专利名称：一种蜂胶软胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明涉及保健食品技术领域，尤其是涉及一种蜂胶软胶囊及其制备方法。
背景技术：
免疫是指机体长期建立起来的一系列固有的保护性系统，增强免疫力对保证身体健康是非常重要的，人体免疫力的降低会导致各种疾病。免疫对机体有三种功能:1、防御功能；2、自我稳定功能；3免疫检视功能。通过这些功能以维持体内环境的平衡和稳定，而免疫功能异常则可出现免疫性疾病，甚至发生肿瘤。目前，经卫生部和国家食品药品监督管理局批准的增强免疫力的保健食品已有上千个，具有提高免疫力功能的功能因子有多糖类、黄酮类、皂苷类、蛋白质等。蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质，使其具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能，对人体有着广泛的医疗、保健作用，现已成为各国科学研究的热点，并成为新兴的保健品倍受推崇。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种生物利用度好、药物稳定性良好、具有增强免疫力功能的蜂胶软胶囊及其制备方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:—种蜂胶软胶囊，包括囊体及封入囊体中的内容物，所述的内容物由以下组分及重量百分比含量的原料制成:
蜂胶18 50;
银杏叶提取物I 20;
聚乙二醇 40040-70；
甘油5—20.=所述的内容物由以下组分及重量百分比含量的原料制成:
蜂胶30;
银杏叶提取物10;
聚乙二醇40050；
甘油W。所述的蜂胶内的总黄酮含量彡18wt%。所述的银杏叶提取物内含有24wt%的总黄酮。
一种蜂胶软胶囊的制备方法，该方法包括以下步骤:(I)制作囊体:以明胶、甘油和纯水为囊体原料，将甘油和纯水注入溶胶罐内，搅拌加热至60 70°C，再加入明胶，继续搅拌20-30分钟后真空脱泡，制作得到囊体；(2)配制内容物:首先将蜂胶粉碎后和聚乙二醇400及甘油在50 70°C下充分混合20 40min，然后再加入银杏叶提取物充分混合30 60min，过胶体磨I 3次，得到混合均匀的内容物；(3)制备胶囊:将步骤(2)配制的内容物及步骤(I)制作得到囊体经过压丸、定型、洗丸、干燥、拣丸和分装步骤，制备得到蜂胶软胶囊。步骤(I)中明胶、甘油及纯水的重量比为5 20: I 10: 5 20。本发明采用的蜂胶、银杏叶提取物的主要活性成分都是黄酮类，具有增强免疫力的保健作用。蜂胶成分相当复杂，主要成分是黄酮类化合物，还有酚类、醇类、酸类脂类等多种化合物，另外还含有少量的铁、钙、铜、硅、锰、铅、锡等微量元素及维生素A、维生素B、多种氨基酸、酶、阿魏酸等。蜂胶或蜂胶提取物在医药上用作过敏源、抗辐射、抗肿瘤、刺激免疫反应等。蜂胶的免疫增强作用与其复杂的化学成分和其提取物的物理性状密不可分。蜂胶中的VA是一种中枢作用佐剂，对免疫中枢起作用，可以刺激抗体应答的增强，VB可增强体液免疫，增强抗体量。蜂胶中的Zn可激发动物的免疫力。免疫细胞在DNA合成过程中，几种依赖性金属酶控制着细胞的生产繁殖，缺Zn对T淋巴细胞的免疫机能会有很大的损害，将导致吞噬细胞明显变化，失去其多型性和伪足而成为平滑的圆形细胞从而使免疫机能下降。大量的实验还证明，蜂胶中的许多酶类、醇类、脂类、酸类物质对机体的免疫系统具有广泛的作用。蜂胶中的松属素、高良姜素、山奈素、对香豆苯甲酸脂、咖啡酸脂和蜂胶浸出物都有抗菌活性，其本身没有抗原性，但能起免疫佐剂作用，能促进抗体的产生，使血清总蛋白和丙种球蛋白的含量增加，白细胞和巨噬细胞的吞噬能力增强，机体的特异性和非特异性免疫能力增强，蜂胶的免疫增强作用是以上诸物质协同作用的结果。银杏叶提取物包括银杏内酯和黄酮类(以槲皮素、山奈索、水杨梅素为主)，除具有扩张心脑血管、舒张支气管、抗菌、消炎等作用外，对人体免疫功能还具有增强作用。蜂胶在聚乙二醇400中能部分溶解，以聚乙二醇400为分散介质，有利于蜂胶和银杏叶提取物在介质内混悬均匀，有利于原料在消化道内分散，易于吸收。与现有技术相比，本发明的软胶囊具有生物利用度好、药物稳定性良好、掩盖不良气味、剂量准确、密封、安全、携带与使用方便等优点，本发明的蜂胶软胶囊具有增强免疫力功能的作用。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1—种蜂胶软胶囊，包括囊体及封入囊体中的内容物，内容物由以下组分及重量百分比含量的原料制成:蜂胶50、银杏叶提取物5、聚乙二醇40040、甘油5 ;其中，蜂胶内的总黄酮含量> 18wt%，银杏叶提取物内含有24wt%总黄酮。
一种蜂胶软胶囊的制备方法，该方法包括以下步骤:(I)制作囊体:以明胶、甘油和纯水为囊体原料，将甘油和纯水注入溶胶罐内，搅拌加热至60°C，再加入明胶，继续搅拌30分钟后真空脱泡，制作得到囊体，其中明胶、甘油及纯水的重量比为5: 10: 20 ;(2)配制内容物:首先将蜂胶粉碎后和聚乙二醇400及甘油在50 70°C下充分混合20 40min，然后再加入银杏叶提取物充分混合30 60min，过胶体磨I 3次，得到混合均匀的内容物；(3)制备胶囊:将步骤(2)配制的内容物及步骤⑴制作得到囊体经过压丸、定型、洗丸、干燥、拣丸和分装步骤，制备得到蜂胶软胶囊，每粒胶囊含内容物为500毫克。对本实施例制备的蜂胶软胶囊的增强免疫力功能进行检测。1、样品:本实施例制备的蜂胶软胶囊2、试验动物及环境:SPF昆明种小白鼠，许可证号:SCXK(沪)2002-0010，体重18 22克,雌性100只,雄性100只,分为四个免疫大组,每大组50只,每个免疫大组的小鼠分为水对照组、溶剂对照组、低、中、高剂量组，各10只。免疫一组(雌性小鼠50只)用于迟发型变态反应(DTH)实验、血清溶血素的测定、抗体生成细胞数的测定；免疫二组(雄性小鼠50只)用于小鼠碳廓清实验；免疫三组(雌性小鼠50只)用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；免疫四组(雄性小鼠50只)用于小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性实验测定。实验环境温度22±2°C，相对湿度50% ±10%。3、剂量设计与受试物给予方式:本发明的蜂胶软胶囊对人体的推荐剂量为每日
1.0g/60kg体重，相当于0.0167g/kg.BW，按相当于人体推荐剂量的5、10、30倍剂量确定小鼠的低中高三种剂量，本实施例中对小鼠的剂量分别设为0.083g/kg.Bff, 0.167g/kg.Bff,
0.50g/kg.Bff三种，经口每日一次灌胃给予小鼠受试物，灌胃体积按10ml/kg.BW。灌胃前用玉米油配制受试物，低、中、高剂量组中受试物的浓度分别为8.33g/L、16.667g/L及50.00g/L,阴性对照组以等体积的蒸馏水代替受试物，溶剂对照组以等体积的玉米油代替受试物，30天后测试各项免疫指标。小鼠以远交系小鼠专用饲料喂饲。4、实验方法4.1脏器体重比值测定小鼠称重后颈椎脱白处死，取其胸腺、脾脏，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污并称重，计算胸腺体重比值与脾脏体重比值。所得数据用PEMS统计软件进行方差分析。4.2迟发型变态反应(足跖增厚法)(DTH)取羊血，用生理盐水洗涤三次，每只鼠经腹腔注射2% (v/v，用生理盐水配置)压积SRBC(2000r/min，IOmin) 0.2ml，致敏后4天，测量左右足跖厚度，同一部位测量3次，取平均值，然后在测量部位皮下注射20% (v/v，用生理盐水配置)压积SRBC20y 1，注射后24小时测量左右足跖厚度，以攻击前后足跖厚度之差表示DTH的程度。所得数据为计量资料，用SPSS统计软件进行方差分析，若受试物攻击前后足跖厚度的差值高于对照组，且差异有显著性(P < 0.05)，可断定该受试物有提高小鼠迟发型变态反应能力的作用。4.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)动物连续给样30天后，颈椎脱白处死，取脾脏，制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为3X 106个/ml，将细胞悬液分为两孔加入24孔培养板中国，每孔1ml，一孔加75 μ IConA液(相当于7.Syg/ml)，另一孔作为对照，置5% C02，37°C培养68h。培养结束前4h，每孔轻轻吸取上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的PRMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml) 50 μ I/孔，继续培养4h，培养结束后，每孔加入Iml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解后，然后将液体移入96孔板中，每孔加3个平行样，用酶标仪在570nm波长进行测量吸光度值(A值)，计算试验孔A值与对照孔A值之差，以表示淋巴细胞的增值能力。结果用方差分析进行分析。若受试物组淋巴细胞的增殖能力高于对照组，且差异有显著性，可判定该受试物有提高ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力的作用。4.4抗体生成细胞测定(Jerne改良玻片法)动物连续给样30天后，将脱纤维绵阳红细胞免疫5天后，动物颈椎脱白处死，取出脾脏，制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为5X IO6个/ml。将表层培养基(Ig琼脂糖加双蒸水100ml)加热溶解后，放入45°C水浴保温，与等量pH7.2-7.4、2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加入50 μ 110 % SRBC, 20 μ I脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂薄层的6cm平皿上，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。结果用方差分析进行统计。若受试物组淋巴细胞的增殖能力高于对照组，且差异有显著性，可判定该受试物有增强小鼠抗体细胞数的作用。4.5小鼠血清溶血素试验:取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只小鼠经腹腔注射2% (用生理盐水配置，体积比)压积SRBC(2000r/min，IOmin) 0.2ml，免疫5天后，摘除小鼠眼球取血于离心管中，放置约I小时，将凝固血与管壁剥离，离心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度血清分别置于微量雪凝实验板内，每孔100 μ 1，再加入0.5% SRBC悬液100 μ 1，混勻，置湿盒内，在37°C温箱孵育3小时，记录血球凝集程度，计算抗体积数(血清对倍稀释指数与凝集度乘积之和)。血清凝集度分为5级，按一下标准判定。O级:SRBC全部下沉，集中在孔底形成致密的圆点状，四周液体清晰级=SRBC大部分沉积在孔底部成圆点状，四周有少量凝集的SRBC ；11级:凝集的SRBC在孔底形成薄层，中心可以明显看见一个疏松的红点；111级:凝集的SRBC均与的铺散在孔底成一薄层，中心隐约可见一个小红点；IV级:凝集的SRBC均匀的铺散在孔底成一薄层，凝块有时成卷折状。所得数据用PEMS软件进行方差分析，若受试物组血清溶血素抗体积数高于对照组，且差异有显著性，可判定受试物有提高小鼠血清溶血素水平的作用。4.6小鼠碳廓清试验:动物连续给样30天后，尾静脉注射1: 5稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10分钟，分别从内眦静脉丛取血20μ 1，并将其加到2ml碳酸钠溶液中，用分光光度计在600nm波长处测试吸光度值，以碳酸钠溶液做空白对照。根据动物体重，肝重和脾重计算吞噬指数，结果以方差分析进行统计。若受试物组血清溶血素抗体积数高于对照组，且差异有显著性，可判定受试物有提高小鼠单核-巨噬细胞的碳廓清能力的作用。4.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法):动物连续给样30天后，每鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液1ml，间隔30分钟，颈椎脱臼处死，固定在鼠板上，剪开腹壁皮肤，注射生理盐水2ml，转动鼠板I分钟，吸出腹腔洗液lml，分滴于2片玻璃片上，37°C孵箱湿孵30分钟，用生理盐水漂洗，晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，4% Giemsa-磷酸缓冲液染色3分钟，再用蒸馏水漂洗晾干，用油镜镜检，计算吞噬百分比和吞噬指数。其中，吞噬率(％)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数XlOO ；吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。所得结果的吞噬率按JT =^Vf1 #进行换算，式中P为吞噬百分率，用小数表示，若受试物的吞噬率或吞噬指数明显高于对照组，且差异有显著性，可判定受试物有提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的作用。4.8小鼠NK细胞活性测定:动物连续给样30天后，颈椎脱白处死，取脾脏，制成脾细胞悬液(效应细胞)，取传代后24h YAC-1细胞加1640完全培养液，调整细胞浓度为4 X IO5个/ml (靶细胞)，取靶细胞和效应细胞各100 μ I效靶比(50: I)，加入U形96孔培养板，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100 μ 1，最大释放孔加靶细胞和1% ΝΡ40各100 μ 1，上述各项均设有三个复 L,与37°C、5%二氧化碳培养箱中培养4小时，每孔吸取上清液100 μ I置于平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100 μ 1，反应3min，每孔加入lmol/1的HCL30 μ I终止，用酶标仪在490mm处测定A值。按以下公式计算NK细胞活性:NK细胞活性％ =(反应孔A-自然释放孔A) / (最大释放孔A-自然释放孔
A)X100 ；NK细胞活性需按= SiVT1V 进行数据转换，式中P为NK细胞活性，用小数表示，若受试物的吞噬率或吞噬指数明显 高于对照组，且差异有显著性，可判定受试物有提高小鼠NK细胞活性的作用。5实验结果5.1实验结果判定增强免疫能力功能判定:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任意两个方面结果阳性，即可判定该受试物具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果为阳性，可判定细胞免疫功能测定结果为阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性或任一实验的两个剂量组结果为阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性或任一实验的两个剂量组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能测定结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。5.2蜂胶软胶囊对小鼠体重的影响见表I。表I样品对免疫一组动物体重(克)的影响
权利要求
1.一种蜂胶软胶囊，包括囊体及封入囊体中的内容物，其特征在于，所述的内容物由以下组分及重量百分比含量的原料制成: 蜂胶18 50 ; 银杏叶提取物I 20 ; 聚乙二醇40040 70; 甘油5 20。
2.根据权利要求1所述的一种蜂胶软胶囊，其特征在于，所述的内容物由以下组分及重量百分比含量的原料制成: 蜂胶30 ； 银杏叶提取物10 ； 聚乙二醇40050; 甘油10。
3.根据权利要求1所述的一种蜂胶软胶囊，其特征在于，所述的蜂胶内的总黄酮含量^ 18wt%。
4.根据权利要求1所述的一种蜂胶软胶囊，其特征在于，所述的银杏叶提取物内含有24wt%S 黄酮。
5.一种如权利要求1或 2所述的蜂胶软胶囊的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: (1)制作囊体:以明胶、甘油和纯水为囊体原料，将甘油和纯水注入溶胶罐内，搅拌加热至60 70°C，再加入明胶，继续搅拌20-30分钟后真空脱泡，制作得到囊体； (2)配制内容物:首先将蜂胶粉碎后和聚乙二醇400及甘油在50 70°C下充分混合20 40min，然后再加入银杏叶提取物充分混合30 60min，过胶体磨I 3次，得到混合均匀的内容物； (3)制备胶囊:将步骤(2)配制的内容物及步骤⑴制作得到囊体经过压丸、定型、洗丸、干燥、拣丸和分装步骤，制备得到蜂胶软胶囊。
6.根据权利要求5所述的一种蜂胶软胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(I)中明胶、甘油及纯水的重量比为5 20: I 10: 5 20。
全文摘要
本发明涉及一种蜂胶软胶囊及其制备方法，将甘油和纯水注入溶胶罐内，搅拌加热至60～70℃，再加入明胶，继续搅拌20-30分钟后真空脱泡，制作得到囊体；首先将蜂胶粉碎后和聚乙二醇400及甘油在50～70℃下充分混合20～40min，然后再加入银杏叶提取物充分混合30～60min，过胶体磨1～3次，得到混合均匀的内容物；将内容物及囊体经过压丸、定型、洗丸、干燥、拣丸和分装步骤，制备得到蜂胶软胶囊。与现有技术相比，本发明的软胶囊具有生物利用度好、药物稳定性良好、掩盖不良气味、剂量准确、密封、安全、携带与使用方便等优点，本发明的蜂胶软胶囊具有增强免疫力功能的作用。
文档编号A61P37/04GK103190621SQ20131011694
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月3日 优先权日2013年4月3日
发明者庞瑞, 李红来, 黄武艺, 王爱兴, 王爱庭, 孙溢, 马春林, 陈秋佳, 王耸, 沈建华 申请人:上海春芝堂生物制品有限公司