蛋白仿生伊曲康唑药物体系及其制备方法与流程

本发明涉及医药领域，具体是医药制剂领域，特别是蛋白仿生伊曲康唑药物体系的制备方法。

背景技术：

伊曲康唑是一种亲脂性的高效、广谱、口服的三氮唑类广谱抗真菌药，可抑制真菌细胞膜的主要成分之一麦角甾醇的合成，导致真菌细胞膜损伤，从而发挥抗真菌效应。化学名为（+）-顺式-4-[4-[4-[4-[[2-(2,4-二氯苯基）-2-(1H-1,2,4-三氮唑基-1-甲基）-1,3-二氧环戊基-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2,4-二氢-2-(1-甲基丙基）-3H-1,2,4-三唑-3-酮，其结构式如下：

伊曲康唑为弱碱性、油水难溶，Pka=3.17，lgP=5.66，因其溶解性而限制临床应用的药效发挥，口服生物利用度低。

纳米混悬液是药物分散在有少量表面活性剂的介质中形成的亚微胶体分散体系。体系中药物平均粒径一般在100~500 nm，药物粒子表面积和曲率增大。因此，纳米混悬液可以增加难溶性药物的饱和溶解度、增加其溶出速度和程度, 从而提高生物利用度。纳米混悬液的制备方法有很多，主要包括沉淀法和乳化法。通过喷雾干燥、冷冻干燥等不同技术结晶，成为纳米结晶中间剂型，根据不同给药途径可制备成多种剂型，如注射剂、喷剂、片剂、丸剂、胶囊等。

随着生命技术的日新月异，蛋白质、多肽等药物的种类和数量不断增多，应用范围和途径越来越广，为各种疾病提供了新的思路。蛋白质作为载体具有来源广泛、价格便宜、安全无毒、稳定、高利用率等优点。蛋白质可形成胶束等，具有两亲性，疏水区域可以和水不溶药物发生作用，亲水区域可以使其分散在水中，而且使用蛋白质后，整个体系辅料应用减少，节约成本且安全性更高。因此蛋白质在纳米结晶中的应用具有重要意义。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是：伊曲康唑为弱碱性、油水难溶，因其溶解性而限制临床应用的药效发挥，口服生物利用度低。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种蛋白仿生伊曲康唑药物体系及其制备方法。母乳是婴儿的第一种食物，很容易被消化吸收，其安全性毋庸置疑。母乳以蛋白为稳定剂，天然形成纳米结构，能同时作为营养物和营养物的运载体。基于以上考虑，本发明模仿母乳自然生理过程，以实现药物安全、高效递送。制备方法中，冷冻干燥得到纳米结晶粉末、蒸发除去有机溶剂和液态奶干燥成为牛奶粉末、脱去脂肪形成脱脂牛奶相似。

本发明将蛋白质作为载体，针对伊曲康唑油水难溶的特点，提供一种简便、安全的口服伊曲康唑纳米结晶的制备方法，利用乳化法制备伊曲康唑纳米混悬液，冷冻干燥得到纳米结晶，提高药物的饱和溶解度和溶出速度，改善制剂的生物利用度。该方法可采用常规工艺设备，适合工业化大规模、高效率生产。

本发明提供的蛋白仿生伊曲康唑药物体系，包括伊曲康唑和蛋白质，伊曲康唑和蛋白质的比重为1:0.5 ~ 15，经以下制备方法制备得到：

a.将蛋白质分散在水中得到体系A；

b.将伊曲康唑分散在有机溶剂中得到体系B；

c.将体系B与体系A混合，并使体系B良好的分散于体系A中，除去有机溶剂，得到蛋白仿生伊曲康唑纳米混悬液C；

d.将得到的蛋白仿生伊曲康唑纳米混悬液C预冻，冷冻干燥，即得到蛋白仿生伊曲康唑药物体系制剂。

其中所述蛋白质为酪蛋白和乳清蛋白质量比1:5-5:1的组合物，或者所述蛋白质为α-乳白蛋白和β-乳球蛋白质量比1:5-5:1的组合物。

优选地，所述有机溶剂为氯仿、无水乙醇、二氯甲烷、二氯乙烷中的一种或多种。

更优选地，所述有机溶剂为三氯甲烷和乙醇的混合物，二者的体积比为1:10~10:1。

优选地，步骤a中，所述蛋白质分散在水中，其中，蛋白质在水中的浓度为1~10g/L。（水为超纯水，二者用量关系如下：每0.1~10 g蛋白质分散在100 mL水中）。

优选地，步骤b中，所述伊曲康唑分散在有机溶剂中，其中，伊曲康唑，在有机溶剂中的浓度为2.5~600 g/L。（二者用量关系如下：每0.03~3g伊曲康唑分散在0.5~12 mL有机溶剂中）。

优选地，步骤a中，蛋白质分散在水中温度为0~40℃。

优选地，步骤c中，所述使体系B良好的分散于体系A中，所述分散方法有高剪切、高压均质、高压微射流中的一种或多种。

优选地，所述体系B良好的分散于体系A中，若采用高剪切法，剪切速度为8000~24000 rpm，剪切时间为0.5~10 min，若采用高压均质法，均质温度为4~50 ℃，均质压力为500 ~ 1800 bar，循环次数为1~10次，若采用高压微射流法，温度为4~50 ℃，压力为500~1800 bar，循环次数为1~10次。

优选地，步骤c中，所述体系B与体系A混合是在0~40 ℃进行。

优选地，除去有机溶剂是在40~60 ℃进行，时间为5~30 min。除去有机溶剂优选为快速薄膜蒸发法。

优选地，步骤d中，所述预冻条件为-80 ~ -20 ℃下，预冻2~24 h，然后置于冷冻干燥设备中冻干24 ~ 48 h。

其中，步骤d中，不需要添加冻干保护剂。

本发明制备得到的蛋白仿生伊曲康唑药物体系，平均粒径范围为50~500 nm；该蛋白仿生伊曲康唑药物体系为无定形态。

本发明的蛋白仿生伊曲康唑药物体系，在应用时可制成口服的片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂等。

本发明的优点主要体现在以下几个方面：

1.本发明的蛋白仿生伊曲康唑药物体系制备方法工艺简单，适合工业放大生产；

2.本发明的蛋白仿生伊曲康唑药物体系处方简单，得到的药物体系中除了药物和蛋白外，无其他任何添加物；

3.本发明得到的蛋白仿生伊曲康唑药物体系，平均粒径小于500 nm，且具有良好的可再分散性，加水再分散平均粒径为100~500 nm，与刚制备时一致；

4.本发明得到的蛋白仿生伊曲康唑药物体系溶出效果优异，显著提高了伊曲康唑的溶解度和溶出速率，伊曲康唑溶解度达到20 mg/mL左右，增加药物的生物利用度，减少给药剂量，降低毒副作用。

附图说明

图1：蛋白仿生伊曲康唑纳米混悬液的粒径分布图。

图2：蛋白仿生伊曲康唑药物体系扫描电镜图。

图3：蛋白仿生伊曲康唑药物体系透射电镜图。

图4：蛋白仿生伊曲康唑药物体系、伊曲康唑、蛋白质的X-射线衍射图谱，表明有效成分伊曲康唑为无定形态。

图5：酪蛋白和乳清蛋白的混合物的差示扫描量热DSC的图谱。

图6：伊曲康唑、酪蛋白和乳清蛋白的物理混合物的差示扫描量热DSC的图谱。

图7：实施例1制得的蛋白仿生伊曲康唑药物体系样品冻干粉末的差示扫描量热DSC的图谱。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1

称取伊曲康唑500 mg于2 mL氯仿中，称取3.0 g酪蛋白和3.0 g乳清蛋白分散于100 mL水中（室温），有机相逐滴加入水相中（室温），在15000 rpm高剪切0.5 min，40℃条件下高压均质800 bar循环6次，40℃减压旋转蒸发除去有机溶剂。-50℃预冻过夜，冷冻干燥36 h，得到本实施例的蛋白仿生伊曲康唑药物体系冻干样品粉末。

取冻干样品粉末，检测其粒径分布，分布图见图1，从图1可看出：样品分布均匀，粒径为70~400 nm之间。

取冻干样品粉末，在扫描电镜下和透射电镜下观察并拍照（见图2和图3），从图2和图3可看出：样品粒子为球形、椭球型，粒径大小在70~400 nm范围内，PDI为0.265（一般为0.3以下较好，分布均匀）。

测定蛋白仿生伊曲康唑药物体系、伊曲康唑、酪蛋白的X-射线衍射图谱，见图4，从图4可看出：蛋白仿生伊曲康唑药物体系体系为无定形态粉末，具有无定形态粉末的特性,一般具有较好的溶出速率和溶解度,有提高生物利用度的可能。

溶解实验：取蛋白仿生伊曲康唑药物体系冻干样品粉末，溶于水中，配制从不饱和溶液到饱和溶液的系列溶液，室温条件下振荡至平衡，经滤膜过滤，取滤液，按照中国药典方法分析测定药物在溶液中的浓度。测定伊曲康唑溶解度为9.77 mg/ml ，为溶解，而伊曲康唑粉末在水(pH7)中溶解度为0.001 mg/ml，为难溶。

伊曲康唑累计释放率的测定方法参照中国药典（2010版），结果说明，本实施例的蛋白仿生伊曲康唑药物体系品的初始释放速率均明显高于伊曲康唑。释放开始前5 min，样品累计释放率约80%，在30 min-60 min内释放平稳，没有大的波动或变化，1h内完全释放。

将酪蛋白和乳清蛋白的混合物，伊曲康唑、酪蛋白和乳清蛋白的物理混合物，以及本实施例制得的蛋白仿生伊曲康唑药物体系样品冻干粉末进行差示扫描量热实验。实验结果如图5~7所示。图6中, 伊曲康唑和蛋白的物理混合物在168 ℃左右有明显的吸收峰，而图7中本实施例制备的蛋白仿生伊曲康唑样品无明显吸收峰，说明样品不同于物理混合样品且呈无定形态，载药成功。进一步验证样品粉末能加速释放的结论。

实施例2

称取伊曲康唑30 mg于0.5 mL氯仿-无水乙醇混合溶液中，称取0.1 g酪蛋白和0.5g乳清蛋白分散于100 mL水中（室温），有机相逐滴加入水相（4℃）中，在10000 rpm高剪切5 min，10℃条件下高压均质1600 bar循环3次，45℃减压旋转蒸发除去有机溶剂。-20℃预冻4 h，-50℃预冻4 h，冷冻干燥48 h。

经检测，本实施例制得的冻干样品粉末粒径在 ：100~400 nm范围内，PDI为0.497。

测得伊曲康唑溶解度为7.67 mg/mL。

伊曲康唑累计释放率的测定方法参照中国药典（2010版），结果说明，本实施例的蛋白仿生伊曲康唑药物体系品的初始释放速率均明显高于伊曲康唑。释放开始前5 min，样品累计释放率约75%，在30 min-60 min内释放平稳，没有大的波动或变化，1h内完全释放。

实施例3

称取伊曲康唑 2.0 g于10.0 mL二氯乙烷中，称取5 g酪蛋白和1g乳清蛋白分散于100 mL水中（室温），有机相在高剪切时加入水相（室温），18000 rpm高剪切3 min，15 ℃条件下高压均质1800 bar循环1次，45℃减压旋转蒸发除去有机溶剂。-20℃预冻过夜，冷冻干燥48 h。

经检测，本实施例制得的冻干样品粉末粒径在 ：100~500 nm范围内，PDI为0.369。

测得伊曲康唑溶解度为11.24mg/ml。

伊曲康唑累计释放率的测定方法参照中国药典（2010版），结果说明，本实施例的蛋白仿生伊曲康唑药物体系品的初始释放速率均明显高于伊曲康唑。释放开始前5 min，样品累计释放率约75%，在30 min-60 min内释放平稳，没有大的波动或变化，1h内完全释放。

实施例4

称取伊曲康唑3.0 g于12.0 mL二氯乙烷-无水乙醇混合溶液中，称取8.0 g α-乳白蛋白（α-la）和2.0g β-乳球蛋白分散于100 mL水中（30℃），有机相在高剪切时加入水相（室温），8000 rpm高剪切10 min，20℃条件下高压均质500 bar循环10次，50℃刮板式薄膜蒸发除去有机溶剂。-20℃预冻过夜，冷冻干燥48 h。

经检测，本实施例制得的冻干样品粉末粒径在 ：50~350 nm 范围内，PDI为0.216。

测得伊曲康唑溶解度为13.08mg/ml。

伊曲康唑累计释放率的测定方法参照中国药典（2010版），结果说明，本实施例的蛋白仿生伊曲康唑药物体系品的初始释放速率均明显高于伊曲康唑。释放开始前5 min，样品累计释放率约80%，在30 min-60 min内释放平稳，没有大的波动或变化，1h内完全释放。

实施例5

称取伊曲康唑 0.6 g于3.0 mL氯仿中，称取1.0 g α-乳白蛋白（α-la）和5.0gβ-乳球蛋白分散于100 mL水中（40℃），有机相逐滴加入水相中（10℃），在16000 rpm高剪切3 min，35 ℃条件下高压微射流1500 bar循环2次，40℃刮板式薄膜蒸发除去有机溶剂。-50℃预冻过夜，冷冻干燥36 h。测定纳米悬浮液粒径分布。

经检测，本实施例制得的冻干样品粉末粒径在 ：50~400 nm范围内，PDI为0.251。

测得伊曲康唑溶解度为9.76mg/ml。

伊曲康唑累计释放率的测定方法参照中国药典（2010版），结果说明，本实施例的蛋白仿生伊曲康唑药物体系品的初始释放速率均明显高于伊曲康唑。释放开始前5 min，样品累计释放率约75%，在30 min-60 min内释放平稳，没有大的波动或变化，1h内完全释放。

实施例6

称取伊曲康唑 0.6 g于3.0 mL氯仿中，称取5.0 g α-乳白蛋白（α-la）和1.0gβ-乳球蛋白分散于100 mL水中（40℃），有机相逐滴加入水相中（10℃），在10000rpm高剪切2min，35 ℃条件下高压微射流1100 bar循环4次，40℃刮板式薄膜蒸发除去有机溶剂。-50℃预冻过夜，冷冻干燥36 h。测定纳米悬浮液粒径分布。

经检测，本实施例制得的冻干样品粉末粒径在 ：50~400 nm范围内，PDI为0.251。

测得伊曲康唑溶解度为10.58mg/ml。

伊曲康唑累计释放率的测定方法参照中国药典（2010版），结果说明，本实施例的蛋白仿生伊曲康唑药物体系品的初始释放速率均明显高于伊曲康唑。释放开始前5 min，样品累计释放率约75%，在30 min-60 min内释放平稳，没有大的波动或变化，1h内完全释放。

符合DSC测试样品为无定形态粉末能加速释放的结论。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。