋白纳米粒后，其分散介质可为水、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、碳酸盐缓冲液、5%葡萄糖溶液或生理盐水。本发明的可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂可用于制备治疗癌症的药物，或者作为药物用于癌症治疗；其中，所述的癌症包括肺癌、乳腺癌、卵巢癌、脑胶质瘤、肝癌、胰腺导管癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、皮肤癌、淋巴瘤、头颈部肿瘤和起源于胆囊、口腔、外周神经系统、粘膜、腺体、血管、骨组织、淋巴结、眼睛的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤等。本发明中，所述的可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂，可采用静脉、皮下、肌内、膜内、腹膜内或其它途径进行注射给药。本发明中，所述紫杉烷类药物被包载后，每次的紫杉烷类药物给药剂量为0. 01 20mg/kg,优选的每次给药剂量为I 10mg/kg ;给药方案为每天给药或间隔给药,每一疗程给药剂量为0. 3 600mg/kg，优选的每一疗程给药剂量为4 40mg/kg。本发明的可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂经药效学试验，结果表明，其治疗效果优于市售注射剂。本发明利用纳米粒子对肿瘤的增强渗透和滞留效应(EPR效应)，使更多药物被动靶向而浓集于肿瘤组织，提高其抗肿瘤效果；同时，由于注射方式的生物利用度高以及所述的可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂存在被动靶向作用，可大大降低给药剂量，从而使得非靶部位的药物浓度有效降低，有助于降低药物的毒副作用；所述的可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂避免了上市口服制剂生物利用度较低、患者顺应性差的缺点，将白蛋白纳米粒的水溶性提高作用和被动靶向作用相融合，具有良好的临床应用前景。另一方面，本发明制备方法简单，药物回收率高，适于工业化大生产。本发明的可溶性注射用白蛋白纳米粒与现有技术相比，具有以下显著优点①对紫杉烷类药物具有显著的增溶作用，其溶解度足够临床注射应用；②包封率几乎为100%，制备过程无损失，载药量亦较高；③可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂可利用肿瘤部位的EPR效应，增加药物在肿瘤组织的蓄积，利于发挥药物的抗肿瘤效果，降低对其它组织的毒副作用。④具有缓释作用，能够持续杀死肿瘤细胞，减少给药次数。
为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本发明的可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。
图I显示了本发明中各制剂组给药后人非小细胞肺癌A549瘤体体积与时间的关系。图2显示了本发明中各制剂组给药后荷人脑胶质瘤裸鼠的生存期。图3显示了本发明中紫杉醇白蛋白纳米粒在荷人脑胶质瘤裸鼠的组织分布。图4显示了本发明中正常小鼠给与紫杉醇白蛋白纳米粒或者紫杉醇注射液后体重随时间的变化。具体的实施方式实施例I、紫杉醇白蛋白纳米粒的处方工艺表I包载紫杉醇的白蛋白纳米粒处方中各组分的比例(mg)
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权利要求
1.一种注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，由紫杉烷类药物、白蛋白、磷脂及药剂学上必要的辅料制成，其中，所述的紫杉烷类药物、白蛋白、磷脂和辅料所占的质量比分别为I 30%，5 70%，5 95%，O. 01 1%。
2.按权利要求I所述的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，所述的紫杉烷类药物、白蛋白、磷脂和药剂学上必要的辅料所占的质量比分别为2 5%，10 25%，50 75%，O. 02 O. 5%。
3.按权利要求I所述的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，所述的紫杉烷类药物选自紫杉醇或/和多烯紫杉醇。
4.按权利要求I所述的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，所述的白蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、羊血清白蛋白、驴血清白蛋白、马血清白蛋白、兔血清白蛋白或猪血清白蛋白及其他种类白蛋白。
5.按权利要求I所述的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，所述的磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化豆磷脂、二月桂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、I-肉豆蘧酰-2-棕榈酰卵磷脂、I-棕榈酰-2-肉豆蘧酰卵磷脂、I-棕榈酰-2-硬脂酰卵磷脂、I-硬脂酰-2-棕榈酰卵磷脂、二油酰基卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰甘油、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰神经鞘磷脂、二棕榈酰卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰二丝氨酸、二月桂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蘧酰磷脂酸、二肉豆蘧酰磷脂酰乙醇胺、脑磷脂酰丝氨酸、二肉豆蘧酰卵磷脂、二肉豆蘧酰磷脂酰丝氨酸、脑神经鞘磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰神经鞘磷脂或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种。
6.按权利要求I所述的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，所述的药剂学上必要的辅料选自维生素E、维生素C、反丁烯二酸、苹果酸、没食子酸丙酯、亚硫酸氢钠和偏亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸或L-异亮氨酸。
7.按权利要求I所述的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂，其特征在于，所述的白蛋白纳米粒采用水、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、碳酸盐缓冲液、5 %葡萄糖溶液或生理盐水为分散介质。
8.一种制备权利要求I所述的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂的方法，其特征在于，采用乳化法制备注射用白蛋白纳米粒，初乳具有适合注射的粒径后，采用超声或高压均质工艺进一步控制粒径，其包括步骤 紫杉烷类药物溶于适量乙醇或其他合适溶剂中，将磷脂溶于适量二氯甲烷中，将二者混合后作为油相；将白蛋白和抗氧化剂溶于适量去离子水中，于室温或冰水浴中将油相滴入磁力搅拌的水相中，继续搅拌，然后40° C水浴旋转蒸发除去乙醇和二氯甲烷，制得载紫杉烷类药物的白蛋白纳米粒。
9.权利要求I的注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂在制备治疗肺癌、乳腺癌、卵巢癌、脑胶质瘤、肝癌、胰腺导管癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、皮肤癌、淋巴瘤、头颈部肿瘤和起源于胆囊、□腔、外周神经系统、粘膜、腺体、血管、骨组织、淋巴结、眼睛的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤药物中的用途。
10.按权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的制剂其给药方式为，静脉、皮下、肌内、膜内、腹膜内或其它途径的注射给药。
11.按权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的紫杉烷类药物的给药剂量为O. Ol 20mg/kg/每次,给药方案为每天给药或间隔给药,每一疗程给药剂量为O. 3 600mg/kg。
全文摘要
本发明属于药物制剂领域，涉及一种可注射用紫杉烷类药物白蛋白纳米粒制剂。本发明以白蛋白和紫杉烷类药物结合、以磷脂加以分散和稳定而形成的白蛋白纳米粒，制成可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂。本发明利用纳米粒子对肿瘤的增强渗透和滞留效应，使更多药物被动靶向而浓集于肿瘤组织，提高其抗肿瘤效果；同时，由于注射方式的生物利用度高以及所述的可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂存在被动靶向作用，可大大降低给药剂量，从而使得非靶部位的药物浓度有效降低，有助于降低药物的毒副作用，具有良好的临床应用前景。本制剂制备方法简便，适宜工业化大生产。
文档编号A61K9/14GK102784109SQ20121030174
公开日2012年11月21日 申请日期2012年8月22日 优先权日2012年8月22日
发明者庞志清, 蒋新国, 高会乐 申请人:复旦大学