本发明属于植物活性成分提取技术领域，具体涉及一种芒果叶多酚的提取方法。
背景技术：
植物多酚是目前功能食品与天然产物研究开发等领域研究的热点，国内外不断有发现植物多酚新功能及从新植物资源中开发利用植物多酚的报道。按照自由基能力，目前所报道的植物多酚众多的功能，如预防心脑血管疾病、调节免疫能力、抗肿瘤等， 都与植物多酚清除自由基的能力有关。在体内危害人体健康的主要自由基是超氧阴离子自由基与羟基自由基。
植物多酚是广泛存在于植物体内的重要次生代谢产物，广泛分布于植物体的根、叶、皮、果肉和壳中，具有抗氧化、抗肿瘤、保护肝脏等多种生理功能，是人体每天必须从食物中摄取的抗氧化物质，被称为继膳食纤维之后的第七营养素。
芒果，为常绿乔木，原产印度，现热带各地均栽种，栽培于华南地区，广西、广东、海南各地村庄或屋宅旁，稍微润湿土壤可见星散植株。芒果的果实、树叶和树皮均可入药，具有较高的经济价值。芒果叶是漆树科芒果属热带常绿大乔木芒果( Mangiferaindica Linn) 的叶。芒果叶富含芒果苷、槲皮素、金丝桃苷、原儿茶酸、没食子酸等多酚类物质，这些多酚类化合物具有平喘止咳、镇痛、抗氧化、抗菌、抗肿瘤、治疗心脑血管疾病等广泛的生理活性。芒果盛产于我国南方各省和自治区，副产品芒果叶资源相当丰富，我国目前对芒果叶的开发利用多局限于为数甚少的几种平喘止咳的制剂。
技术实现要素：
本发明提供一种芒果叶多酚的提取方法，该方法制得的芒果叶多酚纯度高，收率高。
技术方案：一种芒果叶多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)打浆、酶解：采用料液比1: 3-5，用打浆机将洗净沥干的芒果叶打浆3-5min，然后加入蛋白酶充分搅拌后静置1-2 h 进行酶解后，用 800-1000 目滤网过滤取上清酶解液备用；
2) 粗提：用乙醇对芒果叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到芒果叶粗提液；
3)过膜：将上清液过膜过滤装置进行过滤，得到澄清液；
4)纯化：将澄清液上大孔树脂柱，上样流速为0.4～0.6BV/h，上大孔树脂柱，水洗柱，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得芒果叶多酚。
上述步骤1) 中，所述的酶解是每100克芒果叶加入0.2-0.4g 蛋白酶，45-55℃酶解1-2h。
步骤2) 中，芒果叶中含有蛋白质和碳水化合物，采用乙醇为溶媒，不利于蛋白质和碳水化合物的溶解，可减少杂质成分的溶出，对后续纯化有益。乙醇体积浓度为40～50％及酶解液与乙醇的料液比为1ml：2～4ml为佳，乙醇浓度过高会对蛋白质产生凝聚作用，使得蛋白质滞留在颗粒的内部孔道中，反而增加芒果叶多酚的扩散阻力，降低终产品的收率。乙醇浓度过低则杂质含量较大，影响终产品的纯度。
步骤3) 中，所述膜过滤装置为50000 道尔顿微滤膜。
步骤4) 中, 水洗流速为2.5～3BV/h，水的洗脱量为5～6BV ；乙醇的洗脱流速为2～2.5BV/h，乙醇的洗脱量为4～5BV；乙醇的体积浓度为65～85％。
与现有技术相比，本发明具有提取温度低、适用性广、提取率高、操作简便等优点；制得的芒果叶多酚纯度在95％以上，提取率为6.5%以上，比传统加热浸提法提取率高1.5%以上。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
实施例1
1) 打浆、酶解：取洗净沥干芒果叶1000g,采用料液比1:3加入纯净水，用打浆机将洗净沥干的芒果叶打浆3min，然后加入2g蛋白酶充分搅拌后在45℃酶解1h，然后用 800目滤网过滤取上清酶解液备用；
2) 粗提：按酶解液与乙醇的料液比为1ml：2ml加入40％乙醇对芒果叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到芒果叶粗提液；
3) 过膜：将上清液50000 道尔顿微滤膜装置进行过滤，得到澄清液；
4)纯化：将澄清液上DA201大孔树脂柱，上样流速为0.4BV/h，先水洗柱，水洗流速为2.5 BV/h，水的洗脱量为5BV；然后用65％乙醇洗脱，乙醇的洗脱流速为2BV/h，乙醇的洗脱量为4BV，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得13.78g芒果叶多酚。经HPLC 检测，成品中芒果叶多酚的纯度为95.2％，芒果叶多酚提取率（相对于干料）为6.5%以上。
实施例2
1) 打浆、酶解：取洗净沥干芒果叶1000g,采用料液比1:5加入纯净水，用打浆机将洗净沥干的芒果叶打浆5min，然后加入4g蛋白酶充分搅拌后在55℃酶解2h，然后用1000目滤网过滤取上清酶解液备用；
2) 粗提：按酶解液与乙醇的料液比为1ml：4ml加入50％乙醇对芒果叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到芒果叶粗提液；
3) 过膜：将上清液50000 道尔顿微滤膜装置进行过滤，得到澄清液；
4)纯化：将澄清液上DA201大孔树脂柱，上样流速为0.6BV/h，先水洗柱，水洗流速为3BV/h，水的洗脱量为6BV；然后用85％乙醇洗脱，乙醇的洗脱流速为2.5BV/h，乙醇的洗脱量为5BV，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得13.88g芒果叶多酚。经HPLC 检测，成品中芒果叶多酚的纯度为95.1％，芒果叶多酚提取率（相对于干料）为6.5%以上。
实施例3
1) 打浆、酶解：取洗净沥干芒果叶1000g,采用料液比1:4加入纯净水，用打浆机将洗净沥干的芒果叶打浆4min，然后加入3g蛋白酶充分搅拌后在50℃静置酶解1.5h，然后用900目滤网过滤取上清酶解液备用；
2) 粗提：按酶解液与乙醇的料液比为1ml：3ml加入45％乙醇对芒果叶酶解液进行超声浸提，离心，收集上清液，减压回收乙醇，得到芒果叶粗提液；
3) 过膜：将上清液50000 道尔顿微滤膜装置进行过滤，得到澄清液；
4)纯化：将澄清液上DA201大孔树脂柱，上样流速为0.5BV/h，先水洗柱，水洗流速为2.8BV/h，水的洗脱量为5.5BV；然后用75％乙醇洗脱，乙醇的洗脱流速为2.3BV/h，乙醇的洗脱量为4.5BV，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得14.26g芒果叶多酚。经HPLC 检测，成品中芒果叶多酚的纯度为95.8％，芒果叶多酚提取率（相对于干料）为6.5%以上。
实施例4
将上述实施例1-3得到的芒果叶多酚对超氧阴离子O2-·清除效果的测定：
在试验浓度范围内, 芒果叶多酚对O2-·的清除能力较强,0.5mg/mL～2.5mg/mL 浓度范围内清除率随浓度上升而提高的趋势明显。当芒果叶多酚浓度达到 2.5mg/mL 时, 对O2-·的清除率已超过90%。
实施例5
将上述实施例1-3得到的芒果叶多酚对羟基自由基·OH 清除效果的测定：
芒果叶多酚浓度在0.5mg/mL～2.0mg/mL 范围内对·OH 清除率随浓度上升而显著提高。当芒果叶多酚浓度达到 2.0mg/mL 时, 清除率已超过90%。