专利名称：紫景天在制备治疗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种中药材新用途，即紫景天在制备治疗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
在现有技术中，紫景天为景天科(Crassulaceae)植物紫八宝Hylotelephiurn週 仏.ノ的全草,又名紫八宝,景天科。多年生草本。块根多数,胡萝卜状。莖
直立，单生或少数聚生，高16 70cm。叶互生,卵状长圆形至长圆形,长2 7cm,宽O. 5 3cm,先端急尖，钝，上部叶无柄，基部圆，下部叶基部楔形，边缘有不整齐牙齿。花序伞房状，花密生，花梗长4mm ;萼片5，卵状披针形，长2mm，先端尖，基部合生；花瓣5，紫红色，长圆状披针形，长5 6mm，急尖，自中部向外反折；雄蕊10，与花瓣稍同长；鱗片5，线状匙形，长Imm,先端稍宽,有缺刻；心皮5,直立,椭圆状披针形,长6mm,两端渐狭,花柱短。瞢莢果。种 子小，卵状椭圆形，长1mm，褐色花期7 8月，果期9月。生于海拔420 1550m的山坡草原上或林下阴湿山沟边。分布于新疆阿勒泰、辽宁、吉林、黑龙江。紫景天在《中国长白山药用植物彩色图志》有记载(作者严仲铠李万林，出版社人民卫生出版社，出版时间1997年10月)。《特种经济动植物》2008年第8期刊登了王海娟、李海洋文章“紫景天的栽培利
田，，
川 ο中国发明专利说明书公布了〈紫景天总黄酮及其提取方法和药物用途〉发明专利申请，申请号CN201010621895. 2 申请日2010.12.31申请公布号CN102068482A申请公布日2011.05.25。紫景天总黄酮在制备治疗或预防复发性ロ疮、口腔溃疡和牙周炎的药物中的应用。具有清热解毒，收敛止血，消肿生肌的功能。用于治疗或预防复发性ロ疮、口腔溃疡、牙周炎及相关口腔疾病。上述文献均没有报导紫景天在制备治疗肿瘤药物中的应用。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足而提供一种紫景天新的医药用途，即紫景天在制备治疗肿瘤药物中的应用。本发明的技术解决方案是紫景天在制备治疗肿瘤药物中的应用。所述的肿瘤是指肺癌。紫景天制备方法步骤如下取紫景天的干燥根及根茎切段，分别加8、8、6倍量的水煎煮三次，每次lh，合并煎液、浓缩制得。以紫景天为原料，采用常规提取方法提取有效部位即可。最后做成的药物剂型可以是制药行业常用剂型。可以加上常用的药物载体(如赋形剂或辅料)，如可以制成片剂、胶囊剂(软胶囊剂)、颗粒剂、ロ服液、散剂、丸剂、液体制剂或其它常规制剂，不限于此。本发明的优点是本项目通过采用系统预试法(试管反应与薄层层析)与LC-MS联用技术，对紫景天进行化学成分分析，确定了其主要化学成分(多糖类、黄酮类、强心苷、香豆素类、蒽醌类等化学成分)或化合物结构类型。并完成了紫景天抗肿瘤活性部位的确定。在前期预试实验的基础上，用水醇法提取，提取液减压回收こ醇至无醇味后，依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇溶剂萃取，得到相应的有机溶剂萃取物和水溶性部分。在细胞水平上评价了各部位对肿瘤细胞的抑制作用，确定了紫景天抗肿瘤的活性部位。并进一歩对紫景天水煎液进行了体内抗肿瘤实验，表明紫景天具有一定的抗肿瘤活性。对紫景天日后成品药物开发利用、临床提供了科学依据。下面将结合实验例对本发明的内容作进ー步详细描述确认。
图I是Fr-I对Lewis肺癌细胞细胞毒性线性关系。图2是Fr-3对Lewis肺癌细胞细胞毒性实验线性关系图。
图3是Fr-4对Lewis肺癌细胞细胞毒性实验线性关系图。图4是Fr-5对Lewis肺癌细胞细胞毒性实验线性关系图。
具体实施例方式实验例Iー紫景天抗肿瘤有效部位筛选 § I. I样品制备
制得紫景天5个部位，分别标号为Fr-1、Fr-2、Fr-3, Fr-4, Fr-5,制备过程如下
Fr-I代表紫景天水煎液，取紫景天的干燥根及根茎O. 5kg (切成1cm，备用)，分别加8、8、6倍量的水煎煮三次，每次lh，合并煎液浓缩至IOOOml制得。Fr-2代表紫景天的醇提液。取紫景天的干燥根及根茎O. 5kg (切成1cm，备用)，加95%的こ醇分别回流提取lh、lh，合并回流液制得。Fr-3、Fr_4、Fr_5分别代表紫景天提取液减压回收こ醇至无醇味后，依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇溶剂萃取，萃取四次，每次萃取试剂用量为原溶剂量的一半。§1.2 细胞株
Lewis肺癌细胞，由中国医学科学院药物研究所肿瘤中心提供，置于37°C、饱和湿度、5% CO2培养箱中用DMEM培养。§ I. 3试药及器材
10%胎牛血清HyClone公司；
低温冰箱美国REVCO公司；
低温高速离心机=Kendro仪器公司；
磁力搅拌器=KIKA出品；
冷冻干燥机北京博医康实验仪器有限公司；
离心机I-B SIGMA公司；
回旋振荡器HY-5 :国华公司；
CO2 培养箱SANYO ；
超净工作台哈尔滨市东联公司；
MH-I型微量振荡器江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司；
酶标仪久宇鑫泰生物技术有限公司；
微量移液器=Eppendorf公司。
§ I. 4实验方法(MTT法)
1.4. I MTT溶液的配制
称取O. 5 gMTT，溶于100 mL的磷酸缓冲液(PBS)中，用O. 22 μ m微孔滤膜除菌，4°C避
光保存。I. 4. 2 MTT 操作步骤
I、接种细胞用含10%胎小牛血清的RPMI培养液配成单个细胞悬液，以每孔5X IO4个细胞接种到96孔板，每孔体积100 μ L02、加药用适宜的溶剂溶解药物(水溶性的药物要滤过除菌，脂溶性的药物即用DMSO溶解的药物，DMSO终浓度要低于O. 1%，否则会对细胞产生毒性作用)稀释成不同的浓度加入到板孔内，每个浓度设3个孔，另设加细胞和培养液不加药的3孔为对照组。3、培养细胞将培养板放入CO2孵箱，37°C、饱和湿度、5% CO2条件下培养3天。4、呈色培养3天后，每孔加MTT溶液15 μ L，继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液。每孔加100 yLDMSO，振荡10 min，使结晶物充分溶解。5、比色选择适宜的波长(參考文献选择570nm)，在酶标仪上測定各孔A值，记录结果。6、细胞增殖抑制率=(A对照-A药物)/A对照X 100%。7、IC5tl值的计算，采用下述表格中的数据，在Excel中分别以浓度和抑制率为横纵坐标做散点图，导出回归方程，设定I (抑制率)等于50时的X值即为IC5tl值，単位mg/mL。§ I. 5实验结果
表I Fr-I对Lewis肺癌细胞毒性实验结果
权利要求
1.紫景天在制备治疗肿瘤药物中的应用。
2.按照权利要求I所述的应用，其特征在于所述的肿瘤是指肺癌。
3.紫景天制备方法，其特征在于步骤如下取紫景天的干燥根及根茎切段，分别加8、8、6倍量的水煎煮三次，每次lh，合并煎液、浓缩制得。
全文摘要
本发明涉及一种中药材新用途，即紫景天在制备治疗肿瘤药物中的应用。本项目通过采用系统预试法与LC-MS联用技术，对紫景天进行化学成分分析，确定了其主要化学成分或化合物结构类型。并完成了紫景天抗肿瘤活性部位的确定。在前期预试实验的基础上，用水醇法提取，提取液减压回收乙醇至无醇味后,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇溶剂萃取，得到相应的有机溶剂萃取物和水溶性部分。在细胞水平上评价了各部位对肿瘤细胞的抑制作用，确定了紫景天抗肿瘤的活性部位。并进一步对紫景天水煎液进行了体内抗肿瘤实验，表明紫景天具有一定的抗肿瘤活性。对紫景天日后成品药物开发利用、临床提供了科学依据。
文档编号A61P35/00GK102824398SQ20121035236
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月21日 优先权日2012年9月21日
发明者张海丰, 滕坤, 孙健, 董艳辉, 孙仁爽, 车环宇, 姜瑞平 申请人:通化师范学院