用于治疗癌症的组合治疗的制作方法

本申请主张于2014年8月27日提出的美国临时申请No.62/042,710、2014年12月2日提出的美国临时申请No.62/086,376及2015年3月18日提出的美国临时申请No.62/134,661的优先权，各申请通过引用整体并入本发明。

技术领域

本发明提供了包括组合治疗的用于治疗癌症的方法。特别地，本发明提供了包含Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂组合的方法用于治疗癌症和其他疾病。

背景技术：

癌症是发达国家的主要死因之一，仅在美国每年就有大约160万人被诊断出癌症而且有超过500,000例死亡。整体来说，预期每3人中超过1人会在有生之年发展出某些形式的癌。有超过200种不同的癌症，其中四种：乳癌、肺癌、结直肠癌及前列腺癌，占美国所有新病例的一半以上(Siegel et al.,2012,CA:A Cancer J.for Clin.,62:10-29)。

信号传导途径通常连接细胞外信号至细胞核，导致直接或间接控制细胞生长、分化、存活、及死亡的基因表达。在许多种类的癌症中，信号传导途径失调且可能与肿瘤起始以及/或进展有关。与人癌症发生有关的信号传导途径包括但不限于Wnt途径、Ras-Raf-MEK-ERK或MAPK途径、PI3K-AKT途径、CDKN2A/CDK4途径、Bcl-2/TP53途径、及缺口(Notch)途径。

Wnt信号传导途径已被鉴定为癌症治疗的目标。Wnt信号传导途径是胚胎模式形成、后胚胎组织维持及干细胞生物学的若干重要调节因子之一。更特别地，Wnt信号传导在细胞极性的产生和包括干细胞族群自我更新的细胞命运决定中发挥重要作用。未受调节的Wnt途径活化与许多人癌症有关，一般相信该活化可改变细胞的发育命运。活化Wnt途径可能使肿瘤细胞维持在未分化状态以及/或导致不受控制的增生。癌症通过破坏控制正常发育及组织修复的恒定机构而发生和进展(于Reya&Clevers,2005,Nature,434:843-50；Beachy et al.,2004,Nature,432:324-31中评述)。

Wnt信号传导途径首先在果蝇发育突变无翅(wg)以及小鼠原致癌基因int-1(现称Wnt1)中阐述(Nusse&Varmus,1982,Cell,31:99-109；Van Ooyen&Nusse,1984,Cell,39:233-40；Cabrera et al.,1987,Cell,50:659-63；Rijsewijk et al.,1987,Cell,50:649-57)。Wnt基因编码经脂质修饰的分泌糖蛋白，在哺乳动物中已识别出其中的19种。这些分泌型配体活化由卷曲(FZD)受体家族成员及低密度脂蛋白受体相关蛋白5或6(LRP5/6)组成的受体复合体。FZD受体是G蛋白偶合受体(GPCR)超家族的七个跨膜结构域，以及包含胞外N端配体结合结构域，N端配体结合结构域具有10个保守性半胱氨酸，被称为多半胱氨酸区(CRD)或Fri结构域。有十种人FZD受体，FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9及FZD10。不同的FZD CRD对特定Wnt蛋白有不同的结合亲和性(Wu&Nusse,2002,J.Biol.Chem.,277:41762-9)，并且，FZD受体已被分成活化典型β-链蛋白途径者及活化非典型途径者(Miller et al.,1999,Oncogene,18:7860-72)。

Wnt信号传导在癌症中的角色，首先是因为识别Wnt1(原名int1)为通过邻近插入小鼠病毒而转化的乳房肿瘤的致癌基因而被发现(Nusse&Varmus,1982,Cell,31:99-109)。Wnt信号传导在乳癌中的角色的其他证据已随着时间的推移而累积。举例来说，β-链蛋白于小鼠乳腺中的转基因过度表达导致增生及腺癌(Imbert et al.,2001,J.Cell Biol.,153:555-68；Michaelson&Leder,2001,Oncogene,20:5093-9)，然而丧失Wnt信号传导扰乱正常乳腺发育(Tepera et al.,2003,J.Cell Sci.,116:1137-49；Hatsell et al.,2003,J.Mammary Gland Biol.Neoplasia,8:145-58)。在人乳癌中，β-链蛋白累积表明超过50％的癌中有经活化的Wnt信号传导，虽然特定突变尚未被识别，但已观察到卷曲受体表达上调(Brennan&Brown,2004,J.Mammary Gland Biol.Neoplasia,9:119-31；Malovanovic et al.,2004,Int.J.Oncol.,25:1337-42)。

Wnt途径的活化亦与大肠直肠癌有关。所有大肠直肠癌中的大约5至10％为遗传性，其中主要形式之一为家族性腺瘤息肉症(FAP)。FAP是一种体染色体显性疾病，其中大约80％的受影响个体包含大肠腺瘤息肉(APC)基因的种系突变。另外也在包括Axin及β-链蛋白的其他Wnt途径成分发现突变。个别腺瘤为包含第二失活等位基因的上皮细胞的种系过度生长，并且大量FAP腺瘤不可避免地导致腺癌经由致癌基因以及/或抑瘤基因的额外突变发生。另外，Wnt信号传导途径的活化，其包括APC的功能丧失突变及β-链蛋白的稳定突变，可诱导小鼠模型中的增生发育及肿瘤生长(Oshima et al.,1997,Cancer Res.,57:1644-9；Harada et al.,1999,EMBO J.,18:5931-42)。

在非小细胞肺癌(NSCLC)中，β-链蛋白和APC突变是罕见的，但是Wnt信号传导在NSCLC细胞系中是重要的，并且Wnt抑制降低增殖。若干Wnt蛋白和其他Wnt途径组分的过表达在切除的NSCLC中是常见的，并且与不良预后相关。Wnt抑制剂的下调(例如通过高甲基化)在NSCLC肿瘤细胞系和被切除的样品中是常见的，并且可能与不良预后相关。因此，数据表明Wnt信号传导影响NSCLC肿瘤发生、预后和对治疗的抗性(Tennis et al.,2007,J.of Thoracic Oncology,2:889-892；Stewart,2014,JNCI,106:djt356)。

本发明的目标之一是提供改进的癌症治疗的方法，特别是使用Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂组合的策略性时间间隔(即交错或顺序)给药的方案。

技术实现要素：

本发明提供了治疗疾病的方法，其包括向有需求的受试者(subject)施用Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合。利用至少两种治疗剂的组合治疗通常使用通过不同作用机理起作用和/或靶向不同的途径并可导致加和或协同效应的剂。组合治疗可允许每种剂的剂量低于单一疗法中使用的剂量，从而减少毒性副作用和/或增加药剂的治疗指数。组合治疗可以降低对药剂形成抗性的可能性。组合治疗可以允许一种剂通过第二剂使肿瘤细胞(包括癌症干细胞)敏化以增强活性。此外，每种治疗剂的施用顺序和/或时间会影响药物组合的总体功效。

所述方法包括Wnt途径抑制剂，包括但不限于结合至少一种Wnt蛋白的抗体和其他多肽，结合至少一种FZD蛋白的抗体和其他多肽，以及Wnt结合可溶性受体。所述方法还包括作为小分子的Wnt途径抑制剂。所述方法包括有丝分裂抑制剂，包括但不限于紫杉烷(taxanes)、长春花生物碱(vinca alkaloids)、埃坡霉素(epothilones)和艾日布林甲磺酸盐(eribulinmesylate)。提供了包含Wnt途径抑制剂和/或有丝分裂抑制剂的组合物。提供了包含Wnt途径抑制剂或有丝分裂抑制剂的药物组合物。

在一方面，本发明提供了抑制肿瘤生长的方法。在一些实施方案中，方法包括使肿瘤细胞与有效量的Wnt途径抑制剂以及有效量的有丝分裂抑制剂的组合接触，其中所述抑制剂以交错给药方案使用，并且其中首先使用Wnt途径抑制剂，其次使用有丝分裂抑制剂。该方法可以是体内或体外的。在某些实施方案中，肿瘤在受试者中，并且使肿瘤细胞与Wnt途径抑制剂以及有丝分裂抑制剂接触包括向受试者施用治疗有效量的每种抑制剂。

在一个方面，本发明提供了减小肿瘤尺寸的方法。在一些实施方案中，方法包括使肿瘤细胞与有效量的Wnt途径抑制剂以及有效量的有丝分裂抑制剂的组合接触，其中所述抑制剂以交错给药方案使用，并且其中首先使用Wnt途径抑制剂，其次使用有丝分裂抑制剂。该方法可以是体内或体外的。在某些实施方案中，肿瘤在受试者中，并且使肿瘤细胞与Wnt途径抑制剂以及有丝分裂抑制剂接触包括向受试者施用治疗有效量的每种抑制剂。

在一个方面，本发明提供了诱导肿瘤消退的方法。在一些实施方案中，方法包括使肿瘤细胞与有效量的Wnt途径抑制剂以及有效量的有丝分裂抑制剂的组合接触，其中所述抑制剂以交错给药方案使用，并且其中首先使用Wnt途径抑制剂，其次使用有丝分裂抑制剂。该方法可以是体内或体外的。在某些实施方案中，肿瘤在受试者中，并且使肿瘤细胞与Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂接触包括向受试者施用治疗有效量的每种抑制剂。

在另一方面，本发明提供了治疗癌症的方法。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括给受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂与治疗有效量的有丝分裂抑制剂的组合。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括给受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中首先施用Wnt途径抑制剂，然后再施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂使用交错给药方案施用，并且首先施用Wnt途径抑制剂。

在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂使用交错给药方案施用，并且Wnt途径抑制剂首先施用；且其中所述Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种人卷曲(FZD)蛋白的抗体或包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体。

在另一方面，本发明提供了提高有丝分裂抑制剂在治疗受试者的癌症中的功效的方法，其包括在向受试者施用Wnt途径抑制剂后约1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，本发明提供了提高有丝分裂抑制剂在治疗受试者的癌症中的功效的方法，其包括：(a)向受试者施用Wnt途径抑制剂；以及(b)在施用Wnt途径抑制剂后约1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天向受试者施用有丝分裂抑制剂。

另一方面，本发明提供了治疗与Wnt途径活化相关的疾病的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂以交错给药方式施用，并且首先施用Wnt途径抑制剂。

在本文所述的方法的一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后至少1天施用有丝分裂抑制剂。在本文所述的方法的一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后至少2天施用有丝分裂抑制剂。在本文所述的方法的一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后至少3天施用有丝分裂抑制剂。

在上述方面中的每一个的一些实施方案中，以及本文其他地方描述的其他方面和实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂协同作用。在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂使癌细胞对有丝分裂抑制剂敏感。在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂使癌细胞(包括癌症干细胞)对有丝分裂抑制剂敏感。在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂在G2/M检查点抑制或阻止细胞周期的进展，并提高有丝分裂抑制剂的功效。在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂在M期抑制或阻止细胞周期进展并提高有丝分裂抑制剂的功效。

在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合的交错给药方案增加肿瘤细胞的凋亡。在本文所述的方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合的交错给药方案使得Wnt途径抑制剂能在肿瘤部位积累。在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合的交错给药方案使得Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂的抗肿瘤活性能同步。

在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂约每3周施用一次。在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂约每4周施用一次。在本文所述的方法中，有丝分裂抑制剂约每周施用一次，约每两周施用一次，约每3周施用一次，约每4周施用一次，或在4周(即28天)的周期内约每3周施用一次。在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂被施用2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或更多个周期。在本文所述方法的一些实施方案中，有丝分裂抑制剂被施用2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或更多个周期。

在本文所述方法的一些实施方案中，所述Wnt途径抑制剂以约2mg/kg至约10mg/kg的剂量施用于所述受试者。在本文所述方法的一些实施方案中，所述Wnt途径抑制剂以约2mg/kg至约5mg/kg的剂量施用。在本文所述方法的一些实施方案中，所述Wnt途径抑制剂以约3mg/kg至约7.5mg/kg的剂量施用。在本文所述方法的一些实施方案中，所述Wnt途径抑制剂每3周以约2mg/kg至约5mg/kg的剂量施用。在本文所述方法的一些实施方案中，所述Wnt途径抑制剂每4周以约3mg/kg至约7.5mg/kg的剂量施用。

在本文所述的方法的一些实施方案中，有丝分裂抑制剂以约25mg/m²至约200mg/m²的剂量向受试者施用。在本文所述方法的一些实施方案中，有丝分裂抑制剂以约50mg/m²至约150mg/m²的剂量施用。在本文所述的方法的一些实施方案中，所述有丝分裂抑制剂每周一次以约50mg/m²至约150mg/m²的剂量施用。

在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是与至少一种人FZD蛋白特异性结合的抗体。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是与选自下列项中的至少一种FZD蛋白特异性结合的抗体：FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9及FZD10。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是与选自下列项中的至少一种FZD蛋白特异性结合的抗体：FZD1、FZD2、FZD5、FZD7及FZD8。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种人FZD蛋白的抗体，其中所述抗体包含下列项的抗体：包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)的重链CDR1、包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)的重链CDR2、以及包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)的重链CDR3，和/或包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1、包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2、及包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3。

在上述方面中的每一个的某些实施方案中，以及本文别处描述的其他方面和实施方案中，Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种人FZD蛋白的抗体，其中所述抗体包含：(a)与SEQ ID NO:5具有至少约90％，至少约95％或100％的序列同一性的重链可变区；和/或(b)与SEQ ID NO:6具有至少约90％，至少约95％或100％的序列同一性的轻链可变区。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5(也称为凡地吐单抗(vantictumab))。

在上述方面中的每一个的某些实施方案中，以及本文其他地方描述的其他方面和实施方案中，Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种人Wnt蛋白的抗体。

在上述方面中的每一个的某些实施方案中，以及本文其他地方描述的其他方面和实施方案中，Wnt途径抑制剂是重组抗体。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一些实施方案中，抗体是包含抗原结合部位的抗体片段。在某些实施方案中，抗体或抗体片段是单价、单特异性、二价、双特异性或多特异性的。在一些实施方案中，抗体是IgG1抗体、IgG2抗体或IgG4抗体。在某些实施方案中，分离抗体。在其他实施方案中，抗体基本上是纯的。

在上述方面中的每一个的某些实施方案中，以及本文其他地方描述的其他方面和实施方案中，Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在一些实施方案中，可溶性受体包含人FZD蛋白的Fri结构域。在一些实施方案中，Fri结构域包含FZD1的Fri结构域、FZD2的Fri结构域、FZD3的Fri结构域、FZD4的Fri结构域、FZD5的Fri结构域、FZD6的Fri结构域、FZD7的Fri结构域、FZD8的Fri结构域、FZD9的Fri结构域、或FZD10的Fri结构域。在一些实施方案中，Fri结构域包含FZD8的Fri结构域。在一些实施方案中，人FZD蛋白的Fri结构域包含选自SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:22,和SEQ ID NO:23中的序列。在一些实施方案中，Fri结构域包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21。

在本文所述的方法的一些实施方案中，可溶性受体包括非FZD多肽。在一些实施方案中，非FZD多肽直接连接到人FZD蛋白的Fri结构域。在一些实施方案中，非FZD多肽通过接头连接到人FZD蛋白的Fri结构域。在一些实施方案中，非FZD多肽包含人Fc区。在一些实施方案中，非FZD多肽包含SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:27,或SEQ ID NO:28。在一些实施方案中，非FZD多肽包含SEQ ID NO:27。

在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂包含(a)包含SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:22,或SEQ ID NO:23的第一多肽；和(b)包含SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:27,或SEQ ID NO:28的第二多肽，其中所述第一多肽与所述第二多肽直接连接。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂包含(a)包含SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:22,或SEQ ID NO:23的第一多肽；和(b)包含SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:27,或SEQ ID NO:28的第二多肽，其中所述第一多肽通过接头与第二多肽连接。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂包含：(a)包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的第一多肽；和(b)包含SEQ ID NO:27的第二多肽，其中所述第一多肽与所述第二多肽直接连接。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂包含：(a)SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的第一多肽；和(b)包含SEQ ID NO:27的第二多肽，其中所述第一多肽通过接头连接到所述第二多肽。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂包含SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28(也称为艾非纳西肽(ipafricept))。

在上述方面中的每一个的某些实施方案中，以及本文其他地方描述的其他方面和实施方案中，有丝分裂抑制剂选自紫杉烷(taxane)、长春花生物碱(vinca alkaloid)、埃坡霉素(epothilone)或艾日布林甲磺酸盐(eribulinmesylate)。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷。在一些实施方案中，紫杉烷选自：紫杉醇(TAXOL)、白蛋白结合型紫杉醇(ABRAXANE)或多西紫杉醇(TAXOTERE)。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是长春花生物碱。在一些实施方案中，长春花生物碱选自长春花碱(VELBAN)、长春新碱(MARQIBO)或长春瑞滨(NAVELBINE)。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是埃坡霉素。在一些实施方案中，埃坡霉素是伊沙匹隆(IXEMPRA)。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是艾日布林甲磺酸盐(HALAVEN)。

在上述方面中的每一个的某些实施方案中，以及本文中别处描述的其他方面和实施方案中，癌症是选自结肠直肠癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、乳腺癌、肾癌、前列腺癌、胃肠癌、黑素瘤、子宫颈癌，膀胱癌、成胶质细胞瘤和头颈癌。在某些实施方案中，癌症是乳腺癌。在一些实施方案中，癌症是卵巢癌。在某些实施方案中，癌症是肺癌。在某些实施方案中，癌症是胰腺癌。

在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗(OMP-18R5)和治疗有效量的紫杉烷，所述紫杉烷选自紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇(nab-paclitaxel)和多西紫杉醇(docetaxel)，其中在施用凡地吐单抗后约1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天施用紫杉烷。在一些实施方案中，在施用凡地吐单抗约2天后施用紫杉烷。在一些实施方案中，约每3周施用一次凡地吐单抗。在一些实施方案中，约每4周施用一次凡地吐单抗。在一些实施方案中，紫杉烷每周施用一次。在一些实施方案中，在4周的周期内的3周，每周施用一次紫杉烷。

在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽(OMP-54F28)和治疗有效量的选自紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇和多西紫杉醇中的紫杉烷，其中所述紫杉烷在施用艾非纳西肽(ipafricept)后约1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天施用。在一些实施方案中，紫杉烷在施用艾非纳西肽后约2天施用。在一些实施方案中，艾非纳西肽约每3周施用一次。在一些实施方案中，艾非纳西肽(ipafricept)约每4周施用一次。在一些实施方案中，紫杉烷每周施用一次。在一些实施方案中，在4周的周期内的3周，每周施用一次紫杉烷。

在一些实施方案中，本发明提供了抑制受试者中肿瘤生长的方法，其包括使用交错给药方案向受试者施用治疗有效量的抗FZD抗体与有丝分裂抑制剂的组合。

在一些实施方案中，本发明提供了抑制受试者中肿瘤生长的方法，其包括使用交错给药方案向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗与有丝分裂抑制剂的组合。在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗与紫杉烷的组合。在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗与紫杉醇的组合。在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗与白蛋白结合型紫杉醇的组合。在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向所述受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗与多西紫杉醇的组合。

在一些实施方案中，本发明提供了抑制受试者中肿瘤生长的方法，其包括使用交错给药方案向受试者施用治疗有效量的FZD可溶性受体与有丝分裂抑制剂的组合。

在一些实施方案中，本发明提供了抑制受试者中肿瘤生长的方法，其包括使用交错给药方案向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽与有丝分裂抑制剂的组合。在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽与紫杉烷的组合。在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽与紫杉醇的组合。在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽与白蛋白结合型紫杉醇的组合。在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向所述受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽与多西紫杉醇的组合。

在上述方面中的每一个的某些实施方案中，以及本文别处描述的其他方面和实施方案中，所述方法还包括施用至少一种另外的治疗剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂是化疗剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂是抗体。

还提供了包含本文所述的Wnt途径抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物，其与包含本文所述的有丝分裂抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物组合使用。

本发明的方面或实施方案是以马库什群组或其他群组化的替代方案描述，本发明不仅包含被标示为整体的整个群组，而且包含该群组的个别成员及该主要群组中所有可能的亚群，且还包含不含其中一或多个群组成员的主要群组。本发明亦设想明确排除该申请专利的发明中任何群组成员中的一或多个。

附图说明

图1A至1D。通过Wnt途径抑制剂组合化疗剂抑制体内卵巢肿瘤生长。OMP-OV19卵巢肿瘤细胞是经皮下注射至NOD/SCID小鼠。图1A。用对照抗体(-●-)、紫杉醇(-■-)、或FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28和紫杉醇的组合(▲-)治疗小鼠。图1B。用对照抗体(-●-)，白蛋白结合型紫杉醇(-■-)、或OMP-54F28和白蛋白结合型紫杉醇的组合(▲)治疗小鼠。图1C。用对照抗体(-●-)、卡铂(-■-)、或OMP-54F28和卡铂的组合(-▲-)治疗小鼠。图1D。用对照抗体(-●-)、卡铂和紫杉醇(-■-)、或OMP-54F28、卡铂和紫杉醇的组合(-▲-)治疗小鼠。以45mg/kg的OMP-54F28、10mg/kg的紫杉醇、7.5mg/kg的白蛋白结合型紫杉醇、30mg/kg的卡铂、以及15mg/kg卡铂组合5mg/kg的紫杉醇给小鼠施用。所有试剂每三周施用并经腹膜内施用。数据显示为治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。“治疗后天数”是指第一次治疗后的天数。

图2为使用交错给药方案通过Wnt途径抑制剂与紫杉烷组合来抑制活细胞内乳腺肿瘤生长。将UM-PE13乳腺肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，紫杉醇(-■-)，在同一天施用的紫杉醇和抗FZD抗体OMP-18R5(-▲-)，其中紫杉醇在先于OMP-18R5三天施用的紫杉醇和OMP-18R5(-○-)，或其中OMP-18R5先于紫杉醇三天施用的紫杉醇和OMP-18R5(-□-)治疗小鼠。以25mg/kg施用OMP-18R5，并且以20mg/kg施用紫杉醇。每三周施用剂并经腹膜内施用。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。

图3A-3C。使用交错给药方案通过Wnt途径抑制剂与紫杉烷组合抑制体内卵巢肿瘤生长。图3A。将OMP-OV38卵巢肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。将UM-PE13乳腺肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，紫杉醇(-■-)，在同一天施用的紫杉醇和FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28(-▲-)，其中紫杉醇先于OMP-54F28施用的紫杉醇和OMP-54F28(-○-)，其中OMP-54F28先于紫杉醇前两天施用的紫杉醇和OMP-54F28(-□-)治疗小鼠。OMP-54F28以25mg/kg施用，紫杉醇以20mg/kg施用。每三周施用剂并经腹膜内施用。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。图3B。将OMP-OV22卵巢肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，紫杉醇(-■-)，同一天施用的紫杉醇和OMP-54F28(-▲-)，其中紫杉醇先于OMP-54F28两天施用的紫杉醇和OMP-54F28(-○-)，或其中OMP-54F28先于紫杉醇两天施用的紫杉醇和OMP-54F28(-□-)治疗小鼠。OMP-54F28以25mg/kg施用，而紫杉醇以20mg/kg施用。每三周经腹膜内施用剂。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。图3C。将OMP-OV38卵巢肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。通过对照抗体(-●-)，紫杉醇(-■-)，先施用OMP-54F28且一天后施用紫杉醇(-○-)，先施用OMP-54F28且两天后施用紫杉醇(-▲-)，或先施用OMP-54F28且四天后施用紫杉醇(-□-)来治疗小鼠。OMP-54F28以20mg/kg给药，紫杉醇以20mg/kg给药。每两周施用剂并经腹膜内施用。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。

图4。使用交错给药方案通过Wnt途径抑制剂与紫杉烷组合抑制体内肺肿瘤生长。将OMP-LU77肺肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，紫杉醇(-■-)，同一天施用的凡地吐单抗(OMP-18R5)和紫杉醇(-▲-)，或其中凡地吐单抗先于紫杉醇两天施用的凡地吐单抗和紫杉醇(-□-)治疗小鼠。凡地吐单抗以25mg/kg施用，紫杉醇以15mg/kg施用。每隔一周施用剂，并经腹膜内施用。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。

图5A-5B。癌干细胞频率。图5A。在用从已经用对照抗体(对照mAb)、紫杉醇(Pac)或OMP-18R5和紫杉醇的组合(Van+Pac)治疗的小鼠获得的50、150或500个OMP-LU77肿瘤细胞植入后的小鼠的肿瘤生长。图5B。通过有限稀释分析测定的，用对照抗体(对照mAb)，紫杉醇或OMP-18R5抗体和紫杉醇的组合(Van+Pac)治疗后，OMP-LU77肺肿瘤中的癌干细胞(CSC)频率。

图6。使用交错给药方案通过Wnt途径抑制剂与紫杉烷组合抑制体内卵巢肿瘤生长。将OMP-OV38卵巢肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-▲-)，紫杉醇(-■-)，其中OMP-54F28与紫杉醇在同一天施用的OMP-54F28和紫杉醇的组合(-◆-)，或其中先于施用紫杉醇2天施用OMP-54F28的OMP-54F28和紫杉醇的组合(-●-)治疗小鼠。OMP-54F28和紫杉醇以20mg/kg施用。每两周施用剂并经腹膜内施用。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。

图7A-7B。使用交错给药方案通过Wnt途径抑制剂与紫杉烷组合抑制体内乳腺肿瘤生长。图7A。将OMP-B90乳腺肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，紫杉醇(▲-)，其中OMP-18R5与紫杉醇在同一天施用的OMP-18R5和紫杉醇的组合(-□-)，或其中先于施用紫杉醇2天施用OMP-18R5的OMP-18R5和紫杉醇的组合(-◇-)治疗小鼠。图7B。将OMP-B90乳腺肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，OMP-54F28(-■-)，紫杉醇(-▲-)，其中OMP-54F28与紫杉醇在同一天施用的OMP-54F28和紫杉醇的组合(-□-)，或其中在先于施用紫杉醇2天施用OMP-54F28的OMP-54F28和紫杉醇的组合(-◇-)治疗小鼠。OMP-18R5、OMP-54F28和对照抗体以25mg/kg施用，紫杉醇以10mg/kg施用。OMP-18R5、OMP-54F28和对照抗体每两周施用一次，紫杉醇每周施用一次，并且所有剂经腹膜内施用。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。

图8A-8B。使用交错给药方案通过Wnt途径抑制剂与紫杉烷组合抑制体内结肠肿瘤生长。图8A。将OMP-C28结肠肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，OMP-18R5(-▲-)，白蛋白结合型紫杉醇(-■-)或其中先于施用白蛋白结合型紫杉醇2天施用OMP-18R5的OMP-18R5和白蛋白结合型紫杉醇的组合(-◇-)治疗小鼠。图8B。将OMP-C28结肠肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，OMP-54F28(-▲-)，白蛋白结合型紫杉醇(-■-)或其中先于施用白蛋白结合型紫杉醇2天施用OMP-54F28的OMP-54F28和白蛋白结合型紫杉醇的组合(-◇-)治疗小鼠。OMP-18R5、OMP-54F28和对照以25mg/kg施用，白蛋白结合型紫杉醇以15mg/kg施用。OMP-18R5、OMP-54F28和对照每两周施用一次，紫杉醇每周施用一次，并且所有剂经腹膜内施用。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。

图9A-9B。使用交错给药方案通过Wnt途径抑制剂与紫杉烷组合抑制体内卵巢肿瘤生长。图9A。将OMP-OV40卵巢肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，OMP-18R5(-▲-)，紫杉醇(-■-)，或其中先于施用紫杉醇2天施用OMP-18R5的OMP-18R5和紫杉醇的组合(-◇-)治疗小鼠。图7B。将OMP-OV40卵巢肿瘤细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠中。用对照抗体(-●-)，OMP-54F28(-▲-)，紫杉醇(■-)，或其中先于施用紫杉醇2天施用OMP-54F28的OMP-54F28和紫杉醇的组合(-◇-)治疗小鼠。OMP-18R5、OMP-54F28和对照抗体以25mg/kg施用，紫杉醇以20mg/kg施用。试剂每两周施用一次并经腹膜内施用。数据显示为针对治疗后天数的肿瘤体积(mm³)。

具体实施方案

本发明提供了抑制肿瘤生长的方法，减少肿瘤尺寸的方法和治疗癌症的方法。本文提供的方法包括使用交错给药方案向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂与治疗有效量的有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抗体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种Wnt蛋白的抗体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种FZD蛋白的抗体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含FZD蛋白Fri结构域的可溶性受体。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷、长春花生物碱、埃坡霉素或艾日布林甲磺酸盐。

用Wnt途径抑制剂抗-FZD抗体OMP-18R5与紫杉烷组合比与其他类化疗剂组合具有更大的治疗活性(即抑制肿瘤生长)(实施例1；图1)。令人惊奇的是，施用Wnt途径抑制剂，或抗FZD抗体OMP-18R5(也称为凡地吐单抗)或FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28(也称为艾非纳西肽)，然后施用紫杉烷(交错或顺序给药方式)，这在抑制异种移植模型中的肿瘤生长中的作用比其他给药方案有效(实施例2,3和6；图2,3和4)。在交错给药方案中Wnt途径抑制剂和紫杉烷的施用抑制了多种肿瘤类型的肿瘤生长(实施例2,3和6-10；图2-4和6-9)。此外，在一些研究中，以交错给药方案施用Wnt途径抑制剂和紫杉烷实际上导致已形成的肿瘤的尺寸减小(实施例3,6,8和9；图3,4,6和6)7)。

I.定义

为了促进对本发明的了解，以下定义一些用语及用词。

本文所使用的用语“拮抗剂”及“拮抗性”，是指部分或完全阻断、抑制、减少、或中和标靶以及/或信号传导途径(例如Wnt途径)的生物活性的任何分子。本文所使用的用语“拮抗剂”包括部分或完全阻断、抑制、减少、或中和蛋白(例如FZD蛋白或Wnt蛋白)的活性的任何分子。适当的拮抗剂分子特别包括但不限于拮抗剂抗体、抗体片段、可溶性受体、或小分子。

本文所使用的用语“抗体”是指免疫球蛋白分子，该免疫球蛋白分子通过其可变区内的至少一个抗原结合部位，识别标靶(例如蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质、或前述的组合)且与之特异性结合。如本文所使用，该用语包含完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、包含抗原结合位点的抗体片段(诸如Fab、Fab’、F(ab’)2、及Fv片段)、单链Fv(scFv)抗体、多特异性抗体诸如双特异性抗体、单特异性抗体、单价抗体、嵌合抗体、人化抗体、人抗体、包含抗体的抗原结合部位的融合蛋白，及任何其他包含抗原结合部位的经修饰的免疫球蛋白分子，只要该等抗体展现所期望有的生物活性。抗体可为下列五种主要免疫球蛋白类型中的任一者：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM或它们的亚型(同型)(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)，具体根据它们的分别被称为α、δ、ε、γ、及μ的重链恒定结构域的命名。不同类型的免疫球蛋白具有不同且公知的次单位结构及三维构型。抗体可为未经修饰(naked)或与其他分子缀合(conjugated)，该等其他分子包括但不限于毒素及放射性同位素。

本文所使用的用语“抗体片段”是指完整抗体的部分且通常包括完整抗体的抗原性决定可变区或抗原结合部位。抗原片段的实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2及Fv片段、线性抗体、单链抗体及自抗体片段形成的多特异性抗体。此处所使用的“抗体片段”包含至少一个抗原结合部位或表位结合部位。

本文所使用的抗体的“可变区”用语是指抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区(或单独或组合指称)。重链或轻链的可变区通常由四个框架区组成，该四个框架区通过三个互补决定区(CDR)连接，该三个CDR又名“超变异区”。各链中的CDR通过框架区并且利用来自其他链的CDR拉近，导致形成该抗体的抗原结合部位。至少有两种技术用于测定CDR：(1)基于跨种序列变异性的方法(即Kabat et al.,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5^th Edition,National Institutes of Health,Bethesda,MD)；及(2)基于抗原-抗体复合物的结晶学研究的方法(Al-Lazikani et al.,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948)。此外，有时该技术领域组合使用这两种技术以测定CDR。

如本文所使用的用语“单克隆抗体”是指同源性抗体群，其涉及高度特异性识别及结合单一抗原性决定簇或表位。这与多克隆抗体相反，多克隆抗体通常包括以不同抗原决定簇为目标的不同抗体的混合。用语“单克隆抗体”包含完整及全长抗体，也包含抗体片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv)、单链(scFv)抗体、包含抗体部分的融合蛋白质、及任何其他包含至少一种抗原结合部位的经修饰的免疫球蛋白分子。另外，“单克隆抗体”是指由许多技术制备的这样的抗体，这些技术包括但不限于杂交瘤生产、噬菌体选择、重组表达及转基因动物。

如本文所使用的用语“人化抗体”是指包含极少化非人序列的为特定免疫球蛋白链、嵌合性免疫球蛋白或其片段的抗体。通常，人源化抗体是其中CDR的氨基酸残基经非人物种(例如小鼠、大鼠、兔或仓鼠)的CDR的氨基酸残基置换的人免疫球蛋白，其具有所欲的特异性、亲和性以及/或结合能力。

如本文所使用的用语“人抗体”是指由人体产生的抗体或具有对应由人体产生的抗体的氨基酸序列的抗体，人抗体利用任何该技术领域已知的技术制备。

如本文所使用的用语“嵌合抗体”是指其中该免疫球蛋白分子的氨基酸序列是源自二或更多个物种的抗体。通常，轻链及重链两者的可变区皆对应于源自一哺乳动物物种(例如小鼠、大鼠、兔等)的具有所欲特异性、亲和性以及/或结合能力的抗体的可变区，然而这些恒定区与源自另一物种(通常是人)的抗体中的序列是同源的。

如本文所使用的用语“亲和性成熟抗体”是指在一或多个CDR中具有一或多个改变的抗体，该改变导致该抗体相较于不具有这种改变的亲代抗体对抗原的亲和性增加。优选的亲和性成熟抗体将具有纳摩尔或甚至皮摩尔程度的对标靶抗原的亲和性。亲和性成熟抗体通过该领域已知的方法产生，其包括重链和轻链可变区替换、CDR以及/或架构残基的随机突变形成、或CDR以及/或架构残基的定点突变形成。

用语“表位”及“抗原决定簇”在本文可交换使用，是指可被特定抗体辨识且特异性结合的抗原部分。当抗原是多肽时，表位可自连续氨基酸或通过蛋白质的三级折叠并列的非连续氨基酸形成。自连续氨基酸形成的表位(又称为线性表位)通常在蛋白质变性时仍被保留，然而通过三级折叠形成的表位(又称为构象表位)通常在蛋白质变性时丧失。表位通常包括至少3个及更通常地至少5，或8至10个呈独特空间构象的氨基酸。

如本文所使用的用语“选择性结合”或“特异性结合”是指结合剂或抗体以更频繁、更快速、更长时间、更高亲和性或上述条件的某些组合与表位、蛋白质或标靶分子反应或结合，相较于包括非相关或相关蛋白的可供选择的物质而言。在某些实施方案中，“特异性结合”是指例如抗体以大约0.1mM或更低，但通常低于大约1μM的K_D与标靶结合。在某些实施方案中，“特异性结合”是指抗体以至少约0.1μM或更低，至少约0.01μM或更低，或至少约1nM或更低的K_D与标靶结合。由于不同物种的同源性蛋白质之间具有序列一致性，因此特异性结合可包括辨识超过一个物种的蛋白质(例如人FZD蛋白及小鼠FZD蛋白)的抗体。同样地，由于不同蛋白的多肽序列的某些区域内具有同源性，因此特异性结合可包括辨识超过一种蛋白(例如人FZD2及人FZD7)的抗体(或其他多肽或结合剂)。应理解的是，在某些实施方案中，与第一标靶特异性结合的抗体或结合剂可能或可能不与第二标靶特异性结合。因此，“特异性结合”不一定需要(虽然可包括)排他性结合(即与单一标靶结合)。因此，在某些实施方案中，抗体可与一种以上的标靶特异性结合。在某些实施方案中，多重标靶可能由该抗体上的相同的抗原结合部位结合。举例来说，在某些情况下，抗体可能包含二个完全相同的抗原结合部位，该二个抗原结合部位各自与二或多个蛋白(例如FZD2和FZD7)上的相同表位特异性结合。在某些可供选择的实施方案中，抗体可能为双特异性，且包含至少二个具有不同特异性的抗原结合部位。举非限制性实例而言，双特异性剂可包含辨识一个蛋白(例如人FZD)上的表位的一个抗原结合部位，且还包含辨识第二蛋白(例如Wnt蛋白)上的不同表位的第二个不同抗原结合部位。一般来说(但不必然)，所谓的结合是指特异性结合。

本文使用的用语“可溶性受体”是指受体蛋白在该受体的第一跨膜结构域之前的胞外片段(或它的部分)，其可以可溶形式自细胞分泌。

本文使用的用语“FZD可溶性受体”是指FZD受体蛋白在该受体的第一跨膜结构域之前的胞外片段，其可以可溶形式自细胞分泌。包含整个胞外域(ECD)的FZD可溶性受体以及ECD的较小片段由该用语涵盖。因此，包含Fri结构域的FZD可溶性受体亦包括于此用语中。

用语“多肽”和“肽”以及“蛋白”在本文可交换使用，这些用语是指任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可为线性的或分支的，其可能包含经修饰的氨基酸，且其可能被非氨基酸中断。这些用语亦包含经天然或干预修饰的氨基酸聚合物；例如双硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操纵或修饰，诸如与标记成分缀合。该定义还包括例如包含一或多个氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸)的多肽，以及包含本领域公知的其他修饰的多肽。应理解的是，由于本发明中描述的方法中使用的多肽可能以抗体为主，因此在某些实施方案中，这些多肽可能为单链或相关的链(例如二聚体)。

如本文所用的术语“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及与天然存在的氨基酸类似地起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及随后被修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。短语“氨基酸类似物”是指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构的化合物，例如与氢、羧基、氨基和R基团结合的α碳，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物可具有经修饰的R基团(例如正亮氨酸)或经修饰的肽主链，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。短语“氨基酸模拟物”是指具有不同于氨基酸的一般化学结构但与天然存在的氨基酸类似地起作用的结构的化学化合物。

用语“多核苷酸”及“核酸”在本文可交换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合物，包括DNA及RNA。该核苷酸可为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基以及/或它们的类似物，或任何可通过DNA或RNA聚合酶被并入聚合物中的底物。

在提及二或多个核酸或多肽时，用语“一致”或百分比“一致性”是指当二或多个序列或子序列经比较及比对(需要时导入间格)以达最高对应性且不把任何保守性氨基酸取代当作序列一致性的部分时，该二或多个序列或子序列是相同或具有相同的特定百分比的核苷酸或氨基酸残基。该百分比一致性可利用序列比较软件或算法测量，或通过目视检查测量。多种可被用于取得氨基酸或核苷酸序列比对的算法及软件是该领域所公知的。这样的算法及软件包括但不限于BLAST和BLAST变体、ALIGN和ALIGN变体、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin软件包等。在一些实施方案中，二个核酸或多肽是实质上一致的，表示当它们经比较或比对以达最高对应性时，利用序列比较算法或目视检查得知当它们具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％且在一些实施方案中至少95％、96％、97％、98％、99％的核苷酸或氨基酸残基一致性。在一些实施方案中，一致性存在于至少约10、至少约20、至少约40至60个核苷酸或残基、至少约60至80个核苷酸或残基长度或介于它们之间的任何整数长度的序列区域。在一些实施方案中，一致性存在于60至80个核苷酸或残基以上的更长区域，诸如至少约80至100个核苷酸或残基，且在一些实施方案中这些序列在经比较的全长序列诸如核苷酸序列的编码区域上是实质上一致的。

本文所使用的用语“保守性氨基酸取代”是指其中一个氨基酸残基被另一个具有类似侧链的氨基酸残基取代的取代。具有类似侧链的氨基酸残基的群系于该领域中定义，包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)及芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。举例来说，以苯丙氨酸取代酪氨酸是保守性取代。优选地，多肽及抗体的序列中的保守性取代不废除含有该氨基酸序列的多肽或抗体与抗原的结合。识别不消除抗原结合性的核苷酸及氨基酸保守性取代的方法是本技术领域所公知的。

如本文所使用的用语“载体”是指构建物，该构建物能在宿主细胞中递送及通常表达一或多种感兴趣的基因或序列。载体的实例包括但不限于病毒性载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒载体、粘粒载体、或噬菌体载体、与阳离子缩合剂有关的DNA或RNA表达载体，及包封于脂质粒中的DNA或RNA表达载体。

如本文所使用的，经“分离”的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组成物是呈现未见于自然界中的形式的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组成物。经分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组成物包括那些经纯化至一定程度而使它们不再以见于自然界中的形式存在者。在一些实施方案中，经分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组成物实质上是纯的。

如本文所使用的用语“实质上纯的”是指其为至少50％纯的(即不含污染物)、至少90％纯的、至少95％纯的、至少98％纯的或至少99％纯的物质。

如本文所使用的用语“癌”及“癌性”是指称或描述哺乳动物的生理状况，其中细胞群具有未受调节的细胞生长的特征。癌的实例包括但不限于癌(carcinoma)、胚细胞瘤、肉瘤及血液性癌(诸如淋巴瘤及白血病)。

如本文所用的用语“增殖性病症”和“增殖性疾病”是指与异常细胞增殖(例如癌症)相关的病症。

如本文所使用的用语“肿瘤”及“瘤(neoplasm)”是指任何由过度细胞生长或增生所导致的组织团块，不论是良性(非癌性)还是包括癌前性病灶的恶性(癌性)。

如本文所使用的用语“转移”是指一种过程，癌通过该过程自原发部位扩散或转移至身体其他区域且在新位置发展类似癌性的病灶。“转移”或“转移性”细胞通常是指与邻近细胞丧失黏着接触且(例如经由血流或淋巴)自疾病的原发部位移动以侵入邻近的身体结构。

用语“癌干细胞”、“CSC”、“肿瘤干细胞”及“肿瘤起始细胞”在本文可交换使用，是指源自癌或肿瘤且具有下列特性的细胞：(1)具有广泛增生能力，(2)能进行不对称细胞分裂以产生一或多种类型的经分化的细胞后代，其中该经分化的细胞具有减少的增生或发育能力，及(3)能进行对称细胞分裂以自我更新或自我维持。这些特性授予癌干细胞在连续移植至免疫不全宿主(例如小鼠)时能形成或建立肿瘤或癌的能力，相比而言，大部分肿瘤细胞无法形成肿瘤。癌干细胞以混乱方式进行自我更新及分化，以形成具有异常细胞类型的肿瘤，该异常细胞类型可随时间的推移在突变发生时改变。

本文使用的用语“癌细胞”及“肿瘤细胞”是指源自癌或肿瘤或癌前病灶的整体细胞族群，包括非肿瘤发生性细胞(其包含大部分的肿瘤细胞族群)及肿瘤发生性细胞(癌干细胞)。此处使用的用语“癌细胞”或“肿瘤细胞”当仅用于指称该些缺乏更新及分化能力的细胞时，将由用语“非肿瘤发生性”修饰以区别这些肿瘤细胞与癌干细胞。

如本文所使用的用语“肿瘤发生性”是指癌干细胞的功能特性，包括自我更新(导致额外的肿瘤发生性癌干细胞)及增生以产生所有其他肿瘤细胞(导致经分化及因此非肿瘤发生性肿瘤细胞)的特性。

如本文所使用的用语“肿瘤发生性”是指源自肿瘤的细胞样本在连续移植至免疫不全宿主(例如小鼠)时形成明显肿瘤的能力。

如本文所使用的用语“受试者”是指任何动物(例如哺乳动物)，包括但不限于人、非人灵长动物、犬、猫、啮齿动物及类似动物，该动物将成为特定治疗的接受者。通常，关于人受试者的用语“受试者”及“患者”在此处可交换使用。

用语“医药上可接受”是指经美国联邦政府的管理机关或州政府核准或可核准或经明列于美国药典或其他普遍公认的药典中以用于动物(包括人)的试剂、化合物或者分子等。

用语“医药上可接受的赋形剂、载体或佐剂”和“可接受的医药载体”是指可与治疗剂一起施用至受试者的赋形剂、载体或佐剂，且该赋形剂、载体或佐剂不破坏其药理活性，并且当以足以递送治疗效果的剂量施用时是无毒的。通常，本领域技术人员和FDA认为药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂是任何制剂或药物组合物的非活性成分。

本文使用的用语“有效量”和“治疗有效量”以及“治疗效应”是指有效“治疗”受试者或哺乳动物的疾病或疾患的结合剂、抗体、多肽、多核苷酸、小型分子或其他治疗剂的量。以癌为例，剂(例如抗体)的治疗有效量具有治疗效应且因此可减少癌细胞的数量；降低肿瘤发生性、肿瘤发生频率、或肿瘤发生能力；减少癌干细胞的数量或频率；减小肿瘤尺寸；减少癌细胞群；抑制以及/或停止包括例如癌扩散至软组织及骨在内的癌细胞浸润至外围器官；抑制以及/或停止肿瘤或癌细胞转移；抑制以及/或停止肿瘤或癌细胞生长；缓解一或多种与癌相关的症状到某种程度；减少发病率及死亡率；改善生活质量；或这些效应的组合。以该剂预防现存癌细胞生长以及/或杀死现存癌细胞的方面而言，其可被称为细胞静止性以及/或细胞毒性。

用语“进行治疗”和“治疗”和“以治疗”以及“缓解”是指1)治疗性措施，该措施治愈、减缓、减轻经诊断的病理状况或疾患的症状以及/或停止该经诊断的病理状况或疾患的进展及2)预防性或防范性措施，该措施预防或减缓标靶病理状况或疾患的发展。因此这些需要治疗者包括那些已经诊断为罹患该疾患者、那些易于罹患该疾患者，以及那些欲预防疾患者。在一些实施方案中，受试者经本发明的方法被成功“治疗”，若该受试者显示下列一或多项的话：癌细胞的数量减少以及/或完全消失；肿瘤尺寸减小；抑制以及/或缺乏包括癌细胞扩散至软组织及骨在内的癌细胞浸润至外围器官；抑制以及/或缺乏肿瘤或癌细胞转移；抑制以及/或缺乏癌生长；缓解一或多种与该特定癌相关的症状；减少发病率及死亡率；改善生活质量；减少肿瘤发生性；减少癌干细胞的数量或频率；或效应的一些组合。

如本公开内容及权利要求书中所使用的，单数形式的“一”(a,an)及“该”(the)包含复数形式，除非上下文另外清楚地说明。

应理解的是，只要本文描述的实施方案是以用语“包含”描述，其亦提供其他以“由...组成”以及/或“实质上由...组成”的用语所描述的类似实施方案。还应理解的是，只要此处的实施方案是以用语“实质上由...组成”描述，其亦提供其他以“由...组成”的用语所描述的类似实施方案。

当使用于本文中的诸如“A以及/或B”之类的词组中时，本文中的用语“以及/或”是意图包括A及B两者、A或B、A(单独)及B(单独)。同样地，使用于词组诸如“A、B以及/或C”中的用语“以及/或”是意图包含下列实施方案中的每一种：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A(单独)；B(单独)；及C(单独)。

II.使用药物组合物的方法

本文所述的Wnt途径抑制剂(例如Wnt结合剂和FDZ结合剂)与有丝分裂抑制剂的组合可用于多种应用，包括但不限于用于治疗性治疗方法，例如治疗癌症，特别是当以交错或顺序给药方案使用时。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合可用于抑制Wnt信号传导(例如经典Wnt信号传导，自分泌Wnt信号传导，有丝分裂Wnt信号传导)，抑制有丝分裂，抑制肿瘤生长，诱导分化，诱导凋亡，诱导肿瘤细胞死亡，增加分化，增加细胞凋亡，增加肿瘤细胞死亡，减少肿瘤体积，减小肿瘤尺寸，降低肿瘤干细胞频率和/或降低肿瘤的致瘤性，特别是当以交错或顺序给药方案时。所使用的方法可以是体外，离体或体内方法。

如本文所使用的，术语“交错或顺序给药方案”和相关术语或短语如“交错给药方案”通常涉及Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合的用途，其中随时间推移交错使用或施用每种剂。在一些实施方案中，在施用第二剂之前至少约12、24、36、48、60、72、84或96小时施用第一剂。在一些实施方案中，在施用第二剂之前至少约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天施用第一剂。在一些实施方案中，在施用第二剂之前约2天施用第一剂。在一些实施方案中，两种剂的交错施用包括剂量的变化。如本文所用，该定义不排除施用另外的治疗剂。

在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂(例如Wnt结合剂或FDZ结合剂)与有丝分裂抑制剂的组合用于治疗与Wnt途径活化相关的疾病的方法中，特别是当以交错或顺序施用方案使用时。在一些实施方案中，所述疾病是依赖于Wnt信号传导的疾病。在具体实施方案中，Wnt信号传导是规范的Wnt信号传导。在一些实施方案中，Wnt信号传导是自分泌Wnt信号传导。在一些实施方案中，Wnt信号传导是有丝分裂Wnt信号传导。

在一些实施方案中，用Wnt途径抑制剂(例如Wnt结合剂或FDZ结合剂)和有丝分裂抑制剂(其中使用交错施用方案施用治疗剂)的组合治疗的疾病是癌症。在某些实施方案中，该癌症的特征在于Wnt依赖性肿瘤。在某些实施方案中，该癌症的特征在于表达或过表达一种或多种Wnt蛋白的肿瘤。在某些实施方案中，该癌症的特征在于表达或过表达一种或多种FZD蛋白的肿瘤。在某些实施方案中，癌症的特征在于表达或过表达β-链蛋白的肿瘤。

本发明提供了治疗癌症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中首先施用Wnt途径抑制剂，并且其次才施用有丝分裂抑制剂。本发明提供了治疗癌症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂使用交错给药方案施用，并且首先施用Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天施用有丝分裂抑制剂。本发明还提供了提高有丝分裂抑制剂在治疗受试者的癌症中的功效的方法，其包括在施用有丝分裂抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天向受试者施用Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，一种治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂使用交错给药方案施用，并且首先施用Wnt途径抑制剂；且其中所述Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种人卷曲(FZD)蛋白的抗体或包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约2天施用有丝分裂抑制剂。

在一些实施方案中，一种方法包括使用Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂治疗癌症，其中Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂以交错给药方案使用，并且首先使用Wnt途径抑制剂；且其中所述Wnt途径抑制剂是(i)特异性结合至少一种人卷曲(FZD)蛋白的抗体，或(ii)包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体。

本发明还提供了提高有丝分裂抑制剂在治疗受试者的癌症中的功效的方法，其包括：(a)给受试者施用Wnt途径抑制剂；以及(b)在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天向受试者施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，一种提高有丝分裂抑制剂在治疗受试者的癌症中的功效的方法包括在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天向受试者施用有丝分裂抑制剂，其中所述Wnt途径抑制剂是(i)特异性结合至少一种人卷曲(FZD)蛋白的抗体，或(ii)包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体。在一些实施方案中，提高有丝分裂抑制剂在治疗受试者的癌症中的功效的方法包括：(a)向受试者施用Wnt途径抑制剂，其中Wnt途径抑制剂是：(i)至少一种人卷曲(FZD)蛋白，或(ii)包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体；以及(b)在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天给受试者施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约2天施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂在治疗癌症中的功效的提高是相对于当有丝分裂抑制剂和Wnt途径抑制剂基本上同时(例如在同一天)施用于患者时观察到的功效而言的。

本发明还提供了一种提高在治疗受试者的癌症中的组合治疗的功效的方法，其包括：(a)向受试者施用Wnt途径抑制剂；以及(b)在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天给受试者施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，一种提高在治疗受试者的癌症中的组合治疗的功效的方法包括在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天向受试者施用有丝分裂抑制剂，其中所述Wnt途径抑制剂是(i)特异性结合至少一种人卷曲(FZD)蛋白的抗体，或(ii)包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体。在一些实施方案中，一种提高在治疗受试者的癌症中的组合治疗的功效的方法包括：(a)向受试者施用Wnt途径抑制剂，其中Wnt途径抑制剂是：(i)至少一种人卷曲(FZD)蛋白，或(ii)包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体；以及(b)在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天给受试者施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约2天施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，组合治疗在治疗癌症中的功效的提高是相对于当有丝分裂抑制剂和Wnt途径抑制剂基本上同时(例如在同一天)施用于患者时观察到的功效而言的。

在一些实施方案中，一种提高有丝分裂抑制剂治疗癌症的功效的方法包括在使用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天或约6天使用有丝分裂抑制剂，其中所述Wnt途径抑制剂是(i)特异性结合至少一种人卷曲(FZD)蛋白的抗体，或(ii)包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体。在一些实施方案中，在使用Wnt途径抑制剂后约2天使用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂在治疗癌症中的功效的提高是相对于当有丝分裂抑制剂和Wnt途径抑制剂基本上同时(例如在同一天)使用时所观察到的功效而言的。

本发明还提供了一种提高包含Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合治疗的功效的方法，其中所述方法包括在允许有足够的时间使Wnt途径抑制剂到达其标靶后施用所述有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，本发明提供了一种提高包含Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合治疗的功效的方法，其中所述方法包括在允许有足够的时间使Wnt途径抑制剂在其标靶处积聚之后施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，标靶是FZD蛋白。在一些实施方案中，标靶是Wnt蛋白。在一些实施方案中，发现标靶与肿瘤相关。

在本文所述的方法的一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约1天施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约2天施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约3天施用有丝分裂抑制剂。

在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂协同作用。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂使癌细胞对有丝分裂抑制剂敏感。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂使癌症干细胞对有丝分裂抑制剂敏感。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂在有丝分裂(M)期抑制或阻止细胞周期进程。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂在G2/M检查点抑制或阻止细胞周期进程。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂在G2/M检查点抑制或阻止细胞周期进程，并提高有丝分裂抑制剂的功效。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂在M期抑制或阻止细胞周期进程并提高有丝分裂抑制剂的功效。在一些实施方案中，交错给药使得能持续抑制Wnt途径活性和提高有丝分裂抑制剂的功效。

在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂组合的交错给药方案增加肿瘤细胞的凋亡。在本文所述方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂组合的交错给药方案提高了肿瘤细胞的裂解。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合的交错给药方案使得Wnt途径抑制剂能在肿瘤部位积聚。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合的交错给药方案使得Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂的抗肿瘤活性能同步化。

在本文所述的方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂每3周施用一次。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂约每周施用一次，约每2周施用一次，约每3周施用一次，约每4周施用一次，或在4周(即28天)周期内的3周，约每周施用一次。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂约每3周施用一次，并且有丝分裂抑制剂每周施用一次，或在4周(即28天)周期内的3周，约每周施用一次。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂每4周施用一次。在一些实施方案中，约每周施用一次，约每2周施用一次，有丝分裂抑制剂约每3周施用一次或约每4周施用一次。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂每4周施用一次，并且有丝分裂抑制剂每周施用一次，或在4周(即28天)周期内的3周，约每周施用一次。

在一些实施方案中，治疗或给药方案可以限于特定的施用次数或“周期”。“周期”可以是公知的或通常由本领域技术人员用于标准护理治疗剂的给药方案。例如，紫杉醇的周期可以在4周周期内的3周，每周施用一次(即每4周有一周不施用)。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂施用2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或更多个周期。在一些实施方案中，所述有丝分裂抑制剂施用2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或更多个周期。在一些实施方案中，一种剂保持1个或多个周期不施用，而第二剂继续施用。

在本文所述的方法的一些实施方案中，所述癌症是选自结肠直肠癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、乳腺癌、肾癌、前列腺癌、胃肠癌、黑素瘤、宫颈癌、膀胱癌、成胶质细胞瘤和头颈癌。在某些实施方案中，癌症是乳腺癌。在一些实施方案中，癌症是卵巢癌。在某些实施方案中，癌症是肺癌。如本文所使用的，“肺癌”包括但不限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌(NSCLC)。在某些实施方案中，癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，癌症是结肠癌。

在一些实施方案中，一种治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗(OMP-18R5)和治疗有效量的选自紫杉醇，白蛋白结合型紫杉醇和多西紫杉醇的紫杉烷，其中在施用凡地吐单抗后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天施用紫杉烷。在一些实施方案中，在施用凡地吐单抗之后约2天施用紫杉烷。在一些实施方案中，约每2周施用一次凡地吐单抗。在一些实施方案中，约每3周施用一次凡地吐单抗。在一些实施方案中，约每4周施用一次凡地吐单抗。在一些实施方案中，紫杉烷每周施用一次。在一些实施方案中，紫杉烷每2周施用一次。在一些实施方案中，紫杉烷每三周施用一次。在一些实施方案中，紫杉烷在每4周周期的3周，每周施用一次。在一些实施方案中，一种治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗(OMP-18R5)和治疗有效量的多西紫杉醇，其中多西紫杉醇在施用凡地吐单抗后约2或3天施用。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗(OMP-18R5)、治疗有效量的白蛋白结合型紫杉醇和治疗有效量的吉西他滨(gemcitabine)，其中所述白蛋白结合型紫杉醇和吉西他滨在施用凡地吐单抗之后约2或3天施用。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗(OMP-18R5)、治疗有效量的白蛋白结合型紫杉醇和治疗有效量的吉西他滨，其中在施用凡地吐单抗之后约2或3天施用所述白蛋白结合型紫杉醇。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的凡地吐单抗(OMP-18R5)和治疗有效量的紫杉醇，其中紫杉醇在施用凡地吐单抗后约2或3天施用。

在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽(OMP-54F28)和治疗有效量的选自紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇和多西紫杉醇中的紫杉烷，其中所述紫杉烷在施用艾非纳西肽后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天施用。在一些实施方案中，紫杉烷在施用艾非纳西肽后约2天施用。在一些实施方案中，艾非纳西肽约每2周施用一次。在一些实施方案中，艾非纳西肽约每3周施用一次。在一些实施方案中，艾非纳西肽约每4周施用一次。在一些实施方案中，紫杉烷每周施用一次。在一些实施方案中，紫杉烷每2周施用一次。在一些实施方案中，紫杉烷每3周施用一次。在一些实施方案中，紫杉烷在每周4周周期的3周，每周施用一次。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽(OMP-54F28)，治疗有效量的紫杉醇和治疗有效量的卡铂，其中紫杉醇和卡铂在施用艾非纳西肽后约2或3天施用。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽(OMP-54F28)、治疗有效量的紫杉醇和治疗有效量的卡铂，其中紫杉醇在施用艾非纳西肽后约2或3天施用。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽(OMP-54F28)、治疗有效量的白蛋白结合型紫杉醇和治疗有效量的吉西他滨，其中所述白蛋白结合型紫杉醇和吉西他滨在艾非纳西肽施用后约2或3天施用。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向受试者施用治疗有效量的艾非纳西肽(OMP-54F28)、治疗有效量的白蛋白结合型紫杉醇和治疗有效量的吉西他滨，其中施用所述白蛋白结合型紫杉醇在艾非纳西肽施用后约2或3天施用。

本发明进一步提供了抑制肿瘤生长的方法，其包括使肿瘤细胞接触有效量的Wnt途径抑制剂和有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂首先施用于细胞，有丝分裂抑制剂然后施用于细胞。本发明提供了抑制肿瘤生长的方法，其包括使肿瘤细胞接触有效量的Wnt途径抑制剂和有效量的有丝分裂抑制剂，其中使用交错给药方案将Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂施用于细胞并且首先向细胞施用Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84或96小时施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天施用有丝分裂抑制剂。本发明还提供了提高有丝分裂抑制剂在抑制肿瘤生长中的功效的方法，其包括：(a)使肿瘤细胞与Wnt途径抑制剂接触；以及(b)在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天，使肿瘤细胞与有丝分裂抑制剂接触。

在本文所述的方法的某些实施方案中，抑制肿瘤生长的方法包括在体外使肿瘤或肿瘤细胞接触Wnt途径抑制剂和有丝分裂途径抑制剂。例如，在一些实施方案中，永生化细胞系或癌细胞系在培养基中培养，首先向该培养基添加Wnt途径抑制剂，然后加入有丝分裂抑制剂以抑制肿瘤细胞生长。在一些实施方案中，从患者样品(例如组织活检、胸腔积液或血液样品)中分离肿瘤细胞，并在培养基中培养，向该培养基添加Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂的以抑制肿瘤细胞生长。

在一些实施方案中，抑制肿瘤生长的方法包括在体内使肿瘤或肿瘤细胞与Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂接触。在某些实施方案中，使肿瘤或肿瘤细胞与Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂接触在动物模型中进行。例如，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂可以以交错给药方式施用于携带异种移植肿瘤以抑制肿瘤生长的免疫受损小鼠(例如NOD/SCID小鼠)。在某些实施方案中，癌干细胞从患者样品(例如组织活检、胸腔积液或血液样品)中分离，并被注射到免疫受损小鼠中，然后以交错给药方式向免疫受损小鼠施用Wnt途径抑制剂，接着施用有丝分裂抑制剂以抑制肿瘤细胞生长。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂以交错给药方式同时或在将细胞引入动物后不久施用以防止肿瘤生长(预防模型)。在一些实施方案中，在细胞生长至特定大小的肿瘤后，以交错给药方式施用Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂以抑制和/或减少肿瘤生长(治疗模型)。

本发明还提供了抑制受试者中肿瘤生长的方法，其包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂在施用有丝分裂抑制剂之前施用。在某些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者具有肿瘤或其肿瘤已经移除。在一些实施方案中，受试者具有已转移的肿瘤。在一些实施方案中，受试者已经进行了之前的治疗处理。

本发明还提供了减少受试者中肿瘤尺寸的方法，其包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂在施用有丝分裂抑制剂之前施用。在一些实施方案中，通过诱导肿瘤细胞的凋亡来减小肿瘤尺寸。在一些实施方案中，通过诱导肿瘤细胞的裂解来减小肿瘤尺寸。在某些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者具有肿瘤或其肿瘤已经移除。在一些实施方案中，受试者具有已经转移的肿瘤。在一些实施方案中，受试者已经进行了之前的治疗处理。

本发明还提供了诱导在受试者中的肿瘤消退的方法，其包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂在施用有丝分裂抑制剂之前施用。在某些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者具有肿瘤或其肿瘤已经移除。在一些实施方案中，受试者具有已经转移的肿瘤。在一些实施方案中，受试者已经进行了之前的治疗处理。

本发明还提供了抑制受试者中肿瘤侵袭性的方法，其包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂在施用有丝分裂抑制剂之前施用。在一些实施方案中，抑制侵袭性包括提高肿瘤细胞的E-钙粘蛋白表达。在某些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者具有肿瘤或其肿瘤已经移除。

本发明还提供了减少或预防受试者内的转移(metastas)的方法，其包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中Wnt途径抑制剂在施用有丝分裂抑制剂之前施用。在一些实施方案中，减少或预防转移包括抑制肿瘤的侵袭性。在一些实施方案中，减少或预防转移包括通过提高肿瘤细胞的E-钙粘蛋白表达来抑制肿瘤的侵袭性。在某些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者具有肿瘤或其肿瘤已经移除。

本发明还提供了抑制细胞中的Wnt信号传导的方法，其包括以交错给药方式使细胞与有效量的Wnt途径抑制剂以及有效量的有丝分裂抑制剂接触，其中在施用有丝分裂抑制剂之前施用Wnt途径抑制剂。在某些实施方案中，细胞是肿瘤细胞。在某些实施方案中，所述方法是体内方法，其中使细胞与抑制剂接触的步骤包括向受试者施用治疗有效量的抑制剂。在一些实施方案中，所述方法是体外或离体方法。在某些实施方案中，被抑制的Wnt信号传导是规范的Wnt信号传导。在某些实施方案中，被抑制的Wnt信号传导是自分泌Wnt信号传导。在某些实施方案中，被抑制的Wnt信号传导是有丝分裂Wnt信号传导。在某些实施方案中，Wnt信号传导是通过Wnt1、Wnt2、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt7b和/或Wnt10b进行的信号传导。在某些实施方案中，Wnt信号传导是通过Wnt1、Wnt3a、Wnt7b和/或Wnt10b进行的信号传导。

另外，本发明提供了降低受试者中的肿瘤的致瘤性的方法，其包括以交错给药方式向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中在施用有丝分裂抑制剂之前施用Wnt途径抑制剂。在某些实施方案中，肿瘤包含癌症干细胞。在一些实施方案中，通过降低肿瘤中癌干细胞的频率来降低肿瘤的致瘤性。在某些实施方案中，肿瘤中癌症干细胞的频率通过施用Wnt途径抑制剂而减少。在一些实施方案中，通过诱导肿瘤细胞的分化来降低肿瘤的致瘤性。在一些实施方案中，通过诱导肿瘤细胞的凋亡来降低肿瘤的致瘤性。在一些实施方案中，通过提高肿瘤细胞的凋亡来降低肿瘤的致瘤性。

本发明还提供了减少包含癌症干细胞的肿瘤中的癌症干细胞频率的方法，所述方法包括以交错给药的方式向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中在施用有丝分裂抑制剂之前施用Wnt途径抑制剂。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合能够降低动物模型(例如小鼠异种移植模型)中包含癌症干细胞的肿瘤的致瘤性。在某些实施方案中，与未经治疗的肿瘤中的癌症干细胞的数量或频率相比，经治疗的肿瘤中癌症干细胞的数量或频率降低至少约2倍、约3倍、约5倍、约10倍、约50倍、约100倍、或约1000倍。在某些实施方案中，通过使用动物模型的有限稀释测定来确定癌症干细胞的数量或频率的减少。

在某些实施方案中，肿瘤是其中Wnt信号传导具有活性的肿瘤。在某些实施方案中，有活性的Wnt信号传导是规范的Wnt信号传导。在某些实施方案中，有活性的Wnt信号传导是非规范Wnt信号传导。在某些实施方案中，有活性的Wnt信号传导是自分泌Wnt信号传导。在某些实施方案中，有活性的Wnt信号是有丝分裂Wnt信号传导。在某些实施方案中，肿瘤是Wnt依赖性肿瘤。

在本文所述方法的某些实施方案中，肿瘤表达与Wnt结合剂结合的一种或多种人Wnt蛋白。在某些实施方案中，肿瘤过表达一种或多种人Wnt蛋白。在某些实施方案中，与相同组织类型的正常组织中的Wnt蛋白表达相比，肿瘤过表达一种或多种人Wnt蛋白。在某些实施方案中，与至少一种其他肿瘤中的Wnt蛋白表达相比，肿瘤过表达一种或多种人Wnt蛋白。在一些实施方案中，肿瘤过表达Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11和Wnt16。在一些实施方案中，肿瘤过表达Wnt3或Wnt3a。

在某些实施方案中，肿瘤表达与FZD结合剂结合的一种或多种人FZD蛋白。在某些实施方案中，肿瘤过表达一种或多种人FZD蛋白。在某些实施方案中，肿瘤过表达人FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、ZFD6、FZD7、FZD8、FZD9和/或FZD10。在某些实施方案中，肿瘤过表达人FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、和/或FZD8。在某些实施方案中，肿瘤过表达人FZD8。应当理解，人FZD蛋白的“过表达”对于本文所述的FZD结合剂的使用不是必需的或不是必要的。

在本文所述的方法的一些实施方案中，所述肿瘤是选自结肠直肠肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤、肝肿瘤、乳腺肿瘤、肾肿瘤、前列腺肿瘤、胃肠肿瘤、黑素瘤、宫颈肿瘤、膀胱肿瘤、成胶质细胞瘤和头颈部肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤是乳腺肿瘤。在一些实施方案中，所述肿瘤是卵巢肿瘤。在某些实施方案中，所述肿瘤是肺肿瘤。在某些实施方案中，所述肿瘤是胰腺肿瘤。

在本文所述的任何方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是Wnt结合剂。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是FZD结合剂。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抗体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抗Wnt抗体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28(艾非纳西肽)。

在本文所述的任何方法的一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种卷曲蛋白(FZD)或其片段的抗体。在一些实施方案中，抗体特异性结合选自FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9和FZD10中的至少一种人FZD蛋白。在一些实施方案中，抗体特异性结合选自FZD1、FZD2、FZD5、FZD7和FZD8的至少一种人FZD蛋白。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是特异性结合至少一种人FZD蛋白的抗体，所述抗体包含：(a)包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)的重链CDR1，包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)的重链CDR2，和包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)的重链CDR3，和(b)包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1，包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2，和包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含(a)包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)的重链CDR1，包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)的重链CDR2和包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)的重链CDR3，和(b)包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1，包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2和包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3，并以交错给药方式与有丝分裂抑制剂组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含(a)包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)的重链CDR1，包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)的重链CDR2和包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)的重链CDR3，和(b)包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1，包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2和包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3，并以交错给药方式与紫杉烷组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含(a)包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)的重链CDR1，包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)的重链CDR2和包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)的重链CDR3，和(b)包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1，包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2和包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3，并且以交错给药方式与紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西紫杉醇组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含含有SEQ ID NO:5的重链可变区和含有SEQ ID NO:6的轻链可变区的抗体，其以交错给药方式与有丝分裂抑制剂组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含含有SEQ ID NO:5的重链可变区和含有SEQ ID NO:6的轻链可变区的抗体，其以交错给药方式与紫杉烷组合施用。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含含有SEQ ID NO:5的重链可变区和含有SEQ ID NO:6的轻链可变区的抗体，其以交错给药方式与紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西紫杉醇组合施用。

在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或包含抗原结合部位的抗体片段。在一些实施方案中，抗体是单特异性抗体或双特异性抗体。在一些实施方案中，抗体是IgG1抗体或IgG2抗体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5(凡地吐单抗)。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在一些实施方案中，可溶性受体包含人FZD蛋白的Fri结构域。在一些实施方案中，人FZD蛋白的Fri结构域包含FZD1的Fri结构域、FZD2的Fri结构域、FZD3的Fri结构域、FZD4的Fri结构域、FZD5的Fri结构域、FZD6的Fri结构域、FZD7的Fri结构域、FZD8的Fri结构域、FZD9的Fri结构域或FZD10的Fri结构域。在一些实施方案中，人FZD蛋白的Fri结构域包含FZD8的Fri结构域。在一些实施方案中，人FZD蛋白的Fri结构域包含选自SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19，SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:21，SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23中的序列。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的FZD-Fc可溶性受体，其以交错给药方式与有丝分裂抑制剂组合施用。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含SEQ ID NO:20的FZD-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含SEQ ID NO:21的FZD-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷。在一些实施方案中，紫杉烷是紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西紫杉醇。

在本文所述的任何方法的某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的FZD-Fc可溶性受体，其以交错给药方式与有丝分裂抑制剂组合施用。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷。在一些实施方案中，紫杉烷是紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西紫杉醇。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含SEQ ID NO:29的FZD-Fc可溶性受体，其以交错给药方式与紫杉烷组合施用。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是包含SEQ ID NO:29的FZD-Fc可溶性受体，其以交错给药方式与紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西紫杉醇组合施用。

本发明还提供了包含Wnt途径抑制剂和/或有丝分裂抑制剂的组合物。在一些实施方案中，组合物包含本文所述的Wnt结合剂或多肽。在一些实施方案中，组合物包含本文所述的FZD结合剂或多肽。在一些实施方案中，组合物包含本文所述的有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，组合物是包含Wnt途径抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，组合物是包含有丝分裂抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物。该药物组合物可用于抑制肿瘤细胞生长、减小肿瘤尺寸、诱导肿瘤消退和治疗人类患者的癌症。在一些实施方案中，本文所述的FZD结合剂可与有丝分裂抑制剂组合用于制备用于治疗癌症的药物。在一些实施方案中，本文所述的Wnt结合剂可与有丝分裂抑制剂组合用于制备用于治疗癌症的药物。

通过将治疗剂与药学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂作为无菌冻干粉末、水溶液等组合来制备用于储存和使用的制剂(Remington:The Science and Practice of Pharmacy,22^ndEdition,2012,Pharmaceutical Press,London)。本领域技术人员通常认为药学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂是制剂或药物组合物的非活性成分。

合适的载体、赋形剂或稳定剂包括无毒缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；盐，例如氯化钠；抗氧化剂，其包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯化铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚，丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，例如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量多肽(例如小于约10个氨基酸残基)；蛋白质，例如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；碳水化合物，如单糖，二糖，葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，例如蔗糖，甘露醇，海藻糖，或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚山梨酯(TWEEN)或聚乙二醇(PEG)。

治疗制剂可以是单位剂型。这样的制剂包括片剂、丸剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、在水或非水介质中的溶液剂或混悬剂、或用于口服、肠胃外或直肠施用或通过吸入施用的栓剂。在诸如片剂之类的固体组合物中，主要活性成分与药物载体混合。如本文所述，药物载体被认为是制剂或组合物的非活性成分。常规的压片成分包括玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶、以及其他稀释剂(例如水)，以形成含有化合物的均匀混合物的固体预制剂组合物，或其无毒的药学上可接受的盐。然后将固体预制剂组合物再分成上述类型的单位剂型。新组合物的片剂、丸剂等可以被包衣或以其他方式复合以提供具有延长作用的优点的剂型。例如，片剂或丸剂可以包含被外部组分覆盖的内部组合物。此外，两种组分可以通过肠溶层分开，肠溶层用于抵抗崩解并且允许内部组分完整地通过胃或延迟释放。各种材料可用于这样的肠溶层或包衣，这样的肠溶层或包衣包括多种聚合酸和聚合酸与诸如紫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素之类的材料的混合物。

药物制剂可包括与脂质体复合的Wnt途径抑制剂和/或有丝分裂抑制剂。可以使用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物通过反相蒸发来产生脂质体。将脂质体通过限定孔径的过滤器挤出以产生具有所需直径的脂质体。

Wnt途径抑制剂和/或有丝分裂抑制剂也可以包埋在微胶囊中。这样的微胶囊例如通过凝胶技术或通过界面聚合制备，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)中或在如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,22^ndEdition,2012,Pharmaceutical Press,London中所述的宏乳液(macroemulsions)中的羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯))微胶囊。

此外，可以制备包含Wnt途径抑制剂和/或有丝分裂抑制剂的持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有该剂的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质为成形制品(例如膜或微胶囊)的形式。持续释放基质的实例包括聚酯，水凝胶，如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇)，聚丙交酯，L-谷氨酸和7乙基-L-谷氨酸的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，例如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)，蔗糖乙酸异丁酸酯和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。

Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂根据已知方法作为合适的药物组合物施用于人类患者。药物组合物可以以多种方式施用以用于局部或全身治疗。合适的施用方法包括但不限于静脉内(作为丸剂或通过在一段时间内连续输注施用)，动脉内，肌内(注射或输注)，肿瘤内，腹膜内，脑脊髓内，皮下，关节内，滑膜内，颅内(例如鞘内或心室内)或口服。另外，施用可以是局部性的(例如透皮贴剂，软膏，洗剂，霜剂，凝胶剂，滴剂，栓剂，喷雾剂，液体和粉末)或经肺进行的(例如通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括通过喷雾器；气管内，鼻内，表皮和经皮)。

为了治疗疾病，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合的合适剂量取决于待治疗的疾病的类型，疾病的严重性和病程，疾病的反应性，不管施用抑制剂是为了治疗的目的还是为了预防目的，先前的治疗，患者的临床病史等等，所有这些都由治疗医师决定。Wnt途径抑制剂可以一次施用或作为一系列治疗在几天至几个月内施用，或直到实现治愈或实现疾病状态的减轻(例如肿瘤尺寸减小)。有丝分裂抑制剂可以一次施用或作为一系列治疗在几天至几个月内施用，或直到实现治愈或实现疾病状态的减轻(例如肿瘤尺寸减小)。每种剂的最佳给药方案可以根据患者体内药物积累的测量结果来计算，并且将根据单种剂的相对功效而变化。施用医师可以确定最佳剂量、给药方法和重复率。

在一些实施方案中，组合施用包括以单一药物制剂共同施用。在一些实施方案中，组合施用包括使用单独的制剂并以任何顺序但通常在一段时间内连续施用，使得所有活性剂可同时发挥其生物活性。在一些实施方案中，组合施用包括使用单独的制剂和交错给药方案。在一些实施方案中，组合施用包括使用单独的制剂和以特定的顺序施用。在一些实施方案中，组合施用包括使用单独的制剂和以特定的顺序和交错给药方案施用剂。例如，在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天施用有丝分裂抑制剂。在一些实施方案中，在施用Wnt途径抑制剂后约2天施用有丝分裂抑制剂。

在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂的剂量为约0.01μg至约100mg/kg体重，约0.1μg至约100mg/kg体重，约1μg至约100mg/kg体重，约1mg至约100mg/kg体重，约1mg至约80mg/kg体重，约10mg至约100mg/kg体重，约10mg至约75mg/kg体重，或约10mg至约50mg/kg体重。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂的剂量为约0.1mg至约20mg/kg体重。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂以约2mg/kg至约10mg/kg的剂量施用于受试者。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂每天、每周、每月或每年施用一次或多次。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂每周施用一次，每两周施用一次，每三周施用一次或每四周施用一次。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂以每3周约2mg/kg至约5mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂以每4周约3mg/kg至约7.5mg/kg的剂量施用。

在某些实施方案中，有丝分裂抑制剂的剂量为约20mg/m²至约3000mg/m²，约20mg/m²至约2000mg/m²，约20mg/m²至约1000mg/m²，约20mg/m²至约500mg/m²，或约20mg/m²至约250mg/m²。在某些实施方案中，有丝分裂抑制剂的剂量为约20mg/m²至约150mg/m²。在某些实施方案中，有丝分裂抑制剂的剂量为约50mg/m²。在某些实施方案中，有丝分裂抑制剂的剂量为约75mg/m²。在某些实施方案中，有丝分裂抑制剂的剂量为约90mg/m²。在某些实施方案中，有丝分裂抑制剂的剂量为约125mg/m²。在某些实施方案中，有丝分裂抑制剂每天、每周、每月或每年施用一次或多次。在某些实施方案中，有丝分裂抑制剂每天施用两次或多次、每天施用一次、每2天施用一次、每3天施用一次、每4天施用一次、每5天施用一次、每周施用一次、每两周施用一次、每三周施用一次、或每四周施用一次。在一些实施方案中，按照为标准护理治疗剂建立的给药方案施用有丝分裂抑制剂。

在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂和/或有丝分裂抑制剂可以最初施用较高的“负荷”剂量，然后施用一个或多个较低的剂量。在一些实施方案中，施用频率也可改变。在一些实施方案中，给药方案可以包括施用初始剂量，随后是每周施用一次、每两周施用一次、每三周施用一次或每月施用一次额外的剂量(或“维持”剂量)。例如，给药方案可包括施用初始负荷剂量，然后施用为例如初始剂量的一半的每周维持剂量。或者给药方案可包括施用初始负荷剂量，然后施用例如每隔一周施用为初始剂量的一半的维持剂量。或者给药方案可以包括施用三个初始剂量持续3周，然后每隔一周施用例如相同量的维持剂量。

如本领域技术人员已知的，施用任何治疗剂可能导致副作用和/或毒性。在一些情况下，副作用和/或毒性如此严重，以至阻止以治疗有效剂量施用特定剂。在一些情况下，药物治疗必须停止，并且可以尝试其他剂。然而，相同治疗类别中的许多剂经常显示类似的副作用和/或毒性，这意味着患者或者必须停止治疗，或者如果可能的话，遭受与治疗剂相关的令人不快的副作用。

本发明提供了治疗受试者中的癌症的方法，其包括使用用于施用两种或更多种试剂的施用策略，其可以减少与施用Wnt途径抑制剂和/或有丝分裂抑制剂相关的副作用和/或毒性。在一些实施方案中，用于治疗人受试者中的癌症的方法包括向受试者施用治疗有效剂量的Wnt途径抑制剂与治疗有效剂量的有丝分裂抑制剂的组合，其中这些抑制剂中的一者或两者都根据间歇给药策略施用。在一些实施方案中，间歇给药策略包括向受试者施用初始剂量的Wnt途径抑制剂，并且约每2周施用一次后续剂量的Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，间歇给药策略包括向受试者施用初始剂量的Wnt途径抑制剂，并且约每3周施用一次后续剂量的Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，间歇给药策略包括向受试者施用初始剂量的Wnt途径抑制剂，并且约每4周施用一次后续剂量的Wnt途径抑制剂。在一些实施方案中，使用间歇给药策略施用Wnt途径抑制剂，并且有丝分裂抑制剂每周施用或在4周周期的3周，每周施用。

使用两种或更多种治疗剂的组合治疗通常使用通过不同作用机理起作用的剂，尽管这不是必需的。使用具有不同作用机理的剂的组合治疗可导致加成或协同效应。组合治疗可允许每种剂的剂量低于在单一疗法中使用的剂量，从而减小毒性副作用和/或提高剂的治疗指数。组合治疗可以降低抗性癌细胞形成的可能性。在一些实施方案中，组合治疗包括影响(例如，抑制或杀死)非致瘤性细胞的治疗剂和影响(例如，抑制或杀死)致瘤性CSCs的治疗剂。

在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合产生加和或协同结果。在一些实施方案中，组合治疗导致Wnt途径抑制剂的治疗指数的提高。在一些实施方案中，组合治疗导致有丝分裂抑制剂的治疗指数的提高。在一些实施方案中，组合治疗导致Wnt途径抑制剂的毒性和/或副作用的降低。在一些实施方案中，组合治疗导致有丝分裂抑制剂的毒性和/或副作用的降低。

治疗医师可以基于测得的停留时间和药物在体液或组织中的浓度来估计给药的重复率。治疗的进展可以通过常规技术和测定来监测。

在某些实施方案中，除了施用Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂的组合外，治疗方法还可以包括在施用Wnt途径抑制剂之前、同时和/或之后施用至少一种另外的治疗剂和/或有丝分裂抑制剂。

在一些实施方案中，另外的治疗剂将与Wnt途径抑制剂或有丝分裂抑制剂基本上同时或同时施用。例如，受试者可以服用Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂，同时经历用另外的治疗剂(例如，另外的化疗剂)进行的治疗过程。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂将在用另外的治疗剂治疗1年内施用。在某些替代性实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂将在使用另外的治疗剂的任何治疗的10个月、8个月、6个月、4个月或2个月内施用。在某些其他实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂将在使用另外的治疗剂进行的任何治疗的4周、3周、2周或1周内施用。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂将在使用另外的治疗剂进行的任何治疗的5天、4天、3天、2天、或1天内施用。还应理解，所述剂或治疗可以在利用Wnt途径抑制剂或有丝分裂抑制剂的几小时或几分钟(即，基本上同时)的时间内向受试者施用。

有用的另外的治疗(例如抗癌)剂类别包括例如耳抑素(auristatins)、DNA次要凹槽结合剂、DNA复制抑制剂、烷化剂(例如铂复合物，诸如顺铂(cis-platin)、单(铂)、二(铂)及三核铂复合物及卡铂(carboplatin))、蒽环类(anthracycline)、抗生素、抗叶酸剂、抗代谢物、化学疗法致敏剂、双联霉素(duocarmycin)、依托泊苷(etoposide)、氟化嘧啶、离子载体、莱克西托素(lexitropsin)、亚硝基尿素、普拉汀诺(platinol)、嘌呤抗代谢物、嘌呤霉素(puromycin)、放射线致敏剂、类固醇、拓扑异构酶抑制剂、或类似物。在某些实施方案中，另外的治疗剂是抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂或血管生成抑制剂。

可与Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂组合施用的治疗剂包括化疗剂。因此，在一些实施方案中，该方法或治疗涉及施用Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂与化疗剂或多种不同化疗剂的鸡尾酒(cocktail)的组合。利用Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂进行的治疗可发生于施用化疗剂之前、同时或之后。本发明考虑的化疗剂包括本领域已知的并且可商购的化学物质或药物，例如吉西他滨(gemcitabine)，伊立替康(irinotecan)，多柔比星(doxorubicin)，5-氟尿嘧啶，阿糖胞苷(“Ara-C”)，环磷酰胺(cyclophosphamide)，噻替派(thiotepa)，白消安(busulfan)，细胞毒素，甲氨蝶呤，顺铂，霉法兰(melphalan)和卡铂。组合施用可包括于单一医药制剂中共同施用或利用分开的制剂共同施用，或以任何顺序连续施用但通常在一段期间内以使所有活性剂可同步发挥它们的生物活性。这样的化疗剂的准备及给药计划可根据制造商的说明使用或由经验丰富的医生凭经验决定。这样的化学治疗的准备及给药计划亦描述于Chemotherapy Service,1992,M.C.Perry,Editor,Williams&Wilkins,Baltimore,MD中。

可用于本发明所述的方法中的化疗剂包括但不限于：烷化剂，诸如噻替派(thiotepa)及环磷酰胺(cyclophosphamide)；烷基磺酸盐，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，诸如苯多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、甲基优瑞多巴(meturedopa)及优瑞多巴(uredopa)；乙烯亚胺(ethylenimines)及甲基三聚氰胺(methylamelamines)，包括阿草特胺(altretamine)、三亚乙基三聚氰胺(triethylenemelamine)、三乙烯磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙烯硫磷酰胺(triethylenethiophosphaoramide)及三羟甲基三聚氰胺(trimethylolomelamime)；氮芥子气，诸如氯芥苯丁酸(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌二醇氮芥(estramustine)、异环磷酸胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、霉法兰(melphalan)、新氮芥(novembichin)、胆甾醇苯乙酸氮芥(phenesterine)、松龙苯芥(prednimustine)、氯乙环磷酰胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥(uracil mustard)；亚硝基脲(nitrosourea)，诸如卡氮芥(carmustine)、吡葡亚硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、罗氮芥(lomustine)、尼氮芥(nimustine)、雷诺氮芥(ranimustine)；抗生素，诸如阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(anthramycin)、氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡利奇霉素(calicheamicin)、卡拉比辛(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、达克霉素(dactinomycin)、正定霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)、表阿霉素(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycins)、霉酚酸、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、波弗霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链霉黑素(streptonigrin)、链脲佐菌素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、鸟苯美司(ubenimex)、新制癌菌素(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢剂，诸如甲胺喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲胺喋呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲蝶呤(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-硫唑脲嘧啶(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄性素，诸如卡鲁睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、硫雄甾醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪内酮(testolactone)；抗肾上腺剂，诸如胺鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基酮戊酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；贝斯特氮芥(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatrexate)；地弗胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾弗米素(elformithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲；香菇糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK；雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺(2,2’,2”-trichlorotriethylamine)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加塞拖素(gacytosine)；阿拉伯糖苷(Ara-C)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；噻替派(thiotepa)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)及卡铂(carboplatin)；铂(platinum)；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；丝裂霉素C；米托蒽醌(mitoxantrone)；米托蒽醌(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；道诺霉素(daunomycin)；胺喋呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃斯培拉霉素(esperamicin)；卡培他滨(capecitabine)及上述任一剂的医药上可接受的盐、酸或衍生物。化疗剂还包括用来调节或抑制荷尔蒙对肿瘤的作用的抗荷尔蒙剂，诸如抗雌激素剂，包括例如它莫西芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制剂4(5)-咪唑、4-羟基它莫西芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene)；及抗雄性素剂诸如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、柳普林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；及上述任一剂的医药上可接受的盐、酸或衍生物。

在某些实施方案中，该化疗剂是拓扑异构酶抑制剂。拓扑异构酶抑制剂是干扰拓扑异构酶(例如拓扑异构酶I或II)的活性的化疗剂。拓扑异构酶抑制剂包括但不限于盐酸多柔比星(doxorubicin HCl)、柠檬酸正定霉素(daunorubicin citrate)、盐酸米托蒽醌(mitoxantrone HCl)、放线菌素D、依托泊苷(etoposide)、盐酸拓扑替康(topotecan HCl)、替尼泊苷(teniposide)(VM-26)及伊立替康(irinotecan)。

在某些实施方案中，该化疗剂是抗代谢剂。抗代谢剂是化学物质，其结构类似正常生化反应所需的代谢物，但仍有足够的不同处以干扰一或多种细胞正常功能，诸如细胞分裂。抗代谢剂包括但不限于吉西他滨(gemcitabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、卡培他滨(capecitabine)、甲胺喋呤钠、雷替曲塞(ralitrexed)、培美曲塞(pemetrexed)、替加氟(tegafur)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、硫鸟嘌呤、5-氮杂胞苷、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、6-硫鸟嘌呤、喷司他丁(pentostatin)、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)及克拉屈滨(cladribine)，以及这些剂中的任一剂的医药上可接受的盐、酸或衍生物。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂组合吉西他滨使用。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂组合吉西他滨使用以用于治疗胰腺癌，其中Wnt途径抑制剂是OMP-18R5，有丝分裂抑制剂是紫杉醇或白蛋白结合型紫杉醇(ABRAXANE)。

在一些实施方案中，治疗可以包括施用一种或多种细胞因子(例如，淋巴因子、白细胞介素、肿瘤坏死因子和/或生长因子)，或者可以伴随手术切除肿瘤或癌细胞或治疗医师认为必要的任何其他治疗。

在某些实施方案中，治疗包括施用Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂与放射治疗的组合。用Wnt途径抑制剂和有丝分裂抑制剂的治疗可以在施用放射治疗之前、同时或之后进行。这种放射治疗的给药方案可以由技术人员确定。

III Wnt途径抑制剂

本发明提供了包含本文所述的Wnt途径抑制剂的方法，该Wnt途径抑制剂用于抑制肿瘤生长，减小肿瘤尺寸或治疗癌症，特别是与有丝分裂抑制剂组合进行。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂组合按有序的或交错的给药方案使用，其中Wnt途径抑制剂在施用有丝分裂抑制剂之前施用。

在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是结合Wnt途径的一种或多种可溶性胞外组分的药剂。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是结合Wnt途径的膜结合组分的一个或多个胞外区的试剂。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是直接调节Wnt途径的一种或多种可溶性胞外组分的试剂。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是直接调节Wnt途径的膜结合组分的一个或多个细胞外区的试剂。

在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是结合一种或多种人卷曲(FZD)蛋白的药剂。这些试剂在本文中称为“FZD结合剂”。在一些实施方案中，FZD结合剂特异性结合一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、或十种FZD蛋白。在一些实施方案中，FZD结合剂结合选自FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9和FZD10中的一种或多种FZD蛋白。在某些实施方案中，FZD结合剂结合一种、两种、三种、四种、五种或更多种FZD蛋白。在一些实施方案中，FZD结合剂特异性结合选自FZD1、FZD2、FZD5、FZD7和FZD8中的一种、两种、三种、四种或五种FZD蛋白。在一些实施方案中，FZD结合剂与一或多种FZD蛋白结合，该一或多种FZD蛋白包含FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、以及/或FZD8。在某些实施方案中，该FZD结合剂与FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、及FZD8特异性结合。FZD结合剂的非限制性实例可见于美国专利第7,982,013号。

在某些实施方案中，该FZD结合剂是FZD拮抗剂。在某些实施方案中，该FZD结合剂是Wnt途径拮抗剂。在某些实施方案中，该FZD结合剂抑制Wnt信号传导。在一些实施方案中，该FZD结合剂抑制典型Wnt信号传导。在一些实施方案中，FZD结合剂抑制自分泌Wnt信号传导。在一些实施方案中，FZD结合剂抑制有丝分裂Wnt信号传导。

在一些实施方案中，该FZD结合剂是抗体。在一些实施方案中，该FZD结合剂是多肽。在某些实施方案中，该FZD结合剂是包含抗原结合部位的抗体或多肽。在某些实施方案中，本文所述的FZD结合抗体或多肽的抗原结合部位能与一、二、三、四、五、或更多种人FZD蛋白结合。在某些实施方案中，该FZD结合抗体或多肽的抗原结合部位能与选自FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9及FZD10中的一、二、三、四、或五种人FZD蛋白特异性结合。在一些实施方案中，当该FZD结合剂是与超过一种FZD蛋白特异性结合的抗体时，其可能被称为“泛FZD抗体”。

在某些实施方案中，该FZD结合剂(例如抗体)与其所结合的一或多种人FZD蛋白的胞外域(ECD)特异性结合。在某些实施方案中，该FZD结合剂在其所结合的人FZD蛋白的Fri结构域(亦称为多半胱氨酸区(CRD))特异性结合。各种人FZD蛋白的Fri结构域的序列是该领域已知的，且提供为SEQ ID NO:13(FZD1)、SEQ ID NO:14(FZD2)、SEQ ID NO:15(FZD3)、SEQ ID NO:16(FZD4)、SEQ ID NO:17(FZD5)、SEQ ID NO:18(FZD6)、SEQ ID NO:19(FZD7)、SEQ ID NO:20(FZD8)、SEQ ID NO:21(FZD8)、SEQ ID NO:22(FZD9)、及SEQ ID NO:23(FZD10)。

在一些实施方案中，该FZD结合剂以大约1μM或更低、大约100nM或更低、大约40nM或更低、大约20nM或更低、大约10nM或更低、大约1nM或更低、或大约0.1nM或更低的解离常数(K_D)与至少一种人FZD蛋白结合。在一些实施方案中，FZD结合剂以大约1nM或更低的K_D与至少一种FZD蛋白结合。在一些实施方案中，FZD结合剂以大约0.1nM或更低的K_D与至少一种FZD蛋白结合。在某些实施方案中，FZD结合剂以约40nM或更低的K_D与FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、及FZD8中的一或多种(例如1、2、3、4、或5种)中的每种结合。在某些实施方案中，该FZD结合剂以约10nM或更低的K_D与FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、及FZD8中的一或多种中的每种结合。在某些实施方案中，该FZD结合剂以约10nM的K_D与FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、及FZD8中的每种结合。在一些实施方案中，该结合剂(例如抗体)与FZD蛋白的K_D是利用固定于Biacore芯片上的FZD-Fc融合蛋白测得的K_D，该FZD-Fc融合蛋白包含至少部分的FZD胞外域或FZD-Fri结构域。

在某些实施方案中，该FZD结合剂以约1μM或更低、约100nM或更低、约40nM或更低、约20nM或更低、约10nM或更低、或约1nM或更低的EC₅₀与一或多种(例如二或更多种、三或更多种、或四或更多种)人FZD蛋白结合。在某些实施方案中，FZD结合剂以约40nM或更低、约20nM或更低、或约10nM或更低的EC₅₀与超过一种FZD蛋白结合。在某些实施方案中，该FZD结合剂对下列FZD蛋白中的一或多种(例如1、2、3、4、或5种)具有约20nM或更低的EC₅₀：FZD1、FZD2、FZD5、FZD7及FZD8。在某些实施方案中，该FZD结合剂对下列FZD蛋白中的一或多种(例如1、2、3、4、或5种)具有约10nM或更低的EC₅₀：FZD1、FZD2、FZD5、FZD7及FZD8。在某些实施方案中，该FZD结合剂在与FZD5以及/或FZD8结合方面具有约40nM或更低或20nM或更低的EC₅₀。

在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是FZD结合剂，该FZD结合剂是抗体。在一些实施方案中，该抗体是重组抗体。在一些实施方案中，该抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，该抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，该抗体是人化抗体。在一些实施方案中，该抗体是人抗体。在某些实施方案中，该抗体是IgG1抗体。在某些实施方案中，该抗体是IgG2抗体。在某些实施方案中，该抗体是包含抗原结合部位的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体是单价、单特异性、双价、双特异性、或多特异性的。在一些实施方案中，该抗体是与细胞毒性部分缀合的。在一些实施方案中，该抗体是经分离的。在一些实施方案中，该抗体实质上是纯的。

FZD结合剂(例如抗体)的特异性结合可使用该领域已知的任何方法检测。可使用的免疫检测包括但不限于竞争性及非竞争性检测系统，这样的系统利用诸如Biacore分析、FACS分析、免疫荧光、免疫细胞化学、西方墨点分析(Western blot analysis)、放射性免疫测定、ELISA、“三明治式”免疫测定、免疫沉淀分析、沉淀反应、胶体扩散沉淀反应、免疫扩散分析、凝集测定、补体固定测定、免疫放射分析、荧光免疫分析及蛋白质A免疫分析之类的技术。这样的检测是例行性检测且为该领域中所公知(参见例如Ausubel et al.,Editors,1994-present,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.,New York,NY)。

例如，剂与人FZD蛋白的特异性结合可利用ELISA测定。ELISA测定包含准备抗原(例如FZD蛋白或其片段)，以抗原包覆96孔微量滴定板的孔槽，添加与可检测的化合物诸如酶底物(例如辣根过氧化酶或碱性磷酸酶)缀合的FZD结合剂(例如抗体)至孔槽，培养一段时间后，检测与该抗原结合的FZD结合剂的存在。在一些实施方式中，该FZD结合剂不与可检测的化合物缀合，而是将缀合到识别该FZD结合剂或抗体的第二抗体加入孔槽中。在一些实施方式中，不以抗原包覆孔槽，反而是以FZD结合剂包覆孔槽，并于添加抗原至该经包覆的孔槽后加入与可检测的化合物缀合的第二抗体。本领域技术人员将知道可经修改以增加所检测的信号的参数以及可使用的ELISA的其他变量。

在另一实例中，剂与人FZD蛋白的特异性结合可利用FACS测定。FACS筛选测定可包含产生cDNA构建物以表达抗原为融合蛋白(例如FZD-CD4TM融合蛋白)，将该构建物转染至细胞中，使该抗原表达在细胞表面，使该FZD结合剂与该经转染的细胞混合，并培养一段时间。被FZD结合剂结合的细胞，可利用与可检测的化合物缀合的二级抗体(例如PE缀合抗Fc抗体)及流式细胞分析识别。本领域技术人员将知道可经修改以优化经检测的信号的参数以及其他可增进筛选(例如筛选阻断抗体)的FACS变数。

FZD结合剂与抗原(例如FZD蛋白)的结合亲和性，及结合剂-抗原交互反应的解离速率，可通过竞争性结合测定决定。竞争性结合测定的一实例，即放射性免疫测定，其包含在渐增量的未经标记的抗原存在下，培养经标记的抗原(例如用³H或¹²⁵I标记的FZD蛋白)或其片段或变异体与感兴趣的结合剂，之后检测与该经标记的抗原结合的剂。该剂对抗原的亲和性及结合解离速率可由斯卡查德(Scatchard)图分析的数据决定。在一些实施方式中，Biacore动力学分析用于测定FZD结合剂的结合及解离速率。Biacore动力学分析包含分析抗体与芯片表面上经固定的FZD结合剂的结合及解离。

在某些实施方案中，本文所述的方法包含Wnt途径抑制剂，其是特异性结合至少一种人FZD蛋白的抗体。在一些实施方案中，该抗体特异性结合选自FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9和FZD10中的至少一种人FZD蛋白。在一些实施方案中，该抗体特异性结合选自FZD1、FZD2、FZD5、FZD7和FZD8中的至少一种人FZD蛋白。在一些实施方案中，抗体包含重链CDR1、重链CDR2、及重链CDR3，该重链CDR1包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)，该重链CDR2包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)，且该重链CDR3包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)。在一些实施方案中，该抗体还包含轻链CDR1、轻链CDR2、及轻链CDR3，该轻链CDR1包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)，该轻链CDR2包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)，且该轻链CDR3包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，该抗体包含：包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1、包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2、及包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3。在某些实施方案中，该抗体包含：(a)包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)的重链CDR1、包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)的重链CDR2、及包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)的重链CDR3，及(b)包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1、包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2、及包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3。

在某些实施方案中，本发明所描述的方法包含属于抗体的FZD结合剂，其包含：(a)包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)的重链CDR1，或其包含1、2、3、或4个氨基酸取代的变异体；(b)包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)的重链CDR2，或其包含1、2、3、或4个氨基酸取代的变异体；(c)包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)的重链CDR3，或其包含1、2、3、或4个氨基酸取代的变异体；(d)包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1，或其包含1、2、3、或4个氨基酸取代的变异体；(e)包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2，或其包含1、2、3、或4个氨基酸取代的变异体；及(f)包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3，或其包含1、2、3、或4个氨基酸取代的变异体。在某些实施方案中，该氨基酸取代是保守性取代。

在某些实施方案中，本发明所描述的方法包含属于抗体的FZD结合剂，其包含重链可变区和/或轻链可变区，该重链可变区与SEQ ID NO:5具有至少约80％序列一致性，该轻链可变区与SEQ ID NO:6具有至少80％序列一致性。在某些实施方案中，该抗体包含与SEQ ID NO:5具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、或至少约99％序列一致性的重链可变区。在某些实施方案中，该抗体包含与SEQ ID NO:6具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、或至少约99％序列一致性的轻链可变区。在某些实施方案中，该抗体包含与SEQ ID NO:5具有至少约95％序列一致性的重链可变区，和/或与SEQ ID NO:6具有至少约95％序列一致性的轻链可变区。在某些实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:5的重链可变区，和/或包含SEQ ID NO:6的轻链可变区。在某些实施方案中，该抗体包含：实质上由SEQ ID NO:5组成的重链可变区及实质上由SEQ ID NO:6组成的轻链可变区。

在某些实施方案中，本发明所述的方法包含属于抗体的FZD结合剂，该抗体包含：(a)与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3具有至少90％序列一致性的重链；以及/或(b)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4具有至少90％序列一致性的轻链。在一些实施方案中，该抗体包含：(a)与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3具有至少95％序列一致性的重链；以及/或(b)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4具有至少95％序列一致性的轻链。在一些实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的重链，和/或包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的轻链。在一些实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列20-463的重链及包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列20-232的轻链。在一些实施方案中，该抗体包含：包含SEQ ID NO:3的重链和包含SEQ ID NO:4的轻链。在一些实施方案中，该抗体包含：实质上由SEQ ID NO:1的氨基酸20至463所组成的重链及实质上由SEQ ID NO:2的氨基酸20至232所组成的轻链。在一些实施方案中，该抗体包含：实质上由SEQ ID NO:3组成的重链及实质上由SEQ ID NO:4组成的轻链。

在某些实施方案中，本发明所述的方法包含Wnt途径抑制剂，其是与FZD1、FZD2、FZD5、FZD7以及/或FZD8中的至少一者特异性结合的FZD结合剂(例如抗体)，其中该FZD结合剂(例如抗体)包含抗体OMP-18R5的一、二、三、四、五、以及/或六个CDR。抗体OMP-18R5(亦称为凡地吐单抗(vantictumab))，以及其他FZD结合剂，已于美国专利第7,982,013号中先行描述。编码该18R5IgG2抗体的重链及轻链的DNA，依照布达佩斯条约的规定，于2008年9月29日以ATCC编号PTA-9541保藏于美国菌种保藏中心。在一些实施方案中，该FZD结合剂包含OMP-18R5的1或多个CDR、OMP-18R5的2或更多个CDR、OMP-18R5的3或更多个CDR、OMP-18R5的4或更多个CDR、OMP-18R5的5或更多个CDR、或OMP-18R5的所有6个CDR。

在一些实施方案中，本发明所述的方法包含属于Wnt途径抑制剂的多肽。这样的多肽包括但不限于与人FZD蛋白或其片段特异性结合的抗体。在一些实施方案中，多肽与选自下列项中的一或多种FZD蛋白或其片段结合：FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、及FZD10。在一些实施方案中，多肽与FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、以及/或FZD8结合。在一些实施方案中，多肽与FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、及FZD8结合。

在某些实施方案中，多肽包含抗体OMP-18R5的一、二、三、四、五、以及/或六个CDR。在一些实施方案中，多肽包含其中每个CDR有最多达四个(即0、1、2、3、或4个)氨基酸取代的CDR。在某些实施方案中，该重链CDR被包含于重链可变区之内。在某些实施方案中，该轻链CDR被包含于轻链可变区之内。

在一些实施方案中，本发明所述的方法包含与一或多种人FZD蛋白特异性结合的多肽，其中该多肽包含与SEQ ID NO:5具有至少约80％序列一致性的氨基酸序列，和/或与SEQ ID NO:6具有至少约80％序列一致性的氨基酸序列。在某些实施方案中，该多肽包含与SEQ ID NO:5具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、或至少约99％序列一致性的氨基酸序列。在某些实施方案中，该多肽包含与SEQ ID NO:6具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、或至少约99％序列一致性的氨基酸序列。在某些实施方案中，该多肽包含与SEQ ID NO:5具有至少约95％序列一致性的氨基酸序列，和/或与SEQ ID NO:6具有至少约95％序列一致性的氨基酸序列。在某些实施方案中，该多肽包含：包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，和/或包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。

在一些实施方案中，FZD结合剂包含多肽，该多肽包含选自下列项中的序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、及SEQ ID NO:6。

在某些实施方案中，FZD结合剂包含OMP-18R5抗体的重链可变区及轻链可变区。在某些实施方案中，FZD结合剂包含(有或无前导序列的)OMP-18R5抗体的重链及轻链。

在某些实施方案中，FZD结合剂包含抗体OMP-18R5(凡地吐单抗)、实质上由抗体OMP-18R5(凡地吐单抗)组成、或由抗体OMP-18R5(凡地吐单抗)组成。

在某些实施方案中，FZD结合剂(例如抗体)与包含下列项的抗体竞争与一或多种人FZD蛋白的特异性结合：包含SEQ ID NO:5的重链可变区及包含SEQ ID NO:6的轻链可变区。在某些实施方案中，FZD结合剂(例如抗体)与包含下列项的抗体竞争与一或多种人FZD蛋白的特异性结合：包含SEQ ID NO:1(有或无信号序列)的重链及包含SEQ ID NO:2(有或无信号序列)的轻链可变区。在某些实施方案中，FZD结合剂(例如抗体)与包含下列项的抗体竞争与一或多种人FZD蛋白的特异性结合：包含SEQ ID NO:3的重链及包含SEQ ID NO:4的轻链可变区。在某些实施方案中，FZD结合剂与抗体OMP-18R5竞争与一或多种人FZD蛋白的特异性结合。在一些实施方案中，FZD结合剂或抗体与抗体OMP-18R5于试管内竞争性结合测定中竞争与一或多种人FZD蛋白的特异性结合。

在某些实施方案中，FZD结合剂(例如抗体)与一或多种人FZD蛋白上由本发明的抗体所结合的表位相同的表位或实质上相同的表位结合。在另一实施方案中，FZD结合剂是与一或多种人FZD蛋白上的表位结合的抗体，该表位与由本发明的抗体所结合的FZD蛋白上的表位重叠。在某些实施方案中，FZD结合剂(例如抗体)与一或多种FZD蛋白上由抗体OMP-18R5所结合的表位相同的表位或实质上相同的表位结合。在另一实施方案中，该FZD结合剂是与一或多种人FZD蛋白上的表位结合的抗体，该表位与由抗体OMP-18R5所结合的FZD蛋白上的表位重叠。

在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是与一或多种人Wnt蛋白结合的剂。这些剂在这里称作“Wnt结合剂”。在某些实施方案中，这样的剂与一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、或更多种Wnt蛋白特异性结合。在一些实施方案中，该Wnt结合剂与一或多种选自下列项中的人Wnt蛋白结合：Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、及Wnt16。在某些实施方案中，Wnt结合剂与一或多种(或二或更多种、三或更多种、四或更多种、五或更多种、等)选自下列项中的Wnt蛋白结合：Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt10a、及Wnt10b。在某些实施方案中，该一或多种(或二或更多种、三或更多种、四或更多种、五或更多种、等)Wnt蛋白是选自：Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt8a、Wnt8b、Wnt10a、及Wnt10b。

在某些实施方案中，该Wnt结合剂是Wnt拮抗剂。在某些实施方案中，该Wnt结合剂是Wnt途径拮抗剂。在某些实施方案中，该Wnt结合剂抑制Wnt信号传导。在一些实施方案中，该Wnt结合剂抑制典型Wnt信号传导。在一些实施方案中，Wnt结合剂抑制自分泌Wnt信号传导。在一些实施方案中，Wnt结合剂抑制有丝分裂Wnt信号传导。

在某些实施方案中，该Wnt结合剂以约1μM或更低、约100nM或更低、约40nM或更低、约20nM或更低、或约10nM或更低的K_D与一或多种(例如二或多种、三或多种、或四或多种)Wnt蛋白结合。举例来说，在某些实施方案中，本文所述的与超过一种Wnt蛋白结合的Wnt结合剂，以约100nM或更低、约20nM或更低、或约10nM或更低的K_D与该些Wnt蛋白结合。在某些实施方案中，该Wnt结合剂以约40nM或更低的K_D与一或多种(例如1、2、3、4、或5种)Wnt蛋白中的每一种结合，其中这样的Wnt蛋白是选自：Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt10a及Wnt10b。在一些实施方案中，该结合剂(例如抗体)与Wnt蛋白的K_D是利用固定于Biacore芯片上的包含至少部分的Wnt C端多半胱氨酸区的Wnt融合蛋白测得的K_D。

在某些实施方案中，该Wnt结合剂以约1μM或更低、约100nM或更低、约40nM或更低、约20nM或更低、约10nM或更低、或约1nM或更低的EC₅₀与一或多种(例如二或多种、三或多种、或四或多种)人Wnt蛋白结合。在某些实施方案中，Wnt结合剂以约40nM或更低、约20nM或更低、或约10nM或更低的EC₅₀与超过一种Wnt结合。在某些实施方案中，该Wnt结合剂相对于Wnt蛋白Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、以及/或Wnt16中的一或多种(例如1、2、3、4、或5种)具有约20nM或更低的EC₅₀。在某些实施方案中，该Wnt结合剂相对于下列Wnt蛋白中的一或多种(例如1、2、3、4、或5种)具有约10nM或更低的EC₅₀：Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt8a、Wnt8b、Wnt10a、以及/或Wnt10b。

在本发明的方法中使用的Wnt结合剂(例如抗体或可溶性受体)的特异性结合可使用该领域已知的任何方法检测。可使用的免疫检测包括但不限于竞争性及非竞争性检测系统，这样的系统利用诸如Biacore分析、FACS分析、免疫荧光、免疫细胞化学、西方墨点分析(Western blot analysis)、放射性免疫测定、ELISA、“三明治式”免疫测定、免疫沉淀分析、沉淀反应、胶体扩散沉淀反应、免疫扩散分析、凝集测定、补体固定测定、免疫放射分析、荧光免疫分析及蛋白质A免疫分析之类的技术。这样的检测是例行性检测且为该领域中所公知(参见例如Ausubel et al.,Editors,1994-present,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.,New York,NY)。

例如，Wnt结合剂与人Wnt蛋白的特异性结合可利用ELISA测定。ELISA测定包含准备抗原(例如Wnt蛋白或其片段)，以抗原包覆96孔微量滴定板的孔槽，添加与可检测的化合物诸如酶底物(例如辣根过氧化酶或碱性磷酸酶)缀合的Wnt结合剂(例如抗体)至孔槽，培养一段时间后，检测与该抗原结合的Wnt结合剂的存在。在一些实施方式中，该Wnt结合剂不与可检测的化合物缀合，而是将缀合到识别该Wnt结合剂的第二抗体加入孔槽中。在一些实施方式中，不以抗原包覆孔槽，反而是以Wnt结合剂包覆孔槽，并于添加抗原至该经包覆的孔槽后加入与可检测的化合物缀合的第二抗体。本领域技术人员将知道可经修改以增加所检测的信号的参数以及可使用的ELISA的其他变量。

在另一实例中，Wnt结合剂与人Wnt蛋白的特异性结合可利用FACS测定。FACS筛选测定可包含产生cDNA构建物以表达抗原为融合蛋白，将该构建物转染至细胞中，使该抗原表达在细胞表面，使该Wnt结合剂与该经转染的细胞混合，并培养一段时间。被Wnt结合剂结合的细胞，可通过利用与可检测的化合物缀合的二级抗体(例如PE缀合抗Fc抗体)及流式细胞分析识别。本领域技术人员将知道可经修改以优化经检测的信号的参数以及其他可增进筛选的FACS变数。

Wnt结合剂与抗原(例如Wnt蛋白)的结合亲和性，及结合剂-抗原交互反应的解离速率，可通过例如上文针对FZD结合剂所描述的那些竞争性结合测定决定。

在某些实施方案中，该Wnt结合剂是可溶性受体。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在某些实施方案中，该可溶性受体包含FZD受体蛋白的胞外结构域。在一些实施方案中，该可溶性受体包含FZD蛋白的Fri结构域。在一些实施方案中，包含FZD Fri结构域的可溶性受体相较于包含该完整FZD胞外结构域的可溶性受体可显示改变的生物活性(例如增加蛋白半衰期)。蛋白半衰期可进一步通过聚乙二醇(PEG)或聚氧乙烯(PEO)的共价修饰延长。在某些实施方案中，该FZD蛋白是人FZD蛋白。在某些实施方案中，该人FZD蛋白是FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9或FZD10。可溶性FZD受体的非限制性实例可见于美国专利No.7,723,477及7,947,277及国际公布WO 2011/088123中。

人FZD 1至10蛋白中的每一种的预测Fri结构域被提供为SEQ ID NO:13至23。本领域技术人员对于对应各种Fri结构域的确切氨基酸的了解可能互异。因此，上述及本文所述的结构域的N端和/或C端可延长或缩短1、2、3、4、5、6、7、8、9、或甚至10个氨基酸。

在某些实施方案中，该可溶性受体包含与一或多种人Wnt蛋白结合的人FZD蛋白的Fri结构域，或该Fri结构域的片段或变异体。在某些实施方案中，该人FZD蛋白是FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、或FZD10。在某些实施方案中，该人FZD蛋白是FZD8。在某些实施方案中，该FZD蛋白是FZD8且该Wnt结合剂包含SEQ ID NO:20。在某些实施方案中，该FZD蛋白是FZD8且该Wnt结合剂包含SEQ ID NO:21。

在一些实施方案中，该可溶性受体包含Fri结构域，该Fri结构域实质上由FZD1的Fri结构域、FZD2的Fri结构域、FZD3的Fri结构域、FZD4的Fri结构域、FZD5的Fri结构域、FZD6的Fri结构域、FZD7的Fri结构域、FZD8的Fri结构域、FZD9的Fri结构域、或FZD10的Fri结构域组成。在一些实施方案中，该可溶性受体包含实质上由FZD8的Fri结构域组成的Fri结构域。

在一些实施方案中，该可溶性受体包含选自下列项中的序列：SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22,和SEQ ID NO:23。在一些实施方案中，该可溶性受体包含包含SEQ ID NO:20的Fri结构域。在一些实施方案中，该可溶性受体包含包含SEQ ID NO:21的Fri结构域。在一些实施方案中，该可溶性受体包含实质上由SEQ ID NO:20组成的Fri结构域。在一些实施方案中，该可溶性受体包含实质上由SEQ ID NO:21组成的Fri结构域。

在某些实施方案中，该可溶性受体包含前述FZD Fri结构域序列中的任一者的变异体，其包含一或多个(例如一、二、三、四、五、六、七、八、九、十个、等)保守性取代且能与Wnt蛋白结合。

在某些实施方案中，该可溶性受体(例如包含人FZD受体的Fri结构域的剂)还包含非FZD(例如，异源)多肽。在一些实施方案中，可溶性受体可包括与其他非FZD功能性及结构性多肽连接的FZD ECD或Fri结构域，这样的非FZD功能性及结构性多肽包括但不限于人Fc区、至少一个蛋白标签(例如myc、FLAG、GST、GFP)、其他内源性蛋白或蛋白片段，或包含在FZD ECD或Fri结构域与第二多肽之间的任何接头区的任何其他可用的蛋白序列。在某些实施方案中，该非FZD多肽包含人Fc区。该Fc区可自任一类型的免疫球蛋白如IgG、IgA、IgM、IgD及IgE获得。在一些实施方案中，该Fc区是人IgG1Fc区。在一些实施方案中，该Fc区是人IgG2Fc区。在一些实施方案中，该Fc区是野生型Fc区。在一些实施方案中，该Fc区是突变Fc区。在一些实施方案中，该Fc区的N端是经截短1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的(例如在铰链结构域)。在一些实施方案中，在铰链结构域的氨基酸被改变以阻止非所期望的双硫键形成。在一些实施方案中，半胱氨酸是经丝氨酸取代以阻碍非所期望的双硫键形成。在一些实施方案中，该Fc区的C端被截短1、2、3、或更多个氨基酸。在一些实施方案中，该Fc区的C端被截短1个氨基酸。在某些实施方案中，该非FZD多肽包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27或SEQ ID NO:28。在某些实施方案中，该非FZD多肽包含SEQ ID NO:27。在某些实施方案中，该非FZD多肽实质上由SEQ ID NO:27组成。

在某些实施方案中，可溶性受体是包含FZD受体的至少一最小Fri结构域与Fc区的融合蛋白。此处所使用的“融合蛋白”是由包含至少二种基因的核苷酸序列的核酸分子表达的杂合蛋白。在一些实施方案中，该第一多肽的C端与该免疫球蛋白Fc区的N端连接。在一些实施方案中，该第一多肽(例如FZD Fri结构域)与该Fc区直接相连(即不含中介肽接头)。在一些实施方案中，该第一多肽与该Fc区经由接头相连。

此处使用的用语“接头”是指插入第一多肽(例如FZD成分)与第二多肽(例如Fc区)之间的接头。在一些实施方案中，该接头是肽接头。接头不应不良影响该多肽的表达、分泌或生物活性。接头应不具抗原性且不应诱发免疫反应。适当的接头是本领域技术人员所公知的，且通常包括甘氨酸及丝氨酸残基的混合物，且通常包括无空间位阻的氨基酸。其他可被纳入于可用接头的氨基酸包括苏氨酸及丙氨酸残基。接头的长度范围可以是，例如1至50个氨基酸长度、1至22个氨基酸长度、1至10个氨基酸长度、1至5个氨基酸长度或1至3个氨基酸长度。本文所使用的接头是不包括来自该第一多肽(例如FZD Fri结构域)的C端或该第二多肽(例如Fc区)的N端的氨基酸残基的中介肽序列。

在一些实施方案中，该可溶性受体包含第一多肽和第二多肽，该第一多肽包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、或SEQ ID NO:23，该第二多肽包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28，其中该第一多肽是与该第二多肽直接连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:20的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:20的第一多肽及包含SEQ ID NO:27的第二多肽。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：实质上由SEQ ID NO:20组成的第一多肽及实质上由SEQ ID NO:27组成的第二多肽。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:21的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:21的第一多肽及包含SEQ ID NO:27的第二多肽。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:21的第一多肽及实质上由SEQ ID NO:27组成的第二多肽。

在一些实施方案中，该可溶性受体包含第一多肽及第二多肽，该第一多肽包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22,、或SEQ ID NO:23，该第二多肽包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:20的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:20的第一多肽及包含SEQ ID NO:27的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：实质上由SEQ ID NO:20组成的第一多肽及实质上由SEQ ID NO:27组成的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:21的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：包含SEQ ID NO:21的第一多肽及包含SEQ ID NO:27的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：实质上由SEQ ID NO:21组成的第一多肽及实质上由SEQ ID NO:27组成的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。

在一些实施方案中，该可溶性受体包含：与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、或SEQ ID NO:23具有至少95％一致性的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：与SEQ ID NO:20具有至少95％一致性的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：与SEQ ID NO:21具有至少95％一致性的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽。

在一些实施方案中，该可溶性受体包含：与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、或SEQ ID NO:23具有至少95％一致性的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：与SEQ ID NO:20具有至少95％一致性的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。在一些实施方案中，该可溶性受体包含：与SEQ ID NO:21具有至少95％一致性的第一多肽及包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、或SEQ ID NO:28的第二多肽，其中该第一多肽通过接头与该第二多肽连接。

FZD蛋白包含引导该蛋白运输的信号序列。信号序列(又称信号肽或前导序列)通常位于新生多肽的N端。它们引导该多肽至内质网且这样的蛋白被分类至彼等应该去的地方，例如胞器的内部空间、细胞内部的膜、细胞的外膜或经分泌至细胞外部。大部分信号序列在蛋白被运送至内质网后，通过信号肽酶从该蛋白切割。自该多肽切割该信号序列通常发生于氨基酸序列的特定位点，且取决于该信号序列内的氨基酸残基。虽然通常有一个特定的切割位点，但信号肽酶可能识别和/或使用一个以上的切割位点，导致该多肽不相同的N端。举例来说，使用信号序列内的不同的切割位点可导致具有不同N端氨基酸的多肽的表达。因此，在一些实施方案中，本文所述的多肽可能包含具有不同N端的多肽的混合物。在一些实施方案中，该N端的长度相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸。在一些实施方案中，该N端的长度相差1、2、3、4或5个氨基酸。在一些实施方案中，该多肽为实质上相同，即该多肽具有相同的N端。在一些实施方案中，该多肽的信号序列包含一或多个(例如一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、等等)氨基酸取代和/或删除。在一些实施方案中，该多肽的信号序列包含让一个切割位点变成主要切割位点的氨基酸取代和/或删除，由此导致具有一种N端的实质上相同的多肽。

在一些实施方案中，该可溶性受体包含选自下列项中的氨基酸序列：SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30。

在某些实施方案中，该可溶性受体包含SEQ ID NO:29的序列。在某些实施方案中，该可溶性受体包含SEQ ID NO:29的序列，该序列包含一或多个(例如一、二、三、四、五、六、七、八、九、十个、等等)保守性取代。在某些实施方案中，该可溶性受体包含与SEQ ID NO:29具有至少约90％、约95％、或约98％序列一致性的序列。在某些实施方案中，SEQ ID NO:29的变异体维持其与一或多种人Wnt蛋白结合的能力。

在某些实施方案中，Wnt结合剂是包含SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的序列。在一些实施方案中，多肽实质上由SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30组成。在某些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列。

在一些实施方案中，该多肽是实质上经纯化的包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的多肽。在某些实施方案中，该实质上经纯化的多肽是由至少90％的具有丙氨酸-丝氨酸-丙氨酸(ASA)的N端氨基酸序列的多肽所组成。在一些实施方案中，该新生多肽包含导致具有一N端序列的实质上均质多肽产物的信号序列。

在某些实施方案中，Wnt结合剂包含免疫球蛋白的Fc区。本领域技术人员应理解，本发明的某些结合剂将包含融合蛋白，相比于具有大约相同免疫原性的包含天然或未经改变的恒定区的融合蛋白，其中至少部分的Fc区是经删除或以其他方式改变，以提供所期望的生化特征，例如增加癌细胞定位、增加肿瘤穿透、减少血清半衰期、或增加血清半衰期。对Fc区的修饰可能包括添加、删除或取代一或多个结构域中的一或多个氨基酸。此处所公开的经修饰的融合蛋白可能包含对二个重链恒定结构域的一或多种(CH2或CH3)或对铰链区的改变或修饰。在其他实施方案中，整个CH2结构域可被移除(ΔCH2构建体)。在一些实施方案中，该遗漏的恒定区结构域是由短氨基酸间隔子(例如10个残基)取代，以提供通常由该遗漏恒定区结构域所授予的一些分子柔韧性。

在一些实施方案中，该经修饰的融合蛋白是经建构以直接连接CH3结构域与该铰链区。在其他实施方案中，肽间隔子被插入铰链区与经修饰的CH2和/或CH3结构域之间。举例来说，其中CH2结构域被删除且剩余的CH3结构域(经修饰或未经修饰)是以5至20个氨基酸间隔子与铰链区连接的构建体可被表达。该间隔子可被添加以确保恒定区的调节组件维持自由及可接近，或该铰链区维持柔性。然而，应注意氨基酸间隔子在一些情况中可能证实具有免疫原性，且诱发拮抗该构建体的非所期望的免疫反应。因此，在某些实施方案中，任何添加至构建体的间隔子将为相对非免疫原性，以维持该融合蛋白的所期望的生物性质。

在一些实施方案中，该经修饰的融合蛋白可能仅具有恒定结构域的部分删除或取代少数或甚至单一氨基酸。举例来说，在CH2结构域的选择区域中的单一氨基酸突变可能足以实质上减少Fc结合，因此增加癌细胞定位和/或肿瘤穿透。类似地，可能所期望的是单纯删除该一或多个恒定区结构域中控制特定效应功能(例如补体C1q结合)的部分。该恒定区的部分删除可增进该结合剂的选择特性(例如血清半衰期)，同时保留其他与该主题恒定区结构域完整有关的所期望的功能。另外，如上所述，该公开的融合蛋白的恒定区可经由一或多个氨基酸的突变或取代改性以增进该形成构建物的特性。在这方面可能扰乱由保守性结合位点所提供的活性(例如Fc结合)，同时实质上维持该经修饰的融合蛋白的构造及免疫原性特性。在某些实施方案中，该经修饰的融合蛋白包含添加一或多个氨基酸至恒定区以增进所期望的特征，诸如减少或增加效应功能，或提供更多细胞毒素或碳水化合物连接位点。

该领域已知的是恒定区介导数种效应功能。举例来说，补体的C1成分与(结合至抗原的)IgG或IgM抗体的Fc区的结合活化该补体系统。补体的活化于细胞病原体的调理作用及溶解中是重要的。补体的活化亦刺激发炎反应，且还能与自体免疫超敏性有关。此外，免疫球蛋白的Fc区可与表达Fc受体(FcR)的细胞结合。有一些对不同类型的抗体具有特异性的Fc受体，其包括IgG(γ受体)、IgE(ε受体)、IgA(α受体)及IgM(μ受体)。抗体与细胞表面上的Fc受体的结合引发多种重要且多变的生物反应，包括吞噬及破坏抗体包覆颗粒、清空免疫复合物、通过杀手细胞溶解经抗体包覆的标靶细胞、释放发炎介质、胚胎转移及控制免疫球蛋白的产生。

在一些实施方案中，该经修饰的融合蛋白提供经改变的效应功能，进而影响该施用剂的生物特性。举例来说，在一些实施方案中，删除或不活化(经由点突变或其他方法)恒定区结构域可能减少循环中经修饰的剂与Fc受体结合，因此增加癌细胞定位和/或肿瘤穿透。在其他实施方案中，恒定区修饰增加或减少剂的血清半衰期。在一些实施方案中，恒定区是经修饰以消除双硫键或寡糖基团。

在某些实施方案中，经修饰的融合蛋白不具有一或多种通常与Fc区有关的效应功能。在一些实施方案中，该剂不具抗体依赖性细胞媒介性细胞毒性(ADCC)活性和/或不具补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。在某些实施方案中，该剂不与该Fc受体和/或补体因子结合。在某些实施方案中，该剂不具效应功能。

在一些实施方案中，本文所述的Wnt结合剂(例如可溶性受体)被修饰以减少免疫原性。通常，当这些蛋白用来作为治疗剂时，拮抗完全正常人蛋白的免疫反应很少发生。然而，虽然许多融合蛋白包含与自然界中发现的序列相同的多肽序列，但若干种治疗性融合蛋白已显示在哺乳动物中具有免疫原性。在一些试验中，包含接头的融合蛋白已被发现比不包含接头的融合蛋白更具免疫原性。因此，在一些实施方案中，本发明的多肽是通过运算方法分析以预测免疫原性。在一些实施方案中，分析这样的多肽中T细胞和/或B细胞表位的存在。如果任何T细胞或B细胞表位是经辨识和/或预测，则可对这些区域进行修饰(例如氨基酸取代)以扰乱或破坏这样的表位。各种可用于预测T细胞和/或B细胞表位的算法及软件是该领域所公知的。例如，软件程序SYFPEITHI、HLA Bind、PEPVAC、RANKPEP、DiscoTope、ElliPro、及抗体表位预测(Antibody Epitope Prediction)都是公众可获得的。

在一些实施方案中，提供包含如本文中所述的可溶性受体或多肽中的任何一种的组合物。在一些实施方案中，该组合物包含多肽，其中该多肽中的至少80％、90％、95％、97％、98％、或99％具有丙氨酸-丝氨酸-丙氨酸(ASA)的N端氨基酸序列。在一些实施方案中，该组合物包含多肽，其中该多肽中的100％具有ASA的N端氨基酸序列。在一些实施方案中，该组合物包含多肽，其中该多肽中的至少80％具有ASA的N端氨基酸序列。在一些实施方案中，该组合物包含多肽，其中该多肽中的至少90％具有ASA的N端氨基酸序列。在一些实施方案中，该组合物包含多肽，其中该多肽中的至少95％具有ASA的N端氨基酸序列。

本文中所述的多肽可为重组多肽、自然界多肽、或合成多肽。在本技术领域中应认识到，本发明的一些氨基酸序列可变化而不会对该蛋白的结构或功能造成显著影响。若考虑这样的序列上的差异，应记住在蛋白质上将有决定活性的重要区域。因此，本发明另包括多肽的变异体，该变异体显示实质活性或包括FZD蛋白的区域，例如如本文所讨论的蛋白部分。这样的突变包括删除、插入、倒位、重复、及类型取代。

当然，技术人员会采用的氨基酸取代的数量取决于许多因素，包括上文所描述的那些。在某些实施方案中，用于任何给定的可溶性受体多肽中的取代的数量不会超过50、40、30、25、20、15、10、5或3个。

多肽的片段或部分可被采用来通过肽合成用于产生该对应的全长多肽；因此，这样的片段可被采用来用于产生全长多肽的中间物。这样的多肽的片段或部分也可被称为“蛋白片段”或“多肽片段”。

蛋白片段是能与一或多种人Wnt蛋白或一或多种人FZD蛋白结合的蛋白的一部分或整体。在一些实施方案中，该片段对一或多种人Wnt蛋白具有高亲和性。在一些实施方案中，该片段对一或多种人FZD蛋白具有高亲和性。此处所描述的Wnt结合剂的一些片段是包含与免疫球蛋白的恒定区(例如Fc区)的至少部分连接的FZD蛋白的胞外部分的至少部分的蛋白片段。该蛋白片段的结合亲和性可以在约10^-11至10^-12M的范围，虽然亲和性可因片段的不同大小而具有从10^-7至10^-13M的大幅差异。在一些实施方案中，该片段是约100至约200个氨基酸长度，且包含与免疫球蛋白的恒定区的至少部分连接的结合结构域。

在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是Wnt结合剂，该Wnt结合剂是抗体。在一些实施方案中，该Wnt结合剂是多肽。在某些实施方案中，该Wnt结合剂是包含抗原结合部位的抗体或多肽。在某些实施方案中，本文所述的Wnt结合抗体或多肽的抗原结合部位能与一、二、三、四、五、或更多种人Wnt蛋白结合(或键合)。在某些实施方案中，该Wnt结合抗体或多肽的抗原结合部位能与选自Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt10a及Wnt10b中的一、二、三、四或五种人Wnt蛋白特异性结合。Wnt结合剂的非限制性实例可见于美国专利No.7,723,477,国际专利公布No.WO 2011/088123,以及国际专利公布No.WO 2011/088127。

在某些实施方案中，Wnt结合剂结合一种或多种人Wnt蛋白的C-端富含半胱氨酸的结构域。在某些实施方案中，Wnt结合剂结合与剂或抗体结合的一种或多种Wnt蛋白内的结构域，所述剂或抗体选自：SEQ ID NO:31(Wnt1)、SEQ ID NO:32(Wnt2)、SEQ ID NO:33(Wnt2b)、SEQ ID NO:34(Wnt3)、SEQ ID NO:35(Wnt3a)、SEQ ID NO:36(Wnt7a)、SEQ ID NO:37(Wnt7b)、SEQ ID NO:38(Wnt8a)、SEQ ID NO:39(Wnt8b)、SEQ ID NO:40(Wnt10a)和SEQ ID NO:41(Wnt10b)。

在某些实施方式中，该Wnt途径抑制剂是Wnt结合剂，且该Wnt结合剂是抗体。在一些实施方式中，该抗体是重组抗体。在一些实施方式中，该抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，该抗体是嵌合抗体。在一些实施方式中，该抗体是人化抗体。在一些实施方式中，该抗体是人抗体。在某些实施方式中，该抗体是IgG1抗体。在某些实施方式中，该抗体是IgG2抗体。在某些实施方式中，该抗体是包含抗原结合部位的抗体片段。在一些实施方式中，该抗体是单价、单特异性、双价、双特异性或多特异性的。在一些实施方式中，该抗体是与细胞毒性部分缀合。在一些实施方式中，该抗体是被分离的。在一些实施方式中，该抗体是实质上纯的。

在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是多克隆抗体。多克隆抗体可利用任何已知的方法制备。在一些实施方案中，多克隆抗体是通过以相关的抗原(例如经纯化的肽片段、全长重组蛋白或融合蛋白)利用多重皮下或腹腔内注射的方式使动物(例如兔、大鼠、小鼠、山羊、驴)免疫而产生。该抗原可任意选择地与载体缀合，该载体诸如钥孔状帽贝血蓝素(KLH)或血清白蛋白。该抗原(不论有无载体蛋白质)被无菌盐水稀释，且通常与佐剂(例如完全或不完全弗氏(Freund’s)佐剂)组合以形成稳定乳液。在经过足够时间后，从该经免疫处理的动物的血液和/或腹水回收多克隆抗体。该多克隆抗体可根据该领域的标准方法自血清或腹水纯化，这样的方法包括但不限于亲和性层析、离子交换层析、胶体电泳及透析。

在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是单克隆抗体。单克隆抗体可利用本领域技术人员已知的杂交瘤方法制备。在一些实施方案中，使用杂交瘤方法，将小鼠、仓鼠或其他适当的宿主动物经上述方法免疫，以诱发淋巴细胞产生将与该免疫抗原特异性结合的抗体。在一些实施方案中，淋巴细胞可于体外进行免疫处理。在一些实施方案中，该免疫抗原可为人蛋白质或其一部分。在一些实施方案中，该免疫抗原可为小鼠蛋白或其一部分。

在免疫后，淋巴细胞是经分离并利用例如聚乙二醇与适当的骨髓瘤细胞系融合，以形成接着可与未融合的淋巴细胞及骨髓瘤细胞分离的杂交瘤细胞。产生特异性拮抗选定抗原的单克隆抗体的杂交瘤可利用多种方法识别，这样的方法包括但不限于免疫沉淀、免疫转渍及试管内结合试验(例如流式细胞分析、FACS、ELISA及放射性免疫测定)。该杂交瘤可利用标准方法于试管内增殖，或于动物活体内(in vivo)以腹水肿瘤方式增殖。该单克隆抗体可根据该领域的标准方法从培养基或腹水液体纯化，这样的方法包括但不限于亲和性层析、离子交换层析、胶体电泳及透析。

在某些实施方案中，单克隆抗体可利用本领域技术人员已知的重组DNA技术制备。编码单克隆抗体的多核苷酸与成熟B细胞或杂交瘤细胞分离，例如通过使用寡核苷酸引物的RT-PCR，从而特异性扩增编码该抗体的重链及轻链的基因，并且其序列是利用公知技术测定。该经分离的编码重链及轻链的多核苷酸接着被克隆至适当表达载体内，该载体在转染至原本不产生免疫球蛋白的宿主细胞诸如大肠杆菌(E.coli)、类人猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞后产生单克隆抗体。在其他实施方案中，重组单克隆抗体或其片段可自噬菌体展示库分离。

编码单克隆抗体的多核苷酸可进一步以多种不同方式使用重组DNA技术修饰，以产生可供选择的抗体。在一些实施方案中，例如小鼠单克隆抗体的轻链及重链的恒定结构域可被例如人抗体的该些区域取代以产生嵌合抗体，或以非免疫球蛋白多肽取代以产生融合抗体。在一些实施方案中，这样的恒定区被截短或移除以产生所期望的单克隆抗体的抗体片段。在一些实施方案中，可变区的定点或高密度突变形成可被用于优化单克隆抗体的特异性、亲和性等。

在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是人化抗体。通常，人化抗体是其中CDR的残基经源自具有所期望特异性、亲和性和/或结合能力的非人物种(例如小鼠、大鼠、兔、仓鼠等)的CDR的氨基酸残基取代的人免疫球蛋白，该取代是利用本领域技术人员已知的方法进行的。在一些实施方案中，人免疫球蛋白的框架区残基由非人物种的抗体的对应残基取代。在一些实施方案中，该人化抗体可进一步通过取代框架区和/或该经取代的非人残基内的额外残基加以修饰，以精炼和优化抗体特异性、亲和性和/或能力。通常，该人化抗体将包含实可变结构域区，该可变结构域区包含所有或实质上所有的对应该非人免疫球蛋白的CDR，然而所有或实质上所有的框架区是具有人免疫球蛋白序列的框架区。在一些实施方案中，该人化抗体亦可包含至少部分的免疫球蛋白恒定区或恒定结构域(Fc)，通常为人免疫球蛋白的该部分。在某些实施方案中，这样的人化抗体是用于治疗用途，因为当施用至人受试者时它们可能减少抗原性及HAMA(人抗小鼠抗体)反应。

在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是人抗体。人抗体可利用该领域已知的多种技术直接制备。在一些实施方案中，可制备在试管内经免疫处理的或从经免疫处理的个体分离的永生化人B淋巴细胞，该永生化人B淋巴细胞产生以标靶抗原为目标的抗体。在一些实施方案中，该人抗体可选自噬菌体库，其中该噬菌体库表达人抗体。或者，噬菌体展示技术可被用来从未经免疫处理的捐赠者的免疫球蛋白可变区结构域基因贮库在试管内产生人抗体及抗体片段。用于产生及使用抗体噬菌体库的技术是本技术领域所公知的，并且抗体噬菌体库是可商购的。包括但不限于链改组(chain shuffling)及定点突变形成的亲和性成熟策略在本技术领域是已知的，并可被用于产生高亲和性人抗体。

在一些实施方案中，人抗体可于包含人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中制备。经免疫后，这些小鼠可产生整套人抗体而不产生内源性免疫球蛋白。

本发明还包含特异性识别至少一种人FZD蛋白或至少一种Wnt蛋白的双特异性抗体。双特异性抗体可特异性辨识及结合至少二种不同表位。这样的不同的表位可位于相同分子内(例如二个不同的表位位于人FZD5上)或位于不同分子上(例如一表位位于FZD5上，不同的表位位于第二蛋白上)。在一些实施方案中，该双特异性抗体是单克隆人或人化抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体是完整抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体是抗体片段。在某些实施方案中，抗体是多特异性的。在一些实施方案中，该抗体可特异性识别及结合第一抗原标靶(例如FZD蛋白)及第二抗原标靶，例如在淋巴细胞上的效应分子(例如CD2、CD3、CD28、CD80、或CD86)或Fc受体(例如CD64、CD32或CD16)，以使细胞性防御机制集中于表达该第一抗原标靶的细胞。在一些实施方案中，这样的抗体可被用于引导细胞毒性剂至表达特定标靶抗原的细胞。这些抗体具有抗原结合臂及与细胞毒性剂或放射性核素螯合剂(诸如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA结合)的臂。用于制造双特异性或者多特异性抗体的技术是本领域技术人员所公知的。

在某些实施方案中，此处描述的抗体(或其他多肽)可为单特异性的。例如，在某些实施方案中，抗体所包含的一或多个抗原结合部位中的每一种是能结合不同蛋白质上的同源性表位。

在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是包含抗原结合部位的抗体片段。抗体片段可具有与完整抗体不同的功能或能力，例如抗体片段可具有增加的肿瘤穿透。已知用于产生抗体片段的各种技术包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化。在一些实施方案中，抗体片段包括由胃蛋白酶消化抗体分子所产生的F(ab’)2片段。在一些实施方案中，抗体片段包括通过减少F(ab’)2片段的双硫键所产生的Fab片段。在其他实施方案中，抗体片段包括通过以木瓜酶及还原剂处理抗体分子所产生的Fab片段。在某些实施方案中，抗体片段是经重组产生的。在一些实施方案中，抗体片段包括Fv或单链Fv(scFv)片段。Fab、Fv及scFv抗体片段可在大肠杆菌或其他宿主细胞中表达及分泌，从而使得能大量产生这些片段。在一些实施方案中，抗体片段与如此处所讨论的抗体噬菌体分子库分离。举例来说，可利用方法建构Fab表达库以允许快速有效地识别对FZD或Wnt蛋白或其衍生物、片段、类似物或同源物具有所期望特异性的单克隆Fab片段。在一些实施方案中，抗体片段是线性抗体片段。在某些实施方案中，抗体片段是单特异性或双特异性的。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是scFv。各种技术可被用于产生对一或多种人FZD蛋白或一或多种人Wnt蛋白具有特异性的单链抗体。

另外尤其就抗体片段而言所期望的是，修饰抗体以增加其血清半衰期。这可通过例如使抗体片段中的适当区域发生突变以将救援受体结合表位并入抗体片段中实现，或通过将该表位并入肽标签中然后使该肽标签与抗体片段的末端或中间融合(例如通过DNA或肽合成)来实现。在一些实施方案中，抗体被修饰以减小其血清半衰期。

异源缀合抗体的用途也属于本发明的方法的范围内。异源缀合抗体是由二个共价连接的抗体组成。这样的抗体被计划用于例如使免疫细胞以非所期望的细胞为标靶。还考虑到这样的异源缀合抗体可利用已知的合成蛋白质化学方法于试管内制备，包括涉及交联剂的那些方法。举例来说，免疫毒素可利用双硫交换反应或通过形成硫醚键加以建构。为达此目的的适当试剂实例包括亚氨基硫醇盐及甲基-4-巯基丁亚氨酸酯。

就本发明的方法而言，应理解的是经修饰的抗体可包含任何类型的使得该抗体与标靶(即人FZD蛋白或人Wnt蛋白)连接的可变区。在这方面，该可变区可包含或衍生自任何种类的可被诱导以启动体液性反应及产生拮抗该所期望的肿瘤相关抗原的免疫球蛋白的哺乳动物。因此，该经修饰的抗体的可变区可为来源于例如人、小鼠、非人灵长动物(例如长尾猕猴(cynomolgus monkey)、猕猴等)或兔。在一些实施方案中，该经修饰的免疫球蛋白的可变区及恒定区都是来源于人的。在其他实施方案中，兼容性抗体的可变区(通常源自非人来源)可经工程化或特别修改以促进该分子的结合特性或降低该分子的免疫原性。在这方面，可变区可经人化或另行通过包括输入氨基酸序列而改变。

在某些实施方案中，重链及轻链的可变结构域是通过至少部分取代一或多个CDR及(若需要的话)通过部分取代框架区及序列修饰和/或改变而加以改变。虽然CDR可能源自与作为框架区来源的抗体相同类型或甚至相同亚型的抗体，设想CDR将优选地源自不同物种的抗体。要转移一可变结构域的抗原结合能力至另一可变结构域，不一定需要将所有CDR取代成捐赠者可变区的所有CDR。相反地，可能只需要转移那些维持抗原结合部位的活性所需的残基即可。

尽管对可变区进行改变，但本领域技术人员应理解，经修饰的抗体将包含其中至少部分的一或多个恒定结构域已被删除或以其他方式改变的抗体(例如全长抗体或其免疫反应性片段)以提供所期望的生化特征，例如相比于包含原始或未经改变的恒定区的大约相同的免疫原性的抗体，具有增加的肿瘤定位和/或增加的血清半衰期。在一些实施方案中，该经修饰的抗体的恒定区将包含人恒定区。与本发明兼容的恒定区的修饰包含添加、删除或取代一或多个结构域中的一或多个氨基酸。此处所公开的经修饰的抗体可能包含对三个重链恒定结构域中的一或多种(CH1、CH2或CH3)和/或对轻链恒定结构域(CL)的改变或修饰。在一些实施方案中，一或多个结构域从该经修饰的抗体的恒定区部分或全部删除。在一些实施方案中，该经修饰的抗体将包含其中整个CH2结构域已被移除的结构域删除构建体或变异体(ΔCH2构建体)。在一些实施方案中，该缺少的恒定区结构域由短氨基酸间隔子(例如10个氨基酸残基)取代，以提供通常由该缺少恒定区授予的一些分子柔韧性。

在一些实施方案中，该经修饰的抗体是经工程化以直接融合CH3结构域与该抗体的铰链区。在其他实施方案中，肽间隔子被插入铰链区与经修饰的CH2和/或CH3结构域之间。例如，其中CH2结构域被删除且剩余的CH3结构域(经修饰或未经修饰)是用5至20个氨基酸间隔子与铰链区连接的构建体可被表达。该间隔子可被添加以确保恒定结构域的调节组件维持自由及可接近，或该铰链区维持柔性。然而，应注意氨基酸间隔子在一些情况中可能证实具有免疫原性，且诱发拮抗该构建体的非所期望的免疫反应。因此，在某些实施方案中，任何添加至构建体的间隔子将是相对非免疫原性的，以维持该经修饰的抗体的所期望的生物性质。

在一些实施方案中，该经修饰的抗体可能仅具有恒定结构域的部分删除或取代少数或甚至单一氨基酸。举例来说，在CH2结构域的选择区域中的单一氨基酸突变可能足以实质上减少Fc结合，因此增加癌细胞定位和/或肿瘤穿透。类似地，可能所期望的是单纯删除该一或多个恒定区结构域中控制特定效应功能(例如补体C1q结合)的部分。该恒定区的部分删除可增进该抗体的选择特性(血清半衰期)，同时保留其他与该主题恒定区结构域完整有关的所期望功能。另外，如上所述，该公开的抗体的恒定区可经由一或多个氨基酸的突变或取代来修饰以增进该形成构建物的特性。在这方面，扰乱由保守性结合位点所提供的活性(例如Fc结合)，同时实质上维持该经修饰的抗体的构造及免疫原性特性，这是可能的。在某些实施方案中，该经修饰的抗体包含添加一或多个氨基酸至恒定区以增进所期望的特征，诸如减少或增加效应功能或提供更多细胞毒素或碳水化合物连接位点。

该技术领域已知的是，恒定区媒介数种效应功能。例如，补体的C1成分与(结合至抗原的)IgG或IgM抗体的Fc区的结合活化该补体系统。补体的活化在细胞病原体的调理作用及溶解中是重要的。补体的活化还刺激发炎反应，且还可与自体免疫超敏性有关。此外，抗体的Fc区可与表达Fc受体(FcR)的细胞结合。有一些Fc受体对不同类型的抗体具有特异性，包括IgG(γ受体)、IgE(ε受体)、IgA(α受体)及IgM(μ受体)。抗体与细胞表面上的Fc受体的结合引发多种重要且多变的生物反应，包括吞噬及破坏抗体包覆颗粒、清空免疫复合物、通过杀手细胞溶解经抗体包覆的标靶细胞、释放发炎介质、胚胎转移及控制免疫球蛋白的产生。

在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是提供经改变的效应功能的抗体。这些经改变的效应功能可能影响该经施用的抗体的生物特性。例如，在一些实施方案中，删除恒定区结构域或(经由点突变或其他方法)使恒定区结构域失活可能减少循环中经修饰的抗体(例如抗FZD抗体)与Fc受体结合，从而增加癌细胞定位和/或肿瘤穿透。在其他实施方案中，恒定区修饰增加或减少抗体的血清半衰期。在一些实施方案中，恒定区被修饰以消除双硫键或寡糖部分。根据本发明对恒定区的修饰可轻易利用本领域技术人员公知的生化或分子工程技术进行。

在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是不具有一或多种效应功能的抗体。例如，在一些实施方案中，该抗体不具有ADCC活性和/或CDC活性。在某些实施方案中，该抗体不与Fc受体和/或补体因子结合。在某些实施方案中，该抗体不具有效应功能。

本发明的发明还包含实质上与本文中所述的嵌合抗体、人化抗体、人抗体或其抗体片段同源的变异体及相等物。这些可包含例如保守性取代突变。

在某些实施方案中，此处所述的抗体是被分离的。在某些实施方案中，此处所述的抗体是实质上纯的。

在本文所描述的方法的一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是多肽。该多肽可为包含与至少一种人FZD蛋白或至少一种Wnt蛋白结合的抗体或其片段的重组多肽、自然界多肽或合成多肽。在本领域中应认识到，本发明的一些氨基酸序列可变化而不会对该蛋白的结构或功能造成显著影响。因此，本发明还包括多肽的变异体，该变异体显示实质的活性或包括拮抗人FZD蛋白或Wnt蛋白的抗体的区域或其片段。在一些实施方案中，FZD结合多肽或Wnt结合多肽的氨基酸序列变异体包括删除、插入、倒位、重复和/或其他类型的取代。

该多肽、类似物及其变异体可进一步经修饰以包含非该多肽的正常部分的额外化学基团。这样的衍生化基团可增进该多肽的溶解性、延长生物半衰期和/或吸收。这样的基团还可减少或消除该多肽及变异体的任何非所期望的不良反应。有关化学基团的介绍可见Remington:The Science and Practice of Pharmacy,22^nd Edition,2012,Pharmaceutical Press,London。

本文所述的经分离的多肽可通过该领域已知的任何适当方法生产。这样的方法范围从直接蛋白质合成方法至建构编码多肽序列的DNA序列及在适当宿主中表达这样的序列皆可。在一些实施方案中，DNA序列是利用重组技术通过分离或合成编码感兴趣的野生型蛋白质的DNA序列来建构。任选地，该序列可通过定点突变形成来突变以提供其功能性类似物。

在一些实施方案中，编码感兴趣的多肽的DNA序列可利用寡核苷酸合成器通过化学合成建构。寡核苷酸可根据该所期望的多肽的氨基酸序列设计，并选择这些将产生感兴趣的重组多肽的宿主细胞所偏好的密码子。标准方法可被用于合成编码经分离的感兴趣的多肽的多核苷酸序列。例如，完全氨基酸序列可被用于建构反翻译基因。另外，可合成包含编码经分离的特定多肽的核苷酸序列的DNA寡聚体。例如，多个编码该所期望的多肽的部分的小型寡核苷酸可被合成然后连接。个别寡核苷酸通常包含5’或3’悬端以用于互补组装。

一经组装(通过合成、定点突变形成或其他方法)，该编码感兴趣的特定多肽的多核苷酸序列可被插入表达载体并可操作性连接适合该蛋白质于所期望宿主内表达的表达控制序列。适当组装可通过核苷酸测序、限制酶定位和/或于适当宿主内表达生物活性多肽证实。如该领域所公知的，为了在宿主内获得高表达量的经转染的基因，该基因必须与在选定的表达宿主内具有功能性的转录及翻译表达控制序列可操作性连接。

在某些实施方案中，重组表达载体被用于扩增及表达结合人FZD蛋白或Wnt蛋白的DNA编码剂(例如抗体或可溶性受体)或其片段。例如，重组表达载体可为可复制的DNA构建体，其具有与适当转录和/或翻译调节组件可操作性连接的编码FZD结合剂、Wnt结合剂、抗FZD抗体或其片段、抗Wnt抗体或其片段、或FZD-Fc可溶性受体的多肽链的合成性或cDNA衍生性DNA片段，该调节组件是源自哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因。转录单位通常包含下列的组合：(1)于基因表达中具有调节作用的一个或多个基因组件，例如转录启动子或增强子，(2)被转录成mRNA并被翻译成蛋白质的结构或编码序列，以及(3)适当的转录及翻译启动及终止序列。调节组件可包括操作子序列以控制转录。通常由复制起点授予的于宿主内复制的能力及有利转化物辨识的选择基因可被额外并入。DNA区在它们彼此之间是功能性相关时是“可操作性连接的”。例如，如果信号肽的DNA(分泌前导序列)被表达为参与多肽分泌的前体，则该信号肽的DNA(分泌前导序列)是可操作性连接用于该多肽的DNA的；如果启动子控制编码序列的转录，则该启动子是可操作性连接该序列的；或如果核糖体结合位点被定位成能够进行翻译，则核糖体结合位点是可操作性连接编码序列的。在一些实施方案中，适用于酵母菌表达系统的结构组件包括使宿主酵母菌细胞能胞外分泌经翻译的蛋白质的前导序列。在其他实施方案中，如果重组蛋白质是在无前导或转运序列存在时被表达，则其可包括N端甲硫氨酸残基。此残基之后可任选地与该经表达的重组蛋白质切开以提供最终产物。

表达控制序列及表达载体的选择取决于宿主的选择。多样化的表达宿主/载体组合可被采用。可用于真核宿主的表达载体包括例如包含源自SV40、牛乳头状瘤病毒、腺病毒及巨细胞病毒的表达控制序列的载体。可用于细菌宿主的表达载体包括已知的细菌质粒，像是源自大肠杆菌的质粒(包括pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物)，及广泛宿主范围的质粒，例如M13及其他丝状单股DNA噬菌体。

用于表达FZD结合剂或Wnt结合剂(或用来作为抗原的蛋白)的适当宿主细胞包括原核生物、酵母菌细胞、昆虫细胞或高级真核细胞。原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性有机体，例如大肠杆菌(E.coli)或杆菌(Bacillus)。高级真核细胞包括如下所述的哺乳动物来源的株化细胞系。不含细胞的翻译系统也可被采用。用于细菌性、真菌性、酵母菌性及哺乳动物细胞性宿主的适当克隆及表达载体是本技术领域所公知的。

多种哺乳动物细胞培养系统被用于表达重组多肽。于哺乳动物细胞中表达重组蛋白可为优选的，因为这些蛋白通常经过正确折叠、适当修饰且具有生物功能性。适当哺乳动物宿主细胞系的实例包括COS-7(猴肾来源)、L-929(小鼠纤维母细胞来源)、C127(小鼠乳房肿瘤来源)、3T3(小鼠纤维母细胞来源)、CHO(中国仓鼠卵巢来源)、HeLa(人子宫颈癌来源)、BHK(仓鼠肾纤维母细胞来源)、HEK-293(人胚胎肾来源)细胞系及其变异株。哺乳动物表达载体可包含非转录组件(诸如复制起点、与拟表达的基因相连的适当启动子及增强子，及其他5’或3’侧翼非转录序列)及5’或3’非翻译序列(诸如必要的核糖体结合位点、聚腺苷酸化位点、剪接供体点及受体点，及转录终止序列)。

在昆虫细胞培养系统(例如杆状病毒)中表达重组蛋白质还提供产生正确折叠及具有生物功能的蛋白质的稳健方法。用于在昆虫细胞中产生异源性蛋白质的杆状病毒系统是本领域技术人员所公知的。

因此，本发明提供包含此处所述的FZD结合剂或Wnt结合剂的细胞。在一些实施方案中，这样的细胞产生此处所述的结合剂(例如抗体或可溶性受体)。在某些实施方案中，这样的细胞产生抗体。在某些实施方案中，这样的细胞产生抗体OMP-18R5。在一些实施方案中，这样的细胞产生可溶性受体。在一些实施方案中，这样的细胞产生FZD-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，这样的细胞产生FZD8-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，这样的细胞产生FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28。

由经转化的宿主产生的蛋白质可根据任何适当方法纯化。标准方法包括层析(例如离子交换、亲和性及施胶柱层析)、离心、差别溶解或通过任何其他用于蛋白质纯化的标准技术。亲和性标签诸如六组氨酸、麦芽糖结合结构域、流感外套序列及麸胱甘肽-S-转移酶可被连接至该蛋白质以使得能经由通过适当亲和性管柱轻易纯化。被分离的蛋白也可使用例如蛋白水解、质谱分析(MS)、核磁共振(NMR)、高效液相层析(HPLC)及x光结晶之类的技术通过物理方式特征化。

在一些实施方案中，源自分泌重组蛋白质至培养基的表达系统的上清液可利用商用蛋白质浓缩过滤器先行浓缩，例如使用阿密康(Amicon)或密里博(Millipore)Pellicon超过滤单位浓缩。在浓缩步骤之后，该浓缩液可被加至适当纯化基材。在一些实施方案中，可采用阴离子交换树脂，例如具有二乙基氨基乙基(DEAE)悬挂基团的基材或基质。该基材可为丙烯酰胺、洋菜糖、葡聚糖、纤维素或其他常用于蛋白质纯化的基材。在一些实施方案中，可采用阳离子交换步骤。适当的阳离子交换基材包括包含磺丙基或羧甲基的各种不可溶基材。在一些实施方案中，可采用羟磷灰石基质，包括但不限于陶瓷羟磷灰石(CHT)。在某些实施方案中，一或多种应用疏水性反相HPLC基质(例如具有悬挂甲基或其他脂肪族基团的硅胶)的反相HPLC步骤可被采用以进一步纯化结合剂。上述的一些或所有纯化步骤的各种组合也可被应用以提供均质性重组蛋白。

在一些实施方案中，于细菌培养中生产的重组蛋白质可被分离，例如通过自细胞团块初步萃取，接着进行一或多次浓缩、盐析、水性离子交换或胶排除层析步骤进行。HPLC可被使用于最终纯化步骤。用于表达重组蛋白的微生物细胞可通过任何方便方法破碎，该任何方便方法包括冷冻解冻循环、超声波震荡、机械破碎或使用细胞溶解剂。

在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂是小分子。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抑制β-链蛋白和CREB结合蛋白(CBP)之间的相互作用的小分子。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是ICG-001。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抑制β-链蛋白和T细胞因子(TCF)之间的相互作用的小分子。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是iCRT-3、iCRT-5或iCRT-14。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是CPG049090。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是NC043。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是第二代版本PRI-724。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抑制称为豪猪(porcupine)的酰基转移酶的小分子。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是LGK974。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是IWP-1、IWP-2、IWP-3或IWP-4。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是抑制端锚聚合酶(例如，端锚聚合酶1或端锚聚合酶2)的小分子。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是XAV939。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是JW55。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是IWR或IWR-1-endo。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是扑蛲灵(pyrvinium)。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是CCT031374。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是SM04755。在一些实施方案中，Wnt途径抑制剂是选自以下项中的小分子：XAV939、IWR1、IWP-1、IWP-2、JW74、JW55、大田酸(okadaic acid)、泰托霉素(tautomycin)、SB239063、SB203580、ADP-HPD、2-[4-(4-氟-苯基)哌嗪-1-基]-6-甲基嘧啶-4(3H)-酮、PJ34、氯硝柳胺(niclosamide)、康丙罗(cambinol)、舒林酸(sulindac)、3289-8625、J01-017a、NSC668036、非律平(filipin)、IC261、PF670462、博舒替尼(bosutinib)、PHA665752、伊马替尼(imatinib)、ICG-001、依他尼酸(ethacrynic acid)及其衍生物、PKF115-584、PNU-74654、PKF118-744、CGP049090、PKF118-310、ZTM000990、BC21、GDC-0941和Rp-8-Br-cAMP。

在某些实施方案中，该结合剂可以以数种缀合(即免疫缀合物或放射缀合物)或非缀合形式中的任一者被使用。在某些实施方案中，抗体可以非缀合形式被使用以驾驭受试者的自然界防御机制，包括补体依赖性细胞毒性及抗体依赖性细胞毒性，以消灭该恶性或癌细胞。

在一些实施方案中，该结合剂与细胞毒性剂缀合。在一些实施方案中，该细胞毒性剂是化疗剂，包括但不限于甲胺喋呤(methotrexate)、甲烯土霉素(adriamicin)、多柔比星(doxorubicin)、霉法兰(melphalan)、丝裂霉素C(mitomycin C)、氯芥苯丁酸(chlorambucil)、正定霉素(daunorubicin)或其他插入剂。在一些实施方案中，该细胞毒性剂是细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素及其片段，包括但不限于白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素(abrin)A链、莫迪素(modeccin)A链、α-次黄嘌呤(sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素(dianthin)蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、泻果素(curcin)、巴豆素(crotin)、肥皂草(saponaria officinalis)抑制剂、白树毒素(gelonin)、丝裂胶素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素(enomycin)及新月毒素(trichothecene)。在一些实施方案中，该细胞毒性剂是放射性同位素以产生放射缀合物或经放射缀合的抗体。多种放射性核素可用于产生经放射缀合的抗体，包括但不限于⁹⁰Y、¹²⁵I、¹³¹I、¹²³I、¹¹¹In、¹³¹In、¹⁰⁵Rh、¹⁵³Sm、⁶⁷Cu、⁶⁷Ga、¹⁶⁶Ho、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re及²¹²Bi。在一些实施方案中，本发明可产生抗体与一或多种小分子毒素的缀合物，这样的毒素诸如卡利奇霉素(calicheamicin)、类美坦素(maytansinoids)、新月毒素(trichothene)、CC1065及具有毒素活性的这些毒素的衍生物。在某些实施方案中，抗体与细胞毒性剂的缀合物可利用各种双官能性蛋白偶合剂制备，该双官能性蛋白偶合剂如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)、二亚氨环硫丁烷(IT)、亚氨酸酯的双官能基衍生物(诸如己二亚胺二甲酯HCL)、活性酯的双官能基衍生物(诸如辛二酸二琥珀酰亚胺)、醛的双官能基衍生物(诸如戊二醛)、双迭氮化合物(诸如双(对-迭氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如2,6-二异氰酸甲苯酯)及双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝苯)。

在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂(例如抗体或可溶性受体)是至少一种Wnt蛋白(即1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种Wnt蛋白)的拮抗剂。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制其所结合的Wnt蛋白的活性。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的其所结合的人Wnt蛋白的活性。

在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂(例如抗体或可溶性受体)抑制至少一种人Wnt与适当受体的结合。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少一种人Wnt蛋白与一或多种人FZD蛋白的结合。在一些实施方案中，该至少一种Wnt蛋白是选自：Wnt1、Wnt2、Wnt2b/13、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、及Wnt16。在一些实施方案中，该一或多种人FZD蛋白是选自：FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9及FZD10。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制一或多种Wnt蛋白与FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、和/或FZD8的结合。在某些实施方案中，由该Wnt途径抑制剂对特定Wnt与FZD蛋白的结合的抑制是至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方案中，抑制Wnt与FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂还抑制Wnt途径信号传导。在某些实施方案中，抑制人Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是抗体。在某些实施方案中，抑制人Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是抗Wnt抗体。在某些实施方案中，抑制人Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体。在某些实施方案中，抑制人Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5。在某些实施方案中，抑制人Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制人Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制人Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是可溶性受体OMP-54F28。

在某些实施方案中，本文中所述的该Wnt途径抑制剂(例如抗体或可溶性受体)是至少一种人Wnt蛋白的拮抗剂且抑制Wnt活性。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的Wnt活性。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制一、二、三、四、五或更多种Wnt蛋白的活性。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制选自下列项中的至少一种人Wnt蛋白的活性：Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、及Wnt16。在一些实施方案中，该Wnt结合剂与至少一种选自Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt10a、及Wnt10b中的Wnt蛋白结合。在某些实施方案中，该至少一种Wnt蛋白是选自Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt8a、Wnt8b、Wnt10a、及Wnt10b。在某些实施方案中，抑制人Wnt活性的Wnt途径抑制剂是抗体。在某些实施方案中，抑制人Wnt活性的Wnt途径抑制剂是抗Wnt抗体。在某些实施方案中，抑制人Wnt活性的Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制人Wnt活性的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制人Wnt活性的Wnt途径抑制剂是可溶性受体OMP-54F28。

在某些实施方案中，本文所述的Wnt途径抑制剂是至少一种人FZD蛋白的拮抗剂且抑制FZD活性。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的FZD活性。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制一、二、三、四、五或更多种FZD蛋白的活性。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制选自下列项中的至少一种人FZD蛋白的活性：FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9及FZD10。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、和/或FZD8的活性。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体OMP-18R5。

在某些实施方案中，本文所述的Wnt途径抑制剂是至少一种人Wnt蛋白的拮抗剂且抑制Wnt信号传导。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的Wnt信号传导。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制一、二、三、四、五或更多种Wnt蛋白的信号传导。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少一种选自Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt10a、及Wnt10b中的Wnt蛋白的信号传导。在某些实施方案中，抑制Wnt信号传导的Wnt途径抑制剂是抗体。在某些实施方案中，抑制Wnt信号传导的Wnt途径抑制剂是抗Wnt抗体。在某些实施方案中，抑制Wnt信号传导的Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在某些实施方案中，抑制Wnt信号传导的Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制Wnt信号传导的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制Wnt信号传导的Wnt途径抑制剂是可溶性受体OMP-54F28。

在某些实施方案中，本文中所述的Wnt途径抑制剂是β-链蛋白信号传导的拮抗剂。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或约100％的β-链蛋白信号传导。在某些实施方案中，抑制β-链蛋白信号传导的Wnt途径抑制剂是抗体。在某些实施方案中，抑制β-链蛋白信号传导的Wnt途径抑制剂是抗Wnt抗体。在某些实施方案中，抑制β-链蛋白信号传导的Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体。在某些实施方案中，抑制β-链蛋白信号传导的Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5。在某些实施方案中，抑制β-链蛋白信号传导的Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在某些实施方案中，抑制β-链蛋白信号传导的Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制β-链蛋白信号传导的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制β-链蛋白信号传导的Wnt途径抑制剂是可溶性受体OMP-54F28。

在某些实施方案中，本文中所述的Wnt途径抑制剂抑制至少一种Wnt蛋白与受体的结合。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少一种人Wnt蛋白与一或多种其受体的结合。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂抑制至少一种Wnt蛋白与至少一种FZD蛋白的结合。在一些实施方案中，该Wnt结合剂抑制至少一种Wnt蛋白与FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FDZ5、FDZ6、FDZ7、FDZ8、FDZ9、和/或FZD10的结合。在某些实施方案中，抑制至少一种Wnt与至少一种FZD蛋白的结合是抑制至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方案中，抑制至少一种Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂还抑制Wnt途径信号传导和/或β-链蛋白信号传导。在某些实施方案中，抑制至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是抗体。在某些实施方案中，抑制至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体。在某些实施方案中，抑制至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5。在某些实施方案中，抑制至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在某些实施方案中，抑制至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，抑制至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28。

在某些实施方案中，本文中所述的Wnt途径抑制剂阻断至少一种Wnt与受体的结合。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂阻断至少一种人Wnt蛋白与一或多种其受体的结合。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂阻断至少一种Wnt与至少一种FZD蛋白的结合。在一些实施方案中，该Wnt途径抑制剂阻断至少一种Wnt蛋白与FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FDZ5、FDZ6、FDZ7、FDZ8、FDZ9、和/或FZD10的结合。在某些实施方案中，至少一种Wnt与至少一种FZD蛋白的结合是阻断至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在某些实施方案中，阻断至少一种Wnt蛋白与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂还抑制Wnt途径信号传导和/或β-链蛋白信号传导。在某些实施方案中，阻断至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是抗体。在某些实施方案中，阻断至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体。在某些实施方案中，阻断至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5。在某些实施方案中，阻断至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在某些实施方案中，阻断至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，阻断至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在某些实施方案中，阻断至少一种人Wnt与至少一种FZD蛋白结合的Wnt途径抑制剂是可溶性受体OMP-54F28。

在某些实施方案中，本文所述的Wnt途径抑制剂抑制Wnt途径信号传导。应理解的是，抑制Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂在某些实施方案中可能抑制Wnt信号传导途径中通过一或多种受体进行的信号传导，但不一定抑制通过所有受体进行的信号传导。在某些选择性实施方案中，通过所有人受体进行的Wnt途径信号传导可能被抑制。在某些实施方案中，通过选自FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FDZ5、FDZ6、FDZ7、FDZ8、FDZ9、及FZD10中的一或多种受体进行的Wnt途径信号传导被抑制。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂对Wnt途径信号传导的抑制是指Wnt途径信号传导的量减少至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在一些实施方案中，抑制Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是抗体。在一些实施方案中，抑制Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体。在一些实施方案中，抑制Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5。在一些实施方案中，抑制Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在一些实施方案中，抑制Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，抑制Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，抑制Wnt途径信号传导的Wnt途径抑制剂是可溶性受体OMP-54F28。

在某些实施方案中，本文所述的Wnt途径抑制剂抑制β-链蛋白的活化。应理解的是，抑制β-链蛋白的活化的Wnt途径抑制剂在某些实施方案中可能抑制通过一或多种受体进行的β-链蛋白的活化，但不一定抑制通过所有受体进行的β-链蛋白的活化。在某些选择性实施方案中，通过所有人受体进行的β-链蛋白活化可能被抑制。在某些实施方案中，通过选自FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FDZ5、FDZ6、FDZ7、FDZ8、FDZ9、及FZD10中的一或多种受体进行的β-链蛋白的活化被抑制。在某些实施方案中，该Wnt结合剂对β-链蛋白活化的抑制是指减少β-链蛋白活化量至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或至少约95％。在一些实施方案中，抑制β-链蛋白的活化的Wnt途径抑制剂是抗体。在一些实施方案中，抑制β-链蛋白的活化的Wnt途径抑制剂是抗FZD抗体。在一些实施方案中，抑制β-链蛋白的活化的Wnt途径抑制剂是抗体OMP-18R5。在一些实施方案中，抑制β-链蛋白的活化的Wnt途径抑制剂是可溶性受体。在一些实施方案中，抑制β-链蛋白的活化的Wnt途径抑制剂是FZD-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，抑制β-链蛋白的活化的Wnt途径抑制剂是FZD8-Fc可溶性受体。在一些实施方案中，抑制β-链蛋白的活化的Wnt途径抑制剂是可溶性受体OMP-54F28。

用于测定Wnt途径抑制剂是否抑制Wnt途径信号传导的活体内及试管内测定是该技术领域所公知的。例如，可使用以细胞为基底的荧光素酶报告试验测量试管内的β-链蛋白信号传导量，该试验利用含有多份TCF结合结构域与下游萤火虫荧光素酶报告基因的TCF/Luc报告载体(Gazit et al.,1999,Oncogene,18；5959-66；TOPflash,Millipore,Billerica MA)。在一或多种Wnt蛋白(例如由转染细胞表达或由Wnt条件培养基提供的Wnt)存在下，结合剂存在时的β-链蛋白信号传导量是与无结合剂存在时的信号传导量比较。除了TCF/Luc报告子测定之外，结合剂(或候选剂)对β-链蛋白信号传导的影响可于试管内或活体内通过测量该剂对β-链蛋白调节基因表达量的影响加以测定，如c-myc(He et al.,1998、Science,281:1509-12)、细胞周期素D1(Tetsu et al.,1999,Nature,398:422-6)和/或纤维粘连蛋白(Gradl et al.1999,Mol.Cell Biol.,19:5576-87)。在某些实施方案中，结合剂对β-链蛋白信号传导的影响亦可能通过测量该剂对Dishevelled-1、Dishevelled-2、Dishevelled-3、LRP5、LRP6和/或β-链蛋白的磷酸化状态的影响检测。

在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂具有一或多种下列影响：抑制肿瘤细胞增生、抑制肿瘤生长、减小肿瘤尺寸、诱导肿瘤消退、减少癌干细胞于肿瘤中的频率、减少肿瘤的肿瘤发生性、通过减少癌干细胞于肿瘤中的频率以减少肿瘤的肿瘤发生性、刺激肿瘤细胞的细胞死亡、诱导肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞裂解、诱导肿瘤中的细胞分化、使致癌细胞分化成非致癌状态、诱导肿瘤细胞分化标志的表达、防止肿瘤细胞转移、或减少肿瘤细胞的存活。

在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂可抑制肿瘤生长。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂可抑制活体内(例如异种移植小鼠模型和/或于罹患癌的人内)的肿瘤生长。在一些实施方案中，该肿瘤是选自结直肠肿瘤、结肠肿瘤、胰肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤、肝肿瘤、乳房肿瘤、肾肿瘤、前列腺肿瘤、胃肠道肿瘤、黑色素瘤、子宫颈肿瘤、膀胱肿瘤、神经胶母细胞瘤或头颈肿瘤中的肿瘤。在某些实施方案中，该肿瘤是乳房肿瘤。在某些实施方案中，该肿瘤是卵巢肿瘤。在某些实施方案中，该肿瘤是肺肿瘤。在某些实施方案中，该肿瘤是胰肿瘤。在某些实施方案中，该肿瘤是Wnt依赖性肿瘤。

在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂可减少肿瘤的肿瘤发生性。在某些实施方案中，Wnt途径抑制剂可于动物模型诸如小鼠异种移植模型中减少包含癌干细胞的肿瘤的肿瘤发生性。在某些实施方案中，肿瘤中癌干细胞的数量或频率是减少至少约1/2、约2/3、约3/4、约9/10、约49/50、约99/100、或约999/1000。在某些实施方案中，癌干细胞的数量或频率减少是通过使用动物模型的限制稀释试验测定。有关使用限制稀释试验以测定肿瘤中癌干细胞的数量或频率的减少的其他实例及指南可见例如国际公开号WO 2008/042236、及美国专利公开No.2008/0064049及No.2008/0178305。

在某些实施方案中，本文描述的Wnt途径抑制剂于活体内具有至少1小时、至少约2小时、至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周、或至少约2周的活性。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是IgG(例如IgG1或IgG2)抗体，其于活体内具有至少1小时、至少约2小时、至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周、或至少约2周的活性。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是融合蛋白，其于活体内具有至少1小时、至少约2小时、至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周、或至少约2周的活性。

在某些实施方案中，本文描述的Wnt途径抑制剂于小鼠、长尾猕猴(cynomolgus monkey)或人体内具有至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周、或至少约2周的循环半衰期。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是于小鼠、长尾猕猴或人体内具有至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周、或至少约2周的循环半衰期的IgG(例如IgG1或IgG2)抗体。在某些实施方案中，该Wnt途径抑制剂是融合蛋白，其于小鼠、长尾猕猴(cynomolgus monkey)或人体内具有至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约2天、至少约3天、至少约1周、或至少约2周的循环半衰期。增加(或减少)剂诸如多肽及抗体的半衰期的方法是该领域所公知的。例如，增加IgG抗体循环半衰期的已知方法包括导入突变至Fc区，从而增加抗体对新生儿Fc受体(FcRn)的pH依赖性结合。增加缺乏Fc区的抗体片段的循环半衰期的已知方法包括例如PEG化之类的技术。

IV.有丝分裂抑制剂

本文所述的方法包含Wnt途径抑制剂与有丝分裂抑制剂一起用于组合治疗来抑制肿瘤生长、减小肿瘤尺寸和/或用于治疗癌症。有丝分裂抑制剂或抗有丝分裂剂包括但不限于微管结合剂、微管酶抑制剂、有丝分裂检查点激酶(CHK)抑制剂和有丝分裂酶抑制剂。微管结合剂包括但不限于紫杉烷(taxanes)、紫杉烷类(taxoids)、长春花生物碱(vinca alkaloids)、生物碱，埃坡霉素(epothilones)和软海绵素(halichondrins)。

在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂选自紫杉烷，长春花生物碱，埃坡霉素或软海绵素。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是紫杉烷。紫杉烷通过抑制微管解聚(即稳定微管聚合物)来诱导有丝分裂细胞周期阻断。有丝分裂细胞周期阻断导致有丝分裂停滞和细胞凋亡。在一些实施方案中，紫杉烷选自：紫杉醇(TAXOL)、白蛋白结合型紫杉醇(ABRAXANE)、多西紫杉醇(TAXOTERE)、卡巴他赛(JEVTANA)、替司他赛(tesetaxel)、拉罗他赛(larotaxel)、或奥他赛(ortataxel)、DHA-紫杉醇、PG-紫杉醇、其药学上可接受的盐、酸或衍生物。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是长春花生物碱。在一些实施方案中，长春花生物碱选自长春碱(VELBAN)、长春新碱(MARQIBO)、长春瑞滨(NAVELBINE)、长春蔓佛明(vincadifformine)、长春地辛(vindesine)、长春氟宁(vinflunine)、小长春蔓辛(minovincine)、及其药学上可接受的盐、酸或衍生物。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是生物碱，例如新胶质(neoxaline)。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是埃坡霉素。在一些实施方案中，埃坡霉素是伊沙匹隆(IXEMPRA)。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是软骨素B。在一些实施方案中，软海绵素是类似物艾日布林甲磺酸盐(HALAVEN)。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是微管酶抑制剂。在一些实施方案中，微管酶抑制剂选自ARQ 621、EMD534085和LY2523355。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是有丝分裂检查点激酶抑制剂。在一些实施方案中，有丝分裂检查点激酶抑制剂是LY2603618。在一些实施方案中，有丝分裂抑制剂是有丝分裂酶抑制剂。在一些实施方案中，有丝分裂酶抑制剂是Aurora A或PLK1的抑制剂。在一些实施方案中，有丝分裂酶抑制剂选自MLN8237、ENMD-0276、AZD1152、GSK1070916A、PHA-739358、SNS-314、CYC116、PF-03814735、AT9238、AS703569和BI 6727。

实施例

实施例1

FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28与化疗剂在体内的组合的活性

本文所述的OncoMed异种移植物模型在OncoMed Pharmaceuticals由最低限度传代的患者衍生的肿瘤标本建立。肿瘤样本由病理学家检查并分类为特定肿瘤类型。OncoMed依赖这些分类，除非对任何特定肿瘤进行进一步分析，并且认为需要重新分类。

将异种移植OMP-OV19卵巢肿瘤细胞(1×10⁵个细胞)的单细胞悬浮液皮下注射到6-8周龄的NOD/SCID小鼠中。使肿瘤生长28天，直到它们达到120mm³的平均体积。将小鼠随机分组(每组n＝9)，并用紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇、卡铂、卡铂和紫杉醇的组合、OMP-54F28和紫杉醇的组合、OMP-54F28和白蛋白结合型紫杉醇的组合、OMP-54F28和卡铂的组合、OMP-54F28与卡铂以及紫杉醇的组合或对照抗体治疗小鼠。每三周用对照抗体或剂量为45mg/kg的OMP-54F28，剂量为10mg/kg的紫杉醇，剂量为7.5mg/kg的剂量的白蛋白结合型紫杉醇，剂量为30mg/kg的卡铂，或剂量为15mg/kg的卡铂与剂量为5mg/kg的白蛋白结合型紫杉醇的组合治疗小鼠一次。所有药物经腹膜内施用。监测肿瘤生长，并在指定的时间点用电子测径器测量肿瘤体积。数据表示为平均值±S.E.M。

如图1所示，相比于单独的化疗剂，OMP-54F28与每种化疗剂的组合在更大程度上降低卵巢肿瘤OMP-OV19的生长。令人惊奇的是，与OMP-54F28和卡铂的组合或单独的卡铂(图1D)相比，OMP-54F28和紫杉烷化学治疗剂(紫杉醇(图1A)、白蛋白结合型紫杉醇(图1B)或紫杉醇和卡铂(图1C))的组合显示出较大的抑制性。在其他肿瘤类型中已获得了类似的结果。

这些结果支持以下假说：Wnt途径抑制剂(例如OMP-54F28和OMP-18R5)与紫杉烷的组合相比于其与其他类化疗剂的组合具有更大活性和/或更有效。

这些结果的可能解释集中在Wnt和各种类型的化疗剂对细胞周期抑制的不同机理上。已经显示Wnt信号传导在细胞周期的G2/M期达到峰值，并在调节有丝分裂细胞分裂中发挥重要作用(Niehrs and Acebron,2012,EMBO J,31:2705-2713)。已经确定的是，用紫杉烷治疗通过对微管稳定的影响而在有丝分裂时阻断细胞分裂。相比之下，其他化疗剂(例如铂化合物，如卡铂，或核苷类似物，如吉西他滨)在G1/S期抑制DNA合成并阻断细胞周期。因此，紫杉烷和Wnt途径抑制剂可以一同起作用以在细胞周期的有丝分裂期期间协同地抑制或阻断细胞周期进程，从而导致有丝分裂的破坏和肿瘤细胞死亡。

实施例2

交错给药方案对于抗FZD抗体OMP-18R5与紫杉醇的组合的活性的影响

将异种移植UM-PE13乳腺肿瘤细胞(20,000个细胞)的单细胞悬浮液皮下注射到6-8周龄的NOD/SCID小鼠中。UM-PE13是一种三阴性乳腺癌。使肿瘤生长34天，直到它们达到平均80mm³的体积。将小鼠随机分组(每组n＝8)，并用紫杉醇，在同一天施用的OMP-18R5和紫杉醇的组合，OMP-18R5和紫杉醇的组合(其中紫杉醇在施用OMP-18R5之前3天施用)，OMP-18R5和紫杉醇的组合(其中OMP-18R5在施用紫杉醇之前3天施用)，或对照抗体治疗小鼠。用剂量为25mg/kg的OMP-18R5和剂量为20mg/kg的紫杉醇每三周治疗小鼠一次。经腹膜内施用OMP-18R5和紫杉醇。监测肿瘤生长，并在指定的时间点用电子测径器测量肿瘤体积。数据表示为平均值±S.E.M。

如图2所示，OMP-18R5和紫杉醇的交错施用(其中在施用紫杉醇之前施用OMP-18R5)在抑制UM-PE13乳腺肿瘤细胞的肿瘤生长方面显著优于任何其他施用方案。重要的是，当在施用紫杉烷之前2天施用Wnt途径抑制剂时，若干个体小鼠中的肿瘤消退到不可检测的水平。

这些研究表明，给药的顺序和时间对肿瘤生长抑制和/或消退的程度具有显著影响，特别是在Wnt途径抑制剂和紫杉烷两者都间歇地给药的情况下。

实施例3

交错给药方案对于FZD8-Fc可溶性受体OMP-54F28与紫杉醇的组合的活性的影响

将异种移植OMP-OV38卵巢肿瘤细胞(1×10⁵个细胞)的单细胞悬浮液皮下注射到6-8周龄的NOD/SCID小鼠中。使肿瘤生长38天，直到它们达到140mm³的平均体积。将小鼠随机分组(每组n＝9)，并用紫杉醇、同一天施用的OMP-54F28和紫杉醇的组合、OMP-54F28和紫杉醇的组合(其中紫杉醇在施用OMP-54F28之前2天施用)、OMP-54F28和紫杉醇的组合(其中在施用紫杉醇之前2天施用OMP-54F28)或对照抗体治疗小鼠。用剂量为25mg/kg的OMP-54F28和剂量为20mg/kg的紫杉醇每两周治疗小鼠一次。经腹膜内施用OMP-54F28和紫杉醇。监测肿瘤生长，并在指定的时间点用电子测径器测量肿瘤体积。数据表示为平均值±S.E.M。

如图3A所示，OMP-54F28和紫杉醇的交错施用(其中在施用紫杉醇之前施用OMP-54F28)在抑制OMP-OV38卵巢肿瘤细胞的肿瘤生长方面比任何其他给药方案显著更好。如图3B所示，在使用OMP-OV22卵巢肿瘤细胞的第二异种移植模型中观察到类似的结果。

进行另外的研究以确定最佳交错给药方案。在施用紫杉醇之前1天，在施用紫杉醇之前2天或在施用紫杉醇之前4天，向患OV38肿瘤小鼠施用OMP-54F28。如图3C所示，在施用紫杉醇前一天或两天施用OMP-54F28导致最大量的肿瘤生长抑制，其中在施用紫杉醇前两天施用OMP-54F28是这些研究中的最佳施用方案。

通过组织学分析经治疗的OMP-OV38肿瘤。分析显示，在紫杉醇之前使用Wnt途径抑制剂的交错给药计划对肿瘤的组织学产生显著的影响。用这种方案治疗的肿瘤包含许多细胞，具有有丝分裂破坏的证据，包括多核细胞、具有巨核的扩大细胞、固缩和表观细胞死亡。相比之下，单独用紫杉醇，用Wnt途径抑制剂和紫杉醇(当Wnt途径抑制剂和紫杉醇同时施用时)，或用Wnt途径抑制剂和紫杉醇(当在施用Wnt途径抑制剂之前施用紫杉醇时)治疗的肿瘤细胞没有显示这些影响(数据未示出)。这些结果支持以下假设：Wnt途径抑制剂(例如OMP-18R5或OMP-54F28)的在先给药导致在有丝分裂的G2/M期阻断有丝分裂Wnt信号传导，并且该活性与由紫杉烷治疗引起的有丝分裂抑制协同作用，从而促进肿瘤中的细胞死亡。

这些异种移植结果表明，临床上的最佳组合活性可以通过在施用含紫杉烷的化疗方案之前(例如2天前)施用Wnt途径抑制剂来实现。这种安排对于其中紫杉烷以三周计划给药的方案可能是特别重要的。

实施例4

凡地吐单抗(OMP-18R5)与多西紫杉醇的组合用于非小细胞肺癌患者中1b期研究

该研究是在患有先前经治疗的复发性或晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的患者中凡地吐单抗与多西紫杉醇的组合的公开标签1b期剂量递增研究。该研究的主要目的是确定凡地吐单抗与多西紫杉醇的组合的安全性和最大耐受剂量。确定凡地吐单抗与多西紫杉醇组合的推荐的2期剂量。次要目的是表征凡地吐单抗在与多西紫杉醇组合施用时的药代动力学(PK)，以表征凡地吐单抗的免疫原性，并且对凡地吐单抗在与多西紫杉醇组合施用时的功效进行初步评价。

在每个21天的周期的第1天施用凡地吐单抗。群组1和群组2的凡地吐单抗的剂量水平分别为5mg/kg和10mg/kg。对于群组1和群组2，在每个周期的第1天静脉内施用多西紫杉醇(75mg/m²)。由于在1期程序中观察到脆性骨折，因而对于群组1和2中的所有患者停止用凡地吐单抗。群组3和4的患者将分别以2mg/kg和4mg/kg每3周施用凡地吐单抗一次。在剂量群组中不允许凡地吐单抗的剂量增加。交错给药方案将在群组3和群组4中评价。在每个周期的第3天静脉内施用多西紫杉醇(75mg/m²)。

实施例5

艾非纳西肽(OMP-54F28)与紫杉醇以及卡铂的组合用于卵巢癌患者的1b期研究

该研究是艾非纳西肽与紫杉醇以及卡铂的组合用于复发性铂敏感性卵巢癌患者中的公开标签1b期剂量递增研究。该研究的主要目的是确定艾非纳西肽与紫杉醇以及卡铂的组合的安全性和最大耐受剂量。确定艾非纳西肽与紫杉醇以及卡铂的组合的推荐的2期剂量。次要目的是表征艾非纳西肽在与紫杉醇以及卡铂组合施用时的药代动力学(PK)，以表征艾非纳西肽在与紫杉醇以及卡铂组合施用时的免疫原性，以及对艾非纳西肽在与紫杉醇以及卡铂组合施用时的功效进行初步评估。

在每个21天的周期的第1天施用艾非纳西肽。群组1和2的艾非纳西肽的剂量水平分别为5mg/kg和10mg/kg。对于群组1和群组2，在每个周期的第1天静脉内施用紫杉醇(175mg/m²)和卡铂(AUC＝5mg/ml·min)。由于在1期程序中观察到脆性骨折，因此对群组1和2中的所有患者停用艾非纳西肽。群组3和群组4的患者将分别以2mg/kg和4mg/kg每3周施用一次。在剂量群组中将不允许艾非纳西肽的剂量增加。交错给药方案将在群组3和群组4中评估。将在每个周期的第3天静脉内施用紫杉醇(175mg/m²)和卡铂(AUC＝5mg/ml·min)。

实施例6

交错给药方案对于抗FZD抗体OMP-18R5与紫杉醇的组合在肺肿瘤异种移植模型中的活性的影响

OMP-LU77是患者衍生的非小细胞肺(NSCLC)肿瘤。将异种移植OMP-LU77肺肿瘤细胞(50,000个细胞)的单细胞悬浮液皮下注射到NOD/SCID小鼠中。使肿瘤生长37天，直到它们达到平均约200mm³的体积。将携带肿瘤的小鼠随机分成4组(每组n＝8-9)。携带肿瘤的小鼠用单独的紫杉醇、在同一天施用的凡地吐单抗(OMP-18R5)和紫杉醇的组合，凡地吐单抗和紫杉醇的组合(其中该抗体在施用紫杉醇之前两天施用)或对照抗体治疗。抗体以25mg/kg给药，每隔一周施用一次。紫杉醇以15mg/kg给药，也是每隔一周施用一次。监测肿瘤生长并在治疗后指定的天数测量肿瘤体积。数据表示为平均值±SEM。

如图4所示，交错施用凡地吐单抗和紫杉醇(在施用紫杉醇之前施用凡地吐单抗)在抑制OMP-LU77肺肿瘤细胞的肿瘤生长方面显著优于任何其他的给药方案。

实施例7

OMP-18R5和紫杉醇的组合治疗对OMP-LU77肺肿瘤中的癌干细胞的影响

限制性稀释测定(LDAs)可用于评估Wnt途径抑制剂对实体肿瘤癌症干细胞的影响和/或对肿瘤的致瘤性的影响。所述测定可用于确定来自用Wnt途径抑制剂治疗过的动物的肿瘤中的癌干细胞的频率，并将该频率与来自对照动物的肿瘤中的癌干细胞的频率进行比较。

在研究结束时收获来自上述OMP-LU77异种移植物模型的对照和处理的肿瘤(实施例6)。将肿瘤加工并解离成单个细胞。将肿瘤细胞用生物素化的小鼠抗体(抗小鼠CD45-生物素和大鼠抗小鼠H2Kd-生物素，BioLegend，San Diego，CA)在冰上孵育30分钟，随后加入链霉亲和素标记的磁珠(Invitrogen，Carlsbad，CA)以在磁体的帮助下除去小鼠细胞。

对于LDA，收获悬浮液中的肿瘤细胞，计数，并将合适的细胞剂量(50、150和500个细胞)皮下注射到NOD/SCID小鼠中(每个治疗组每个细胞剂量10只小鼠)。允许肿瘤生长79天，如图5A所示。图5A中的每个符号表示单个小鼠的肿瘤体积。在所有治疗组中测定具有可检测肿瘤的小鼠的百分比，并与对照中具有可检测肿瘤的小鼠的百分比进行比较。使用L-CalcTM软件，利用肿瘤生长频率计算癌症干细胞频率。每个治疗组的计算得到的癌症干细胞频率显示在图5B中。凡地吐单抗(OMP-18R5)和紫杉醇的交错施用(其中在施用紫杉醇之前施用凡地吐单抗)显著降低癌症干细胞频率。

实施例8

交错给药方案对于OMP-54F28与紫杉醇的组合的活性的影响

将异种移植OMP-OV19卵巢肿瘤细胞的单细胞悬浮液皮下注射到6-8周龄的NOD/SCID小鼠中。使肿瘤生长直到它们达到平均120mm³的体积。将小鼠随机分布(每组n＝8-10)，并用紫杉醇，同一天施用的OMP-54F28和紫杉醇的组合，OMP-54F28和紫杉醇的组合(其中在施用紫杉醇之前2天施用OMP-54F28)，或对照抗体治疗。小鼠每两周用20mg/kg的剂量的OMP-54F28和20mg/kg的剂量的紫杉醇治疗一次。OMP-54F28和紫杉醇经腹膜内施用。监测肿瘤生长，并在指定的时间点用电子测径器测量肿瘤体积。数据表示为平均值±S.E.M。

如图6所示，交错施用OMP-54F28和紫杉醇的组合(其中在施用紫杉醇之前2天施用OMP-54F28)在抑制OMP-OV19卵巢肿瘤细胞的肿瘤生长方面显著优于任何其他给药方案。如图6所示，不仅肿瘤生长受到抑制，而且OMP-54F28和紫杉醇的交错治疗诱导已形成的卵巢肿瘤消退。令人惊讶的是，这种肿瘤生长抑制/消退维持超过170天。

实施例9

在乳腺癌异种移植模型中Wnt抑制剂与紫杉醇的组合的交错给药方案

将异种移植OMP-B90乳房肿瘤细胞的单细胞悬浮液皮下注射到6-8周龄的NOD/SCID小鼠中。使肿瘤生长直到它们达到平均约137mm³的体积。将小鼠随机分组(每组n＝9)，并用紫杉醇，同一天施用的OMP-18R5和紫杉醇的组合，OMP-18R5和紫杉醇的组合(其中在施用紫杉醇之前2天施用OMP-18R5)，OMP-54F28，同一天施用的OMP-54F28和紫杉醇的组合，OMP-54F28和紫杉醇的组合(其中在施用紫杉醇之前2天施用OMP-54F28)，或对照抗体治疗。小鼠用OMP-18R5、OMP-54F28或对照抗体以25mg/kg的剂量每两周治疗一次，并用紫杉醇以10mg/kg的剂量每周治疗一次。经腹膜内施用抗体和紫杉醇。监测肿瘤生长，并在指定的时间点用电子测径器测量肿瘤体积。数据表示为平均值±S.E.M。

如图7所示，Wnt途径抑制剂OMP-18R5和OMP-54F28与紫杉醇的交错施用(其中Wnt途径抑制剂在施用紫杉醇之前2天施用)在抑制OMP-B90乳腺肿瘤细胞的肿瘤生长方面显著好于任何其他给药方案。不仅肿瘤生长受到抑制，而且Wnt途径抑制剂和紫杉醇的交错治疗诱导已形成的乳腺肿瘤消退。

实施例10

在结肠癌异种移植模型中使用Wnt抑制剂与紫杉醇的组合的交错给药方案

将异种移植OMP-C28结肠肿瘤细胞的单细胞悬浮液皮下注射到6-8周龄的NOD/SCID小鼠中。使肿瘤生长直到它们达到平均约89mm³的体积。将小鼠随机分组(每组n＝9)，并用白蛋白结合型紫杉醇、OMP-18R5、OMP-54F28、OMP-18R5和白蛋白结合型紫杉醇的组合(其中在施用白蛋白结合型紫杉醇之前2天施用OMP-18R5)、OMP-54F28和白蛋白结合型紫杉醇的组合(其中在施用白蛋白结合型紫杉醇之前2天施用OMP-54F28)、或对照进行治疗。小鼠每2周用OMP-18R5、OMP-54F28或对照以25mg/kg的剂量治疗一次，并用白蛋白结合型紫杉醇以15mg/kg的剂量每周治疗一次。抗体和白蛋白结合型紫杉醇经腹膜内施用。监测肿瘤生长，并在指定的时间点用电子测径器测量肿瘤体积。数据表示为平均值±S.E.M。

如图8所示，Wnt途径抑制剂OMP-18R5(图8A)和OMP-54F28(图8B)以及白蛋白结合型紫杉醇的交错施用(其中Wnt途径抑制剂在施用紫杉醇前2天施用)相比于单独用Wnt途径抑制剂或单独用白蛋白结合型紫杉醇在更大程度上抑制OMP-C28结肠肿瘤细胞的肿瘤生长。

实施例11

在结肠癌异种移植模型中使用Wnt抑制剂与紫杉醇的组合的交错给药方案

将异种移植OMP-OV40卵巢肿瘤细胞的单细胞悬浮液皮下注射到6-8周龄的NOD/SCID小鼠中。使肿瘤生长直到它们达到平均约128mm³的体积。将小鼠随机分组(每组n＝8)，并用紫杉醇、OMP-18R5、OMP-54F28、OMP-18R5和白蛋白结合型紫杉醇的组合(其中在施用白蛋白结合型紫杉醇之前2天施用OMP-18R5)、OMP-54F28和白蛋白结合型紫杉醇的组合(其中在施用白蛋白结合型紫杉醇之前2天施用OMP-54F28)、或对照抗体治疗。小鼠每2周用OMP-18R5、OMP-54F28或对照以25mg/kg的剂量治疗一次，并用紫杉醇以20mg/kg的剂量每两周治疗一次。经腹膜内施用抗体和紫杉醇。监测肿瘤生长，并在指定的时间点用电子测径器测量肿瘤体积。数据表示为平均值±S.E.M。

如图9所示，Wnt途径抑制剂OMP-18R5(图9A)和OMP-54F28(图9B)以及紫杉醇的交错施用(其中Wnt途径抑制剂在施用紫杉醇之前2天施用)相比于单独施用Wnt途径抑制剂或单独施用紫杉醇在更大程度上抑制OMP-OV40卵巢肿瘤细胞的肿瘤生长。

这些结果表明，抗FZD抗体OMP-18R5与紫杉醇的组合以及可溶性受体OMP-54F28与紫杉醇的组合抑制卵巢肿瘤的肿瘤生长。

应理解此处所描述的实施例及实施方案仅用于说明的目的，各种对其进行的修饰或改变将被呈现给本领域技术人员且将被纳入本申请的精神与范围内。

本文所引述的所有公开文献、专利、专利申请、互联网网站、和登录号/包括多核苷酸和多肽序列的数据库序列通过引用基于所有目的完整并入本文，如同每个公开文献、专利、专利申请、互联网网站、和登录号/数据库序列是特别且单独地被表明这样通过引用并入。

本申请中公开的的序列如下：

SEQ ID NO:1含加下划线的预测信号序列的18R5重链氨基酸序列

MKHLWFFLLLVAAPRWVLSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYTLSWVRQAPGKGLEWVSVISGDGSYTYYADSVKGRFTISSDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNFIKYVFANWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:2含加下划线的预测信号序列的18R5轻链氨基酸序列

MAWALLLLTLLTQGTGSWADIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSFYVHWYQQKPGQAPVLVIYDKSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYANTLSLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS

SEQ ID NO:3不含预测信号序列的18R5重链氨基酸序列

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYTLSWVRQAPGKGLEWVSVISGDGSYTYYADSVKGRFTISSDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNFIKYVFANWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:4不含预测信号序列的18R5轻链氨基酸序列

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSFYVHWYQQKPGQAPVLVIYDKSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYANTLSLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS

SEQ ID NO:5 18R5重链可变区氨基酸序列

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYTLSWVRQAPGKGLEWVSVISGDGSYTYYADSVKGRFTISSDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNFIKYVFANWGQGTLVTVSSSEQ ID NO:6 18R5轻链可变区氨基酸序列

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSFYVHWYQQKPGQAPVLVIYDKSNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYANTLSLVFGGGTKLTVLG

SEQ ID NO:7 18R5重链CDR1

GFTFSHYTLS

SEQ ID NO:8 18R5重链CDR2

VISGDGSYTYYADSVKG

SEQ ID NO:9 18R5重链CDR3

NFIKYVFAN

SEQ ID NO:10 18R5轻链CDR1

SGDNIGSFYVH

SEQ ID NO:11 18R5轻链CDR2

DKSNRPSG

SEQ ID NO:12 18R5轻链CDR3

QSYANTLSL

SEQ ID NO:13不含预测信号序列的人FZD1Fri结构域氨基酸序列

QQPPPPPQQQQSGQQYNGERGISVPDHGYCQPISIPLCTDIAYNQTIMPNLLGHTNQEDAGLEVHQFYPLVKVQCSAELKFFLCSMYAPVCTVLEQALPPCRSLCERARQGCEALMNKFGFQWPDTLKCEKFPVHGAGELCVGQNTSDKGT

SEQ ID NO:14不含预测信号序列的人FZD2Fri结构域氨基酸序列

QFHGEKGISIPDHGFCQPISIPLCTDIAYNQTIMPNLLGHTNQEDAGLEVHQFYPLVKVQCSPELRFFLCSMYAPVCTVLEQAIPPCRSICERARQGCEALMNKFGFQWPERLRCEHFPRHGAEQICVGQNHSEDG

SEQ ID NO:15不含预测信号序列的人FZD3Fri结构域氨基酸序列

HSLFSCEPITLRMCQDLPYNTTFMPNLLNHYDQQTAALAMEPFHPMVNLDCSRDF

RPFLCALYAPICMEYGRVTLPCRRLCQRAYSECSKLMEMFGVPWPEDMECSRFPDCDEPYPRLVDL

SEQ ID NO:16不含预测信号序列的人FZD4Fri结构域氨基酸序列

FGDEEERRCDPIRISMCQNLGYNVTKMPNLVGHELQTDAELQLTTFTPLIQYGCSSQLQFFLCSVYVPMCTEKINIPIGPCGGMCLSVKRRCEPVLKEFGFAWPESLNCSKFPPQNDHNHMCMEGPGDEEV

SEQ ID NO:17不含预测信号序列的人FZD5Fri结构域氨基酸序列

ASKAPVCQEITVPMCRGIGYNLTHMPNQFNHDTQDEAGLEVHQFWPLVEIQCSPDLRFFLCSMYTPICLPDYHKPLPPCRSVCERAKAGCSPLMRQYGFAWPERMSCDRLPVLGRDAEVLCMDYNRSEATT

SEQ ID NO:18不含预测信号序列的人FZD6Fri结构域氨基酸序列

HSLFTCEPITVPRCMKMAYNMTFFPNLMGHYDQSIAAVEMEHFLPLANLECSPNIETFLCKAFVPTCIEQIHVVPPCRKLCEKVYSDCKKLIDTFGIRWPEELECDRLQYCDETVPVTFDPHTEFLG

SEQ ID NO:19不含预测信号序列的人FZD7Fri结构域氨基酸序列

QPYHGEKGISVPDHGFCQPISIPLCTDIAYNQTILPNLLGHTNQEDAGLEVHQFYPLVKVQCSPELRFFLCSMYAPVCTVLDQAIPPCRSLCERARQGCEALMNKFGFQWPERLRCENFPVHGAGEICVGQNTSDGSG

SEQ ID NO:20不含预测信号序列的人FZD8Fri结构域氨基酸序列

ASAKELACQEITVPLCKGIGYNYTYMPNQFNHDTQDEAGLEVHQFWPLVEIQCSPDLKFFLCSMYTPICLEDYKKPLPPCRSVCERAKAGCAPLMRQYGFAWPDRMRCDRLPEQGNPDTLCMDYNRTDLTT

SEQ ID NO:21不含预测信号序列的人FZD8Fri结构域氨基酸序列

ASAKELACQEITVPLCKGIGYNYTYMPNQFNHDTQDEAGLEVHQFWPLVEIQCSPDLKFFLCSMYTPICLEDYKKPLPPCRSVCERAKAGCAPLMRQYGFAWPDRMRCDRLPEQGNPDTLCMDYNRTDL

SEQ ID NO:22不含预测信号序列的人FZD9Fri结构域氨基酸序列

LEIGRFDPERGRGAAPCQAVEIPMCRGIGYNLTRMPNLLGHTSQGEAAAELAEFAPLVQYGCHSHLRFFLCSLYAPMCTDQVSTPIPACRPMCEQARLRCAPIMEQFNFGWPDSLDCARLPTRNDPHALCMEAPENA

SEQ ID NO:23不含预测信号序列的人FZD10Fri结构域氨基酸序列

ISSMDMERPGDGKCQPIEIPMCKDIGYNMTRMPNLMGHENQREAAIQLHEFAPLVEYGCHGHLRFFLCSLYAPMCTEQVSTPIPACRVMCEQARLKCSPIMEQFNFKWPDSLDCRKLPNKNDPNYLCMEAPNNG

SEQ ID NO:24人IgG₁ Fc区

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:25人IgG₁ Fc区

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:26人IgG₁ Fc区

KSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:27人IgG₁ Fc区

EPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:28人IgG₂ Fc区

CVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:29FZD8-Fc 54F28氨基酸序列(不含预测信号序列)

ASAKELACQEITVPLCKGIGYNYTYMPNQFNHDTQDEAGLEVHQFWPLVEIQCSPDLKFFLCSMYTPICLEDYKKPLPPCRSVCERAKAGCAPLMRQYGFAWPDRMRCDRLPEQGNPDTLCMDYNRTDLTTEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:30含具有下划线的预测信号序列的FZD8-Fc 54F28

MEWGYLLEVTSLLAALLLLQRSPFVHAASAKELACQEITVPLCKGIGYNYTYMPNQFNHDTQDEAGLEVHQFWPLVEIQCSPDLKFFLCSMYTPICLEDYKKPLPPCRSVCERAKAGCAPLMRQYGFAWPDRMRCDRLPEQGNPDTLCMDYNRTDLTTEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO:31人Wnt1 C-端富含半胱氨酸结构域(aa 288-370)

DLVYFEKSPNFCTYSGRLGTAGTAGRACNSSSPALDGCELLCCGRGHRTRTQRVTERCNCTFHWCCHVSCRNCTHTRVLHECL

SEQ ID NO:32人Wnt2 C-端富含半胱氨酸结构域(aa 267-360)

DLVYFENSPDYCIRDREAGSLGTAGRVCNLTSRGMDSCEVMCCGRGYDTSHVTRMTKCGCKFHWCCAVRCQDCLEALDVHTCKAPKNADWTTAT

SEQ ID NO:33人Wnt2b C-端富含半胱氨酸结构域(aa 298-391)

DLVYFDNSPDYCVLDKAAGSLGTAGRVCSKTSKGTDGCEIMCCGRGYDTTRVTRVTQCECKFHWCCAVRCKECRNTVDVHTCKAPKKAEWLDQT

SEQ ID NO:34人Wnt3 C-端富含半胱氨酸结构域(aa 273-355)

DLVYYENSPNFCEPNPETGSFGTRDRTCNVTSHGIDGCDLLCCGRGHNTRTEKRKEKCHCIFHWCCYVSCQECIRIYDVHTCK

SEQ ID NO:35人Wnt3a C-端富含半胱氨酸结构域(aa 270-352)

DLVYYEASPNFCEPNPETGSFGTRDRTCNVSSHGIDGCDLLCCGRGHNARAERRREKCRCVFHWCCYVSCQECTRVYDVHTCK

SEQ ID NO:36人Wnt7a C-端富含半胱氨酸结构域(aa 267-359)

DLVYIEKSPNYCEEDPVTGSVGTQGRACNKTAPQASGCDLMCCGRGYNTHQYARVWQCNCKFHWCCYVKCNTCSERTEMYTCK

SEQ ID NO:37人Wnt7b C-端富含半胱氨酸结构域(aa 267-349)

DLVYIEKSPNYCEEDAATGSVGTQGRLCNRTSPGADGCDTMCCGRGYNTHQYTKVWQCNCKFHWCCFVKCNTCSERTEVFTCK

SEQ ID NO:38人Wnt8a C-端富含半胱氨酸结构域(aa 248-355)

ELIFLEESPDYCTCNSSLGIYGTEGRECLQNSHNTSRWERRSCGRLCTECGLQVEERKTEVISSCNCKFQWCCTVKCDQCRHVVSKYYCARSPGSAQSLGRVWFGVYI

SEQ ID NO:39人Wnt8b C-端富含半胱氨酸结构域(aa 245-351)

ELVHLEDSPDYCLENKTLGLLGTEGRECLRRGRALGRWELRSCRRLCGDCGLAVEERRAETVSSCNCKFHWCCAVRCEQCRRRVTKYFCSRAERPRGGAAHKPGRKP

SEQ ID NO:40人Wnt10a C-端富含半胱氨酸结构域(aa 335-417)

DLVYFEKSPDFCEREPRLDSAGTVGRLCNKSSAGSDGCGSMCCGRGHNILRQTRSERCHCRFHWCCFVVCEECRITEWVSVCK

SEQ ID NO:41人Wnt10b C-端富含半胱氨酸结构域(aa 307-389)

ELVYFEKSPDFCERDPTMGSPGTRGRACNKTSRLLDGCGSLCCGRGHNVLRQTRVERCHCRFHWCCYVLCDECKVTEWVNVCK

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种治疗癌症和/或抑制肿瘤生长的方法，其包括：

向受试者施用治疗有效量的Wnt途径抑制剂和治疗有效量的有丝分裂抑制剂，其中所述Wnt途径抑制剂和所述有丝分裂抑制剂使用交错给药方案施用，并且所述Wnt途径抑制剂首先施用；且其中所述Wnt途径抑制剂是：

(a)特异性结合至少一种人卷曲(FZD)蛋白的抗体，或

(b)包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述有丝分裂抑制剂在施用所述Wnt途径抑制剂后约1天、2天、3天、4天、5天或6天施用。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述Wnt途径抑制剂每3周施用一次。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述Wnt途径抑制剂约每4周施用一次。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述有丝分裂抑制剂约每周施用一次、约每2周施用一次、约每3周施用一次、或在4周(28天)的周期内的3周，每周施用一次。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述Wnt途径抑制剂是抗体，所述抗体特异性结合选自FZD1、FZD2、FZD5、FZD7和FZD8中的至少一种人FZD蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体包含：

(a)包含GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:7)的重链CDR1，包含VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:8)的重链CDR2和包含NFIKYVFAN(SEQ ID NO:9)的重链CDR3，以及

(b)包含SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:10)的轻链CDR1，包含DKSNRPSG(SEQ ID NO:11)的轻链CDR2和包含QSYANTLSL(SEQ ID NO:12)的轻链CDR3。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体包含包含SEQ ID NO:5的重链可变区和包含SEQ ID NO:6的轻链可变区。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗原结合部位的抗体片段、单特异性抗体、双特异性抗体、IgG1抗体、或IgG2抗体。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述Wnt途径抑制剂是凡地吐单抗。

11.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述Wnt途径抑制剂是包含人FZD蛋白的Fri结构域的可溶性受体。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述人FZD蛋白的Fri结构域包含FZD8的Fri结构域。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述人FZD蛋白的Fri结构域包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21。

14.根据权利要求11-13中任一项所述的方法，其中所述可溶性受体包含非FZD多肽。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述非FZD多肽包含人Fc区。

16.根据权利要求11所述的方法，其中所述可溶性受体包括：

(a)SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21；和

(b)SEQ ID NO:27。

17.根据权利要求11所述的方法，其中所述可溶性受体包含SEQ ID NO:29。

18.根据权利要求1-5或11-17中任一项所述的方法，其中所述Wnt途径抑制剂是艾非纳西肽。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述有丝分裂抑制剂是紫杉烷、长春花生物碱、埃坡霉素或艾日布林甲磺酸盐。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述有丝分裂抑制剂是选自紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇、多西紫杉醇及其衍生物中的紫杉烷。

21.根据权利要求19所述的方法，其中所述有丝分裂抑制剂是长春花生物碱，其选自长春花碱、长春新碱、长春瑞滨及其衍生物。

22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述癌症或肿瘤是乳腺癌/肿瘤、卵巢癌/肿瘤、肺癌/肿瘤或胰腺癌/肿瘤。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其还包括施用至少一种另外的治疗剂。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述另外的治疗剂是化疗剂。