抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体的制作方法

本申请要求2014年5月30日申请的美国临时申请系列号62/005,887的优先权，其全部内容并入本文作参考。发明背景表皮生长因子受体(也称作EGFR、ErbB-1和HER1)是ErbB受体家族的一种细胞表面受体，ErbB受体家族是由四种密切相关的受体酪氨酸激酶组成的亚家族，包括EGFR(ErbB-1)、HER2/c-neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4)。EGFR与配体(如表皮生长因子(EGF)、转化生长因子a(TGFα)、HB-EGF、双调蛋白、β细胞素/BTC、上皮细胞有丝分裂蛋白(epigen)/EPGN或其它)的结合在EGFR的C末端结构域中诱导一些酪氨酸(Y)残基(Y992、Y1045、Y1068、Y1148和Y1173)的受体二聚体化及自身磷酸化。这种自身磷酸化引发包括MAPK、Akt和JNK途径在内的一些信号转导级联的下游激活，导致细胞迁移、粘附和细胞增殖。EGFR或家族成员的突变、扩增或误调节涉及全部上皮细胞癌的大约30％。例如，导致EGFR过表达或过度反应性的突变与许多癌症相关，包括肺癌、肛门癌、头颈癌及多形性成胶质细胞瘤。EGFR被鉴别为癌基因导致需要开发针对EGFR的抗癌治疗剂。本发明满足了这一需求及其它需求。发明概述本发明提供了抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列N/T/Q-YGVH(SEQIDNO:4)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列Y-N/A/G/D-T/D/N-P/K/E-FTSRF(SEQIDNO:9)及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列T/D-Y/L-YDY-E/N-FAY(SEQIDNO:14)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列I-G/R/S-T/L/P-NIH(SEQIDNO:20)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KY-A/G-SE-S/T-I-S/R(SEQIDNO:24)及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPT-T/L/S/A/Y(SEQIDNO:30)。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含选自SEQIDNO:1-3的氨基酸序列，(2)CDR-H2，其包含选自SEQIDNO:5-8的氨基酸序列及(3)CDR-H3，其包含选自SEQIDNO:10-13的氨基酸序列；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含选自SEQIDNO:15-19的氨基酸序列，(2)CDR-L2，其包含选自SEQIDNO:21-23的氨基酸序列，(3)CDR-L3，其包含选自SEQIDNO:25-29的氨基酸序列。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQIDNO:5)及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列TYYDYEFAY(SEQIDNO:10)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTT(SEQIDNO:25)。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQIDNO:5)及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YATEFTSRF(SEQIDNO:7)及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YDDKFTSRF(SEQIDNO:6)及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列TYGVH(SEQIDNO:3)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IRTNIH(SEQIDNO:16)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYGSESIS(SEQIDNO:22)及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列TYGVH(SEQIDNO:3)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列ISTNIH(SEQIDNO:19)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYGSESIS(SEQIDNO:22)及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。本发明还提供了无糖基化CDR-H2抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含CDR-H2，所述CDR-H2包含氨基酸序列Y-A/G/D-D/N-K/E-FTSRF(SEQIDNO:31)。在一些实施方案中，所述重链可变结构域进一步包含CDR-H1和CDR-H3，所述CDR-H1包含氨基酸序列N/T/Q-YGVH(SEQIDNO:4)并且所述CDR-H3包含氨基酸序列T/D-Y/L-YDY-E/N-FAY(SEQIDNO:14)。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含轻链可变结构域序列，其包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述CDR-L1包含氨基酸序列I-G/R/S-T/L/P-NIH(SEQIDNO:20)，所述CDR-L2包含氨基酸序列KY-A/G-SE-S/T-I-S/R(SEQIDNO:24)并且所述CDR-L3包含氨基酸序列NWPT-T/L/S/A/Y(SEQIDNO:30)。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体包含人IgG的Fc序列。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段、双抗体及线性抗体。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体是多特异性抗体。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段与治疗剂缀合。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段与标记缀合。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述标记选自放射性同位素、荧光染料和酶。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体是无岩藻糖基化抗体。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段与细胞毒性剂缀合。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞毒性剂是美登素或其衍生物。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述美登素或其衍生物是DM-1。本发明提供了分离的核酸分子，其编码根据(或者适合于)上述任何实施方案中的所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段。本发明还提供了表达载体，其编码根据(或者适合于)上述任何实施方案的所述核酸分子。本发明还提供了包含根据(或者适合于)上述任何实施方案的所述表达载体的细胞。本发明还提供了一种生产抗体的方法，包括培养根据(或者适合于)上述任何实施方案的细胞及从所述细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述哺乳动物细胞是CHO细胞。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是稳定的哺乳动物细胞系。在根据(或者适合于)上述任何实施方案中的一些实施方案中，所述稳定的哺乳动物细胞系是CHO细胞系。本发明提供了组合物，其包含根据(或者适合于)上述任何实施方案中的所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段及其药物可接受的载体。本发明提供了一种检测患者样品中EGFR蛋白的方法，包括将根据(或者适合于)上述任何实施方案的所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段与所述样品接触，并检测与EGFR蛋白结合的所述抗EGFR抗体。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段用于免疫组织化学测定(IHC)或ELISA测定中。本发明还提供了一种治疗对象中癌症的方法，包括给予对象有效量的根据(或者适合于)上述任何实施方案的组合物。本发明还提供了用于治疗癌症的组合物，其包含根据(或者适合于)上述任何实施方案的抗EGFR抗体或其抗原结合片段。本发明提供了根据(或者适合于)上述任何实施方案的抗EGFR抗体或其抗原结合片段在生产治疗癌症的药物中的应用。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述癌症选自结肠直肠癌、肺癌及头颈癌。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，进一步给予对象选自如下的治疗剂：抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂和细胞毒性剂。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，所述癌症是喉癌。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，进一步给予对象放射性治疗。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，进一步给予对象选自如下的治疗剂：抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂和细胞毒性剂。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，被给予包含本文所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段的组合物的对象是KRAS野生型的。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，被给予包含本文所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段的组合物的对象具有KRASG13D突变。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，被给予包含本文所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段的组合物的对象是BRAF野生型的。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，被给予包含本文所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段的组合物的对象具有BRAFV600E突变。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，被给予包含本文所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段的组合物的对象对Erbitux或其生物类似物是有抗性的。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，被给予包含本文所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段的组合物的对象在Erbitux或其生物类似物治疗后仍是进展的。在根据(或者适合于)上述任何实施方案的一些实施方案中，被给予包含本文所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段的组合物的对象是Erbitux或其生物类似物难治疗的。附图简述图1示出ELISA结果，比较了得自CDR-L3/CDR-H3文库的抗EGFRFab变体与EGFR的结合。图2示出ELISA结果，比较了得自CDR-L3/CDR-H3文库的全长抗EGFRIgG抗体变体与EGFR的结合。图3示出解离速率(off-rate)ELISA结果，比较了得自CDR-H2文库的HLX05抗体(即公司内部产生的ERBITUX生物类似物抗体)和抗EGFR抗体变体与EGFR的解离速率。图4示出ELISA结果，比较了HLX05抗体(即公司内部产生的ERBITUX生物类似物抗体)、购自MerckKGaA的抗EGFR抗体1-26/2-68、1-26/3-67、#8/#33、#34/#33及利妥昔单抗的直接EGFR结合。图5示出竞争性ELISA结果，比较了HLX05、利妥昔单抗及抗EGFR抗体1-26/2-68、1-26/3-67、#8/#33及#34/#33的EGFR结合。图6A和6B示出对HLX05、和抗EGFR抗体1-26/2-68、1-26/3-67、#8/#33、#34/#33进行的聚糖分析结果。图7示出ELISA结果，比较了HLX05、及抗EGFR抗体1-26/2-68、1-26/3-67、#8/#33、#34/#33与FcγIII的结合。图8A示出比较HLX05与抗EGFR抗体1-26/2-68的ADCC活性的分析结果。图8B示出比较HLX05与抗EGFR抗体#8/#33的ADCC活性的分析结果。图8C示出比较抗EGFR抗体1-26/2-68和1-26/3-67的ADCC活性的分析结果。图8D示出比较HLX05与抗EGFR抗体1-26/3-67的ADCC活性的分析结果。图8E示出比较HLX05与抗EGFR抗体#34/#33的ADCC活性的分析结果。图8F示出比较抗EGFR抗体#8/#33和#34/#33的ADCC活性的分析结果。图8G示出比较HLX05、1-26/2-68、1-26/3-67、#8/#33和#34/#33的ADCC活性的量化分析结果。图9A示出比较HLX05和抗EGFR抗体1-26/2-68对A431细胞的抗增殖作用的分析结果。图9B示出比较HLX05和抗EGFR抗体#8/#33对A431细胞的抗增殖作用的分析结果。图9C示出比较抗EGFR抗体1-26/2-68和1-26/3-67对A431细胞的抗增殖作用的分析结果。图9D示出比较HLX05与抗EGFR抗体1-26/3-67对A431细胞的抗增殖作用的分析结果。图9E示出比较HLX05和抗EGFR抗体#34/#33对A431细胞的抗增殖作用的分析结果。图9F示出比较抗EGFR抗体#8/#33和#34/#33对A431细胞的抗增殖作用的分析结果。图9G示出比较HLX05、1-26/2-68、1-26/3-67、#8/#33和#34/#33对A431细胞的抗增殖作用的量化分析结果。图10示出测量#34/#33、1-26/3-67和1-26/2-68抑制肿瘤生长能力的A431肿瘤异种移植测定的结果。图11示出在第3天和第35天的#34/#33、1-26/3-67、1-26/2-68和的血清水平。图12示出测量HLX05、1-26/3-67、和安慰剂抑制肿瘤生长能力的FaDu肿瘤异种移植测定的结果。图13示出测量1-26/3-67+放疗、+放疗及安慰剂+放疗抑制肿瘤生长能力的FaDu肿瘤异种移植测定的结果。图14A示出评估HLX07-DM1、HLX07和对照抗体抑制DiFi细胞(KRASWT，BRAFWT)生长的能力的体外实验结果。图14B示出评估HLX07-DM1、HLX07和对照抗体抑制HCT-116细胞(KRASG13D)生长的能力的体外实验结果。图14C示出评估HLX07-DM1、HLX07和对照抗体抑制HT29细胞(BRAFV600E)生长的能力的体外实验结果。图15A示出使用PBMC效应细胞，1-26/3-67-FF(即“无岩藻糖(fuscosefree)”)、1-26/3-67和对照抗体针对DiFi细胞(KRASWT)的ADCC活性。图15B示出使用PBMC效应细胞，1-26/3-67-FF(即“无岩藻糖”)、1-26/3-67和对照抗体针对HCT-116细胞(KRASG13D)的ADCC活性。图15C示出使用PBMC效应细胞，1-26/3-67-FF(即“无岩藻糖”)、1-26/3-67和对照抗体针对HT29细胞(BRAFV600E)的ADCC活性。图16A示出ELISA结果，比较了34/33和3/67在食蟹猴中相对时间的血清浓度。图16B示出ELISA的结果，比较了HLX05(即1-3)和(即4-6)在食蟹猴中相对时间的血清浓度。图17示出由稳定细胞系产生的1-26/3-67抗体相对时间的浓度(mg/ml)。发明详述本发明提供了新的抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体。申请人惊奇地发现本文描述的抗EGFR抗体与FDA批准的用于治疗转移的结肠直肠癌和头颈癌的抗EGFR抗体(西妥昔单抗)相比，呈现增强的治疗效力。本文描述的抗EGFR抗体与相比也呈现更长的半衰期。在一相关方面，本发明提供了在CDR-H2中缺少N-糖基化基序的新的抗EGFR抗体。在抗体的轻链可变区和/或重链可变区内的糖基化，如的VH区Asn99处的N-聚糖，可通过干扰抗原结合而降低抗体的治疗效力。此外，这种糖基化在一批抗体内可导致异质性，可导致功能、免疫原性或稳定性改变。在CDR-H2中缺少糖基化基序的抗EGFR抗体的生产批次中存在更少的糖型(glycoform)。本发明还提供了免疫缀合物、编码本文所述新的抗EGFR抗体的核酸，以及组合物(如药物组合物)。本发明还提供了使用新的抗EGFR抗体检测样品(如体内或离体样品)中EGFR的方法、用于治疗癌症的包含这种抗体的组合物，以及这种抗体在生产治疗癌症的药物中的应用。定义如本文使用，“治疗”是获得有益的或希望的结果包括临床结果的方法。对于本发明而言，有益的或希望的临床结果包括但不限于如下的一或多种：缓解疾病所导致的一或多个症状，减轻疾病程度，稳定疾病(例如预防或延缓疾病恶化)，预防或延缓疾病传播(例如转移)，预防或延缓疾病复发，延缓或减慢疾病进展，改善疾病状态，疾病(部分或全部)减轻，减少治疗疾病需要的一或多种其它药物的剂量，延缓疾病进展，增加或改善生活质量，增加体重，和/或延长存活。“治疗”还涵盖减少癌症的病理学结果(例如肿瘤体积)。本发明提供的方法涉及这些治疗方面的任意一种或多种。术语“复发”、“再发”是指癌症或疾病在临床评估疾病消失后再次出现。远端转移或者局部复发诊断可以被认为是再发。术语“难治的”或“抗性的”是指癌症或疾病对于治疗无应答。术语“辅助治疗”是指在初始治疗、通常是手术之后给予的治疗。癌症或疾病的辅助治疗可包括免疫治疗、化疗、放疗或者激素治疗。术语“维持治疗”是指帮助维持先前的治疗效果而给予的预定再治疗。给予维持治疗通常是帮助保持癌症减轻或者延长对于特定治疗的应答，无论疾病进展如何。术语“侵润性癌症”是指已经传播越过其初生的组织层进入周围正常组织的癌症。侵润性癌症可以是或不是转移的。术语“非侵润性癌症”是指极早期的癌症或者尚未传播越过起源组织的癌症。在肿瘤学中术语“无进展存活期”是指在治疗期间和之后癌症不再生长的时间长度。无进展存活期包括患者经历的完整应答或部分应答的时间，以及患者经历的稳定疾病的时间。在肿瘤学中术语“进展性疾病”可以指由于肿瘤团块增加或者肿瘤传播所致，自治疗开始以来肿瘤生长超过20％。“病症”是指将得益于所述抗体治疗的任何状况。例如，患有或者需要预防异常EGFR活性的哺乳动物。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物具有所述病症倾向的那些病理学状况。本文要治疗的病症的非限制性实例包括癌症(如头颈癌、喉癌、结肠直肠癌、肺癌等)。如本文使用，“肿瘤”是指所有的赘生性细胞生长和增殖，无论是恶性或良性的，以及所有的癌前细胞和癌细胞及组织。术语“抗体”以最广义使用，特别覆盖例如单一单克隆抗体(包括激动剂、拮抗剂及中和性抗体)、具有多肽特异性的抗体组合物、多克隆抗体、单链抗-抗体以及抗体片段(见下文)，只要其特异性结合天然多肽和/或呈现出本发明的生物学活性或免疫学活性即可。根据一个实施方案，所述抗体结合靶蛋白的寡聚体形式，例如三聚体形式。根据另一实施方案，所述抗体特异性结合蛋白质，这种结合可以由本发明的单克隆抗体抑制(例如本发明的保藏抗体等)。短语抗体的“功能性片段或类似物”是与所指抗体具有共同的定性生物学活性的化合物。例如，本发明抗体的功能片段或类似物可以是特异性结合EGFR的功能性片段或类似物。在一个实施方案中，所述抗体可以阻止或实质降低EGFR诱导细胞增殖的能力。“分离的抗体”是已经鉴别并从其天然环境成分中分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染成分是将干扰所述抗体的诊断或治疗应用的材料，可包括酶、激素及其它蛋白质性或非蛋白质性溶质。在优选的实施方案中，所述抗体将被纯化至(1)通过Lowry方法确定，高于95％重量抗体，最优选超过99％重量，(2)足以通过使用转杯测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或者(3)通过SDS-PAGE在还原或非还原条件下使用考马斯蓝或优选银染显示为同质。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为所述抗体天然环境的至少一种成分将不存在。然而，通常分离的抗体通过至少一个纯化步骤制备。基本的4-链抗体单位是异源四聚体糖蛋白，由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成(IgM抗体由基本的异源四聚体单位与称作J链的额外多肽的5部分组成，因此含有10个抗原结合位点，而分泌的IgA抗体可以聚合形成多价聚集物，包含与J链一起的2-5个基本的4-链单位)。在IgG的情况中，4-链单位通常为大约150000道尔顿。每个L链与H链通过一个共价二硫键连接，而两个H链根据H链同种型通过一或多个二硫键彼此连接。每个H和L链也具有规律间隔的链内二硫键。每个H链在N末端有一个可变结构域(VH)，随后是每个α和γ链的三个恒定结构域(CH)及μ和ε同种型的四个CH结构域。每个L链在N末端具有一个可变结构域(VL)，随后在其另一端是一个恒定结构域(CL)。VL与VH排列一起，CL与重链的第一个恒定结构域(CH1)排列一起。特定氨基酸残基被认为在轻链与重链可变结构域之间形成界面。VH与VL的配对形成了单一的抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，见例如BasicandClinicalImmunology,8thedition,DanielP.Stites,AbbaI.TerrandTristramG.Parslow(eds.),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,page71andChapter6。来自任何脊椎动物物种的L链基于其恒定结构域的氨基酸序列可以归属于称作κ和λ的两个明显不同类型之一。根据其重链恒定结构域(CH)的氨基酸序列，免疫球蛋白可以归属于不同类别或同种型。有五个免疫球蛋白类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，具有分别称作α、δ、γ、ε和μ的重链。γ和α类别基于在CH序列和功能中的相对较小的差别而进一步分为亚类，例如人表达如下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。术语“可变”是指可变结构域的某些节段在抗体序列中广泛不同。V结构域介导抗原结合及界定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性在可变结构域的110个氨基酸跨度不是均匀分布的。V区由称作构架区(FR)的15-30个氨基酸的相对不变的区段组成，所述FR区被每个为9-12个氨基酸长的称作“超变区”的极端可变较短区域间隔。天然重链和轻链的可变结构域每个均包含四个FR，主要采取β-折叠构型，由形成环连接、及在一些情况中形成β-折叠结构的一部分的三个超变区连接。每个链中超变区通过FR紧密相近，与另一链的超变区有助于抗体的抗原结合位点的形成(见Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但是呈现出不同的效应子功能，如在抗体依赖性细胞毒性(ADCC)中抗体的参与。如本文使用，术语“CDR”或者“互补决定区”是指在重链和轻链多肽的可变区内发现的不连续的抗原结合位点。这些特定区域已经由Kabatetal.,J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabatetal.,U.S.Dept.ofHealthandHumanServices,“Sequencesofproteinsofimmunologicalinterest”(1991)；byChothiaetal.,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)及MacCallumetal.,J.Mol.Biol.262:732-745(1996)描述，其中当彼此比较时，所述定义包括氨基酸残基的重叠或子集。然而，提及抗体或嫁接的抗体或其变体的CDR的任一定义均包含在本发明定义和使用的该术语的范围内。涵盖由上文引用的参考文献定义的CDR的氨基酸残基在下表1中列出以作比较。表1：CDR定义Kabat1Chothia2MacCallum3VHCDR131-3526-3230-35VHCDR250-6553-5547-58VHCDR395-10296-10193-101VLCDR124-3426-3230-36VLCDR250-5650-5246-55VLCDR389-9791-9689-961残基编号根据Kabat等(如前)的命名法，2残基编号根据Chothia等(如前)的命名法，3残基编号根据MacCallum等(如前)的命名法。如本文使用，术语“单克隆抗体”是指得自一群基本同质抗体的抗体，即该群包含的各个抗体除了可能少量存在的可能天然发生的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。此外，与多克隆抗体制备物(其包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体)相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了特异性之外，单克隆抗体是有利的，因为其可以被合成而不被其它抗体污染。修饰语“单克隆”不应理解为需要通过任何特定方法产生所述抗体。例如，可用于本发明中的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法制备，所述方法首次由Kohleretal.Nature.256:495(1975)描述，或者可以使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(见例如美国专利号4,816,567)。“单克隆抗体”也可以分离自噬菌体抗体文库，使用如Clacksonetal.,Nature,352:624-628(1991),Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)及例如下文的实施例中所述的技术进行。本文中单克隆抗体包括“嵌合”抗体以及这种抗体的片段，只要其呈现出本发明的生物学活性即可，所述嵌合抗体中一部分重链和/或轻链与衍生自特定物种的抗体中相应序列相同或同源或者属于特定抗体类别或亚类，同时所述链的剩余部分与衍生自另一物种的抗体中相应序列相同或同源或者属于另一抗体类别或亚类(见美国专利号4,816,567；及Morrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。本发明感兴趣的嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其包含衍生自非人灵长类动物(例如旧大陆猴、猿等)的可变结构域抗原结合序列及人恒定区序列。“完整的”抗体是指包含抗原结合位点以及CL及至少重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如人天然序列恒定结构域)或者其氨基酸序列变体。优选地，完整抗体具有一或多种效应子功能。“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体(见美国专利号5,641,870，实施例2；Zapataetal.,ProteinEng.8(10):1057-1062[1995])，单链抗体分子，及抗体片段形成的多特异性抗体。用语“线性抗体”通常是指在Zapataetal.,ProteinEng.,8(10):1057-1062(1995)中描述的抗体。简而言之，这些抗体包含一对串联的Fd节段(VH-CH1-VH-CH1)，其与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性或单特异性的。抗体的木瓜蛋白酶消化产生称作“Fab”片段的两个相同的抗原结合片段和剩余的“Fc”片段，其名称反映出易于晶体化的能力。Fab片段由沿着H链的可变区结构域(VH)的整个L链及一个重链的第一个恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段关于抗原结合均是单价的，即其具有单一抗原结合位点。对抗体进行胰蛋白酶处理产生单一的大F(ab')2片段，其大致相应于两个二硫键连接的Fab片段，具有二价抗原结合活性，仍能交联抗原。Fab’片段与Fab片段不同，在CH1结构域的羧基末端具有另外几个残基，包括来自抗体铰链区的一或多个半胱氨酸。Fab'-SH在本文是对于Fab'的命名，其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带游离的巯基。F(ab')2抗体片段最初是作为Fab'片段对产生的，其间具有铰链半胱氨酸。也已知抗体片段的其它化学结合。Fc片段包含通过二硫键连载一起的两个H链的羧基末端部分。抗体的效应子功能是由Fc区域中的序列决定的，该区域也是由在某些类型细胞上发现的Fc受体(FcR)识别的部分。“变体Fc区域”包含由于如本文定义的至少一个“氨基酸修饰”而与Fc区域天然序列不同的氨基酸序列。优选地，变体Fc区与Fc区天然序列相比或者与亲代多肽的Fc区相比具有至少一个氨基酸取代，例如在Fc区天然序列或者在亲代多肽的Fc区中具有大约1个至大约10个氨基酸取代，优选大约1个至大约5个氨基酸取代。在一个实施方案中，本文所述变体Fc区与天然序列Fc区具有至少大约80％同源性、至少大约85％同源性、至少大约90％同源性、至少大约95％同源性或者至少大约99％同源性。根据另一实施方案，变体Fc区域与亲代多肽Fc区具有至少大约80％同源性、至少大约85％同源性、至少大约90％同源性、至少大约95％同源性或者至少大约99％同源性。术语“包含Fc区的多肽”是指这样的多肽，如抗体或免疫粘附素(见本文别处定义)，其包含Fc区。Fc区的C末端赖氨酸(根据EU编号系统的第447位残基)在例如多肽的纯化期间或者通过对编码所述多肽的核酸进行重组工程化而可以除去。因此，包含具有本发明的Fc区的多肽(包括抗体)的组合物可以包括所有K447残基均被除去的多肽群、无K447残基被除去的多肽群或者具有有和无K447残基的多肽混合物的多肽群。抗体“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物学活性，随着抗体同种型而变化。抗体效应子功能的例子包括：C1q结合及补体依赖性细胞毒性，Fc受体结合，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，吞噬作用，细胞表面受体的下调，及B细胞活化。“天然序列Fc区”包含与天然发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。Fc序列的例子在例如但不限于Kabatetal.,SequencesofImmunologicalInterest.5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1991))中描述。“Fv”是最小抗体片段，其含有完整的抗原识别和抗原结合位点。这个片段由一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的紧密非共价缔合的二聚体组成。这两个结构域的折叠产生6个超变环(各来自H和L链的3个环)，贡献抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即使单一的可变结构域(或者包含仅三个特异于抗原的CDR的一半Fv)具有识别和结合抗原的能力，但是与完整的结合位点相比具有较低亲和性。“单链Fv”也缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接为单一多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽进一步包含在VH与VL结构域之间的多肽接头，其使得sFv形成用于抗原结合所需的结构。关于sFv的综述，见PluckthuninThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113,RosenburgandMooreeds.,Springer-Verlag,NewYork,pp.269-315(1994)，Borrebaeck1995(下文)所述。术语“双抗体”是指小抗体片段，通过在VH与VL结构域之间用短接头(大约5-10个残基)构建sFv片段而制备(见前述)，由此获得V结构域的链间而不是链内配对，产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异源二聚体，其中两个抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。双抗体在例如EP404,097、WO93/11161及Hollingeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)中更充分描述。非人(例如啮齿动物)抗体的“人源化”形式是嵌合抗体，其含有衍生自非人抗体的最小序列。人源化抗体的大部分是人免疫球蛋白(接受抗体)，其中来自接受者超变区的残基由来自具有所需的抗体特异性、亲和性和性能的非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的超变区的残基置换。在一些情况中，人免疫球蛋白构架区(FR)残基由相应非人残基置换。此外，人源化抗体可以包含在接受抗体中或者在供体抗体中未发现的残基。产生这些修饰以进一步改善抗体性能。通常，人源化抗体包含基本上所有的至少一个及典型两个可变结构域，其中所有或基本上所有的超变环均相应于非人免疫球蛋白的那些结构，以及所有或基本上所有FR均是人免疫球蛋白序列的那些结构。人源化抗体任选还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，典型为人免疫球蛋白的恒定区。关于进一步的详细描述见Jonesetal.,Nature321:522-525(1986)；Riechmannetal.,Nature332:323-329(1988)及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。关于本文鉴别的多肽和抗体序列的“氨基酸序列相同性百分比(％)”或“同源性”定义为在考虑到作为序列相同性一部分的任何保守取代而比对序列之后，候选序列中与对比的多肽中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为了确定氨基酸序列相同性百分比进行的比对可以本领域技术人员已知的各种方式实现，例如使用可公开获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定合适的参数以测量比对，包括实现与对比序列全长最大程度比对需要的任何算法。然而，对于本发明，氨基酸序列相同性百分比数值是使用序列对比计算机程序ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列对比计算机程序由Genentech公司设计，源代码已经由用户文件在U.S.CopyrightOffice,WashingtonD.C.,20559申请，其注册为U.S.CopyrightRegistrationNo.TXU510087。ALIGN-2程序可通过Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,California公开获得。ALIGN-2程序应被编译用于UNIX操作系统，优选数字UNIXV4.0D。所有序列对比参数均由ALIGN-2程序设定，不改变。术语“Fc受体”或“FcR”用于描述结合抗体Fc区的受体。在一个实施方案中，本发明的FcR结合IgG抗体(γ受体)及包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，其具有主要在其胞浆区中不同的相似氨基酸序列。激活受体FcγRIIA在其胞浆区含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞浆区含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见M.inAnnu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。该术语包括同种异型，如FcγRIIIA同种异型：FcγRIIIA-Phe158、FcγRIIIA-Val158、FcγRIIA-R131和/或FcγRIIA-H131。FcR在RavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol9:457-92(1991)、Capeletal.,Immunomethods4:25-34(1994)及deHaasetal.,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中回顾。其它FcR，包括未来将鉴别的那些，均涵盖在本文术语“FcR”中。该术语还包括新生儿受体FcRn，其使得母亲IgG传递至胎儿(Guyeretal.,J.Immunol.117:587(1976)及Kimetal.,J.Immunol.24:249(1994))。术语“FcRn”是指新生儿Fc受体(FcRn)。FcRn与主要组织相容性复合物(MHC)在结构上相似，由与β2-微球蛋白非共价结合的α-链组成。新生儿Fc受体FcRn的多重功能参见GhetieandWard(2000)Annu.Rev.Immunol.18,739-766。FcRn在免疫球蛋白IgG从母亲至幼儿的被动输送及调节血清IgG水平中起作用。FcRn可作为救助受体，在细胞内及穿过细胞结合并转运胞饮的完整形式IgG，及从默认降解途径中将其挽救。人IgGFc区的“CH1结构域”(也称作H1的C1结构域)通常从大约第118位氨基酸延伸至大约215位氨基酸(EU编号系统)。“铰链区”通常定义为人IgG1的从Glu216至Pro230的区段(Burton,Molec.Immunol.22:161-206(1985))。通过将形成重链间S-S键的第一个和最后一个半胱氨酸残基置于同一位置，可以将其它IgG同种型的铰链区与IgG1序列进行比对。Fc区的“下游铰链区”通常定义为紧邻铰链区C末端的残基区段，即Fc区的残基233-239。在先前的报导中，FcR结合通常归因于在IgGFc区的下游铰链区中的氨基酸残基。人IgGFc区的“CH2结构域”(也称作H2的C2结构域)通常从大约第231位氨基酸延伸至大约第340位氨基酸。CH2结构域是唯一的，因为其与另一结构域不严密配对。事实上，两个N-连接的分支碳水化合物链置于完整的天然IgG分子的两个CH2结构域之间。推测该碳水化合物可提供结构域-结构域配对的取代基并帮助稳定CH2结构域。Burton,MolecImmunol.22:161-206(1985)。“CH3结构域”(也称作C2或H3结构域)包含Fc区中C末端至CH2结构域的残基区段(即从抗体序列的大约第341位氨基酸残基至C末端，典型为IgG的第446或447位氨基酸残基)。“功能性Fc区”具有天然序列Fc区的“效应子功能”。举例的“效应子功能”包括C1q结合、补体依赖性细胞毒性、Fc受体结合、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、吞噬作用、细胞表面受体(例如B细胞受体，BCR)的下调等。这种效应子功能通常需要Fc区与一结合结构域(例如抗体可变结构域)组合及例如可以使用如本文公开的各种测定法评估。“C1q”是包括用于免疫球蛋白Fc区的结合位点的多肽。C1q与两种丝氨酸蛋白酶C1r和C1s一起形成C1复合物，这是补体依赖性细胞毒性(CDC)途径的第一种成分。人C1q可以商购自例如Quidel,SanDiego,CA。术语“结合结构域”是指多肽的结合另一分子的区域。在FcR的情况中，结合结构域可包含一部分多肽链(例如其α链)，其与结合Fc区相关。一种有用的结合结构域是FcRα链的胞外结构域。具有变体IgGFc及具有“改变的”FcR结合亲和性或ADCC活性的抗体是这样的抗体，其与亲代多肽或者与包含天然序列Fc区的多肽相比，具有增强或降低的FcR结合活性(例如FcγR或FcRn)和/或ADCC活性。与FcR“呈现出增强的结合”的变体Fc与亲代多肽或天然序列IgGFc相比以更高的亲和性(例如更低的表观Kd或IC50值)结合至少一种FcR。根据一些实施方案，与亲代多肽相比，所述结合改良了大约3倍、优选大约5、10、25、50、60、100、150、200直至500倍，或者所述结合改良了大约25％-1000％。与FcR“呈现出降低的结合”的多肽变体与亲代多肽相比，以更低的亲和性(例如更高的表观Kd或者更高的IC50值)结合至少一种FcR。与亲代多肽相比，所述结合降低可以为大约40％或更多的结合降低。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或者“ADCC”是指一种细胞毒性形式，其中结合某些细胞毒性细胞(例如天然杀伤细胞(NK)、中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)的分泌的Ig使得这些细胞毒性效应细胞特异性结合携带抗原的靶细胞，随后用细胞毒素杀死靶细胞。所述抗体“装备”细胞毒性细胞，为这种杀伤所必需。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达在RavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol9:457-92(1991)第464页表3中总结。为评估感兴趣分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定，如在美国专利号5,500,362或5,821,337或者在下文实施例中所述。对于这种测定有用的效应细胞包括周围血单核细胞(PBMC)和天然杀伤细胞(NK)。替代地或另外地，感兴趣分子的ADCC活性可以在体内评估，例如在Clynesetal.PNAS(USA)95:652-656(1998)公开的动物模型中进行。与具有野生型IgGFc的多肽或亲代多肽相比，在存在人效应细胞时，包含变体Fc区的多肽“呈现出增加的ADCC”或介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，当在测定中具有变体Fc区的多肽与具有野生型Fc区的多肽(或者亲代多肽)的量是基本相同时，这种多肽在体外或体内在介导ADCC方面基本上更有效。通常，这种变体使用本领域已知的体外ADCC测定鉴别，如在动物模型等中确定ADCC活性的测定或方法。在一个实施方案中，优选的变体与野生型Fc(或亲代多肽)相比，在介导ADCC方面更有效大约5至大约100倍，例如大约25至大约50倍。“补体依赖性细胞毒性”或者“CDC”是指靶细胞在存在补体条件下的裂解。经典补体途径的激活是通过补体系统的第一种成分(C1q)与结合其同源抗原的(合适亚类的)抗体的结合而起始。为评估补体激活，可以进行CDC测定，如Gazzano-Santoroetal.,J.Immunol.Methods202:163(1996)所述。具有改变的Fc区氨基酸序列及增加或降低的C1q结合能力的多肽变体在美国专利号6,194,551B1和WO99/51642中描述。这些专利公开的内容特别并入本文作参考。也见Idusogieetal.J.Immunol.164:4178-4184(2000)。本文公开的抗EGFR抗体(或其片段)或组合物的“有效量”是足以进行特定所述目的的量。“有效量”可以根据经验及通过与所述目的相关的已知方法确定。术语“治疗有效量”是指本文公开的抗EGFR抗体(或其片段)或组合物有效“治疗”哺乳动物(也称作患者)疾病或病症的量。在癌症的情况中，本文公开的抗EGFR抗体(或其片段)或组合物的治疗有效量可以减少癌细胞的数目，减少肿瘤大小或重量，抑制(即在一定程度减缓及优选终止)癌细胞侵润至周围器官，抑制(即在一定程度减缓及优选终止)肿瘤转移，在一定程度抑制肿瘤生长，和/或在一定程度减轻与癌症相关的一或多个症状。在本文公开的抗EGFR抗体(或其片段)或组合物可以阻止生长和/或杀死现有癌细胞的程度，其可以是细胞生长抑制性的和/或细胞毒性的。在一个实施方案中，治疗有效量是生长抑制量。在另一个实施方案中，治疗有效量是延长患者存活期的量。在另一个实施方案中，治疗有效量是改良患者无进展生存率的量。本文公开的本发明抗EGFR抗体(或其片段)或组合物的“生长抑制量”是在体外或体内能抑制细胞、特别是肿瘤例如癌细胞生长的量。本发明的用于抑制赘生性细胞生长的多肽、抗体、拮抗剂或组合物的“生长抑制量”可以根据经验及通过已知方法或本文提供的实例进行确定。本发明的抗EGFR抗体(或其片段)或组合物的“细胞毒性量”是在体外或体内能导致细胞、特别是肿瘤例如癌细胞破坏的量。本发明的用于抑制赘生性细胞生长的抗EGFR抗体(或其片段)或组合物的“细胞毒性量”可以根据经验及通过本领域已知方法确定。本发明的抗EGFR抗体(或其片段)或组合物的“生长抑制量”是在体外或体内能抑制细胞、特别是肿瘤例如癌细胞生长的量。本发明的用于抑制赘生性细胞生长的抗EGFR抗体(或其片段)或组合物的“生长抑制量”可以根据经验或通过已知方法或通过本文提供的实例确定。如本文使用，“药学可接受的”或者“药学相容的”是指不是生物学或另外不希望的材料，例如所述材料可以并入给予患者的药物组合物中，而不引起任何明显的不希望的生物学作用或者以有害方式与包含其的组合物的任何其它成分相互作用。药物学可接受的载体或赋形剂优选符合毒理学和生产检测的要求标准，和/或列入美国食品和药物管理局的无活性成分指导(InactiveIngredientGuide)。术语“检测”是指包括确定物质的存在或不存在或者量化物质(如EGFR)的量。该术语因此是指本发明的材料、组合物和方法在定性和定量确定中的应用。通常，用于检测的特定技术对于实施本发明不是关键的。例如，本发明的“检测”可包括：观测EGFR基因产物、mRNA分子或EGFR多肽的存在或不存在，EGFR多肽的水平或与靶结合的量的改变，EGFR多肽的生物学功能/活性的改变。在一些实施方案中，“检测”可包括检测野生型EGFR水平(例如mRNA或多肽水平)。检测可包括当与对照物对比时，量化在10％-90％、或者30％-60％之间或者超过100％的任何值的改变(增加或降低)。检测可包括量化在2-10倍(包括端点值)之间任何值、或者例如超过100-倍的改变。如本文使用，单词“标记”是指与抗体直接或间接缀合的一种可检测的化合物或组合物。所述标记自身可以是可被检测的(例如放射性同位素标记或荧光标记)，或者在酶标记的情况中，可以催化可检测的底物化合物或组合物的化学改变。本文提及数值或参数所用词“大约”是指各自数值的通常误差范围，这些为本领域技术人员已知。本文提及“大约”数值或参数包括(及描述了)针对该数值或参数本身。例如，提及“大约X”的描述包括“X”。应理解本文描述的本发明的各个方面和实施方案包括“包含”各个方面和实施方案、“由(各个方面和实施方案)…组成”及“基本由(各个方面和实施方案)…组成”。本文列举的所有参考文献，包括专利申请和公开，均以其全部内容并入本文作参考。抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体本发明基于结合表皮生长因子受体(EGFR)的新抗体的鉴别。所述抗EGFR抗体可用于多种治疗和诊断方法中。例如，所述抗EGFR抗体可以单独使用或者组合其它制剂组合用于治疗特征在于异常EGFR表达或异常EGFR活性的疾病，包括例如头颈癌、喉癌、结肠直肠癌、肺癌等。本发明提供的抗体也可以用于检测患者或患者样品中的EGFR蛋白，通过将所述抗EGFR抗体给予患者并检测患者样品中(例如在体内或离体)与EGFR蛋白结合的所述抗EGFR抗体、或者通过将所述抗EGFR抗体与患者样品接触并定性或定量检测与EGFR蛋白结合的所述抗EGFR抗体进行。表皮生长因子受体或EGFR(也已知为例如ERBB、ERBB1、HER1、PIG61、mENA、细胞生长抑制蛋白40、细胞增殖诱导蛋白61和EC2.7.10.1)是ErbB受体家族、四个密切相关的受体酪氨酸激酶的亚家族的成员。EGFR通过其特异性配体(如表皮生长因子(EGF)，TGFα，结合肝素的EGF-样生长因子，双调蛋白，β细胞素(BTC)，上皮细胞有丝分裂蛋白(EPGN)等)的结合而被激活，由此EGFR经历二聚体化和酪氨酸自身磷酸化。自身磷酸化导致例如磷脂酰3-激酶(PI3K)、磷脂酶(PL)C-g1、Akt、Ras、Raf及促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)以及与细胞增殖、运动性、粘附和迁移相关的其它信号转导级联的下游激活。异常EGFR表达或EGFR活性与许多癌症(如头颈癌、喉癌、结肠直肠癌、肺癌等))相关。抗EGFR抗体是以足够亲和性和特异性结合EGFR的抗体。优选地，本发明提供的抗EGFR抗体(或其抗原结合片段)在靶向和干扰涉及EGFR活性的疾病或状况中可用作治疗剂。抗-EGFR抗体通常不结合其它ERBb家族，如Her2/Neu/ErbB2、Her3/ERBb3或Her4/ERBb4。优选地，所述抗EGFR抗体是重组人源化抗-EGFR单克隆抗体。根据一个实施方案，所述抗EGFR抗体包含本文公开的任一抗体的CDR、可变重链区和/或可变轻链区。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体(或其抗原结合片段)是抗EGFR抗体的变体，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重量可变结构域序列包含：包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQIDNO:5)的CDR-H2及包含氨基酸序列TYYDYEFAY(SEQIDNO:10)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)的CDR-L1、包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)的CDR-L2及(3)包含氨基酸序列NWPTT(SEQIDNO:25)的CDR-L3，其中所述变体在SEQIDNO:5、10、15、21和/或25的一或多个中包含至少一个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述变体在SEQIDNO:5、10、15、21和/或25的一或多个中包含至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个氨基酸取代。在某些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。在某些实施方案中，所述氨基酸取代基本上不降低抗体结合抗原的能力。例如，可以产生基本上不降低EGFR结合亲和性的保守改变(例如本文提供的保守取代)。抗EGFR抗体变体的结合亲和性可以使用下文实施例中描述的方法评估。保守取代在表2中标题为“保守取代”部分示出。更多的实质改变在表2中标题为“举例的取代”部分提供，并在下文关于氨基酸侧链类别进一步描述。氨基酸取代可以导入感兴趣的抗体中，并根据希望的活性例如保持/改良的EGFR结合、降低的免疫原性或者改良的ADCC或CDC来筛选产物。表2：保守取代非保守取代将使得这些类别之一的成员更换为另一类别。一个举例的取代变体是亲和力成熟抗体，其可以例如使用本文所述那些基于噬菌体展示的亲和力成熟技术便利地产生。简而言之，突变一或多个CDR残基，变体抗体展示在噬菌体上并针对特定生物学活性(例如结合亲和性)进行筛选。可以在HVR中产生改变(例如取代)，以改良抗体亲和性。这种改变可以在HVR“热点”即由在体细胞成熟过程期间经历高频率突变的密码子编码的残基中产生(见例如Chowdhury,MethodsMol.Biol.207:179-196(2008))，和/或在SDR(a-CDR)中产生，检测所得变体VH或VL的结合亲和性。通过从二级文库中构建和再选择进行的亲和力成熟在例如Hoogenboometal.inMethodsinMolecularBiology178:1-37(O'Brienetal.,ed.,HumanPress,Totowa,NJ,(2001).)中描述。在亲和力成熟的一些实施方案中，在选择用于成熟的可变基因中通过任何方法(例如易错PCR、链替换或者寡核苷酸定向诱变)导入多样性。产然后生二级文库。然后筛选该文库以鉴别具有希望的亲和性的任何抗体变体。导入多样性的另一方法包括HVR定向方法，其中随机化一些HVR残基(例如一次4-6个残基)。参与抗原结合的HVR残基可以是特别鉴别的，例如使用丙氨酸扫描诱变或建模进行。通常特别靶向CDR-H3和CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体(或其抗原结合片段)包含重链可变结构域和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列N/T/Q-YGVH(SEQIDNO:4)的CDR-H1、包含氨基酸序列Y-N/A/G/D-T/D/N-P/K/E-FTSRF(SEQIDNO:9)的CDR-H2及包含氨基酸序列T/D-Y/L-YDY-E/N-FAY(SEQIDNO:14)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列I-G/R/S-T/L/P-NIH(SEQIDNO:20)的CDR-L1、包含氨基酸序列KY-A/G-SE-S/T-I-S/R(SEQIDNO:24)的CDR-L2及包含氨基酸序列NWPT-T/L/S/A/Y(SEQIDNO:30)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含选自SEQIDNO:1-3的氨基酸序列的CDR-H1、包含选自SEQIDNO:5-8的氨基酸序列的CDR-H2及包含选自SEQIDNO:10-13的氨基酸序列的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含选自SEQIDNO:15-19的氨基酸序列的CDR-L1、包含选自SEQIDNO:21-23的氨基酸序列的CDR-L2及包含选自SEQIDNO:25-29的氨基酸序列的CDR-L3。在本文提及的CDR序列在下表3中提供。表3在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体(或其抗原结合片段)包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQIDNO:5)的CDR-H2及包含氨基酸序列TYYDYEFAY(SEQIDNO:10)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)的CDR-L1、包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)的CDR-L2及(3)包含氨基酸序列NWPTT(SEQIDNO:25)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQIDNO:5)的CDR-H2及包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)的CDR-L1、包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)的CDR-L2及包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)的CDR-H2及包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)的CDR-L1、包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)的CDR-L2及包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列YATEFTSRF(SEQIDNO:7)的CDR-H2及包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)的CDR-L1、包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)的CDR-L2及包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)的CDR-H1、包含氨基酸序列YDDKFTSRF(SEQIDNO:6)的CDR-H2及包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)的CDR-L1、包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)的CDR-L2及包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列TYGVH(SEQIDNO:3)的CDR-H1、包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)的CDR-H2及包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列IRTNIH(SEQIDNO:16)的CDR-L1、包含氨基酸序列KYGSESIS(SEQIDNO:22)的CDR-L2及包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列TYGVH(SEQIDNO:3)的CDR-H1、包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)的CDR-H2及包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)的CDR-H3；所述轻链可变结构域序列包含：包含氨基酸序列ISTNIH(SEQIDNO:19)的CDR-L1、包含氨基酸序列KYGSESIS(SEQIDNO:22)的CDR-L1及包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体包含轻链可变结构域(VL)，其包含SEQIDNO:32-35任一所示氨基酸序列。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含SEQIDNO:36-39所示氨基酸序列。SEQIDNO:32-39的氨基酸序列在下文提供。SEQIDNO:32EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSIGTNIHWYQQKPGQAPRLLIKYASESISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQNNNWPTSFGGGTKVEIKRTSEQIDNO:33EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSIRTNIHWYQQKPGQAPRLLIKYGSESISGIPARFSGSGSGTDTLTISSLEPEDFAVYYCQQNNNWPTSFGGGTKVEIKRTSEQIDNO:34EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISTNIHWYQQKPGQAPRLLIKYGSESISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQNNNWPTSFGGGTKVEIKRTSEQIDNO:35EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSIGTNIHWYQQKPGQAPRLLIKYASESISGIPARFSGGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQNNNWPTTFGGGTKVEIKRTSEQIDNO:36EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGNTDYGNEFTSRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARALDYYDYEFAYWGQGTMVTVSSASEQIDNO:37EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTNYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGNTDYGNEFTSRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARALDYYDYEFAYWGQGTMVTVSSASEQIDNO:38EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTNYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGNTDYATEFTSRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARALDYYDYEFAYWGQGTMVTVSSASEQIDNO:39EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTNYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARALTYYDYEFAYWGQGTMVTVSSA在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含轻链可变结构域及重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQIDNO:32所示氨基酸序列，所述重链可变结构域包含SEQIDNO:38所示氨基酸序列。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含轻链可变结构域及重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQIDNO:32所示氨基酸序列，所述重链可变结构域包含SEQIDNO:37所示氨基酸序列。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含轻链可变结构域及重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQIDNO:33所示氨基酸序列，所述重链可变结构域包含SEQIDNO:36所示氨基酸序列。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含轻链可变结构域及重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQIDNO:34所示氨基酸序列，所述重链可变结构域包含SEQIDNO:36所示氨基酸序列。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含轻链可变结构域及重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQIDNO:35所示氨基酸序列，所述重链可变结构域包含SEQIDNO:39所示氨基酸序列。所述重链和轻链可变结构域以所有可能的配对组合方式组合，以产生许多抗EGFR抗体。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体在CDR-H2中缺少N-糖基化基序(无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体)。治疗性抗体的重链或轻链可变区中的糖基化，如在VH区或的Asn99的N-聚糖，可导致一批抗体中的差异，可引起功能、免疫原性或稳定性的改变。在某些实施方案中，所述无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体包含重链可变结构域，其包含CDR-H2，所述CDR-H2包含氨基酸序列Y-A/G/D-D/N-K/E-FTSRF(SEQIDNO:31)。在某些实施方案中，所述无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体或其抗原结合片段进一步包含重链，其包含CDR-H1和CDR-H3，所述CDR-H1包含氨基酸序列N/T/Q-YGVH(SEQIDNO:4)，所述CDR-H3包含氨基酸序列T/D-Y/L-YDY-E/N-FAY(SEQIDNO:14)。在某些实施方案中，所述无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体或其抗原结合片段进一步包含轻链可变结构域序列，其包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述CDR-L1包含氨基酸序列I-G/R/S-T/L/P-NIH(SEQIDNO:20)，所述CDR-L2包含氨基酸序列KY-A/G-SE-S/T-I-S/R(SEQIDNO:24)及所述CDR-L3包含氨基酸序列NWPT-T/L/S/A/Y(SEQIDNO:30)。上述CDR的序列在下表4中提供。表4SEQIDNO:4N/T/Q-YGVHSEQIDNO:14T/D-Y/L-YDY-E/N-FAYSEQIDNO:20I-G/R/S-T/L/P-NIHSEQIDNO:24KY-A/G-SE-S/T-I-S/RSEQIDNO:30NWPT-T/L/S/A/YSEQIDNO:31Y-A/G/D-D/N-K/E-FTSRF分析抗体糖基化的方法包括但不限于例如层析(如阳离子交换层析(CEX)或液相层析)、质谱分析(如电喷射离子化质谱分析)及毛细管电泳-十二烷基硫酸钠。这些方法在例如Jungetal.(2011)CurrOpBiotechnol.22(6):858-67；CummingsRD,EtzlerME.AntibodiesandLectinsinGlycanAnalysis.In:VarkiA,CummingsRD,EskoJD,etal.,editors.EssentialsofGlycobiology.2ndedition.ColdSpringHarbor(NY):ColdSpringHarborLaboratoryPress；2009.Chapter45；MulloyB,HartGW,StanleyP.StructuralAnalysisofGlycans.In:VarkiA,CummingsRD,EskoJD,etal.,editors.EssentialsofGlycobiology.2ndedition.ColdSpringHarbor(NY):ColdSpringHarborLaboratoryPress；2009.Chapter47；Leymarie,etal.(2012)AnalChem.84(7):3040-3048；Fernandez(2005)EuropeanBiopharmaceuticalReview.pp106-110及Raju,T.(2013)MethodsMolBiol.988:169-180中描述。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体对于EGFR的结合亲和性强于其对于EGFR同系物如Her2/ERBb2、Her3/ERBb3或Her4/ERBb4的结合亲和性。通常，所述抗EGFR抗体“特异性结合”EGFR(即结合亲和性(Kd)值不超过大约1×10-7M，优选不超过大约1×10-8及最优选不超过大约1×10-9M)，但是与ERBb家族成员的结合亲和性比其与EGFR的结合亲和性弱至少大约50倍、至少大约500倍或者至少大约1000倍。特异性结合EGFR的所述抗EGFR抗体可以是如上文定义的多种类型抗体的任一种，但是优选是人源化抗体或人抗体。在一些实施方案中，所述抗EGFR抗体与非靶蛋白(如Her2/ERBb2，Her3/ERBb3或Her4/ERBb4)的结合程度与所述抗体与EGFR的结合相比低大约10％，通过本领域已知方法确定，如ELISA、荧光激活细胞分选(FACS)分析或者放射性免疫沉淀法(RIA)。特异性结合可以例如通过与对照分子的结合相比确定分子的结合情况而测量，对照分子通常是具有相似结构但不具有结合活性的分子。例如，特异性结合可以通过与和靶相似的对照分子的竞争而确定，例如过量的未标记的靶。在这种情况中，如果标记的靶与探针的结合被过量的未标记的靶竞争性抑制，则表示特异性结合。如本文所用，术语“特异性结合”或者“特异于”特定多肽或者特定多肽靶上的表位可以呈现为例如分子对靶的Kd为至少大约10-4M，或者至少大约10-5M，或者至少大约10-6M，或者至少大约10-7M，或者至少大约10-8M，或者至少大约10-9M，或者至少大约10-10M，或者至少大约10-11M，或者至少大约10-12M或更高。在一个实施方案中，术语“特异性结合”是指其中分子结合特定多肽或特定多肽上表位的结合，而基本上不结合任何其它多肽或多肽表位。抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)是治疗性抗体针对肿瘤细胞的一种作用机制。ADCC是一种细胞介导的免疫防御，借此免疫系统的效应细胞主动裂解靶细胞(例如癌细胞)，其膜-表面抗原被特异性抗体结合(例如本文描述的抗EGFR抗体)。在一些实施方案中，所述抗EGFR抗体呈现出与相似的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能，如通过在实施例中描述的测定法证实。例如，在某些实施方案中，本文描述的抗EGFR抗体的ADCC效应子功能活性是的ADCC效应子功能活性的至少大约80％、至少大约85％、至少大约90％、至少大约91％、至少大约92％、至少大约93％、至少大约94％、至少大约95％、至少大约96％、至少大约97％、至少大约98％、至少大约99％、至少大约100％或超过100％(例如大约105％、大约106％、大约107％、大约108％、大约109％、大约110％、大约111％、大约112％、大约113％、大约114％、大约115％、大约116％、大约117％、大约118％、大约119％、大约120％、大约121％、大约122％、大约123％、大约124％、大约125％或者大约130％)，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体对FcγRIIIa呈现出与相似的结合亲和性。在某些实施方案中，与FcγRIIIa结合通过ELISA证实，如在实施例中所述。例如，所述抗-EGFR对FcγRIIIa的结合亲和性是(西妥昔单抗)对FcγRIIIa的结合亲和性的大约1％、大约5％、大约10％、大约15％、大约20％、大约30％、大约40％、大约50％、大约60％、大约70％、大约80％、大约90％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％、大约99％、大约100％或者高于100％(例如大约105％、大约106％、大约107％、大约108％、大约109％、大约110％、大约111％、大约112％、大约113％、大约114％、大约115％、大约116％、大约117％、大约118％、大约119％、大约120％、大约121％、大约122％、大约123％、大约124％、大约125％或者高于大约125％)。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体结合人EGFR的Kd在大约0.1pM-200pM(0.2nM)之间，例如大约0.1pM、大约0.25pM、大约0.5pM、大约0.75pM、大约1pM、大约5pM、大约10pM、大约20pM、大约30pM、大约40pM、大约50pM、大约60pM、大约70pM、大约80pM、大约90pM、大约100pM、大约110pM、大约120pM、大约130pM、大约140pM、大约150pM、大约160pM、大约170pM、大约180pM、大约190pM或者超过大约190pM，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体与EGFR的结合亲和性比(西妥昔单抗)与EGFR的结合亲和性高大约1％、大约5％、大约10％、大约15％、大约20％、大约30％、大约40％、大约50％、大约60％、大约70％、大约80％、大约90％、大约95％大约96％、大约97％、大约98％、大约99％、大约100％或者超过大约100％(例如大约105％、大约110％、大约120％或大约130％)。在某些实施方案中，所述抗-EGFR与EGFR的结合亲和性是(西妥昔单抗)与EGFR的结合亲和性的大约1.1倍、大约1.2倍、大约1.3倍、大约1.4倍、大约1.5倍、大约1.6倍、大约1.7倍、大约1.8倍、大约1.9倍、大约2倍、大约2.25倍、大约2.5倍、大约2.75倍、大约3倍、大约3.25倍、大约3.5倍、大约3.75倍、大约4倍、大约4.25倍、大约4.5倍、大约4.75倍或者超过大约4.75倍，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体与相比具有延长的体内半衰期。在某些实施方案中，本文描述的抗EGFR抗体的体内半衰期不短于的体内半衰期。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体呈现出与(西妥昔单抗)或其生物类似物相似的药动学性质。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体呈现出这样的AUC(曲线下面积)，其是(西妥昔单抗)或其生物类似物的血清浓度-时间谱的大约50％、大约55％、大约60％、大约65％、大约70％、大约75％、大约80％、大约85％、大约90％、大约95％或高于95％(如大约96％、大约97％、大约98％、大约99％或超过大约99％)，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，所述抗体包含人IgG例如人IgG1或人IgG4的Fc序列。在某些实施方案中，所述Fc序列已经改变或者另外变化，由此缺少通常与其结合Fc受体(FcR)相关的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应子功能。有许多可改变效应子功能的Fc序列的改变或突变的实例。例如，WO00/42072和Shieldsetal.JBiol.Chem.9(2):6591-6604(2001)描述了与FcR结合提高或减少的抗体变体。这些出版物的内容特别并入本文作参考。所述抗体可以是Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段、双抗体和线性抗体形式。抗体也可以是多特异性抗体，其结合EGFR，但是也结合一或多个其它靶并抑制其功能。所述抗体可以与治疗剂(例如细胞毒性剂、放射性同位素和化疗剂)或用于在患者样品中或者在体内通过成像(例如放射性同位素、荧光染料和酶)检测EGFR的标记缀合。其它修饰包括毒素与本发明提供的抗EGFR抗体的缀合。本发明还涵盖了编码所述抗EGFR抗体的核酸分子、包含编码本文所述CDR和/或重链可变结构域和/或轻链可变结构域的核酸分子的表达载体以及包含所述核酸分子的细胞。这些抗体可用于本文所述治疗中及检测患者样品(例如通过FACS、免疫组织化学测定(IHC)、ELISA测定)或者患者中的EGFR蛋白。单克隆抗体单克隆抗体可以例如使用杂交瘤方法制备，如KohlerandMilstein,Nature,256:495(1975)所述，或者可以通过重组DNA方法产生(美国专利号4,816,567)或者可以通过在下文实施例中描述的方法产生。在杂交瘤方法中，典型地将仓鼠、小鼠或其它合适的宿主动物用免疫剂免疫以激发产生或能产生特异性结合所述免疫剂的抗体的淋巴细胞。或者，所述淋巴细胞可以在体外被免疫。所述免疫剂典型包括感兴趣的多肽或蛋白质的融合蛋白或者包含所述蛋白质的组合物。通常，如果希望使用人来源的细胞，则使用周围血淋巴细胞(PBL)，或者如果希望使用非人哺乳动物来源，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用合适的融合剂如聚乙二醇将淋巴细胞与永生化细胞系融合，形成杂交瘤细胞。Goding,MONOCLONALANTIBODIES:PRINCIPLESANDPRACTICE(NewYork:AcademicPress,1986),pp.59-103。永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿动物、牛和人来源的骨髓瘤细胞。通常，应用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基(优选含有抑制未融合的永生化细胞生长或存活的一或多种物质)中培养。例如，如果亲代细胞缺少次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤的培养基将典型包含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT-缺陷细胞的生长。优选的永生化细胞系是有效融合、支持所选择的抗体生产细胞稳定高水平表达抗体及对培养基如HAT培养基敏感的那些细胞系。更优选的永生化细胞系是鼠骨髓瘤细胞系，其可以得自例如SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,California和美国典型培养物保藏中心(Manassas,Virginia)。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也描述用于生产人单克隆抗体。Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeuretal.MONOCLONALANTIBODYPRODUCTIONTECHNIQUESANDAPPLICATIONS(MarcelDekker,Inc.:NewYork,1987)pp.51-63。然后可以测定在培养杂交瘤细胞的培养基中针对所述多肽的单克隆抗体的存在情况。由所述杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性可以通过免疫沉淀法或者通过体外结合测定法如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)确定。这种技术和测定为本领域已知。单克隆抗体的结合亲和性可例如通过MunsonandPollard,Anal.Biochem.,107:220(1980)所述的Scatchard分析法确定。在鉴别希望的杂交瘤细胞之后，将克隆可以通过限制稀释程序进行亚克隆及通过标准方法生长。Goding，如前。为此，合适的培养基包括例如Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium和RPMI-1640培养基。或者，杂交瘤细胞可以在哺乳动物腹水中在体内生长。由所述亚克隆分泌的单克隆抗体可以从培养基或腹水液中分离或纯化，通过常规的免疫球蛋白纯化方法进行，如蛋白质A-琼脂糖、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析或者亲和性层析。单克隆抗体也可以通过重组DNA方法产生，如在美国专利号4,816,567中所述。编码本发明提供的单克隆抗体的DNA可以使用常规方法(例如使用能特异性结合编码鼠抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)容易地分离和测序。本发明提供的杂交瘤细胞作为这种DNA的优选来源。一旦分离，可以将DNA置于表达载体中，然后将其转移至不另外产生免疫球蛋白的宿主细胞如猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞中，以在所述重组宿主细胞中合成单克隆抗体。DNA也可以被修饰，例如用人重链和轻链恒定结构域的编码序列取代同源鼠序列(美国专利号4,816,567；Morrisonetal.,如前)或者共价结合免疫球蛋白编码序列与非免疫球蛋白多肽的所有或部分编码序列。这种非免疫球蛋白多肽可以由本发明提供的抗体的恒定结构域取代，或者可以由本发明提供的抗体的一个抗原结合位点的可变结构域取代，以产生嵌合二价抗体。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体由稳定的哺乳动物细胞系表达。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体从稳定的哺乳动物细胞系表达，效价为大约2.0g/l、大约2.5g/l、大约3.0g/l、大约3.5g/l、大约4.0g/l、大约4.5g/l、大约5.0g/l、大约5.5g/l、大约6g/l、大约6.5g/l、大约7.0g/l或超过大约7.0g/l，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体从中表达的稳定的哺乳动物细胞系是CHO细胞系。在某些实施方案中，所述抗体是单价抗体。制备单价抗体的方法为本领域已知。例如，一种方法包括重组表达免疫球蛋白轻链和修饰的重链。重链通常在Fc区中的任何点被截短，以阻止重链交联。或者，相关的半胱氨酸残基用另一氨基酸残基取代或缺失以阻止交联。体外方法也适于制备单价抗体。可以使用但不限于本领域已知的技术消化抗体产生其片段、特别是Fab片段。人和人源化抗体所述抗体可以是人源化抗体或者人抗体。人源化形式的非人(例如鼠)抗体是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或者其片段(如抗体的Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或者其它抗原结合子序列)，其典型含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(接受抗体)，其中接受者的CDR的残基由来自具有所需特异性、亲和力和性能的非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或兔的CDR的残基置换。在一些情况中，所述人免疫球蛋白的Fv构架残基由相应非人残基置换。所述人源化抗体也可包含在接受抗体和输入的CDR或构架序列中均未发现的残基。通常，所述人源化抗体可包含基本上所有的至少一个、典型为两个可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR区均相应于非人免疫球蛋白的那些区域，及所有或基本上所有的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些区域。所述人源化抗体优选还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，典型为人免疫球蛋白恒定区。Jonesetal.Nature,321:522-525(1986)；Riechmannetal.,Nature,332:323-329(1988)；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596(1992)。通常，人源化抗体具有导入其中的来自非人来源的一或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称作“输入”残基，其典型取自“输入”可变结构域中。根据一个实施方案，人源化基本上根据Winter及同事(Jonesetal.Nature,321:522-525(1986)；Riechmannetal.Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyenetal.Science,239:1534-1536(1988))所述方法进行，用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列。因此，这种“人源化”抗体是这样的抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上小于完整的人可变结构域已经由来自非人物种的相应序列取代。实际上，人源化抗体是典型的人抗体，其中一些CDR残基及可能一些FR残基由啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。代替人源化，可以产生人抗体。例如，现在可以产生转基因动物(例如小鼠)，在不存在内源性免疫球蛋白产生的条件下，其在免疫时能产生人抗体的全部库集(repertoire)。例如，已经描述了在嵌合及种系突变小鼠中抗体重链结合区(JH)基因的纯合缺失导致完全抑制内源性抗体产生。将人种系免疫球蛋白基因阵列转移至这种种系突变小鼠中，在抗原攻击时将产生人抗体。见例如Jakobovitsetal.PNASUSA,90:2551(1993)；Jakobovitsetal.,Nature,362:255-258(1993)；Bruggemannetal.YearinImmunol.,7:33(1993)；美国专利号5,545,806、5,569,825、5,591,669、5,545,807和WO97/17852。或者，可以通过将人免疫球蛋白基因座导入转基因动物如小鼠中产生人抗体，所述小鼠中内源性免疫球蛋白基因已经被部分或完全失活。在抗原攻击时，观测到人抗体产生，其与在人中所见的抗体在包括基因重排、装配和抗体库集的所有方面均非常相似。这种方法在例如美国专利号5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425和5,661,016及Marksetal.,Bio/Technology,10:779-783(1992)、Lonbergetal.,Nature,368:856-859(1994)、Morrison,Nature,368:812-813(1994)、Fishwildetal.NatureBiotechnology,14:845-851(1996)、Neuberger,NatureBiotechnology,14:826(1996)、LonbergandHuszar,Intern.Rev.Immunol.,13:65-93(1995)中描述。或者，可使用噬菌体展示技术(McCaffertyetal.,Nature348:552-553[1990])从未免疫供体的免疫球蛋白可变(V)结构域基因库集中在体外产生人抗体和抗体片段。根据这种技术的一个实施方案，将抗体V结构域序列符合读框地克隆进丝状噬菌体如M13或fd的主要或次要包被蛋白基因中，并在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。噬菌体展示可以多种形式进行，例如下文实施例章节中所述，或者参见例如Johnson,KevinS.andChiswell,DavidJ.,CurrentOpinioninStructuralBiology3:564-571(1993)。一些V基因节段来源可用于噬菌体展示。Clacksonetal.,Nature,352:624-628(1991)从衍生自免疫的小鼠的脾的V基因的小型随机组合文库中分离了抗-噁唑酮抗体的不同阵列。可以构建来自未免疫的人供体的V基因的库集，及可以分离不同抗原阵列(包括自体抗原)的抗体，基本上根据如Markseta！.,J.Mol.Biol.222:581-597(1991)或Griffithetal.,EMBOJ.12:725-734(1993)所述技术进行。也见美国专利号5,565,332和5,573,905所述。如上所述，人抗体也可以通过体外激活的B细胞产生(见美国专利5,567,610和5,229,275)。人抗体也可以使用本领域已知的各种技术产生，包括噬菌体展示文库。HoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:581(1991)。Coleetal.和Boerneretal.的技术也可用于制备人单克隆抗体。Coleetal.,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,p.77(1985)和Boerneretal.,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)。多特异性抗体多特异性抗体是单克隆的、优选人或人源化抗体，其对两或更多种不同抗原具有结合特异性(例如双特异性抗体对于至少两种抗原具有结合特异性)。例如，一种结合特异性可以是针对a5～1蛋白，另一种是针对任何其它抗原。根据一个优选的实施方案，其它抗原是细胞表面蛋白或受体或受体亚基。例如，细胞表面蛋白可以是天然杀伤(NK)细胞受体。因此，根据一个实施方案，本发明的双特异性抗体可以结合EGFR及例如第二种细胞表面受体二者。产生双特异性抗体的合适方法为本领域已知。例如，双特异性抗体的重组产生基于两个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中两个重链具有不同的特异性。MilsteinandCuello,Nature,305:537-539(1983)。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机组合，因此这些杂交瘤(细胞杂交瘤)产生潜在的10种不同抗体分子的混合物，其中仅1种具有正确的双特异性结构。所述正确分子的纯化通常通过亲和性层析步骤完成。相似方法在WO93/08829和在Trauneckeretal.,EMBO,10:3655-3659(1991)中公开。具有希望的结合特异性的抗体可变结构域(抗体-抗原结合位点)可以与免疫球蛋白恒定结构域序列融合。所述融合体优选具有免疫球蛋白重链恒定结构域，其包含至少一部分铰链、CH2和CH3区。优选具有第一个重链恒定区(CH1)，其含有在至少一个融合体中存在的轻链结合所需位点。将编码免疫球蛋白重链融合体及如果需要的免疫球蛋白轻链的DNA插入单独的表达载体中，并共转染进合适的宿主生物体中。关于产生双特异性抗体的进一步详细描述见例如Sureshetal.,MethodsinEnzymology,121:210(1986)。直接从重组细胞培养物中产生和分离双特异性抗体片段的各种技术也已经描述。例如，已经使用亮氨酸拉链产生双特异性抗体。Kostelnyetal.,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)。将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两个不同抗体的Fab'部分连接。在铰链区的抗体同二聚体被还原形成单体，然后再氧化形成抗体异二聚体。这种方法也可用于产生抗体同二聚体。Hollingeretal.,PNASUSA,90:6444-6448(1993)描述的“双抗体”技术提供了产生双特异性抗体片段的另一种机制。所述片段包含通过接头与VL连接的VH，所述接头太短以致于不能使同一链上的两个结构域之间配对。因此，使得一个片段的VH和VL结构域与另一片段的互补VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。通过使用单链Fv(sFv)二聚体产生双特异性抗体片段的另一策略也已经报导。见Gruberetal.,J.Immunol.,152:5368(1994)。本发明涵盖超过二价的抗体。例如，可以制备三特异性抗体。Tuttetal.J.Immunol.147:60(1991)。异缀合抗体异缀合抗体由两个共价结合的抗体组成。这种抗体已经被提议例如使免疫系统细胞靶向不希望的细胞(美国专利号4,676,980)，及用于治疗HIV感染。WO91/00360，WO92/200373，EP03089。预期所述抗体可以使用合成蛋白质化学中的已知方法在体外制备，包括涉及交联剂的那些方法。例如，可以使用二硫化物交换反应或者通过形成硫醚键构建免疫毒素。为此目的，合适试剂的例子包括亚氨基硫醇盐(iminothiolate)和甲基-4-巯基丁酸亚氨酸酯(methyl-4-mercaptobutyrimidate)及在例如美国专利号4,676,980中描述的那些。效应子功能工程化希望修饰本发明提供的抗体的效应子功能，以增强例如抗体在治疗癌症中的效力。例如，可以将半胱氨酸残基导入Fc区中，从而使得在这个区域中形成链间二硫键。由此产生的同二聚体抗体可具有改良的内在化能力和/或增加的补体介导的细胞杀伤和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。见Caronetal.,J.Exp.Med.,176:1191-1195(1992)和Shapes,J.Immunol.,148:2918-2922(1992)所述。具有增强的抗肿瘤活性的同二聚体抗体也可以使用异双功能交联剂制备，如Wolffetal.,CancerResearch,53:2560-2565(1993)所述。或者，抗体可以工程化为具有双重Fc区及因此可以具有增强的补体裂解和ADCC能力。见Stevensonetal.,Anti-CancerDrugDesign3:219-230(1989).可以在Fc区序列中产生突变或改变以改良FcR结合(例如FcγR，FcRn)。根据一个实施方案，本发明的抗体具有选自ADCC、CDC及与天然IgG或亲代抗体相比改良的FcRn结合的至少一种改变的效应子功能。一些有用的特异性突变的例子在例如Shields,RLetal.(2001)JBC276(6)6591-6604、Presta,L.G.,(2002)BiochemicalSocietyTransactions30(4):487-490和WO00/42072中描述。根据一个实施方案，所述Fc受体突变是在选自如下的至少一个位置的取代：Fc区的238、239、246、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439，其中Fc区中残基的编号根据EU编号系统编号。在一些实施方案中，所述Fc受体突变是D265A取代。在一些实施方案中，所述Fc受体突变是N297A取代。其它合适的突变在美国专利号7,332,581中描述。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体是无岩藻糖基化的(即“无岩藻糖基化抗EGFR抗体”或者“无岩藻糖基化抗EGFR抗体”)。“无岩藻糖基化抗体”或者“无岩藻糖基化抗体”是指在Fc区中在Asn297岩藻糖残基水平降低而具有改变的糖基化模式的IgG1或IgG3同种型抗体。人IgG1或IgG3的糖基化在Asn297发生，核心岩藻糖基化的双触角复合物寡糖糖基化末端具有最多2个Gal残基。这些结构根据末端Gal残基的量被称作GO、G1(a1,6或a1,3)或G2聚糖残基(Raju,T.S.,BioProcessInt.1(2003)44-53)。抗体Fc部分的CHO型糖基化在例如Routier,F.H.,GlycoconjugateJ.14(1997)201-207中描述。在非糖基修饰的CHO宿主细胞中重组表达的抗体通常是在Asn297岩藻糖基化的，量为至少85％。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体具有降低的岩藻糖残基水平。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体在其糖基化模式中没有岩藻糖。通常已知在抗体中的典型糖基化残基位置是根据EU编号系统在位置297的天冬酰胺(Asn297)。因此，在一些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体包含已经被改变或者另外变化以在其糖基化模式中岩藻糖残基水平降低或无岩藻糖的Fc序列。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体包含根据EU编号系统在位置297有改变的Fc序列。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体由能产生低-或无岩藻糖基化聚糖的宿主细胞产生。可以产生无岩藻糖基化抗体的稳定的哺乳动物宿主细胞系已经确立，在例如Yamane-Ohnukietal.(2004)BiotechnolBioeng.87,614-622、Morietal.(2004)BiotechnolBioeng.88,901-908、Kandaetal(2006)BiotechnolBioeng.94,680-688、Kanda(2007)JBiotechnol.130,300-310、Imai-Nishiya(2007)BMCBiotechnol7,84、Yamane-OhnukiandSatoh(2009)mAbs1,230-236中描述。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体在糖基修饰的宿主细胞中表达，所述宿主细胞被工程化为表达b(1,4)-N-乙酰葡糖氨基转移酶III活性。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体在糖基修饰的宿主细胞中表达，所述细胞中1,6-岩藻糖基转移酶活性被降低或消除。见例如US6,946,292详细描述了糖基修饰的宿主细胞的产生。抗体岩藻糖基化的量可以例如通过发酵条件(例如发酵时间)或者通过组合具有不同岩藻糖基化量的至少两种抗体而预先确定。这种无岩藻糖基化抗体和各自的糖工程化方法在WO2005/044859、WO2004/065540、WO2007/031875、Umanaetal.,NatureBiotechnol.17(1999)176-180、WO99/154342、WO2005/018572、WO2006/116260、WO2006/114700、WO2005/011735、WO2005/027966、WO97/028267、US2006/0134709、US2005/0054048、US2005/0152894、WO2003/035835、WO2000/061739中描述。这些糖基工程化的抗体具有增加的ADCC。产生本发明的无岩藻糖基化抗体的其它糖基工程化方法在例如Niwa,R.etal.,J.Immunol.Methods306(2005)151-160、Shinkawa,T.,etal.,J.Biol.Chem,278(2003)3466-3473、WO03/055993或US2005/0249722中描述。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体使用体外技术产生。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体是化学合成的(见例如Yamamotoetal.(2008)JACS130,501-510，其描述了无岩藻糖基化形式的单核细胞趋化蛋白3(MCP-3)的化学合成。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体使用岩藻糖苷酶除去IgG上的岩藻糖残基而产生(见例如Yazawaetal.(1986)_BiochemBiophysResCommun.136,563-569)。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比具有改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能，通过例如在实施例中描述的测定法证实。例如，在某些实施方案中，本文描述的抗EGFR抗体的ADCC效应子功能活性是的ADCC效应子功能活性的至少大约140％、至少大约150％、至少大约160％、至少大约170％、至少大约180％、至少大约190％、至少大约190％、至少大约200％、至少大约210％、至少大约220％、至少大约230％、至少大约240％、至少大约250％、至少大约260％、至少大约270％、至少大约280％、至少大约290％或者至少大约300％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，本文描述的抗EGFR抗体的ADCC效应子功能活性多于的ADCC效应子功能活性的大约300％，包括的ADCC效应子功能活性的至少大约350％、至少大约360％、至少大约370％、至少大约380％、至少大约390％、至少大约400％、至少大约410％、至少大约420％、至少大约430％、至少大约440％、至少大约450％、至少大约460％、至少大约470％、至少大约480％、至少大约490％、至少大约500％、至少大约510％、至少大约520％、至少大约530％、至少大约540％、至少大约550％、至少大约560％、至少大约570％、至少大约580％、至少大约590％或者至少大约6000％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有野生型KRAS的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有KRAS突变的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，所述KRAS突变是在KRAS基因的密码子12中的突变。在某些实施方案中，所述KRAS突变是在KRAS基因外显子2的密码子13中的突变。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有KRASG13D突变的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，所述KRAS突变是在KRAS基因的密码子61中的突变。在某些实施方案中，所述KRAS突变是在KRAS基因的密码子117中的突变。在某些实施方案中，所述KRAS突变是在KRAS基因的密码子146中的突变。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有野生型BRAF的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有BRAF突变的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，所述BRAF突变是在BRAF基因的密码子600中的突变。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有BRAFV600E突变的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，所述BRAF突变是在BRAF基因的密码子G446中的突变。在某些实施方案中，所述BRAF突变是在BRAF基因的密码子G469中的突变。在某些实施方案中，所述BRAF突变是在BRAF基因的密码子L597中的突变。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有野生型PTEN的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有PTEN突变的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，所述PTEN突变是在PTEN基因的外显子3中的突变。在某些实施方案中，所述PTEN突变是在PTEN基因的外显子4中的突变。在某些实施方案中，所述PTEN突变是在PTEN基因的外显子5中的突变。在某些实施方案中，所述PTEN突变是在PTEN基因的外显子6中的突变。在某些实施方案中，所述PTEN突变是在PTEN基因的外显子7中的突变。在某些实施方案中，所述PTEN突变是在PTEN基因的外显子8中的突变。在某些实施方案中，所述PTEN突变是在PTEN基因的密码子233中的突变。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有野生型NRAS的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有NRAS突变的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，所述NRAS突变是在NRAS基因的密码子12中的突变。在某些实施方案中，所述NRAS突变是在NRAS基因的密码子13中的突变。在某些实施方案中，所述NRAS突变是在NRAS基因的密码子61中的突变。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有野生型PIK3CA的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，本发明提供的无岩藻糖基化抗EGFR抗体与相比在具有PIK3CA突变的对象中呈现出改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应子功能。在某些实施方案中，所述PIK3CA突变是在PIK3CA基因的外显子20中的突变。在某些实施方案中，给予本文描述的无岩藻糖基化抗EGFR抗体的对象对于Erbitux或其生物类似物是有抗性的。在某些实施方案中，给予本文描述的无岩藻糖基化抗EGFR抗体的对象在Erbitux或其生物类似物治疗后仍是进展的。在某些实施方案中，给予本文描述的无岩藻糖基化抗EGFR抗体的对象是Erbitux或其生物类似物难治疗的。免疫缀合物本发明还涉及免疫缀合物，其包含与细胞毒性剂如化疗剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素或其片段)或者放射性同位素(即放射性缀合物)缀合的抗体。可以使用的酶促活性毒素及其片段包括白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa))、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-帚曲菌素、油桐(Aleuritesfordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolacaamericana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒蛋白、石碱草(sapaonariaofficinalis)抑制剂、白树毒素、丝裂蛋白(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素及单端孢霉烯族毒素类(tricothecenes)。许多放射性核素可用于产生放射性缀合的抗体。例子包括212Bi、131I、131In、90Y和186Re。举例的可用于产生这种免疫缀合物的化疗剂包括在本文别处描述的那些。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(如无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体、无岩藻糖基化抗EGFR抗体或者也是无岩藻糖基化的无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体)与美登素、美登木素生物碱(maytansinoid)或者卡奇霉素缀合。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(如无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体和/或无岩藻糖基化抗EGFR抗体)与美登木素生物碱DM1缀合。所述抗体与细胞毒性剂的缀合物可使用多种双功能性蛋白-偶联剂产生，如N-琥珀酰-3-(2-联硫基吡啶)丙酸盐(SPDP)、亚氨基四氢噻吩(iminothiolane,IT)、亚氨酸酯的双功能性衍生物(如二甲基己二酸HCl)、活性酯(如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)、醛(如戊二醛)，二叠氮基化合物(如双(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(如双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)，二异氰酸酯(如甲苯二异氰酸酯)，及双重活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒素免疫毒素可以如Vitettaetal.,Science,238:1098(1987)所述制备。碳-14-标记的1-异硫氰酸苄基-3-甲基二乙烯三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核素缀合抗体的举例螯合剂。见WO94/11026。在另一个实施方案中，所述抗体可以与“受体”(如链霉抗生物素蛋白)缀合以用于肿瘤预靶向中，其中将所述抗体-受体缀合物给予患者，随后使用清除剂从循环中除去未结合的缀合物，然后给予与细胞毒性剂(例如放射性核苷酸)缀合的“配体”(例如抗生物素蛋白)。共价修饰所述抗EGFR抗体及其片段的共价修饰包括在本发明范围内。一种类型的共价修饰包括将被靶向的多肽氨基酸残基与能与选择的侧链或者多肽N-或C-末端残基反应的有机衍生剂反应。例如，用双功能剂衍生化可用于使所述多肽与不溶于水的支持基质或者表面交联用于纯化抗体的方法中，反之亦然。常用的交联剂包括例如1,1-双(重氮基乙酰)-2-苯乙烷，戊二醛，N-羟基琥珀酰亚胺酯，例如与4-叠氮水杨酸的酯，同双功能亚氨酸酯，包括二琥珀酰亚胺酯如3,3'-二硫代双(琥珀酰亚胺丙酸酯)，双功能马来酰亚胺如双-N-马来酰亚胺-1,8-辛烷及物质如甲基-3-[(对-叠氮苯基)-二硫代]丙亚氨酸酯。其它修饰包括谷氨酰胺酰基和天冬酰胺酰基残基分别脱酰胺基为相应的谷氨酰和天冬氨酰残基，脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰基或苏氨酰基残基的羟基的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基的甲基化[T.E.Creighton,Proteins:StructureandMolecularProperties,W.H.Freeman&Co.,SanFrancisco,pp.79-86(1983)]，N-末端胺的乙酰化，及任何C-末端羧基的酰胺化。所述多肽的另一类型共价修饰包括将所述多肽与多种非蛋白质聚合物如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯之一以在美国专利号4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192或4,179,337中所述方式连接。嵌合分子如果是有利的，本发明的抗EGFR抗体(或其片段)也可以以形成嵌合分子的方式被修饰，所述嵌合分子包含与另一异源多肽或氨基酸序列(例如免疫粘附素或肽体(peptibodies))融合的所述多肽。在一个实施方案中，这种嵌合分子包含所述多肽与蛋白质转导结构域的融合体，所述蛋白质转导结构域将该多肽靶向输送至多种组织及更特别地穿过血脑屏障，例如使用人免疫缺陷病毒TAT蛋白的蛋白质转导结构域进行(Schwarzeetal.,1999,Science285:1569-72)。在另一个实施方案中，这种嵌合分子包含所述多肽与标签多肽的融合体，所述标签多肽提供了抗-标签抗体可以选择性结合的表位。所述表位标签通常置于所述多肽的氨基-或羧基末端。所述多肽的这种表位标签形式的存在可以使用针对该标签多肽的抗体检测。而且，提供所述表位标签也使得所述多肽易于使用抗-标签抗体或结合所述表位标签的另一类型亲和性基质通过亲和性纯化方式纯化。本领域已知多种标签多肽及其各自的抗体。例子包括聚-组氨酸(聚-His)或者聚-组氨酸-甘氨酸(聚-His-gly)标签，fluHA标签多肽及其抗体12CA5[Fieldetal.,Mol.Cell.Biol.,8:2159-2165(1988)]，c-myc标签及其抗体8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10[Evanetal.,MolecularandCellularBiology,5:3610-3616(1985)]，单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体[Paborskyetal.,ProteinEngineering,3(6):547-553(1990)]。其它标签多肽包括Flag-肽[Hoppetal.,BioTechnology,6:1204-1210(1988)]，KT3表位肽[Martinetal.,Science,255:192-194(1992)]，α-微管蛋白表位肽[Skinneretal.,J.Biol.Chem.,266:15163-15166(1991)]，及T7基因10蛋白质肽标签[Lutz-Freyermuthetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:6393-6397(1990)]。在替代的实施方案中，所述嵌合分子可包含所述多肽与免疫球蛋白或免疫球蛋白特定区域的融合体。对于二价形式的嵌合分子(例如免疫粘附素)，这种融合体可以是与IgG分子的Fc区的融合体。本发明的Ig融合体包括包含大约或仅是人的残基94-243、残基33-53或残基33-52代替Ig分子内的至少一个可变区的多肽。在一个特别优选的实施方案中，所述免疫球蛋白融合体包括IgG1分子的铰链、CH2和CH3区，或者铰链、CH1、CH2和CH3区。对于免疫球蛋白融合体的产生，也见1995年6月27日授权的美国专利号5,428,130。免疫脂质体本文公开的抗体也可以配制为免疫脂质体。含有所述抗体的脂质体通过本领域已知的方法制备，如Epsteinetal.,PNASUSA,82:3688(1985)，Hwangetal.,PNASUSA,77:4030(1980)及美国专利号4,485,045和4,544,545描述。具有延长的循环时间的脂质体在美国专利号5,013,556中公开。特别有用的脂质体可以使用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物通过反相蒸发法产生。脂质体通过指定孔径的滤器挤出，产生具有希望直径的脂质体。本发明抗体的Fab’片段可以通过二硫化物交换反应与脂质体缀合，如Martinetal.,J.Biol.Chem.,257:286-288(1982)所述。抗肿瘤剂、生长抑制剂或者化疗剂(如阿霉素)任选也包含在所述脂质体中。见Gabizonetal.,J.NationalCancerInst.,81(19):1484(1989)所述。使用抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体治疗本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)和/或组合物可以给予对象(例如哺乳动物如人)以治疗与异常EGFR活性相关的疾病或病症，包括例如癌症(如头颈癌、喉癌、结肠直肠癌、肺癌等)。在某些实施方案中，本发明提供了抗EGFR抗体(或其片段)用于生产治疗对象中癌症(如头颈癌、肺癌或结肠直肠癌)的药物。在某些实施方案中，本发明提供了抗EGFR抗体(或其片段)，用于治疗对象中的癌症(如头颈癌、喉癌、结肠直肠癌、肺癌等)。在某些实施方案中，本发明提供了包含本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)的药物组合物，用于治疗对象中的癌症(如头颈癌、喉癌、结肠直肠癌、肺癌等)。在某些实施方案中，所述被治疗的对象是哺乳动物(例如人，非人灵长类动物，大鼠，小鼠，牛，马，猪，绵羊，山羊，狗，猫等)。在某些实施方案中，所述对象是人。在某些实施方案中，所述对象是临床患者、临床实验志愿者、实验动物等。在某些实施方案中，所述对象怀疑患有或处于患癌症(如头颈癌，喉癌，结肠直肠癌，肺癌等)的危险中，或者被诊断患有癌症或者具有异常EGFR表达或活性的任何其它疾病。在一些实施方案中，所述给予本发明提供的抗EGFR抗体的对象对于KRAS是野生型的。在某些实施方案中，所述给予本发明的抗EGFR抗体的对象具有KRASG13D突变。在一些实施方案中，所述给予本发明的抗EGFR抗体的对象对于BRAF是野生型的。在某些实施方案中，所述给予本发明的抗EGFR抗体的对象具有BRAFV600E突变。在某些实施方案中，所述给予本发明的抗EGFR抗体的对象对于Erbitux或其生物类似物是有抗性的。在某些实施方案中，所述给予本发明的抗EGFR抗体的对象在Erbitux或其生物类似物治疗后仍是进展的。在某些实施方案中，所述给予本发明的抗EGFR抗体的对象是Erbitux或其生物类似物难治疗的。在某些实施方案中，将DM1-缀合的本发明抗EGFR抗体给予具有野生型KRAS的对象。在某些实施方案中，将DM1-缀合的本发明抗EGFR抗体给予具有KRASG13D突变的癌症患者。在某些实施方案中，将DM1-缀合的本发明抗EGFR抗体给予具有野生型BRAF的癌症患者。在某些实施方案中，将DM1-缀合的本发明抗EGFR抗体给予具有BRAFV600E突变的对象。在某些实施方案中，将DM1-缀合的本发明抗EGFR抗体给予对于Erbitux或其生物类似物具有抗性的对象。在某些实施方案中，将DM1-缀合的本发明抗EGFR抗体给予在Erbitux或其生物类似物治疗后仍是进展的对象。在某些实施方案中，将DM1-缀合的本发明抗EGFR抗体给予Erbitux或其生物类似物难治疗的对象。本领域已知癌症(如头颈癌、喉癌、结肠直肠癌、肺癌等)或呈现出异常EGFR活性的任何其它疾病的许多诊断方法及这些疾病的临床描述。这些方法包括但不限于例如免疫组织化学、PCR、荧光原位杂交(FISH)。关于异常EGFR活性或表达的诊断方法的另外详细描述在例如Guptaetal.(2009)ModPathol.22(1):128-133、Lopez-Riosetal.(2013)JClinPathol.66(5):381-385、Ellisonetal.(2013)JClinPathol66(2):79-89和Guhaetal.(2013)PLoSONE8(6):e67782中描述。可以通过任何合适途径给予，所述途径包括例如静脉内、肌肉内或皮下。在一些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)和/或组合物组合第二种、第三种或第四种药物(包括例如抗肿瘤剂，生长抑制剂，细胞毒性剂或者化疗剂)给予，以治疗异常EGFR活性相关的疾病或病症。这些药物包括例如多西他赛、吉非替尼、FOLFIRI(伊立替康、5-氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸)、伊立替康、顺铂、卡铂、紫杉醇、贝伐珠单抗(抗-VEGF抗体)、FOLFOX-4(输注氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸及奥沙利铂、阿法替尼、吉西他滨、卡培他滨、培美曲塞、tivantinib、依维莫司、CpG-ODN、雷帕霉素、来那度胺(lenalidomide)、维罗非尼(vemurafenib)、内皮抑素(endostatin)、拉帕替尼(lapatinib)、PX-866、ImprimePGG以及irlotinibm。在一些实施方案中，所述抗EGFR抗体(或其片段)与另外的物质缀合。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)和/或组合物与一或多种另外的治疗如放疗、手术、化疗和/或靶向治疗组合给予。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)和/或组合物组合放疗一起给予。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)和/或组合物与放疗组合用于治疗头颈癌。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)和/或组合物与放疗组合用于治疗喉癌。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)和/或组合物与放疗组合用于治疗结肠直肠癌。在某些实施方案中，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)和/或组合物与放疗组合用于治疗肺癌。根据要治疗的适应症及本领域医生熟知的与给药相关的因素，本发明提供的所述抗体将以有效治疗该适应症同时毒性和副作用最小的剂量给予。对于治疗癌症(如头颈癌、喉癌、结肠直肠癌、肺癌等)，典型的剂量可以是例如0.001-1000μg范围；然而，低于或高于这个示例范围的剂量也在本发明范围内。每日剂量可以是大约0.1μg/kg至大约100mg/kg总体重(例如大约5μg/kg、大约10μg/kg、大约100μg/kg、大约500μg/kg、大约1mg/kg、大约50mg/kg，或者前述任两个数值限定的范围)，优选大约0.3μg/kg至大约10mg/kg总体重(例如大约0.5μg/kg、大约1μg/kg、大约50μg/kg、大约150μg/kg、大约300μg/kg、大约750μg/kg、大约1.5mg/kg、大约5mg/kg，或者前述任何两个数值限定的范围)，更优选为大约1μg/kg至1mg/kg总体重(例如大约3μg/kg、大约15μg/kg、大约75μg/kg、大约300μg/kg、大约900μg/kg，或者前述任两个数值限定的范围)，及更优选大约0.5-10mg/kg体重/天(例如大约2mg/kg、大约4mg/kg、大约7mg/kg、大约9mg/kg，或者前述任两个数值限定的范围，包括前述数值之间的任何范围)。如上所述，治疗效力或预防效力可以通过定期评估治疗的患者而监测。对于重复给予几天或更长时间，根据状况，重复治疗直至出现希望的疾病症状抑制。然而，其它剂量方案也可以使用且也在本发明范围内。希望的剂量可以通过单次推注给予所述组合物、多次推注给予所述组合物或者通过持续输注给予所述组合物而输送。包含所述抗EGFR抗体的药物组合物可以每天给予1、2、3或4次。所述组合物也可以比每天给予更低的频率给予，例如6次/周、5次/周、4次/周、3次/周、2次/周、1次/周、1次/2周、1次/3周、1次/月、1次/2月、1次/3月，或者1次/6月。所述组合物也可以通过缓释配方给予，如在植入体中，其在一段时间逐步释放所述组合物并使得可以低频率给予所述组合物，如1次/月、1次/2-6月、1次/年，或者甚至是只给予一次。缓释装置(如微丸、纳米粒子、微粒、纳米球、微球等)可以通过注射给予。所述抗体(或其抗原结合片段)可以单次一日量给予，或者总一日量可以每天2、3或4次的分开剂量给予。所述组合物也可以低于每天给予的频率给予，例如6次/周、5次/周、4次/周、3次/周、2次/周、1次/周、1次/2周、1次/3周、1次/月、1次/2月、1次/3月，或者1次/6月。所述组合物也可以通过缓释配方如在植入体中给予，其在一段时间逐步释放所述组合物并使得可以低频率给予所述组合物，如1次/月、1次/2-6月、1次/年，或者甚至是只给予一次。缓释装置(如微丸、纳米粒子、微粒、纳米球、微球等)可以通过注射或手术植入在不同部位而给予。癌症治疗可以通过例如但不限于肿瘤退化、肿瘤重量或大小缩小、进展时间、存活时间、无进展存活、总体应答率、应答持续时间、生活质量、蛋白质表达和/或活性等方面加以评估。可以应用确定治疗效力的方法，包括例如通过放射性图像测量应答。在一些实施方案中，治疗效力以肿瘤生长抑制百分比(％TGI)测量，使用等式100-(T/C×100)计算，其中T是治疗的肿瘤的平均相对肿瘤体积，C是未治疗的肿瘤的平均相对肿瘤体积。在某些实施方案中，所述％TGI为大约10％、大约20％、大约30％、大约40％、大约50％、大约60％、大约70％、大约80％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％或者超过95％。在某些实施方案中，抗-EGFR的％TGI与的％TGI相同或更高，如是的％TGI的大约1.1-倍、大约1.2-倍、大约1.3-倍、大约1.4-倍、大约1.5-倍、大约1.6-倍、大约1.7-倍、大约1.8-倍、大约1.9-倍、大约2-倍、大约2.1-倍、大约2.2-倍、大约2.3-倍、大约2.4-倍、大约2.5-倍、大约2.6-倍、大约2.7-倍，包括在这些数值之间的任何范围，或者超过大约2.7-倍。药物制剂所述抗EGFR抗体(或其片段)可以与合适的载体或赋形剂一起配制，以便其适于给予。合适的抗体配制物通过将具有希望纯度程度的抗体与任选的药物可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合而获得(Remington'sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol,A.Ed.(1980))，形式为冻干的配制物或者水溶液。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在应用的剂量和浓度对于接受者是无毒性的，包括缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐或其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苯甲基氯化铵；氯己双铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚，丁基或苯甲基醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；及间甲酚)；低分子量(低于大约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或者赖氨酸；单糖、二糖及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或者山梨醇；成盐反离子如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，如TWEENTM、PLURONICSTM或者聚乙二醇(PEG)。举例的抗体配制在特别并入本文作参考的W098/56418中描述。适于皮下给予的冻干配制物在W097/04801中描述。这种冻干的配制物可以用合适的稀释剂重建为高蛋白质浓度，且重建的配制物可以经皮下给予待治疗的哺乳动物。本发明的配制物根据治疗的特定适应症的需要也可以含有一种以上的活性化合物，优选这些化合物具有彼此不不利影响的互补活性。例如，可希望进一步提供抗肿瘤剂、生长抑制剂、细胞毒性剂或化疗剂。这种分子合适地以针对指定目的有效量组合存在。这种其它药物的有效量依赖于配制物中存在的抗体的量、疾病或病症或者治疗的类型以及上述其它因素。这些通常以相同剂量和本文所述给予途径使用，或者是上述所用剂量的大约1-99％。所述活性成分也可以包埋在制备的微囊中，例如通过凝聚技术或者通过界面聚合技术进行，例如分别是羟甲基纤维素或明胶-微囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊，在胶体药物输送系统(例如脂质体，白蛋白微球，微乳液，纳米粒子和纳米微囊)或者粗乳液中。这种技术在Remington'sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol,A.Ed.(1980)中公开。可以制备缓释制备物。缓释制备物的合适例子包括含有所述拮抗剂的半透性固体疏水性聚合物基质，该基质是成形物品形式，例如薄膜或微囊。缓释基质的例子包括聚酯，水凝胶(例如聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)或者聚(乙烯醇))，聚乳酸(美国专利号3,773,919)，L-谷氨酸与乙基-L-谷氨酸的共聚物，不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，如LUPRONDEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物与醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)，及聚-D-(-)-3-羟丁酸。Lipofectins或脂质体可用于将本发明的多肽和抗体(或其片段)或组合物输送至细胞中。在使用抗体片段的情况中，优选特异性结合靶蛋白的结合结构域的最小抑制性片段。例如，基于抗体的可变区序列，可以设计保留结合靶蛋白序列的能力的肽分子。这种肽可以化学合成和/或通过重组DNA技术产生。见例如Marascoetal.,PNASUSA,90:7889-7893(1993)。所述活性成分也可以包埋在制备的微囊中，例如通过凝聚技术或通过界面聚合技术进行，例如分别是羟甲基纤维素或明胶-微囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊，在胶体药物输送系统(例如脂质体，白蛋白微球，微乳液，纳米粒子和纳米微囊)或者粗乳液中。这种技术在Remington'sPHARMACEUTICALSCIENCES中公开，如前。可以制备缓释制备物。缓释制备物的合适例子包括含有所述抗体(或其片段)的半透性固体疏水性聚合物基质，该基质是成形物品形式，例如薄膜或微囊。缓释基质的例子包括聚酯，水凝胶(例如聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)或者聚(乙烯醇))，聚乳酸(美国专利号3,773,919)，L-谷氨酸与乙基-L-谷氨酸的共聚物，不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，如LUPRONDEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物与醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)，及聚-D-(-)-3-羟丁酸。虽然聚合物如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸使得分子可以释放超过100天，但是某些水凝胶释放蛋白质的时间较短。当包囊的抗体长时间保留在体内时，由于暴露于在37℃的湿度的结果，其可以变性或聚集，导致生物学活性损失及可能改变免疫原性。可以根据有关的机制设计用于稳定化的合理策略。例如，如果发现聚集机制是通过硫-二硫化物交换形成分子间S-S键，则可以通过修饰巯基残基、冻干酸性溶液、控制水分含量、使用适当的添加剂及开发特异聚合物基质组合物而实现稳定化。在某些实施方案中，所述配制物包含本发明的抗EGFR抗体，浓度高于大约0.5mg/ml、高于大约1mg/ml、高于大约2mg/ml、高于大约3mg/ml、高于大约4mg/ml、高于大约5mg/ml、高于大约6mg/ml、高于大约7mg/ml、高于大约8mg/ml、高于大约9mg/ml、高于大约10mg/ml、高于大约11mg/ml、高于大约12mg/ml、高于大约13mg/ml、高于大约14mg/ml、高于大约15mg/ml、高于大约16mg/ml、高于大约17mg/ml、高于大约18mg/ml、高于大约19mg/ml、高于大约20mg/ml、高于大约21mg/ml、高于大约22mg/ml、高于大约23mg/ml、高于大约24mg/ml、高于大约25mg/ml、高于大约26mg/ml、高于大约27mg/ml、高于大约28mg/ml、高于大约29mg/ml或者高于大约30mg/ml，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体(例如以高于大约0.5mg/ml、高于大约1mg/ml、高于大约5mg/ml、高于大约10mg/ml、高于大约15mg/ml、高于大约20mg/ml或者高于大约25mg/ml的浓度，包括在这些数值之间的任何范围的浓度)在包含柠檬酸盐、NaCl、醋酸盐、琥珀酸盐、甘氨酸、聚山梨醇酯80(Tween80)或者前述任意组合的缓冲液中配制。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体(例如以高于大约0.5mg/ml、高于大约1mg/ml、高于大约5mg/ml、高于大约10mg/ml、高于大约15mg/ml、高于大约20mg/ml或者高于大约25mg/ml的浓度，包括在这些数值之间的任何范围的浓度)在包含大约100mM至大约150mM甘氨酸的缓冲液中配制。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体在包含大约50mM至大约100mMNaCl的缓冲液中配制。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体(例如以高于大约0.5mg/ml、高于大约1mg/ml、高于大约5mg/ml、高于大约10mg/ml、高于大约15mg/ml、高于大约20mg/ml或者高于大约25mg/ml的浓度，包括在这些数值之间的任何范围的浓度)在包含大约10mM至大约50mM醋酸盐的缓冲液中配制。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体在包含大约10mM至大约50mM琥珀酸盐的缓冲液中配制。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体(例如以高于大约0.5mg/ml、高于大约1mg/ml、高于大约5mg/ml、高于大约10mg/ml、高于大约15mg/ml、高于大约20mg/ml或者高于大约25mg/ml的浓度，包括在这些数值之间的任何范围的浓度)在包含大约0.005％至大约0.02％聚山梨醇酯80的缓冲液中配制。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体在pH为大约5.1-5.6的缓冲液中配制。在某些实施方案中，所述抗EGFR抗体在包含10mM柠檬酸盐、100mMNaCl、100mM甘氨酸和0.01％聚山梨醇酯80的缓冲液中配制，其中配制物的pH＝5.5。在某些实施方案中，包含本发明的EFGR抗体(例如浓度为高于大约0.5mg/ml、高于大约1mg/ml、高于大约5mg/ml、高于大约10mg/ml、高于大约15mg/ml、高于大约20mg/ml或者高于大约25mg/ml，包括在这些数值之间的任何范围)的配制物(如包含缓冲液的配制物，所述缓冲液包含10mM柠檬酸盐、100mMNaCl、100mM甘氨酸和0.01％聚山梨醇酯80，其中配制物的pH＝5.5)在室温是稳定的(如在大约20-25℃稳定大约0.5周、1.0周、1.5周、2.0周、2.5周、3.5周、4.0周、4.5周或5.0周，包括在这些数值之间的任何范围)。在某些实施方案中，包含本发明EFGR抗体(例如浓度为高于大约0.5mg/ml、高于大约1mg/ml、高于大约5mg/ml、高于大约10mg/ml、高于大约15mg/ml、高于大约20mg/ml或者高于大约25mg/ml，包括在这些数值之间的任何范围)的配制物(如包含缓冲液的配制物，所述缓冲液包含10mM柠檬酸盐、100mMNaCl、100mM甘氨酸和0.01％聚山梨醇酯80，其中配制物的pH＝5.5)在加速条件下(如在大约37℃贮存)稳定大约0.5周、1.0周、1.5周、2.0周、2.5周、3.5周、4.0周、4.5周或5.0周，包括在这些数值之间的任何范围。大小排阻层析(SEC)在蛋白质稳定性研究中是熟知且广泛使用的方法，检测相应于物理和化学不稳定性的潜在片段化和聚集。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明的抗-EFGR抗体的配制物在37℃、1周后示出高分子量组分(HMWS)相对于初始高分子量组分％增加少于大约1.6％、1.4％、1.2％、1.0％、0.8％、0.6％、0.4％、0.2％或0.1％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物在37℃、2周后示出高分子量组分相对于初始高分子量组分％增加少于大约2.0％、1.8％1.6％、1.4％、1.2％、1.0％、0.8％、0.6％、0.4％、0.2％或0.1％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物在37℃、4周后示出高分子量组分相对于初始高分子量组分％增加少于大约3.3％、3.2％、3.1％、3.0％、2.9％、2.8％、2.7％、2.6％、2.5％、2.4％、2.2％、2.0％、1.8％、1.6％、1.4％、1.2％、1.0％、0.8％、0.6％、0.4％、0.2％或0.1％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物在37℃、1周后示出低分子量组分(LMWS)相对于初始低分子量组分％增加少于大约1.6％、1.4％、1.2％、1.0％、0.8％、0.6％、0.4％、0.2％或0.1％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物在37℃、2周后示出低分子量组分相对于初始低分子量组分％增加少于大约2.0％、1.8％、1.6％、1.4％、1.2％、1.0％、0.8％、0.6％、0.4％、0.2％或0.1％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物在37℃、4周后示出低分子量组分相对于初始低分子量组分％增加少于大约2.4％、2.2％、2.0％、1.8％、1.6％、1.4％、1.2％、1.0％、0.8％、0.6％、0.4％、0.2％或0.1％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物在37℃、1周后示出单体相对于初始单体％降低不超过大约0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、或3.5％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物在37℃、2周后示出单体相对于初始单体％降低不超过大约0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％或3.5％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用SEC测量，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物在37℃、2周后示出单体相对于初始单体％降低不超过大约0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％或3.5％，包括在这些数值之间的任何范围。阳离子交换层析(CEX)是检测蛋白质降解事件如脱酰胺化或氧化(Moorhouseetal.(1997)J.Pharm.Biomed.Anal.16,593–603)的熟知且广泛应用的工具。降解产物与具有较高表观pI的gnts相比，典型被称作酸性或碱性组分。酸性组分是从CEX中早于主峰洗脱的变体，而碱性组分是从CEX中晚于主峰洗脱的变体。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、1周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的酸性峰组分不超过总蛋白质的大约7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、2周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的酸性峰组分不超过总蛋白质的大约8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％或18％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、2周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的酸性峰组分不超过总蛋白质的大约8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％或27％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、1周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的碱性峰组分不超过总蛋白质的大约39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％或46％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、2周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的碱性峰组分不超过总蛋白质的大约39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％或46％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、4周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的碱性峰组分不超过总蛋白质的大约39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％或46％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、1周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的主峰组分不低于总蛋白质的大约32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％或46％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、2周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的碱性峰组分不低于总蛋白质的大约32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％或46％，包括在这些数值之间的任何范围。在某些实施方案中，使用CEX测量，在37℃、4周后，包含5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml本发明抗-EFGR抗体的配制物的碱性峰组分不低于总蛋白质的大约32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％或46％，包括在这些数值之间的任何范围。用于体内给予的配制物必须是无菌的。这易于通过例如灭菌滤膜过滤而实现。使用抗表皮生长因子受体抗体的诊断和成像方法特异性结合EGFR多肽的标记的抗EGFR抗体、其片段及其衍生物和类似物可用于诊断目的，以检测、诊断或监测与EGFR的表达、异常表达和/或活性相关的疾病和/或病症。例如，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)可以用于原位、体内、离体和体外诊断测定或成像测定中。检测EGFR多肽表达的方法包括(a)使用本发明的一或多种抗体测定所述多肽在个体的细胞(例如组织)或体液中的表达及(b)将所述基因表达水平与标准基因表达水平进行比较，其中所述测定的基因表达水平与所述标准表达水平相比增加或降低表示异常表达。本发明提供的另外的实施方案包括诊断与动物(例如哺乳动物如人)中EGFR的表达或异常表达相关的疾病或病症的方法。所述方法包括检测哺乳动物中的EGFR分子。在某些实施方案中，诊断包括：(a)给予哺乳动物有效量的标记的抗EGFR抗体(或其片段)，(b)在给予后等待一段时间，以使得所述标记的抗EGFR抗体(或其片段)优先集中在对象中EGFR分子表达的部位(并且未结合的标记的分子被清除至背景水平)；(c)确定背景水平；及(d)检测对象中所述标记的分子，由此检测到标记的分子高于所述背景水平表示所述对象具有与EGFR的表达或异常表达相关的特定疾病或病症。背景水平可以通过多种方法确定，包括将检测到的标记的分子的量与针对特定系统先前确定的标准值进行比较。使用本领域技术人员已知的传统免疫组织学方法，本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)可用于测定生物学样品中的蛋白质水平(例如参见Jalkanen,etal.,J.Cell.Biol.101:976-985(1985)；Jalkanen,etal.,J.Cell.Biol.105:3087-3096(1987))。可用于检测蛋白质基因表达的其它基于抗体的方法包括免疫测定，如酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射性免疫测定(RIA)。合适的抗体测定标记为本领域已知，包括酶标记如葡萄糖氧化酶；放射性同位素如碘(131I、125I、123I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(115mIn、113mIn、112In、111In)和锝(99Tc，99mTc)、铊(201Ti)、镓(68Ga，67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru；鲁米诺；及荧光标记如荧光素和罗丹明，以及生物素。本领域已知的技术可用于标记本发明提供的抗体(或其片段)。这种技术包括但不限于使用双功能缀合剂(见例如美国专利号5,756,065，5,714,631，5,696,239，5,652,361，5,505,931，5,489,425，5,435,990，5,428,139，5,342,604，5,274,119，4,994,560和5,808,003)。或者或另外，可以测量细胞中编码EGFR多肽的核酸或mRNA的水平，例如通过原位杂交技术使用相应于编码EGFR的核酸或其互补序列的核酸探针(FISH，见1998年10月公开的W098/45479)，Southern印迹，Northern印迹，或者聚合酶链反应(PCR)技术如实时定量PCR(RT-PCR)。也可以通过测量生物学液体如血清中的shed抗原研究EGFR过表达，例如使用基于抗体的测定(也见例如1990年6月12日授权的美国专利号4,933,294；1991年4月18日公开的W091/05264；1995年3月28日授权的美国专利5,401,638；以及Siasetal.,J.Immunol.Methods132:73-80(1990))。除了上述测定之外，技术人员也可利用多种体内和离体测定。例如，可以将哺乳动物体内的细胞暴露于任选用检测标记如放射性同位素标记的抗体，评估与所述抗体的结合，例如通过外部扫描放射性或者通过分析取自先前暴露于所述抗体的哺乳动物的样品(例如活检或其它生物学样品)进行评估。生产产品和试剂盒本发明提供的另一实施方案是含有用于治疗癌症如头颈癌、肺癌或结肠直肠癌(例如肿瘤)的材料的生产产品。所述生产产品可包含容器和标签或者在该容器上或与容器关联的药品说明书。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器等。所述容器可以由多种材料制成，如玻璃或塑料。通常，容器含有有效治疗所述病症的组合物及可具有无菌入口(例如容器可以是静脉内注射溶液袋或具有可以由皮下注射针穿刺的塞子的小瓶)。组合物中至少一种活性剂是本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)。所述标签或药品说明书指示所述组合物用于治疗特定病症。所述标签或药品说明书进一步包含将所述抗体组合物给予患者的指导。本发明也涵盖包含本文所述组合治疗的生产产品和试剂盒。所述药品说明书是指通常包含在治疗产品的商业包装中的说明书，其含有关于使用这种治疗产品的适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或注意事项的信息。在一个实施方案中，药品说明书指出所述组合物用于治疗癌症(如头颈癌、肺癌或结肠直肠癌)。此外，所述生产产品可进一步包含第二个容器，其包含药物可接受的缓冲液，如抑制细菌的注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、Ringer's溶液和葡萄糖溶液。其可进一步包含满足商业和用户需要的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、滤器、针头和注射器。本发明还提供了用于多种目的的试剂盒，例如用于分离或检测患者中的EGFR，任选与所述生产产品组合。为了分离和纯化EGFR，所述试剂盒可含有与珠(例如琼脂糖珠)偶联的本发明提供的抗EGFR抗体(或其片段)。可以提供含有在体外例如在ELISA或Western印迹中检测和量化EGFR的抗体(或其片段)的试剂盒。与所述生产产品一样，所述试剂盒包含容器及在该容器上或与该容器相关联的标签或药品说明书。例如，所述容器含有包含至少一种本发明提供的抗EGFR抗体的组合物。可包括含有例如稀释剂和缓冲液、对照抗体的另外的容器。所述标签或药品说明书可提供关于所述组合物的描述以及预期的体外或诊断应用方面的指导。实施例实施例1：糖基化和无糖基化CDR-H2抗表皮生长因子抗体的产生和亲和力成熟人源化抗EGFR抗体348311使用种系重链可变区VH3.48和种系轻链可变区VK3.11产生。然后将348311用于体外基于噬菌体展示的亲和力成熟实验中以产生具有改良的结合性能的克隆。首先，通过PCR产生CDR-L3/CDR-H3核酸文库，克隆进噬菌体展示载体中，并转化进大肠杆菌中产生噬菌体文库。在两轮淘选后，通过ELISA筛选284个Fab克隆，发现7个克隆(即1-15、1-16、1-26、1-86、2-48、1-13和3-66)具有与348311相当或更好的结合性能(图1)。使用包含如下轻链/重链组合的全长IgG克隆进行进一步ELISA：348311/348311(LC/HC)，1-15/348311(LC/HC)，1-26/348311(LC/HC)，1-86/348311(LC/HC)，2-48/348311(LC/HC)，348311/1-26(LC/HC)，1-15/1-26(LC/HC)，1-26/1-26(LC/HC)，1-86/1-26(LC/HC)和2-48/1-26(LC/HC)。对HLX05(即内部产生的生物相似抗体)也进行测试。包含1-26重链的克隆与包含348311重链的克隆相比呈现出更好的EGFR结合性能(见图2)。选择1-26重链并用作产生缺失糖基化位点的CDR-H2文库的基础。CDR-H2核酸文库通过PCR产生，克隆进噬菌体展示载体中，并转化进大肠杆菌中产生噬菌体文库。在两轮淘选后，通过ELISA筛选出两个克隆，即2-68和3-67，发现其具有改良的结合性质。在用内部产生的EGFR抗原及包含如下轻链/重链组合的抗EGFR抗体克隆包被的孔中进行解离速率ELISA：1-26/2-68(LC/HC)，1-26/3-67(LC/HC)，1-26/1-26(LC/HC)和348311/1-26(LC/HC)。在解离速率ELISA中发现包含1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)和348311/1-26(LC/HC)的克隆比HLX05具有更高的EGFR-结合亲和性(图3)。克隆3-67用作产生CDR-L1/CDR-L2/CDR-H1文库的基础。CDR-L1/CDR-L2/CDR-H1核酸文库通过PCR产生，克隆进噬菌体展示载体中，并转化进大肠杆菌中产生噬菌体文库。在两轮淘选后，通过ELISA筛选出克隆#8、#31、#33和#34，示出以与相似的亲和性结合EGFR。对克隆1-26、2-68、3-67、#8、#31、#33和#34的重链和轻链重新进行组合以产生另外的抗EGFR抗体变体，将其也在ELISA中测试。选择如下前导抗体在直接结合ELISA中进一步分析：1-26/2-68(LC/HC)，1-26/3-67(LC/HC)，#8/#33(LC/HC)和#34/#33(LC/HC)。简而言之，将每个克隆、HLX05、购自MerckKGaA的及利妥昔单抗(即抗-CD20抗体)的系列稀释液在微滴定培养皿的孔中用山羊抗-fd抗体捕获。每个孔中捕获的抗体的量使用抗-人κ-HRP-缀合的二级抗体量化。将HRP-缀合的二级抗体加入孔中，在保温后洗去过量的二级抗体。将TMB加入孔中，在保温后终止反应，通过监测在450nm的吸光度的增加测量HRP活性。EGFR结合通过在孔中加入EGFR-AP融合蛋白进行测量。在保温和洗涤后，将pNPP加入孔中并保温30分钟。AP活性通过监测在405nm吸光度的增加而测量。绘制抗体浓度与AP活性的函数图(图4)。如图4示出，克隆1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)示出具有与HLX05和购自MerckKGaA的相似的EGFR结合亲和性。将克隆1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)、#8/#33(LC/HC)、#34/#33(LC/HC)、HLX05、购自MerckKGaA的及利妥昔单抗和生物素酰化的HLX05在对于EGFR结合的竞争性ELISA中进行测试。简而言之，将每个抗体样品与生物素酰化的HLX05预混合。然后将碱性磷酸酶缀合的EGFR加入预混合的溶液中，在室温预保温1小时。然后将预保温混合物加入用抗生物素蛋白包被的微滴定孔中。保温1小时后，所有孔均用PBST洗涤，将pNPP加入每个孔中。在第二次在37℃保温后，终止反应。碱性磷酸酶活性通过监测在405nm吸光度的增加而测量。所有测试的克隆均示出比HLX05或购自MerckKGaA的更高的竞争能力(图5)。这个结果也证实测试的所有克隆均与结合相同的EGFR表位。将均含有CDR-H2的克隆1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)、#8/#33(LC/HC)和#34/#33(LC/HC)工程化以除去糖基化位点。通过HPLC分析完整IgG克隆1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)、#8/#33(LC/HC)和#34/#33(LC/HC)、购自MerckKGaA的及HLX05的糖基化谱。在测试的克隆中，大多数类型的聚糖是G0F和G1F，而G0在购自MerckKGaA的和HLX05上均检测到(图6)。对1-26/3-67(LC/HC)、购自MerckKGaA的及HLX05的Fab片段和Fc片段进行另外的聚糖分析。G0F和G1F在1-26/3-67的Fc上检测到，但是在1-26/3-67的Fab上未检测到聚糖。相反，在购自MerckKGaA的和HLX05的Fc片段上检测到微量G2F以及G0F和G1F。在购自MerckKGaA的的Fab片段上检测到G2F+2*Gal和G2F+Gal+SA(NeuAc)，在HLX05的Fab片段上检测到G2F+2*SA(NeuAC)和G2F+Gal+SA(NeuAc)(图6)。对内部产生的HLX05、348311/2-68(LC/HC)、1-26/2-68(LC/HC)、348311/3-67(LC/HC)和1-26/3-67(LC/HC)进行SPR。结果在下表5中示出。表5LC/HCka(1/(M*s))kd(1/s)KD(M)KD倍数差异HLX055.02E6(±1.28E3)6.38E-4(±8.89E-6)1.27E-10(±1.81E-12)1348311/2-685.80E6(±2.49E3)7.29E-4(±8.83E-6)1.26E-10(±1.58E-12)11-26/2-686.48E6(±8.14E2)4.21E-4(±9.60E-6)6.49E-11(±1.49E-12)2.0348311/3-676.10E6(±3.31E3)1.51E-3(±6.58E-6)2.47E-10(±1.21E-12)0.51-26/3-675.09E6(±1.52E3)5.53E-4(±1.13E-5)1.09E-10(±2.24E-12)1.2克隆1-26/2-68经测量具有的Kd为6.49×10-11，即与EGFR的亲和性是HLX05的2倍。1-26/3-67经测量具有的Kd为1.09×10-10，即与EGFR的亲和性是HLX05的1.2倍。证实包含1-26轻链及2-68或3-67重链的IgG克隆对EGFR的亲和性是HLX05的2至3倍高(见下表6)。表6LC/HCka(1/(M*s))kd(1/s)KD(M)KD倍数差异HLX058.31E6(±8.82E4)2.07E-3(±1.88E-4)2.49E-10(±2.52E-11)11-26/2-688.82E6(±2.73E3)7.18E-4(±7.36E-4)8.14E-11(±8.34E-11)3.11-26/3-678.93E6(±1.69E3)9.95E-4(±2.58E-4)1.11E-10(±2.89E-11)2.2#8/#336.09E6(±1.33E5)1.02E-4(±1.13E-5)1.67E-11(±2.22E-12)13.9#31/#337.24E6(±2.75E5)5.47E-4(±2.69E-5)7.56E-11(±6.59E-12)3.3#34/#338.25E6(±8.15E4)6.17E-4(±1.34E-5)7.48E-11(±2.37E-12)3.3#8/3-676.68E6(±6.42E3)6.15E-4(±1.06E-3)9.21E-11(±1.58E-10)2.7#8/#317.52E5(±5.26E3)1.00E-3(±5.81E-4)1.33E-10(±7.74E-11)1.9#31/3-676.45E6(±1.68E3)1.16E-3(±4.10E-4)1.80E-10(±6.36E-11)1.4通过亲和力成熟产生的所述抗EGFR抗体克隆与FcγRIIIA的结合通过ELISA测定。简而言之，将微滴定孔用FcγRIIIA包被并用BSA封闭。加入如下浓度为1μg/ml的抗体：内部产生的HLX05，1-26/2-68(LC/HC)，1-26/3-67(LC/HC)，#8/#33(LC/HC)，#34/#33(LC/HC)及购自MerckKGaA的保温1小时后，将抗-人κ轻链-HRP缀合的抗体加入每个孔中。将TMB底物加入孔中并保温7分钟。在反应终止后，HRP活性通过监测在450nm吸光度的增加而测量。如图7所示，1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)、#8/#33(LC/HC)、#34/#33(LC/HC)均结合FcγRIIIa，亲和性与购自MerckKGaA的及HLX05的亲和性相似。将通过亲和力成熟产生的所述抗体克隆的ADCC活性与内部产生的HLX05的活性对比。如Suzukietal.(2007)“ANonfucosylatedAnti-HER2AntibodyAugmentsAntibody-DependentCellularCytotoxicityinBreastCancerPatients.”ClinCancerRes13,1875-1882所述进行测定。测试的所有克隆均示出与内部产生的HLX05呈现相似的ADCC活性。发现#34/#33(LC/HC)具有略微改良的ADCC活性(图8A-G)。在MTT测定中比较1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)、#8/#33(LC/HC)、#34/#33(LC/HC)和HLX05对于人A431鳞状细胞癌细胞的抗增殖作用。MTT比色测定是在增殖和细胞毒性研究中确定活细胞数的一种已经确立的方法。这个测定基于黄色四唑盐MTT的裂解，通过线粒体酶形成可溶蓝色甲(formazan)产物，产生的甲的量与在TT暴露期间存在的活的非死亡细胞的数目成正比(见Mosmann(1983)JImmunolMethods1983,65:55-63)。将1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)、#8/#33(LC/HC)、#34/#33(LC/HC)或HLX05以增加浓度加入细胞中。保温后，将MTT试剂加入细胞中。所得MTT产物通过测量在570nm的吸光度而确定。细胞存活使用如下公式确定：存活％＝(样品的光密度/对照的光密度)×100对于任何测试的细胞系增殖示出50％抑制的浓度计算为IC50值。如图9示出，1-26/2-68(LC/HC)、1-26/3-67(LC/HC)、#8/#33(LC/HC)和#34/#33(LC/HC)与HLX05相比示出具有改良的抗增殖作用。携带人A431鳞状细胞癌肿瘤异种移植物的小鼠用于测定本文描述的所述抗EGFR抗体的治疗效力。简而言之，将人A431鳞状细胞癌细胞(接种＝2×106个细胞)植入雄性BALB/c裸鼠中。将小鼠随机分为5组。每组用下表7中描述的剂量方案之一治疗：表7开始治疗35天后，用治疗的小鼠的肿瘤与接受安慰剂的小鼠的肿瘤相比小大约26％。用1-26/2-68治疗的小鼠的肿瘤与接受安慰剂的小鼠的肿瘤相比小大约31％(p<0.05)。用#8/#33或#34/#33治疗的小鼠的肿瘤与接受安慰剂的小鼠的肿瘤相比小大约50％(p<0.01)，与接受的小鼠的肿瘤相比小大约50％(p<0.05)。见图10和下表8。表81TV：肿瘤体积(mm3)2RTV：相对于初始体积的肿瘤体积3TV/CV％：治疗组体积/对照组体积4TGI％：肿瘤生长抑制率＝1-(T35-T0)/(C35-C0)％5p值<0.05＝*<0.01＝**<0.001＝***在第3天和第35天从每只小鼠取得血清样品用于确定在这两个时间点的#34/#33、1-26/3-67、1-26/2-68或的血清浓度。简而言之，将微滴定培养皿的孔用稀释8倍的EGFR-AP包被。将所述血清样品稀释5000倍并加入孔中。使用山羊抗人IgG-Fc-HRP缀合的二级抗体量化每个孔中被捕获的抗体的量。一式两份进行这个实验，结果示于图11。在第3天和第35天，#34/#33、1-26/3-67、1-26/2-68的血清水平均高于的血清水平。实施例2：FaDu下咽鳞状细胞癌肿瘤异种移植物测定使用携带人FaDu下咽鳞状细胞癌肿瘤异种移植物的小鼠测定本文所述抗EGFR抗体的治疗效力。简而言之，将人FaDu下咽鳞状细胞癌细胞(接种＝2x106细胞)皮下植入雌性BALB/c裸鼠。将小鼠随机分为4组，每组7只。每组用下表9中描述的剂量方案之一治疗：表9开始治疗17天后，用治疗的小鼠的肿瘤与接受安慰剂的小鼠的肿瘤相比小大约38％。用HLX05治疗的小鼠的肿瘤与接受安慰剂的小鼠的肿瘤相比小大约29％(p<0.05)。用1-26/3-67治疗的小鼠的肿瘤与接受安慰剂的小鼠的肿瘤相比小大约51％(p<0.01)。见图12和下表10。表10在另一组实验中，给予NOD-SCID小鼠抗体治疗加放疗(XRT)。简而言之，将人FaDu下咽鳞状细胞癌细胞(接种＝1x106细胞)皮下植入雄性NOD-SCID小鼠。将小鼠随机分为3组。每组用下表11中描述的剂量方案之一治疗：表11治疗5天后，给予ERBITUX和XRT组合治疗的小鼠的肿瘤比单独给予XRT的小鼠的肿瘤小91％。给予HLX07和XRT组合治疗的小鼠的肿瘤比单独给予XRT的小鼠的肿瘤小105％。见图13和下表12。(RT＝放疗)表12实施例3：抗表皮生长因子抗体-药物缀合物DM1(N2'-去乙酰基-N2'-(3-巯基-1-氧代丙基)美登素)是微管装配的一种有效抑制剂，其已经示出诱导有丝分裂阻滞(见例如Chan(2008)AccChemRes41,98-107；Oroudjevetal.(2010)MolCancerTher9,2700-2713；及Remillardetal.(1975)Science189,1002-1005)。制备HLX07-DM1缀合物，如下文所述评估其作为抗癌剂的效力。使用PD10脱盐柱将HLX07在PBS、pH6.5中配制。HLX07的终浓度使用相同缓冲液调节为7.5mg/mL。在单独的试管中，将DM1和SMCC制备为10mMDMF溶液。混合等体积的DM1和SMCC溶液，使其在室温完成反应30分钟。然后以4.5:1摩尔比率将DM1-SMCC加入HLX07溶液中。将混合的溶液在室温保温2小时。使用PD10柱除去过量的小反应物。抗体-药物缀合物的浓度使用A280确定，根据A252适当校准。药物与抗体的比率使用A280/A252比率确定。HLX07-DM1介导抑制EGFR-阳性人结肠癌细胞的能力在使用DiFi(KRASWT和BRAFWT)、HCT-116(KRASG13D)和HT-29(BRAFV600E)细胞系的一系列体外实验中测量。在所有研究中，将来自每个细胞系的细胞与增加浓度的HLX07-DM、HLX07或对照抗体(抗-CD20)(3-倍系列稀释)在37℃保温3天。使用MTT测定测量生长抑制情况。具有活性代谢的活细胞将MTT(即3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐，黄色染料)转变为在565nm具有吸光度的紫色甲产物。如图14A所示，HLX07-DM1和HLX07的生长抑制作用在EGFR野生型DiFi人直肠癌细胞中是相似的。然而，只有HLX07-DM1示出对于KRAS突变的HCT-116(图14B)和BRAF突变的HT-29细胞的抗增殖作用(图14C)。实施例4：无岩藻糖基化的抗表皮生长因子抗体为了评估无岩藻糖HLX07(即HLX07-FF)的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，进行ADCC测定，使用来自健康人供体的PBMC作为效应细胞及DiFi(KRAS野生型人直肠癌细胞系)作为靶细胞。使用-1077(Sigma-Aldrich)从健康供体的全血中新鲜制备人PBMC，悬浮于RPMI培养基(RPMI-1640，含有L-谷氨酰胺、25mMHEPES、青霉素、链霉素和10％FBS)中，密度为5×106细胞/mL。将DiFi靶细胞悬浮于RPMI培养基中，铺板于96-孔U形底微滴定平板中，密度为1×104细胞/孔。将HLX07-FF、HLX07和对照抗体(抗-CD20)的系列稀释液加入各个孔中，浓度为1.5pg/ml-3.3ng/mL。接下来，将PBMC加入孔中以达到效应细胞:靶细胞比率为25:1，将平板在37℃保温5小时。然后将平板离心，分析上清的乳酸脱氢酶活性。记录上清在490nm的吸光度以确定乳酸脱氢酶的释放，使用CytoscanTM-LDH细胞毒性测定试剂盒(G-Bioscience)进行。对测试细胞系诱导50％的ADCC的浓度计算为EC50值。如图15A所示，HLX07-FF在1.69ng/ml示出50％诱导，浓度比HLX07示出50％诱导所需的浓度(即4.388ng/ml)低60％。KRAS突变是在转移的结肠癌中对ERBITUX抗性的一种预测性生物标记。见“ClassLabelingChangesto抗EGFRmonoclonalantibodies,cetuximab(Erbitux)andpanitumumab(Vecitibix):KRASMutations.”U.S.FoodandDrugAdministration2010-01-11。为比较HLX07-FF与HLX07在KRAS-突变的细胞中的ADCC活性，重复上述测定，使用HCT-116即具有KRASG13D突变的人结肠癌细胞系作为靶细胞。使用30:1的效应细胞:靶细胞比率进行测定。将从0.1μg/ml至5.1pg/ml的3倍系列稀释的HLX07-FF、HLX07和对照抗体(抗-CD20)的不同浓度的系列稀释液加入各个孔中。如图15B所示，证实HLX07-FF在HCT-116细胞中的ADCC活性是无岩藻糖基化的HLX07的4.8倍高。BRAF突变是在转移的结肠癌中对于ERBITUX抗性的一种预测性生物标记。见DiNicolitanoetal.(2008)J.ClinOncol.26,5705-5712。为对比HLX07-FF与HLX07在BRAF-突变的细胞中的ADCC活性，如上所述重复上文测定，使用HT29(具有BRAFV600E突变的人结肠直肠癌细胞系)作为靶细胞。使用30:1的效应细胞:靶细胞比率进行该测定。将从0.1μg/ml至5.1pg/ml的3倍系列稀释的HLX07-FF、HLX07和对照抗体(抗-CD20)的不同浓度的系列稀释液加入各个孔中。如图15C所示，证实HLX07-FF在HT29细胞中的ADCC活性是岩藻糖基化的HLX07的4.7倍高。实施例5：抗表皮生长因子抗体的药代动力学概况给两只食蟹猴(一雄性，一雌性)通过i.v注射24mg/kg抗体(即33/34-#1、33/34-#2、3/67-#3和3/67-#4)。在注入后的不同时间点，通过ELISA方法测量所述抗EGFR抗体的血清浓度。在另一组食蟹猴、抗体中重复这个实验。如在图16A中血清浓度-时间图所示，在食蟹猴血清中，抗体3/67可检测到的时间比抗体34/33长大约100倍。图16B示出HLX05(1-3)和(即4-6)在食蟹猴中的血清浓度-时间图。实施例6：从稳定细胞系生产抗表皮生长因子抗体通过填料进已建立的DASGIP生物反应器平台来筛选HLX071-26/3-67头等亚克隆。使用补料分批饲养方案，加入丁酸盐及在较低温度保温条件下进行，pH控制为7，亚克隆1-26/3-67-45-9在第17天达到4.9g/L。见图17。实施例7：抗表皮生长因子抗体的稳定性将含有5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml和25mg/ml的HLX07抗体配制物经历加速贮存条件(即37℃)直至4周进行稳定性研究。在0周、1周、2周和4周的时间点从每个配制物中取样品，通过大小排阻层析(SEC)和阳离子交换层析(CEX)分析。SEC广泛用于检测抗体聚集(即高分子量组分，或HMWS)、单体和片段(即低分子量组分，或LMWS)。阳离子交换层析(CEX)是熟知且广泛使用的工具，用以检测蛋白质降解事件如脱酰胺化或氧化(Moorhouseetal.(1997)J.Pharm.Biomed.Anal.16,593–603)。降解产物与主要组分相比典型称作酸性或碱性组分。酸性组分是具有较低表观pI的变体，碱性组分是具有较高表观pI的变体。酸性组分是在CEX中早于主峰被洗脱的变体，而碱性组分是在CEX中晚于主峰被洗脱的变体。对取自在加速条件下贮存的配制物的样品进行SEC和CEX分析的结果在下表13中提供：表13提供前述实施例只是用于说明目的，其不试图以任何方式限制本发明的范围。除了在本文示出及描述的那些之外，根据前文描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员将是显而易见的，且包含在本发明所附权利要求书的范围内。实施方案列表本发明提供的实施方案包括，但不限于：1.抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列N/T/Q-YGVH(SEQIDNO:4)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列Y-N/A/G/D-T/D/N-P/K/E-FTSRF(SEQIDNO:9)，及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列T/D-Y/L-YDY-E/N-FAY(SEQIDNO:14)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列I-G/R/S-T/L/P-NIH(SEQIDNO:20)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KY-A/G-SE-S/T-I-S/R(SEQIDNO:24)，及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPT-T/L/S/A/Y(SEQIDNO:30)。2.实施方案1的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含选自SEQIDNO:1-3的氨基酸序列，(2)CDR-H2，其包含选自SEQIDNO:5-8的氨基酸序列，及(3)CDR-H3，其包含选自SEQIDNO:10-13的氨基酸序列；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含选自SEQIDNO:15-19的氨基酸序列，(2)CDR-L2，其包含选自SEQIDNO:21-23的氨基酸序列，(3)CDR-L3，其包含选自SEQIDNO:25-29的氨基酸序列。3.实施方案2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQIDNO:5)，及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列TYYDYEFAY(SEQIDNO:10)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)，及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTT(SEQIDNO:25)。4.实施方案2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YNTPFTSRF(SEQIDNO:5)，及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)，及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。5.实施方案2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)，及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)，及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。6.实施方案2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，所述重链可变结构域包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YATEFTSRF(SEQIDNO:7)，及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)，及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。7.实施方案2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，其中所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列NYGVH(SEQIDNO:1)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YDDKFTSRF(SEQIDNO:6)，及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IGTNIH(SEQIDNO:15)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYASESIS(SEQIDNO:21)，及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。8.实施方案2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，其中所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列TYGVH(SEQIDNO:3)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)，及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列IRTNIH(SEQIDNO:16)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYGSESIS(SEQIDNO:22)，及(3)CDR-L3包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。9.实施方案2的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，其中所述重链可变结构域序列包含(1)CDR-H1，其包含氨基酸序列TYGVH(SEQIDNO:3)，(2)CDR-H2，其包含氨基酸序列YGNEFTSRF(SEQIDNO:8)，及(3)CDR-H3，其包含氨基酸序列DYYDYEFAY(SEQIDNO:11)；所述轻链可变结构域序列包含(1)CDR-L1，其包含氨基酸序列ISTNIH(SEQIDNO:19)，(2)CDR-L2，其包含氨基酸序列KYGSESIS(SEQIDNO:22)，及(3)CDR-L3，其包含氨基酸序列NWPTS(SEQIDNO:27)。10.无糖基化CDR-H2抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含CDR-H2，所述CDR-H2包含氨基酸序列Y-A/G/D-D/N-K/E-FTSRF(SEQIDNO:31)。11.实施方案10的无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域进一步包含CDR-H1及CDR-H3，所述CDR-H1包含氨基酸序列N/T/Q-YGVH(SEQIDNO:4)，所述CDR-H3包含氨基酸序列T/D-Y/L-YDY-E/N-FAY(SEQIDNO:14)。12.实施方案10或实施方案11的无糖基化CDR-H2抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段进一步包含轻链可变结构域序列，所述轻链可变结构域序列包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述CDR-L1包含氨基酸序列I-G/R/S-T/L/P-NIH(SEQIDNO:20)，所述CDR-L2包含氨基酸序列KY-A/G-SE-S/T-I-S/R(SEQIDNO:24)，所述CDR-L3包含氨基酸序列NWPT-T/L/S/A/Y(SEQIDNO:30)。13.实施方案1-12任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人IgG的Fc序列。14.实施方案1-13任一项的抗EGFR抗体的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段、双抗体及线性抗体。15.实施方案1-13任一项的的抗EGFR抗体，其中所述抗体是多特异性抗体。16.实施方案1-15任一项的抗体，其中所述抗体是无岩藻糖基化抗体。17.实施方案1-16任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其与治疗剂缀合。18.实施方案1-16任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其与一种标记缀合。19.实施方案18的抗体，其中所述标记选自放射性同位素、荧光染料和酶。20.分离的核酸分子，其编码实施方案1-16任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段。21.表达载体，其编码实施方案20的核酸分子。22.细胞，其包含实施方案21的表达载体。23.一种生产抗体的方法，包括培养实施方案22的细胞及从细胞培养物回收抗体。24.组合物，其包含实施方案1-17任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段及药学上可接受的载体。25.一种检测患者样品中EGFR蛋白的方法，通过将实施方案1-16和18-19任一项的抗EGFR抗体或其抗原结合片段与所述样品接触，并检测与EGFR蛋白结合的所述抗EGFR抗体。26.实施方案25的方法，其中所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段用于免疫组织化学测定(IHC)或者ELISA测定中。27.治疗对象中癌症的方法，包括给予所述对象有效量的实施方案26的组合物。28.实施方案27的方法，其中所述癌症选自喉癌、结肠直肠癌、肺癌和头颈癌。29.实施方案27的方法，其中进一步给予所述对象选自如下的治疗剂：抗肿瘤剂，化疗剂，生长抑制剂和细胞毒性剂。30.实施方案27的方法，其中进一步给予所述对象放射性治疗。当前第1页1 2 3