一种分步酶解提取浒苔多糖的方法
【专利摘要】本发明提供了一种分步酶解提取浒苔多糖的方法，所述方法包括：以浒苔为原料，在除杂粉碎后对浒苔粉末用水进行浸泡，再分别采用果胶酶、纤维素酶和木瓜蛋白酶对浒苔的水浸提液进行分步酶解处理，然后将酶灭活，离心浓缩、乙醇沉淀，最后进行真空干燥，得到浒苔多糖。本发明产率高、产品纯度高、耗能低、无污染且保留了较高的生物学活性，适合于浒苔多糖的大规模生产，有益于浒苔资源的开发利用，经济和社会价值显著。
【专利说明】一种分步酶解提取浒苔多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种浒苔多糖的提取方法，尤其是涉及一种分步酶解提取浒苔多糖的方法。
【背景技术】
[0002]將苔(Enteromorpha)是一种大型绿藻,俗称苔条、青海苔等，为绿藻门石药目石莼科浒苔属的藻类植物，生长在潮间带。在中国，浒苔产量很高，尤其是东部沿海。近年来，浒苔的快速繁殖对我国沿海造成污染，为治理浒苔过度繁殖造成的污染，需要耗费大量的人力物力，因此如能对浒苔进行开发利用，不但可治理浒苔污染，同时还能够变废为宝。
[0003]自古以来浒苔即为食用和药用藻类，在《本草纲目》中记载浒苔可“烧末吹鼻止衄血；汤浸捣敷手背肿痛”；《隐身居饮食谱》记载:“清胆，消瘰疬瘿瘤，泻胀、化痰，治水土不月艮。浒苔富含糖类、蛋白质、粗纤维及矿物质，同时还含有脂肪和维生素。近年来的研究证实，浒苔的主要成分水溶性多糖是药理活性很强的成分，具有显著的降血脂、抗疲劳、抗菌、抗肿瘤及增强免疫力等多种生物学活性(林文庭.浅谈浒苔的开发与利用.中国食物与营#,2007,9:23 ~25)
[0004]目前浒苔多糖的提取最常用的是热水浸提法(吕玲玲.浒苔水溶性多糖提取工艺的优化研究?安徽农业科学，2009，37 (24):717，756.)，如申请号为201010224578.7的专利申请所述。但是采用热水浸提法从浒苔中提取多糖的收率较低、杂质含量高，耗能高，活性低。
【发明内容】
[0005]本发明就是针对上述问题，提供了一种产率高、产品纯度高、耗能低、无污染且保留较高生物学活性的浒苔多糖的提取方法。
[0006]本发明技术方案所采用的生产工艺过程为:浒苔藻体的除杂、干燥、粉碎——分步酶解一酶的灭活一离心、浓缩、乙醇沉淀一真空干燥。
[0007]具体步骤如下:
[0008]步骤1:将浒苔清洗干净，60~80°C烘干后粉碎、过筛(20~60目)。称取所得浒苔粉末，按料液比1: 20~60(w/v，g/ml)加入蒸馏水，充分搅拌，浸泡10~15h，得浒苔
第一浸提液。
[0009]步骤2:向所述浒苔第一浸提液加入酸调节pH值为3.5~4.5，将温度加热至40~50°C，加入果胶酶，充分搅拌，酶解I~2h，得浒苔第二浸提液。
[0010]步骤3:向所述浒苔第二浸提液加入碱调节pH值为4.5~5.5，将温度加热至50~60°C，加入纤维素酶，充分搅拌，酶解2~4h，得浒苔第三浸提液。
[0011]步骤4:向所述浒苔第三浸提液中加入木瓜蛋白酶，在温度50~60°C、pH值为
5.0~6.0条件下酶解1~2h，得浒苔第四浸提液。
[0012]步骤5:将上述完成分步酶解后得到的产物加热至90~100°C，对残留酶进行灭活，充分搅拌浸泡，处理20~50min，得浒苔第五浸提液。
[0013]步骤6:将浒苔第五浸提液在1000Orpm离心10~15min，上清液过滤后真空浓缩；向浓缩物中加入乙醇，离心沉淀，沉淀物真空干燥，得到浒苔多糖。
[0014]本发明的有益效果:
[0015]本发明采用分步酶解法提取浒苔多糖，在多糖浸提过程中分步加入果胶酶、纤维素酶和木瓜蛋白酶，使其分别在各自酶活力最高的操作环境下处理浒苔浸提液。果胶酶、纤维素酶可水解果胶质和纤维素，有效的溶解细胞壁，使多糖更容易从细胞内释放出来；木瓜蛋白酶不仅能破坏游离的蛋白质，而且能使多糖结合的蛋白质降解，从而使得多糖更充分溶入水中，因此多糖的提取效率和纯度大大提高，并且保留了较高的生物活性。
[0016]利用本发明的提取方法所得成品色泽灰白，多糖得率15.92±1.46%，多糖含量为68.35±4.46%。方法稳定、可靠。体外抗氧化实验证实，所制备的浒苔多糖对超氧阴离子自由基的清除能力为73.1 %~83.7%，清除能力和Vc相当，且具有剂量效应，说明其具备较强的体外抗氧化活性。
[0017]本发明的整个工艺过程中无污染物排放，适合于大规模生产，有益于浒苔资源的开发利用。
【具体实施方式】
[0018]实施例1
[0019]步骤1:将浒苔清洗干净，60°C烘干后粉碎、过40目筛。称取Ikg浒苔粉末，加入20L蒸馏水，充分搅拌，浸泡15h。得浒苔第一浸提液。
`[0020]步骤2:向所述浒苔第一浸提液加入柠檬酸调节pH值为4.0，将温度加热至45°C，加入15g果胶酶，充分搅拌，酶解lh，得浒苔第二浸提液。
[0021]步骤3:向所述浒苔第二浸提液加入0.1M氢氧化钠调节pH值为5.0，将温度加热至55°C，加入IOg纤维素酶，充分搅拌，酶解2h，得浒苔第三浸提液。
[0022]步骤4:向所述浒苔第三浸提液中加入30g木瓜蛋白酶，用0.1M氢氧化钠调节pH值为5.5，在温度55°C酶解2h，得浒苔第四浸提液。
[0023]步骤5:将上述完成分步酶解后得到的产物加热至100°C，对残留酶进行灭活，充分搅拌浸泡，处理30min。得浒苔第五浸提液
[0024]步骤6:将浒苔第五浸提液在1000Orpm离心lOmin，上清液过滤后真空浓缩；向浓缩物中加入浓缩物3倍体积的乙醇，4000rpm离心lOmin，沉淀物真空干燥，得到浒苔多糖156.Sg;多糖含量为68.1 % (采用苯酚-硫酸法测定)；体外抗氧化实验结果显示，当浒苔多糖浓度为0.25mg/mL时，对超氧阴离子自由基的清除能力达到76.4%。
[0025]实施例2
[0026]步骤1:将浒苔清洗干净，60°C烘干后粉碎、过40目筛。称取Ikg浒苔粉末，加入20L蒸馏水，充分搅拌，浸泡IOh。得浒苔第一浸提液。
[0027]步骤2:向所述浒苔第一浸提液加入柠檬酸调节pH值为4.0，将温度加热至40°C，加入IOg果胶酶，充分搅拌，酶解lh，得浒苔第二浸提液。
[0028]步骤3:向所述浒苔第二浸提液加入0.1M氢氧化钠调节pH值为5.0，将温度加热至50°C，加入Sg纤维素酶，充分搅拌，酶解2h，得浒苔第三浸提液。[0029]步骤4:向所述浒苔第三浸提液中加入30g木瓜蛋白酶，用0.1M氢氧化钠调节pH值为5.5，在温度55°C酶解2h，得浒苔第四浸提液。
[0030]步骤5:将上述完成分步酶解后得到的产物加热至100°C，对残留酶进行灭活，充分搅拌浸泡，处理30min。得浒苔第五浸提液。
[0031]步骤6:将浒苔第五浸提液在1000Orpm离心lOmin，上清液过滤后真空浓缩；向浓缩物中加入浓缩物3倍体积的乙醇，4000rpm离心lOmin，沉淀物真空干燥，得到浒苔多糖150.2g;多糖含量为70.6% (采用苯酚-硫酸法测定)；体外抗氧化实验结果显示，当浒苔多糖浓度为0.25mg/mL时，对超氧阴离子自由基的清除能力达到80.7%。
【权利要求】
1.一种分步酶解提取浒苔多糖的方法，其特征在于，包括: 步骤1:将浒苔清洗干净，60~80°C烘干后粉碎、过筛(20~60目)。称取所得浒苔粉末，按料液比1: 20~60(w/v, g/ml)加入蒸懼水,充分搅拌,浸泡10~15h,得將苔第一浸提液。 步骤2:向所述浒苔第一浸提液加入酸调节pH值为3.5~4.5，将温度加热至40~50°C，加入果胶酶，充分搅拌，酶解I~2h，得浒苔第二浸提液。 步骤3:向所述浒苔第二浸提液加入碱调节pH值为4.5~5.5，将温度加热至50~60°C，加入纤维素酶，充分搅拌，酶解2~4h，得浒苔第三浸提液。 步骤4:向所述浒苔第三浸提液中加入木瓜蛋白酶，在温度50~60°C，pH = 5.0~6.0条件下酶解I~2h，得浒苔第四浸提液。 步骤5:将上述完成分步酶解后得到的产物加热至90~100°C，对残留酶进行灭活，充分搅拌浸泡，处理20~50min。得浒苔第五浸提液 步骤6:将將苔第五浸提液在1000Orpm离心10~15min,上清液过滤后真空浓缩；向浓缩物中加入乙醇，离心沉淀，沉淀物真空干燥。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的酸为柠檬酸、盐酸或磷酸中的一种。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，加入果胶酶的量相当于浒苔粉末重量体积的1%~3%。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氨水中的一种。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，加入纤维素酶的量相当于浒苔粉末重量体积的0.5%~2%。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，加入木瓜蛋白酶的量相当于浒苔粉末重量体积的3 %~5 %。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤6中加入浓缩液2~3倍体积的乙醇，于4°C静置3~4h后离心。
【文档编号】A61P39/06GK103804503SQ201210486512
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2012年11月13日 优先权日:2012年11月13日
【发明者】唐志红, 鞠宝, 任育红, 吕家森, 温少红 申请人:烟台大学