用于家庭小型宠物的含间充质干细胞分泌物的灌肠液及其制备方法与流程

本发明涉及干细胞分泌物，尤其是一种含有间充质干细胞分泌物的灌肠液及其制备方法和用途。

背景技术：

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。它们具有自我更新能力、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如：脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，此外还能够向及其它胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞\血管内皮细胞分化。

间充质干细胞培养体系中含有多种大量的活性成分，如：干细胞生长因子(SCF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、内皮细胞生长因子(VEGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、细胞集落刺激因子、白细胞介素(IL)、胶原蛋白、透明质酸等80余种活性物质。目前，已经有将间充质干细胞应用于肠炎、克隆氏病等肠道疾病的报道。但是由于活性细胞的存活条件比较苛刻，很容易死亡因此由活细胞所起的作用也会大打折扣。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是，提供一种活性稳定的用于家庭小型宠物的含间充质干细胞分泌物的灌肠液及其制备方法，利用干细胞分泌的多种细胞因子为治疗各种急慢性肠炎的修复以及肠道清理提供了安全、有效、使用方便的治疗药物。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于家庭小型宠物的含间充质干细胞分泌物的灌肠液的制备方法，包括以下步骤：

(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取人脐带间充质干细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO₂进行培养；

(2)待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养12-24小时；

(3)待细胞生长程度达到90％-95％后，收取细胞培养上清3000-4500g条件下离心5-8min，以0.22um滤膜过滤，分装到灌肠管中，放到4℃冰箱中保存待用。

所述复方电解质注射液为中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖MG3注射液。

上述的用于家庭小型宠物的含间充质干细胞分泌物的灌肠液的制备方法制得的灌肠液。

本发明的有益效果是：将细胞进行饥饿培养，使得细胞分泌的各种活性成分的浓度都得到了提高，可促进肠粘膜的修复，缩短粘膜伤口的愈合时间，并起到消除炎症，促进经久不愈的溃疡愈合等作用。

附图说明

图1为本发明的方法培养的间充质干细胞图；

图2为不同饥饿时间提取物中有效因子分泌量比较图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明：

本发明的用于家庭小型宠物的含间充质干细胞分泌物的灌肠液的制备方法，包括以下步骤：

(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取人脐带间充质干细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO₂进行培养；

(2)待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养12-24小时；

(3)待细胞生长程度达到90％-95％后，收取细胞培养上清3000-4500g条件下离心5-8min，以0.22um滤膜过滤，分装到灌肠管中，放到4℃冰箱中保存待用。

所述复方电解质注射液为中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖MG3注射液。

制备的灌肠液用于家庭小型宠物(犬、猫)的各种急慢性肠炎的修复以及肠道清理。

实施例1

(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO₂进行培养；

(2)待细胞生长程度达到70％-80％(见图1)，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养8小时；

(3)待细胞生长程度达到90％--95％后，收取细胞培养上清3000g条件下离心5min，以0.22um滤膜过滤，分装到灌肠管中，放到4℃冰箱中保存待用，检测因子含量见(图2)。

实施例2

(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO₂进行培养；

(2)待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养16小时，；

(3)待细胞生长程度达到90％--95％后，收取细胞培养上清4000g条件下离心6min，以0.22um滤膜过滤，分装到灌肠管中，放到4℃冰箱中保存待用，检测因子含量(图2)。

实施例3

(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO₂进行培养；

(2)待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养24小时，；

(3)待细胞生长程度达到90％--95％后，收取细胞培养上清4500g条件下离心8min，以0.22um滤膜过滤，分装到灌肠管中，放到4℃冰箱中保存待用，检测因子含量(图2)。

实施例4

(1)选取7周龄的SD大鼠12只，平均分为3组，①空白组；②阴性对照组；③实验组制备大鼠肠炎模型。

(2)造模成功后，按照①阴性对照组给予生理盐水灌肠；②实验组用含间充质干细胞分泌物的灌肠液进行治疗，分别在给药后的第1、3、5、7、9天对各组实验动物的各项指标进行检测，并统计。

(3)数据分析，分析各灌肠液对肠炎的修护作用。见表1,为动物实验数据统计表。

表1动物实验数据统计表

综上所述，本发明的内容并不局限在上述的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。