一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，具体涉及一种酶发酵协同连续逆流超声提取沙棘总黄酮的方法。其处理步骤包括：a.沙棘叶于60℃烘干、粉碎，过40目筛；b.生物酶发酵；c.连续逆流超声波辅助提取；d.过聚酰胺树脂柱，乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得沙棘总黄酮。本发明以沙棘叶为原料，充分利用生物酶发酵和超声波的叠加效果，提高沙棘总黄酮的溶出率。本发明具有工艺简单、提取时间短、反应条件温和等优点，对环境友好，同时也保证了沙棘总黄酮的生物活性不被破坏，易于实现工业化生产。
【专利说明】
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，尤其涉及一种酶发酵协同连 续逆流超声波提取沙棘总黄酮的方法。 一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法
【背景技术】
[0002]沙棘是胡颓子科沙棘属的一种野生浆果植物，又名醋柳、沙枣、黑刺，是世界上公 认的珍贵食用和药用植物。研究表明，高海拔地区的沙棘中黄酮类化合物含量较高，叶中黄 酮类化合物主要以苷的形式存在，主要有异鼠李素、槲皮素、山奈酚和杨梅素等4种苷元及 其苷类化合物，具有抗心肌缺血缺氧、抗心律失常、降低血清胆固醇和增强免疫等广泛的药 理作用。 <
[0003]黄酮作为沙棘的最主要活性成分，常见的提取方法如下：水蒸气蒸馏法、有机溶剂 萃取法、超临界二氧化碳萃取法、分子烙印技术等。这些方法均存在诸多不足；水蒸气蒸馈 法虽然设备简单、成本低且对环境和人类无毒害而适宜工业化生产，但是提取率低、杂质含 量较高，因此现在很少被人们利用；有机溶剂萃取法成本较高，存在溶剂残留效应，对人类 和环境有一定影响；超临界二氧化碳萃取技术是一项新的分离、提取技术，具有低温提取、 无有毒残溶和可以选择性分离等特点，但是其用于沙棘黄酮的提取，原料要经过脱脂和脱 色素等前期处理，检测过程也比较繁杂；分子烙印技术是最近才发展起来的一种新技术，可 制备槲皮素为模板的MIP,进行从沙棘初提物中提取黄酮实验，实验结果表明以槲皮素为模 板的MIP可有效地从沙棘初提物中提取槲皮素和异鼠李素，但是这种方法成本太高，过程 繁琐，现在还处于实验室摸索阶段。
[0004] 经文献检索，未见采用酶发酵与连续逆流超声相结合提取沙棘总黄酮的文献报 道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方 法，该方法具有工艺简单、易操作、提取时间短、提取率高、对环境友好等优点。
[0006] 本发明包括以下步骤： a. 沙棘叶于60°C烘干、粉碎，过40目筛； b. 向上述原料中加入原料重量Γ2%的生物酶，搅拌均勻，再喷洒ΡΗ4· 0?5· 〇的柠檬酸 /柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于4〇~5(TC发酵5~7天； c. 将发酵好的原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入5~7倍的 60?80%的乙醇溶液，控温在45~6(TC,提取90~120min，过滤，得滤液； d. 将步骤c中的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:4~8、粒径为8〇?1〇〇目的聚酰胺 树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用疒8BV的6(Γ80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓 缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮。 _
[0007] 步骤b中所述的生物酶为重量比〇· 7:〇· 3的纤维素酶和果胶酶的混合物，酶的活 力单位为5000U/g。
[0008] 本发明与现有技术相比，具有以下优点： (1) 总黄酮含量和收率较尚：本发明米用生物酶发酵，破坏细胞壁的致密结构，在结合 超声波的空化作用，使有效成分最大限度的溶出，提高了总黄酮的提取率，通过连续逆流可 实现连续作业； (2) 本发明采用聚酰胺树脂进行分离纯化，该树脂重复利用率高，价格便宜，适用于工 业生产。
[0009]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
[0010]
【具体实施方式】： 实施例1 : 沙棘叶于60°C烘干、粉碎，过40目筛，取100g粉末，加入原料重量1%的纤维素酶和果 胶酶(重量比为0· 7:0· 3,酶的活力单位为5〇〇〇U/g)的混合酶，搅拌均匀，再喷洒ρΗ4· 〇的梓 檬酸/梓檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于4(TC发酵5天；将发酵好的原料 置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入5倍的60%的乙醇溶液，控温在45?， 提取 9〇min，过滤，得滤液；将滤液浓缩至无醇味，转入径髙比为1:4、粒径为8〇目的聚酰胺 树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用4BV的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干 燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物1. 85g，经UV检测，总黄酮含量为51. 2%。
[0011] 实施例2: 沙棘叶于60°C供干、粉碎，过40目筛，取100g粉末，加入原料重量1. 5%的纤维素酶和 果月父酶(重量比为0· 7:0. 3,酶的活力单位为5000U/g，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒pH4. 5 的朽1檬酸/朽3檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于45Γ发酵7天；将发酵好的 原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入6倍的 7〇%的乙醇溶液，控温在 50°C，提取lOOmin，过滤，得滤液；将滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:6、粒径为 1〇〇目的 聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用6BV的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓 缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物1· 78g，经UV检测,总黄酮含量为55. 6%。
[0012] 实施例3: 沙棘叶于6〇°C烘干、粉碎，过40目筛，取100g粉末，加入原料重量2%的纤维素酶和果 胶酶(重量比为〇_7:〇_3，酶的活力单位为50001]4，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒 1)册.〇的 柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于50?发酵6天；将发酵好的 原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入7倍的80%的乙醇溶液，控温在 60?，提取lOOrnin，过滤，得滤液；将滤液浓缩至无醇味，转入径高比为 1:8、粒径为9〇目的 聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用8BV的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓 缩，千燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物1. 96g，经UV检测，总黄酮含量为48. 1%。
【权利要求】
1. 一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤： a. 沙棘叶于60O烘干、粉碎，过40目筛； b. 向上述原料中加入原料重量Γ2%的生物酶，搅拌均匀，再喷洒ρΗ4· (Γ5. 〇的柠檬酸 /柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于4(T5〇°C发酵5~7天； c. 将发酵好的原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入5~7倍的 60?80%的乙醇溶液,控温在45?60°C，提取90?120min，过滤，得滤液； d. 将步骤c中的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:4?8、粒径为8〇~100目的聚酰胺 树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用4?8BV的60?80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓 缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮。
2. 根据权利要求1所述的一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，其特征在于，步 骤b中所述的生物酶为重量比0. 7:0. 3的纤维素酶和果胶酶的混合物，酶的活力单位为 5000U/g。
【文档编号】A61K127/00GK104189031SQ201410445682
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】张金芳, 杨存 申请人:南京标科生物科技有限公司