专利名称：一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种高效提取铁皮石斛等多味中药材的有效成分，并进一步制备成颗粒剂的方法。
背景技术：
中药颗粒剂是指中药材的提取物与适宜辅料或部分药材细粉混匀，制成的干颗粒状剂型。中药颗粒剂是结合汤剂、酒剂和糖浆剂的特点而发展起来的一种中药剂型，既保持了汤剂吸收快、显效迅速的特点，又克服了汤剂服用前临时煎煮、久置易霉败变质的特点，还可掩盖某些中药的苦味。也可以说“中药颗粒剂是中药饮片加工炮制工艺及剂型改革研究的进展，是依据中医药理论临床应用需要，而对中药材及中药材饮片进行特殊加工的一种便于携带和服用的疗效显著增高的新剂型”。开始出现于上世纪70年代，由于其携带服用方便，在上世纪80年代的中药生产工业中曾以年递增41. 9%的速度发展。 中药颗粒的提取、浓缩、干燥、辅料选择、制粒方法和粒度选择等都应该进行优选和详细的研究。由于中药成分复杂、既要体现中医药理论指导的自身特色，还要保留中药传统制剂合理的本质、注意成分和疗效的密切相关性等，所以中药颗粒剂的制备关键的问题是对原药材的提取技术研究和干燥技术研究。提取是从药材原料中分离有效成分的单元操作，直接关系到产品有效成分的含量，影响内在质量、临床疗效、经济效益及GMP的实施。中药制剂的研究和生产从传统制剂原粉成型的丸、散到浸提型制剂如颗粒剂、浸膏片、胶囊、口服液、注射液等的兴起和发展，是半个世纪来中药制剂进步的特征，属于从传统制剂进入改进制剂的时期。由于中药成分复杂，要体现中医药理论指导的自身特色，要尽可能保留中药传统制剂合理的本职，注重成分和疗效的密切相关性等诸方面，中药提取工艺的研究和选择是十分重要，也是相当复杂的课题。铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎，味甘，性微寒，归胃、肾经。具有益胃生津，滋阴清热的功能。现代医药学研究表明，铁皮石斛主要含有多糖类、氨基酸和微量元素、菲类和少量生物碱等化学成分，具有增强免疫、抗疲劳、抗肿瘤、降血糖等药理作用。茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw. )ffolf的干燥菌核，味甘、淡，性平，归心、肺、脾、肾经。具有利水渗湿，健脾宁心的功能。现代医药学研究表明，茯苓主要成分为β -茯苓聚糖和三菇类化合物乙酞茯苓酸、茯苓酸和3 β -羟基羊毛留三烯酸。具有提高免疫力、抗肿瘤、抗肝硬化等功能。人参为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根及根茎，味甘、微苦，性平，归脾、肺、心经。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功能。现代医药学研究表明，人参主要含多种人参皂苷、糖类、挥发油、肽、氨基酸、微量元素及有机酸、多种维生素、胆碱和酶等成分。具有抗疲劳、增强免疫力、抗肿瘤，降血糖和抗衰老等作用。枸杞子为爺科植物宁夏枸杞Lycium barb arum L.的干燥成熟果实,味甘,性平,归肝、肾经。具有滋补肝肾，益精明目的功能。现代医药学研究表明，枸杞子主要含有糖类、氨基酸和微量元素等化学成分，具有增强免疫力、抗肿瘤、降血脂等功能。山药为薯菌科植物薯菌Dioscorea opposite Thumb.的干燥根莖,味甘,性平,归脾、肺、肾经。具有补脾养胃，生津益肺，补肾涩精的功能。现代医药学研究表明，山药含有多糖、蛋白质、多巴胺、盐酸山药碱、山药素、维生素、钙、镁、铜及丰富的碘和其它微量元素，以及尿囊素、皂昔、胆碱等化学成分。具有降血糖、增强免疫力、抗衰老及降血脂的功能。薏该仁为禾本科植物薏该Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman. ) Stapf的干燥成熟种仁，味甘、淡，性凉，归脾、胃、肺经。具有健脾渗湿，除痹止泻，清热排脓的功能。现代医药学研究表明，薏该仁含有糖类、薏该仁酯(coixenolide),肉豆蘧酸(myristicacid)、芸苔留醇等，尚含氨基酸、蛋白质等。具有增强免疫力、抗肿瘤、降血糖等功能。但是，到目前为止，尚未见到以铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁为主要成分的中药制剂的报道。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种铁皮石斛颗粒的组成配方及制备成颗粒剂的方法。本发明的铁皮石斛颗粒能够增强免疫力、缓解体力疲劳。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法，它包括如下步骤(I)按照铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁的重量配比为15 28 30 42 :7 18 :3 13 :15 28 15 28 取材；(2)将铁皮石斛置多功能提取罐中，加20倍量水浸泡4h，煎煮1. 5h，过滤得第一滤洛和第一滤液；(3)将第一滤渣、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁置多功能提取罐中，加约12倍量水煎煮lh，过滤得第二滤洛和第二滤液；(4)将第二滤渣置多功能提取罐中，加10倍量水煎煮lh，过滤得第三滤渣和第三滤液；(5)合并第一滤液、第二滤液和第三滤液，用板框过滤机过滤后，滤液置于减压浓缩罐中；55-65°C、真空度O. 07-0. 09MPa下减压浓缩至相对密度为1. 15-1. 20 (60°C测)，得浓缩浸膏；(6)在浓缩浸膏中加入质量为浓缩浸膏1. 5-2. 5倍的β _环糊精，喷雾干燥成浸膏粉。(7)干法制粒，过筛整粒即得铁皮石斛颗粒。本发明得有益效果是本发明具有以下技术效果调节免疫功能，抗疲劳，补气养阴，适用于体质虚弱及易疲劳者，特别对病后康复、劳累过度、肺胃阴虚表现者具有良好的作用，消除人们由繁忙的工作和学习所致的神疲乏力，能有效地提高工作和学习效率。传统煎煮法铁皮石斛有效成分提取率较低，因为铁皮石斛中的粗多糖含量较多，而且药材中含有大量的粘液质，各成分较难煎出，本发明的方法在提取前进行一定时间的浸泡、单独多提取一次均有利于其有效成份的提取；利用喷雾干燥、干法制粒等先进工艺制成颗粒剂，整个工艺过程仅使用水为提取溶剂，生产过程没有废水、废气产生，适合工业化生产。本发明采用颗粒剂型，以β -环糊精为赋形剂，具有溶解性好、口感好生物利用度高、携带方便、计量准确等特点，最终产物有健脾养胃、滋补肝肾、补气养阴、扶正固本的作用，经科学实验证明具增强免疫力、缓解体力疲劳的保健食品，具有良好广阔的市场前景。用本发明的铁皮石斛颗粒进行毒理学安全性实验1、急性毒性实验结论采用最大耐受剂量法、将本发明铁皮石斛颗粒以20000mg/kg剂量对雌雄小鼠(19-22g)各10只经口灌胃染毒。灌胃容量按O. 4ml/20g体重计，在24小时内对小鼠灌胃2次。本发明铁皮石斛颗粒对雌雄小白鼠的急性经口的最大耐受剂量MTD 均大于 20000mg/kg。2、微核实验结论采用30小时两次灌胃法，将本发明铁皮石斛颗粒分别以 10000mg/kg、5000mg/kg、2500mg/kg 三个剂量组，对小鼠(25-30g，雌雄各半)，按 O. 4ml/20g体重，分别对各组动物灌胃。本发明铁皮石斛颗粒骨髓嗜多染红细胞微核实验结果为阴性。3、精子畸形实验结论将样品分别以10000mg/kg、5000mg/kg、2500mg/kg三个剂量组，对雄性小鼠(25-35g)按O. 4ml/20g体重，分别对各组动物灌胃。每日一次，连续5天。于首次给样后第35天，取二侧副睾剪碎，取滤液制片。镜检观察，每鼠计数1000个精子的畸形数。本发明铁皮石斛颗粒精子畸形实验结果为阴性。。4、Ames实验结论米用平板掺入法，测试计量为O. 06mg/皿、O. 18mg/皿、O. 55mg/皿、1. 66mg/皿、5. OOmg/皿。检测重复一次。本发明铁皮石斛颗粒Ames实验结果为阴性。5、30天喂养实验SD大鼠80只(60_80g)，雌雄各半，将本发明铁皮石斛颗粒设立
2.5g/kg、5. 0g/kg、10. Og/kg三个剂量组(相当于本发明铁皮石斛颗粒推荐剂量6g/kg/日的25倍，50倍，100倍)单笼饲养，自由饮食，连续喂养30天。结果大鼠生长情况基本良好。血色素、红细胞、白细胞计数及其分类的检查结果均在正常范围内。肝、肾、脾、胃肠、性器官等主要脏器的组织学检查结果未发现与实验有关的病变。用本发明铁皮石斛颗粒进行有关增强免疫力功能和抗疲劳功能实验本发明铁皮石斛颗粒，为浅黄色颗粒，人体推荐剂量为每日6g/60kg。本次动物实验设低、中、高三个剂量组，即O. 5g/kg、l. 0g/kg、3. Og/kg,分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。对小鼠连续灌胃给予样品30天，另设空白对照组，灌胃给予蒸馏水。实验结果表明本发明铁皮石斛颗粒能明显增强细胞免疫活性，提高单核-巨噬细胞吞噬能力，但体液免疫活性及NK细胞活性未见明显增强。结论在本次试验条件下，小鼠经口给予本发明铁皮石斛颗粒具有增强免疫力功倉泛。1.材料1.1、受试本发明铁皮石斛颗粒及剂量设计本发明铁皮石斛颗粒，本品人体推荐剂量为每日6g/60kg。本次动物实验设低、中、高三个剂量组，即O. 5g/kg、1.0g/kg、3.0g/kg，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。对小鼠连续灌胃给予样品30天，另设空白对照组，灌胃给予蒸馏水。称取样品O. 5g、l. 0g、3. Og分别加蒸馏水至20ml，按此比例配制即为低、中、高三个剂量组的供试液。1. 2、实验动物清洁级ICR种小白鼠，许可证号SCXK (沪)2007-0005,体重21-27g，雌性，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，本中心SPF动物房饲养。实验动物饲养室温度20-25°C，相对湿度40-70%，实验动物使用许可证号SYXK(沪)2007-0008，动物饲养料由苏州双狮实验动物饲料科技服务有限公司提供，登记证号苏E饲生字(2002) 006。2.试验方法2.1、分组将200只小鼠按体重随机分入五个实验大组，每组40只(免疫一组进行NK细胞活性测定和淋转实验，免疫二组进行DTH、脾指数和胸腺指数实验，免疫三组进行溶血空斑和溶血素实验，免疫四组进行碳廓清实验，免疫五组进行吞噬实验)。2. 2、喂养并称重按剂量设计连续喂养小 鼠30天，每周称重一次，计算实验初，中期(第二周)末和实验末体重。实验结果用SPSS软件进行统计。2. 3、脏器/体重比值(胸腺指数、脾指数)测定动物连续给样30天后，颈椎脱臼处死，取胸腺、脾脏称重，分别计算胸腺指数和脾指数。2. 4、细胞免疫功能测定2.4. UConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验动物连续给样30天后，颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾淋巴细胞悬液，调整细胞浓度为3X IO6个/ml，将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔Iml, —孔加75 μ I ConA液(相当于7. 5 μ g/ml),另一孔作为对照，置5%C02, 37°C培养72h。培养结束前4h，每孔加入MTT (5mg/ml) 50 μ I/孔，继续培养4h，培养结束后，每孔加入Iml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解后，以570nm波长进行比色，实验结果用SPSS15. O进行统计。2. 4.2, DTH测定及胸腺指数、脾指数的测定致敏动物连续给样30天后，每鼠腹部去毛，范围约3cmX 3cm，将1%DNFB溶液10 μ I均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击。24h后，每鼠称重，颈椎脱白处死小鼠，用打孔器取下直径8mm的左右耳片，称重并计算肿胀度。再取胸腺、脾脏称重，分别计算胸腺指数、脾指数。2. 5、体液免疫功能测定2. 5.1、抗体生产检测试验动物连续给样30天后，将脱纤维绵羊红细胞免疫5天后，动物颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为5 X IO6个/ml。将表层培养基(Ig琼脂糖加双蒸水至100ml)加热溶解后，放入45°C水浴保温，与等量pH7. 2-7. 4、2倍浓度的Hanks液混合,分装小试管,每管O. 5ml,再向管内加50 μ I 110%SRBC, 20 μ I中温育1. 5h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1:10)加入到平皿中，继续温育1. 5h后，计数溶血空斑数。2. 5. 2、血清溶血素实验动物连续给样30天后，用2%(v/v)SRBC免疫动物5天后，眼眶采血，分离血清。在96孔微量血凝板上加100 μ I生理盐水，再分别在第一排加100 μ I血清，以后各排作倍比稀释，每孔加l%SRBC100y 1，振荡后37°C放置3h，当血球对照出现沉
落后观察结果。2. 6、单核-巨噬细胞功能测定实验2. 6.1、小鼠碳廓清实验动物连续给样30天后，尾静脉注射1:3稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min后，分别从眼静脉取血20μ 1，并将其加到2mlO. l%Na2C03溶液中，用分光光度计在600nm处测OD值，以Na2CO3溶液作空白对照。根据动物体重、肝重和脾重计算吞噬指数。2. 6. 2、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验动物连续给样30天后，每鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液lml，间隔30min，颈椎脱白处死，固定于鼠板上，剪开腹壁皮肤，注射生理盐水2ml，转动鼠板Imin，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37 °C孵箱湿孵30min，用生理盐水漂洗，晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，4%Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干，用油镜镜检，计算吞噬百分率(％)和吞噬指数。2. 7、NK细胞活性测定动物连续给样30天后，动物颈椎脱曰处死，取脾脏，制成脾细胞悬液(效应细胞)，取传代后24h YAC-1细胞加入RPMI1640完全培养液，调整细胞浓度为4X IO5个/ml (靶细胞)，取靶细胞和效应细胞各100 μ I (效靶比50:1 )，加入U型96孔板，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100 μ 1，最大释放孔加靶细胞和1%ΝΡ40各100 μ 1，上述各项均设三个复孔，于37°C、5%C02培养箱中培养4h，每孔吸取上清液100 μ I置平底96孔板中，同时加入LDH基质液100 μ 1，反应3min,每孔加入lmol/1的HCl 30 μ I终止，用酶标仪在490nm处测定OD值。2. 8、统计实验结果用SPSS15. O软件进行统计分析，各剂量分别于对照组比较。
3.结果在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定本发明铁皮石斛颗粒具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能检测项目中的两个实验(即小鼠脾淋巴细胞转化实验和迟发型变态反应实验)结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量结果为阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验(即抗体生成细胞检测和血清溶血素测定)结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量结果为阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验(即小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验)结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量结果为阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果为阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。表1:免疫一组(NK细胞活性、脾淋巴细胞转化实验)结果(x + SD)(n=10)
权利要求
1. 一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤 (1)按照铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁等的重量配比为15 2830 .42 7 18 :3 13 :15 28 :15 28 取材； (2)将铁皮石斛置多功能提取罐中，加约20倍量水浸泡4h，煎煮1.5h，过滤得第一滤渣和第一滤液； (3)将第一滤渣、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁置多功能提取罐中，加约12倍量水煎煮lh，过滤得第二滤渣和第二滤液； (4)将第二滤渣置多功能提取罐中，加约10倍量水煎煮lh，过滤得第三滤渣和第三滤液； (5)合并第一滤液、第二滤液和第三滤液，用板框过滤机过滤后，滤液置于减压浓缩罐中；55-65°C、真空度O. 07-0. 09MPa下减压浓缩至相对密度为1. 15-1. 20 (60°C测)，得浓缩浸膏；(6)在浓缩浸膏中加入质量为浓缩浸膏1.5-2. 5倍的环糊精，喷雾干燥成浸膏粉； (7)干法制粒，过筛整粒即得铁皮石斛颗粒。
全文摘要
本发明公开了一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法，该方法首先按照铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁的重量配比为15～2830～427～183～1315～2815～28取材；将铁皮石斛置多功能提取罐中，加水浸泡、煎煮、过滤得第一滤渣和第一滤液；将第一滤渣、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁置多功能提取罐中，加水煎煮，过滤得第二滤渣和第二滤液；将第二滤渣置多功能提取罐中，加水煎煮，过滤得第三滤渣和第三滤液；合并滤液，过滤后，滤液减压浓缩，再加入β-环糊精，喷雾干燥成浸膏粉，最后干法制粒，过筛整粒；本发明整个工艺过程仅使用水为提取溶剂，生产过程没有废水、废气产生，适合工业化生产。
文档编号A61K36/8994GK102988828SQ20121047513
公开日2013年3月27日 申请日期2012年11月21日 优先权日2012年11月21日
发明者赵才标, 张世定 申请人:光明食品集团云南石斛生物科技开发有限公司