抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体的制作方法

文档序号:12069669阅读:来源:国知局

技术特征:

1.抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体或其抗原结合片段,其包含重链可变结构域序列及轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含:(1)CDR-H1,其包含氨基酸序列N/T/Q-YGVH(SEQ ID NO:4),(2)CDR-H2,其包含氨基酸序列Y-N/A/G/D-T/D/N-P/K/E-FTSRF(SEQ ID NO:9),及(3)CDR-H3,其包含氨基酸序列T/D-Y/L-YDY-E/N-FAY(SEQ ID NO:14);所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含氨基酸序列I-G/R/S-T/L/P-NIH(SEQ ID NO:20),(2)CDR-L2,其包含氨基酸序列KY-A/G-SE-S/T-I-S/R(SEQ ID NO:24),及(3)CDR-L3,其包含氨基酸序列NWPT-T/L/S/A/Y(SEQ ID NO:30)。

2.权利要求1的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1,其包含选自SEQ ID NO:1-3的氨基酸序列,(2)CDR-H2,其包含选自SEQ ID NO:5-8的氨基酸序列,及(3)CDR-H3,其包含选自SEQ ID NO:10-13的氨基酸序列;所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含选自SEQ ID NO:15-19的氨基酸序列,(2)CDR-L2,其包含选自SEQ ID NO:21-23的氨基酸序列,(3)CDR-L3,其包含选自SEQ ID NO:25-29的氨基酸序列。

3.权利要求2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1,其包含氨基酸序列NYGVH(SEQ ID NO:1),(2)CDR-H2,其包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQ ID NO:5),及(3)CDR-H3,其包含氨基酸序列TYYDYEFAY(SEQ ID NO:10);所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQ ID NO:15),(2)CDR-L2,其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQ ID NO:21),及(3)CDR-L3,其包含氨基酸序列NWPTT(SEQ ID NO:25)。

4.权利要求2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1,其包含氨基酸序列NYGVH(SEQ ID NO:1),(2)CDR-H2,其包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQ ID NO:5),及(3)CDR-H3,其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQ ID NO:11);所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQ ID NO:15),(2)CDR-L2,其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQ ID NO:21),及(3)CDR-L3,其包含氨基酸序列NWPTS(SEQ ID NO:27)。

5.权利要求2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1,其包含氨基酸序列NYGVH(SEQ ID NO:1),(2)CDR-H2,其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQ ID NO:8),及(3)CDR-H3,其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQ ID NO:11);所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQ ID NO:15),(2)CDR-L2,其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQ ID NO:21),及(3)CDR-L3,其包含氨基酸序列NWPTS(SEQ ID NO:27)。

6.权利要求2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1,其包含氨基酸序列NYGVH(SEQ ID NO:1),(2)CDR-H2,其包含氨基酸序列YATEFTSRF(SEQ ID NO:7),及(3)CDR-H3,其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQ ID NO:11);所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQ ID NO:15),(2)CDR-L2,其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQ ID NO:21),及(3)CDR-L3,其包含氨基酸序列NWPTS(SEQ ID NO:27)。

7.权利要求2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1,其包含氨基酸序列NYGVH(SEQ ID NO:1),(2)CDR-H2,其包含氨基酸序列YDDKFTSRF(SEQ ID NO:6),及(3)CDR-H3,其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQ ID NO:11);所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQ ID NO:15),(2)CDR-L2,其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQ ID NO:21),及(3)CDR-L3,其包含氨基酸序列NWPTS(SEQ ID NO:27)。

8.权利要求2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1,其包含氨基酸序列TYGVH(SEQ ID NO:3),(2)CDR-H2,其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQ ID NO:8),及(3)CDR-H3,其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQ ID NO:11);所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含氨基酸序列IRTNIH(SEQ ID NO:16),(2)CDR-L2,其包含氨基酸序列KYGSESIS(SEQ ID NO:22),及(3)CDR-L3,其包含氨基酸序列NWPTS(SEQ ID NO:27)。

9.权利要求2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列,所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1,其包含氨基酸序列TYGVH(SEQ ID NO:3),(2)CDR-H2,其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQ ID NO:8),及(3)CDR-H3,其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQ ID NO:11);所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1,其包含氨基酸序列ISTNIH(SEQ ID NO:19),(2)CDR-L2,其包含氨基酸序列KYGSESIS(SEQ ID NO:22),及(3)CDR-L3,其包含氨基酸序列NWPTS(SEQ ID NO:27)。

10.无糖基化的CDR-H2抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体或其抗原结合片段,其包含重链可变结构域,所述重链可变结构域包含选择的CDR-H2,所述CDR-H2包含氨基酸序列Y-A/G/D-D/N-K/E-FTSRF(SEQ ID NO:31)。

11.权利要求10的无糖基化的CDR-H2抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述重链可变结构域进一步包含CDR-H1和CDR-H3,所述CDR-H1包含氨基酸序列N/T/Q-YGVH(SEQ ID NO:4),所述CDR-H3包含氨基酸序列T/D-Y/L-YDY-E/N-FAY(SEQ ID NO:14)。

12.权利要求10或11的无糖基化的CDR-H2抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段进一步包含轻链可变结构域序列,所述轻链可变结构域序列包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3,所述CDR-L1包含氨基酸序列I-G/R/S-T/L/P-NIH(SEQ ID NO:20),所述CDR-L2包含氨基酸序列KY-A/G-SE-S/T-I-S/R(SEQ ID NO:24),所述CDR-L3包含氨基酸序列NWPT-T/L/S/A/Y(SEQ ID NO:30)。

13.权利要求1-12任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体包含人IgG的Fc序列。

14.权利要求1-13任一项的抗EGFR抗体的抗原结合片段,其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段、双抗体及线性抗体。

15.权利要求1-13任一项的抗EGFR抗体,其中所述抗体是多特异性抗体。

16.权利要求1-15任一项的抗体,其中所述抗体是无岩藻糖基化抗体。

17.权利要求1-16任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其与治疗剂缀合。

18.权利要求1-16任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段,其与一种标记缀合。

19.权利要求18的抗体,其中所述标记选自放射性同位素、荧光染料和酶。

20.分离的核酸分子,其编码权利要求1-16任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段。

21.表达载体,其编码权利要求20的核酸分子。

22.细胞,其包含权利要求21的表达载体。

23.一种生产抗体的方法,包括培养权利要求22的细胞及从细胞培养物回收抗体。

24.组合物,其包含权利要求1-17任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段及一种药学上可接受的载体。

25.一种检测患者样品中EGFR蛋白的方法,通过将权利要求1-16和18-19任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段与所述样品接触并检测与EGFR蛋白结合的所述抗EGFR抗体进行。

26.权利要求25的方法,其中所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段用于免疫组织化学测定(IHC)或者ELISA测定中。

27.一种治疗对象中癌症的方法,包括给予对象有效量的权利要求24的组合物。

28.权利要求27的方法,其中所述癌症选自喉癌、结肠直肠癌、肺癌和头颈癌。

29.权利要求27的方法,其中进一步给予对象选自如下的治疗剂:抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂及细胞毒性剂。

30.权利要求27的方法,其中进一步给予对象放射性治疗。

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