专利名称：一种具有自由基清除活性的蓝莓叶提取物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有自由基清除活性的蓝莓叶提取物。
背景技术：
自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强氧化性，可损害机体的组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老效应，因此，研制一种具有自由基清除活性的提取物是很有必要的。DPPH法是一种被广泛认可的筛选自由基清除剂、评价抗氧化活性的简便方法。DPPH是一种稳定的自由基，结构中含有3个苯环，I个氮原子上有一个孤对电子。其乙醇溶液呈紫色，在517nm附近有强吸收。当DPPH溶液中加入自由基清除剂时，孤对电子被配对，颜色由紫色向黄色变化，从而在517nm处的吸光度变小，吸光度变小的程度与自由基清除能力呈定量关系。由于该法操作简单，快速，且灵敏度高，被广泛用于测定化合物或植物提取物的自由基清除能力。
发明内容
本发明提供了一种具有自由基清除活性的蓝莓叶提取物。本发明是通过以下技术方案实现的:将蓝莓叶粉碎后，以水为溶液加热煮沸提取三次，过滤后合并滤液并浓缩再用大孔树脂富集有效成分，分别以去离子水和不同浓度的乙醇溶液洗脱，所得各分段溶液溶剂回收、冷冻干燥后保存，其中50%乙醇洗脱得到的部位即为本发明的提取物。
本发明的提取物是将IOOg蓝莓叶粉碎后，以水为溶液加热煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，过滤后合并滤液，浓缩提取液至400mL，先得到样品溶液；样品溶液加入DlOl大孔树脂(IOOg)层析柱，分别以去离子水(2L)和不同浓度的乙醇溶液(各浓度2L)为洗脱剂，流速约为6mL/min ;将50%乙醇溶液洗脱得到的部位溶液溶剂回收，浓溶液冷冻干燥后，进行称重并密封保存，即为本发明的提取物。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明:实施例1 一种具有自由基清除活性的蓝莓叶提取物的制备将IOOg蓝莓叶粉碎后，以水为溶液加热煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，过滤后合并滤液，浓缩提取液至400mL，先得到样品溶液；样品溶液加入DlOl大孔树脂(IOOg)层析柱，分别以去离子水(2L)和不同浓度的乙醇溶液(各浓度2L)为洗脱剂，流速约为6mL/min ;将50%乙醇溶液洗脱得到的部位溶液溶剂回收，浓溶液冷冻干燥后，进行称重并密封保存，即为本发明的提取物。实施例2样品的自由基清除活性实验称取20mg DPPH.，以适量无水乙醇溶解，并定容至250mL(浓度为2 X I(T4M);各化合物用二甲亚砜(DMSO)配成200 μ g/ml的母液，于_4°C保存。使用前以DMSO稀释至所需浓度；取0.2mM的DPPH溶液0.1mL与0.1mL样品液(无水乙醇溶解)混勻，于25°C水浴中孵育30min,然后测定其517nm处的吸光度。以加入等体积的无水乙醇作为空白对照。化合物对DPPH的清除率可按照以下公式计算(A为吸光值):DPPH.scavenging activity (% )=[1-A (sample)/Ao (control) ] X 100 %，根据结果计算 EC50 值，即清除 50% 的 DPPH 时的化合物浓度。取样品200 μ g/ml母液，逐级稀释成100，50，25，10，5，2.5，1.0，0.5，0.25，0.1 μ g/ml溶液；在当样品浓度在 5 25 μ g/ml之间时，其对DPPH的清除率呈直线型，其EC50 为 1324.98ng/ml。
权利要求
1.本发明是一种具有自由基清除活性的蓝莓叶提取物。
2.本发明的提取物是将IOOg蓝莓叶粉碎后，以水为溶液加热煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，过滤后合并滤液，浓缩提取液至400mL，先得到样品溶液；样品溶液加入DlOl大孔树脂(IOOg)层析柱，分别以去离子水(2L)和不同浓度的乙醇溶液(各浓度2L)为洗脱齐U，流速约为6mL/min ;将50%乙醇溶液洗脱得到的部位溶液溶剂回收，浓溶液冷冻干燥后，进行称重并密 封保存，即为本发明的提取物。
全文摘要
本发明是一种具有自由基清除活性的蓝莓叶提取物，是由蓝莓叶用水煎煮、大孔树脂富集、乙醇洗脱所得，50％乙醇洗脱部位在DPPH实验中可显著清除自由基。
文档编号A61P39/06GK103211852SQ20131017231
公开日2013年7月24日 申请日期2013年5月9日 优先权日2013年5月9日
发明者於红, 贺善安, 王天寿, 张剑 申请人:南京紫玉蓝莓科技有限公司