一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法，其特征在于它的载药脂蛋白-壳聚糖纳米粒子的制备方法包括如下步骤：（1）称取一定量的脂蛋白和蛇六谷提取物，加入到超纯水中，搅拌1-3小时；（2）缓慢搅拌脂蛋白和提取物溶液，滴加壳聚糖溶液，配制脂蛋白与壳聚糖质量比为8:1-1:2的混合液，该混合液在室温下搅拌1-5小时；（3）调体系pH值至2-7，将其密封加热15-60分钟；（4）待体系冷却，过滤除杂即得载药纳米粒子悬浮液。本发明改纳米药物可被细胞内吞，在胞内将负载的药物缓慢释放从而提高药物利用率，且抑制乳腺癌细胞迁移。
【专利说明】一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法
[0001]【技术领域】
本发明属于纳米材料及药物载体领域，具体涉及一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法。利用本发明制备的蛇六谷提取物纳米粒子可有效抑制乳腺癌细胞迁移。
[0002]【背景技术】
乳腺癌是妇女常见恶性肿瘤之一，发病率较高，在我国占恶性肿瘤的10%左右，几年的调查表明，我国乳腺癌发病率呈迅速上升趋势，每年的新增病例达3%-4%，且发病年龄逐渐年轻化。乳腺癌治疗有手术治疗、内分泌治疗、化疗、放疗、免疫治疗等，但这些方法扔不能很好的解决乳腺癌术后癌细胞的转移问题，如外科手术是治疗乳腺癌的主要方法，但是术后转移并不少见，有50%-70%的患者在单纯根治及改良根治术后10年内发生全身转移，既使原发灶较小，腋窝淋巴结清扫阴性的临床早期乳腺癌，术后也可能早期发生局部及远处转移，影响预后。目前有资料报道乳腺癌术后转移者到30%-40%，其中约有76%的患者在复发转移后2年内死亡。降低复发转移已成为提高乳腺癌患者生存率亟待解决的问题之一。
[0003]
【发明内容】
本发明所用蛇六谷提取物制备方法包括如下步骤:
取一定量的蛇六谷全粉，加 4-6倍量的溶剂(水，乙醇，石油醚，乙酸乙酯，正丁醇)回流提取两次，每次2-4小时，合并两次提取液，过滤，滤液采用旋转蒸发进行浓缩。真空干燥得蛇六谷提取物。
[0004]本发明的载药脂蛋白-壳聚糖纳米粒子的制备方法包括如下步骤:
(1)称取一定量的脂蛋白和蛇六谷提取物，加入到超纯水中，搅拌1-3小时；
(2)缓慢搅拌脂蛋白和提取物溶液，滴加壳聚糖溶液，配制脂蛋白与壳聚糖质量比为8:1-1:2的混合液，该混合液在室温下搅拌1-5小时；
(3)调体系pH值至2-7，将其密封加热15-60分钟；
(4)待体系冷却，过滤除杂即得载药纳米粒子悬浮液。
[0005]所述脂蛋白来源于鸡蛋黄，经提取冻干获得；
所述药物为蛇六谷提取物；
所述壳聚糖溶液用质量分数为0.1%-0.5%的冰醋酸溶液配制，在室温下搅拌过夜溶解壳聚糖。
[0006]本发明的有益效果是:
1、根据上述方法制备的载药纳米粒子呈球型，平均粒径为150-200nm且分布较窄，表面电势为+ 48.3mV。在长达三个月的贮存期内，此纳米药物不发生解离和团聚，具备良好的贮存稳定性。
[0007]2、改纳米药物可被细胞内吞，在胞内将负载的药物缓慢释放从而提高药物利用率，且抑制乳腺癌细胞迁移。
【具体实施方式】[0008]实施例1
用质量分数为0.5%的冰醋酸溶液配制得到5.0mg/mL的壳聚糖(购自国药集团化学试剂有限公司)溶液，在室温下搅拌过夜溶解壳聚糖。
[0009](1)称取IOmg脂蛋白，加入9mL超纯水，以120rpm搅拌I小时；
(2)缓慢搅拌脂蛋白水溶液，滴加ImL壳聚糖溶液，配制脂蛋白与壳聚糖质量比为2:1的混合液，该混合液在室温下搅拌2小时；
(3)将其密封后加热60分钟；
(4)待体系冷却，过滤除杂即得纳米粒子悬浮液。
[0010]本实施例中制备出的脂蛋白-壳聚糖纳米粒子平均粒径为385nm，多分散系数为0.342。
[0011]实施例2
用质量分数为0.5%的冰醋酸溶液配制得到5.0mg/mL的壳聚糖(购自浙江金壳生物化学有限公司)溶液，在室温下搅拌过夜溶解壳聚糖。
[0012](I)称取IOmg脂蛋白，加入18mL超纯水，以120rpm搅拌I小时；
(2)缓慢搅拌脂蛋白水溶液，滴加2mL壳聚糖溶液，配制脂蛋白与壳聚糖质量比为2:1的混合液，该混合液在室温下搅拌2小时；
(3)将其密封后加热30分钟；
(4)待体系冷却，过滤除杂即得纳米粒子悬浮液。
[0013]本实施例中制备出的脂蛋白-壳聚糖纳米粒子平均粒径为260nm，多分散系数为0.189。
[0014]实施例3
用质量分数为0.5%的冰醋酸溶液配制得到5.0mg/mL的壳聚糖(购自浙江金壳生物化学有限公司)溶液，在室温下搅拌过夜溶解壳聚糖；
用超纯水配制浓度为lmol/L的盐酸溶液。
[0015](I)称取9mg脂蛋白，加入17.7mL超纯水,以120rpm搅拌I小时；
(2)缓慢搅拌脂蛋白水溶液，滴加0.3mL壳聚糖溶液，配制脂蛋白与壳聚糖质量比为6:1的混合液，该混合液在室温下搅拌2小时；
(3)用lmol/L的盐酸调节体系pH至2.5，密封加热45分钟；
(4)待体系冷却，过滤除杂即得纳米粒子悬浮液。
[0016]本实施例中制备出的脂蛋白-壳聚糖纳米粒子平均粒径为160nm，多分散系数为0.171。
[0017]实施例4
用质量分数为0.5%的冰醋酸溶液配制得到5.0mg/mL的壳聚糖(购自浙江金壳生物化学有限公司)溶液，在室温下搅拌过夜溶解壳聚糖；
用超纯水配制浓度为lmol/L的盐酸溶液；
称取IOmg盐酸阿霉素,制成浓度为lmg/mL的盐酸阿霉素水溶液。
[0018](I)称取9mg脂蛋白，加入1.8mL上述盐酸阿霉素水溶液和15.9mL超纯水，以120rpm搅拌2小时；
(2)缓慢搅拌脂蛋白水溶液，滴加0.3mL壳聚糖溶液，该混合液在室温下搅拌2小时；(3)用lmol/L的盐酸调节体系pH至2.5，密封加热45分钟；
(4)待体系冷却，过滤除杂即得载药纳米粒子悬浮液。
[0019]本实施例中制备出的脂蛋白-壳聚糖纳米粒子平均粒径为166nm，表面电势为+48.3mV。载药后，纳米载体粒径没有发生明显变化，依然保持小粒径窄分布。细胞毒性实验显示，纳米药物与单纯么蛇`六谷提取物具有相似的抑制癌细胞迁移的效果。
【权利要求】
1.一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法，其特征在于它的载药脂蛋白-壳聚糖纳米粒子的制备方法包括如下步骤: (1)称取一定量的脂蛋白和蛇六谷提取物，加入到超纯水中，搅拌1-3小时； (2)缓慢搅拌脂蛋白和提取物溶液，滴加壳聚糖溶液，配制脂蛋白与壳聚糖质量比为8:1-1:2的混合液，该混合液在室温下搅拌1-5小时； (3)调体系pH值至2-7，将其密封加热15-60分钟； (4)待体系冷却，过滤除杂即得载药纳米粒子悬浮液。
2.根据权利要I所述的一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法，它的载药脂蛋白-壳聚糖纳米粒子的制备方法中所述脂蛋白来源于鸡蛋黄，经提取冻干获得。
3.根据权利要I所述的一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法，它的载药脂蛋白-壳聚糖纳米粒子的制备方法中所述药物为蛇六谷提取物。
4.根据权利要I所述的一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法，它的载药脂蛋白-壳聚糖纳米粒子的制备方法中所述壳聚糖溶液用质量分数为0.1%-0.5%的冰醋酸溶液配制，在室温下搅拌过夜溶解壳聚糖。
5.根据权利要3所述的一种可抑制乳腺癌细胞迁移的纳米药物的制备方法，它的载药脂蛋白-壳聚糖纳米粒子的制备方法中所述药物为蛇六谷提取物，蛇六谷提取物制备方法包括如下步骤:取一定量的蛇六谷全粉，加4-6倍量的溶剂(7jC，乙醇，石油醚，乙酸乙酯，正丁醇)回流提取两次，每 次2-4小时，合并两次提取液，过滤，滤液采用旋转蒸发进行浓缩，真空干燥得蛇六谷提取物。
【文档编号】A61K9/10GK103751455SQ201410015592
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2014年1月14日 优先权日:2014年1月14日
【发明者】李斌, 洪峰 申请人:湖北吉登丰生物技术有限公司