本发明属于医药领域，具体涉及一种用于治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物。
背景技术：
缺血性脑卒中（cerebralischemicstroke）是脑部血液循环障碍导致局部供血和炎症，从而引发的脑组织坏死及神经功能损伤性疾病，通常由脑部供血血管狭窄或血栓栓塞所致。缺血性脑卒中占脑卒中的85%以上，是目前最主要的致死、致残性疾病，卒中后偏瘫、丧失行动能力是目前困扰广大患者的主要问题。
急性缺血性脑卒中(acutecerebralarterialthrombosis)是缺血性脑卒中的主要类型，约占卒中患者总人数的60～80%。在中国每年新发急性缺血性脑卒中患者约150～200万人。病死率约80～120/10万人。近年研究显示中国急性缺血性脑卒中患者发病后1月病死率约为3.3～5.2％，3月病死率9～9.6％，死亡/残疾率为34.5～37.1％；1年病死率11.4.～15.4％，死亡／残疾率33.4.～44.6％（中华医学会神经病学分会，中华医学会神经病学分会脑血管病学组.中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014）。与出血性脑卒中相比，缺血性脑卒中发病相对缓慢，但预后相对更差，尤其是神经功能恢复的难度更大。
目前认为，早期溶栓治疗是目前对急性缺血性脑卒中的治疗首选，及时溶栓，解除血管阻塞，促进血管再通，恢复脑部供血，有利于减轻脑组织损伤及神经损伤，改善缺血性脑卒中的预后。目前已上市的缺血性脑卒中用溶栓药物包括第一代非纤维蛋白选择性溶栓药尿激酶、链激酶；第二代纤维蛋白选择性溶栓药重组人组织型纤溶酶原激活剂(recombinanthumantissue-typeplasminogenactivator,rt-pa，中文通用名为阿替普酶)及第三代纤维蛋白选择性溶栓药物替奈普酶（tnk-tpa）。
第一代溶栓药物不具有纤维蛋白特异性，可导致系统性纤维蛋白降解，易出现出血并发症，血管再通率偏低。尿激酶无抗原性和过敏反应。链激酶有一定抗原性，临床应用时需要预先负荷剂量中和体内抗体，余药方可发挥作用，剂量难掌握，易引起过敏反应。
第二代溶栓药物重组人组织型纤溶酶原激活剂：是用基因重组技术制备的人源蛋白，对纤维蛋白具有特异性的亲和力，故可选择性地激活血凝块中的纤溶酶原，具有较强的局部溶栓作用。该药无抗原性，但半衰期短，需要持续静脉给药。
第三代溶栓药物替奈普酶临床上可单次静脉推注给药，对血凝块有较强的亲和力，拮抗纤溶酶原激活剂抑制剂-1的能力也较重组组织性纤溶酶原激活剂强。
瑞替普酶也是t-pa的突变体，通过基因重组技术获得，保留了较强的纤维蛋白选择性，同血浆半衰期显著延长，可通过静脉推注直接给药，使用更方便。
自1996年美国食品药品监督管理局批准rt-pa用于急性缺血性脑卒中的治疗起，至今已有20年。美国心脏协会/美国脑卒中协会发布的《急性缺血性脑卒中早期诊疗指南》及中华医学会神经病学分会和中华医学会神经病学分会脑血管病学组发布的《中国急性缺血性脑卒中诊治指南》结合大量循证医学证据认为重组人组织型纤溶酶原激活剂是效果较好的急性缺血性脑卒中溶栓药物。
然而，重组人组织型纤溶酶原激活剂于急性缺血性脑卒中发病1.5小时内给药时效果最为理想，发病3～4.5小时给药时效果降低50%，目前没有证据显示缺血性脑卒中发病6小时后给药能获得收益。并且重组人组织型纤溶酶原激活剂存在出血风险，且出血的不良反应发生率较高，如脑出血、脑血肿、出血性卒中、卒中的出血性转变、颅内血肿、蛛网膜下腔出血、咽部出血、胃出血，胃溃疡出血、直肠出血、呕血、黑便、口部出血、牙龈出血、瘀斑、血尿、泌尿道的出血、注射部位处出血等等。因此，目前的文献认为重组人组织型纤溶酶原激活剂溶栓24小时内患者不应使用降低凝血功能的药物如肝素、阿司匹林、醋硝香豆素、茴茚二酮、双香豆素、苯茚二酮、华法林等等。最近国内外研究均表明，重组人组织型纤溶酶原激活剂溶栓后早期给予抗凝药物对患者症状改善无益，且会增加出血风险（陈晨.阿替普酶溶栓治疗脑卒中后早期给予阿司匹林无益.中华医学杂志,2012,92(39):2805-2805；焦迎宾.早期给予阿司匹林对阿替普酶治疗的急性缺血性脑卒中患者的影响.中国保健营养旬刊.2012,22(8):2824-2824）。
此外，市售的重组人组织型纤溶酶原激活剂制剂为注射用冻干粉，即注射用阿替普酶，药物稳定性差，适用于复溶的溶剂较少，复溶后必须尽快使用，且存在诸多配伍禁忌，目前仍认为其不益与其他药物尤其是碳水化合物混合后静脉注射给药。如注射用阿替普酶与注射用奥美拉唑钠接触混合时出现白色混浊沉淀物及絮状物（叶丽芬.注射用阿替普酶与奥美拉唑存在配伍禁忌.中国乡村医药.2014,21（2）：43.）。
由于上述溶栓药物存在诸多禁忌，且溶栓时间窗较窄，而中药及单体药物缺乏快速溶栓效果。因此溶栓药物的临床应用较少，而巴曲酶以及抗凝血药物、抗血小板凝集药物应用相对较多。其中巴曲酶属于降纤药，目前禁忌与抗凝血药物、抗血小板凝集药物联合使用。巴曲酶提取自蛇毒，具有降纤、预防血栓形成、促进组织纤溶酶原激活物释放、间接溶栓、抑制血管内部炎症、保护血管上皮细胞等功效（黄宪.巴曲酶治疗急性缺血性脑卒中的临床应用效果分析.转化医学电子杂志.2015,2（7）:91-92.）。
技术实现要素：
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种用于治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种用于治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物，由医药学上可接受的药用辅料和以下活性成分制成：巴曲酶、胞二磷胆碱、银杏内酯、原卟啉钠。
作为一个优选的方案，所述活性成分的重量份比为：巴曲酶3000～9000重量份、胞二磷胆碱1000～4000重量份、银杏内酯600～4000重量份、原卟啉钠60～82重量份。
作为一个进一步优选的方案，所述活性成分的重量份比为：巴曲酶3500～6000重量份、胞二磷胆碱1000～3000重量份、银杏内酯600～2800重量份、原卟啉钠60～70重量份。
作为一个更进一步优选的方案，所述活性成分的重量份比为：巴曲酶4000重量份、胞二磷胆碱1500重量份、银杏内酯900重量份、原卟啉钠62重量份。
优选的，上述用于治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物的剂型为注射用冻干粉制剂。
优选的，上述医药学上可接受的药用辅料包括灭菌注射用水、吐温80、磷酸和冻干保护剂。
优选的，上述冻干保护剂为甘露醇、l-精氨酸、海藻糖、蔗糖、葡萄糖、半乳糖、聚乙二醇、透明质酸中的一种或两种。
优选的，所述冻干保护剂为l-精氨酸和甘露醇。
优选的，所述冻干粉制剂通过包含以下步骤的制备方法制得：
1）取处方量胞二磷胆碱、原卟啉钠混合后加入灭菌注射用水溶解得溶液a，溶液浓度以胞二磷胆碱计算为2～15mg/ml；
2）取处方量巴曲酶，加入灭菌注射用水、磷酸、l-精氨酸、甘露醇、吐温80搅拌溶解，加入处方量银杏内酯再次搅拌溶解，得溶液b，溶液浓度以巴曲酶计算为1～15mg/ml；
3）将溶液a与溶液b混合，采用孔径为0.1～0.45μm的微孔滤膜过滤，滤液分装后进行冷冻干燥既得。
优选的，上述步骤1）中溶液a的浓度以胞二磷胆碱计算为5～10mg/ml；步骤2）中磷酸用量为巴曲酶重量的10倍，l-精氨酸用量为巴曲酶重量的30倍，甘露醇用量为巴曲酶重量的4倍，吐温80用量为巴曲酶重量的0.1倍，溶液b的浓度以巴曲酶计算为1～10mg/ml；步骤3）中微孔滤膜孔径为0.45μm，滤液分装后每瓶药物含量以巴曲酶计算为10～30mg。
优选的，上述步骤1）中溶液a的浓度以胞二磷胆碱计算为5mg/ml；步骤2）中溶液b的浓度以巴曲酶计算为2mg/ml。
优选的，上述用于治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物中所述银杏内酯至少包括银杏内酯b、银杏内酯b、白果内酯、银杏内酯a、银杏内酯c中的一种。
优选的，上述用于治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物中所述银杏内酯为银杏内酯b。
在处方一定的前提下，冻干粉制备的工艺参数如预冻温度、一次干燥和二次干燥温度、真空度及温度变化速度等属于本领域技术人员通过正交试验设计等即可不需要创造性劳动获得的方案。具体可见姚静、张自强主编2007年中国医药科技出版社出版的《药物冻干制剂技术的设计及应用》。
作为一个优选的技术方案，上述步骤3）中冷冻干燥包括以下步骤：以-40℃预冻温度，预冻2小时；预冻结束后，抽真空至20pa，以5℃/分钟的升温速度升温至0℃，维持干燥9小时；然后以2℃/分钟的升温速度升温至30℃,维持干燥3小时即得。
本发明技术方案中所述的巴曲酶，英文名为batroxobin，cas号为9001-13-2，其原料及制剂均可自市场购得。
本发明技术方案中所述的胞二磷胆碱，英文名为cytidinediphosphatecholine，cas号为987-78-0，其原料可自市场购得。
本发明技术方案中所述的银杏内酯是在银杏叶中发现的一类重要的内酯类活性成分，包括银杏内酯b、白果内酯、银杏内酯a和银杏内酯c等，其中银杏内酯b生物活性最强，而银杏内酯b、白果内酯、银杏内酯a和银杏内酯c的混合物在临床缺血性脑卒中治疗中也可改善神经功能评分。银杏内酯b英文名为ginkgolideb，cas号为15291-77-7，其原料可自市场购得；银杏内酯a英文名为ginkgolidea，cas号为15291-75-5，其原料可自市场购得；银杏内酯c英文名为ginkgolidec，cas号为15291-76-6，其原料可自市场购得；白果内酯英文名为bilobalide，cas号为33570-04-6，其原料可自市场购得。
本发明技术方案中所述的原卟啉钠，英文名为protoporphyrinsodium，cas号为50865-01-5，其原料可自市场购得。
本发明的发明人在研究中发现，原卟啉钠与巴曲酶联合使用可出乎预料的增强巴曲酶的体内抗血栓效果和巴曲酶体内增强脑部血流灌注量的效果。胞二磷胆碱、银杏内酯的混合物与巴曲酶联合使用具有一定的药效叠加作用，巴曲酶、胞二磷胆碱、银杏内酯、原卟啉钠的复方对急性缺血性脑卒中的抗血栓和增强脑部血流灌注量的效果显著高于巴曲酶、胞二磷胆碱、巴曲酶的组合物。体内实验显示巴曲酶、胞二磷胆碱、银杏内酯、原卟啉钠复方不增加巴曲酶出血风险；制剂学稳定性研究显示，巴曲酶、胞二磷胆碱、银杏内酯、原卟啉钠组成的复方制备成冻干粉后，采用溶剂复溶后稳定性未见显著降低。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的解释。应当理解的是，以下实施例仅用于解释本发明，而不是限制本发明的保护范围。
实施例1治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物及其制备
组方：巴曲酶3500mg、胞二磷胆碱1000mg、银杏内酯b600mg、原卟啉钠60mg。
制备方法：
1）取处方量胞二磷胆碱、原卟啉钠混合后加入灭菌注射用水溶解得溶液a，溶液浓度以胞二磷胆碱计算为5mg/ml；
2）取处方量巴曲酶，加入灭菌注射用水、35000mg磷酸、105000mgl-精氨酸、14000mg甘露醇、350mg吐温80搅拌溶解，加入处方量银杏内酯b再次搅拌溶解，得溶液b，溶液浓度以巴曲酶计算为2mg/ml；
3）将溶液a与溶液b混合，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液分装入40ml灭菌西林瓶中，每瓶含巴曲酶17.5mg，将西林瓶放入冻干机，以-40℃预冻温度，预冻2小时；预冻结束后，抽真空至20pa，以5℃/分钟的升温速度升温至0℃，维持干燥9小时；然后以2℃/分钟的升温速度升温至30℃，维持干燥3小时即得每瓶含17.5mg巴曲酶、5mg胞二磷胆碱、3mg银杏内酯b、0.3mg原卟啉钠的注射用冻干粉。
实施例2治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物及其制备
组方：巴曲酶4000mg、胞二磷胆碱1500mg、银杏内酯b900mg、原卟啉钠62mg。
制备方法：
1）取处方量胞二磷胆碱、原卟啉钠混合后加入灭菌注射用水溶解得溶液a，溶液浓度以胞二磷胆碱计算为5mg/ml；
2）取处方量巴曲酶，加入灭菌注射用水、40000mg磷酸、120000mgl-精氨酸、16000mg甘露醇、400mg吐温80搅拌溶解，加入处方量银杏内酯b再次搅拌溶解，得溶液b，溶液浓度以巴曲酶计算为2mg/ml；
3）将溶液a与溶液b混合，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液分装入40ml灭菌西林瓶中，每瓶含巴曲酶20mg，将西林瓶放入冻干机，以-40℃预冻温度，预冻2小时；预冻结束后，抽真空至20pa，以5℃/分钟的升温速度升温至0℃，维持干燥9小时；然后以2℃/分钟的升温速度升温至30℃，维持干燥3小时即得每瓶含20mg巴曲酶、7.5mg胞二磷胆碱、4.5mg银杏内酯b、0.31mg原卟啉钠的注射用冻干粉。
实施例3治疗急性缺血性脑卒中的药物组合物及其制备
组方：巴曲酶6000mg、胞二磷胆碱3000mg、银杏内酯b2800mg、原卟啉钠70mg。
制备方法：
1）取处方量胞二磷胆碱、原卟啉钠混合后加入灭菌注射用水溶解得溶液a，溶液浓度以胞二磷胆碱计算为5mg/ml；
2）取处方量巴曲酶，加入灭菌注射用水、60000mg磷酸、180000mgl-精氨酸、24000mg甘露醇、600mg吐温80搅拌溶解，加入处方量银杏内酯b再次搅拌溶解，得溶液b，溶液浓度以巴曲酶计算为2mg/ml；
3）将溶液a与溶液b混合，采用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，将滤液分装入40ml灭菌西林瓶中，每瓶含巴曲酶30mg，将西林瓶放入冻干机，以-40℃预冻温度，预冻2小时；预冻结束后，抽真空至20pa，以5℃/分钟的升温速度升温至0℃，维持干燥9小时；然后以2℃/分钟的升温速度升温至30℃，维持干燥3小时即得每瓶含30mg巴曲酶、15mg胞二磷胆碱、14mg银杏内酯b、0.35mg原卟啉钠的注射用冻干粉。
实施例4抑制血栓形成的体内药效学实验
一、药物及配制
实验药物1：取实施例1的冻干粉，取样量按巴曲酶计算为120mg，等分为6份，每份20mg，采用生理盐水稀释。
实验药物2：取实施例2的冻干粉，取样量按巴曲酶计算为120mg，等分为6份，每份20mg，采用生理盐水稀释。
实验药物3：取实施例3的冻干粉，取样量按巴曲酶计算为120mg，等分为6份，每份20mg，采用生理盐水稀释。
对比药物1：取巴曲酶120mg，等分为6份，每份20mg，采用生理盐水稀释。
对比药物2：取胞二磷胆碱45mg、银杏内酯b27mg混合均匀，等分为6份，每份含胞二磷胆碱7.5mg，加入生理盐水稀释后再加入80mg甘露醇和2mg吐温80搅拌溶解。
对比药物3：取原卟啉钠1.86mg，等分为6份，每份0.31mg，采用生理盐水稀释。
对比药物4：取由巴曲酶120mg、胞二磷胆碱45mg、银杏内酯b27mg混合均匀，等分为6份，每份含巴曲酶20mg，加入生理盐水稀释后再加入80mg甘露醇和2mg吐温80搅拌溶解。
对比药物5：取由巴曲酶120mg、原卟啉钠1.86mg，混合均匀，等分为6份，每份含巴曲酶20mg，采用生理盐水稀释。
对比药物6：生理盐水。
上述实验药物及对比药物均稀释为等体积溶液。
二、动物及给药
雄性新西兰白兔，体重2.4～2.8kg，购自武汉大学生命科学院动物实验中心，取新西兰白兔54只，随机分为9组，每组6只。9组动物分别通过耳缘静脉滴注给予实施例1-3及对比例1-6的药物，且各组动物滴注速度相同。滴注完毕后4h，采用氯化铁溶液诱导兔血管损伤致血栓形成。
将家兔采用20%乌拉坦耳缘静脉注射麻醉，仰卧位固定。分离右侧颈总动脉、颈外动脉和左颈外静脉。经颈外动脉插管至距颈内、外动脉分叉约2mm处，插管与压力换能器相连，采用pclab生物信号采集处理系统连续记录血压变化。将浸有2微升浓度为50%氯化铁水溶液的滤纸条（宽0.5cm×长1.0cm）覆盖插管近心端颈总动脉，滤纸两端用动脉夹夹闭，30分钟后去除动脉夹。滤纸条下置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。90分钟后切取滤纸条覆盖位置的血管（切取血管长度均为3.0cm，即自滤纸条左右两侧各扩出1.0厘米。防止血栓取样不全），取出血栓，置于恒温干燥箱中40℃烘干20分钟，取出称重。
三、统计分析
数据以均值±标准差表示。多组间比较采用单因素方差分析进行比较，组间两两比较采用tukey's检验。p＜0.05视为差异有统计学意义。
四、实验结果
各组动物血栓重量测定结果见下表：
与对比药物6相比：*p＜0.05,**p＜0.01；与对比药物1相比：#p＜0.05,##p＜0.01。与对比药物5相比：▲p＜0.05,▲▲p＜0.01。
由上表可见，与对比药物6相比，对比药物3的血栓重量无显著差异，说明原卟啉钠无抑制血栓形成的作用。但与对比药物1相比，对比药物5的血栓重量显著降低（p＜0.05），说明原卟啉钠可显著提高巴曲酶的预防血栓形成作用。
与对比药物6相比，对比药物2的血栓重量显著降低（p＜0.05），说明胞二磷胆碱、银杏内酯b混合物具有预防血栓形成作用。与对比药物1相比，对比药物4的血栓重量未见显著降低，但低于对比药物1，说明胞二磷胆碱、银杏内酯b混合物与巴曲酶具有一定的药效叠加作用。
实验药物1-3组的血栓重量均显著低于对比药物1、对比药物5及对比药物6（p＜0.01）。说明实验药物1-3预防血栓形成的作用显著高于上述药物。
实施例5对急性缺血性脑卒中的体内药效学实验
spf级雄性sd大鼠40只，体重100～140g，吸入异氟烷麻醉后，取侧卧位，自左眼眶后至耳的中点纵形切开皮肤，沿颞骨缘剪开颞肌筋膜，完全暴露颞鳞和蝶骨大翼，在颧弓上方颞鳞与蝶骨大翼交界处钻孔，切开硬膜，暴露大脑中动脉，将浸有2微升浓度为50%氯化铁水溶液的滤纸条（宽0.5cm×长1.0cm）覆盖大脑中动脉中段，滤纸两端用动脉夹夹闭，30分钟后去除动脉夹。滤纸条下置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。90分钟后取下滤纸条及塑料薄膜，手术创面撒青霉素药粉，分层缝合肌肉和皮肤，单笼饲养。
手术后24小时，将动物随机分为5组，每组8只，第一组静脉注射给予实施例2的冻干粉，用生理盐水溶解后注射，以巴曲酶计算剂量为20mg/kg。第二组静脉注射给予巴曲酶生理盐水溶液，以巴曲酶计算剂量为20mg/kg。第三、四组静脉注射给予实施例4的对比药物4和对比药物5，以巴曲酶计算剂量为20mg/kg。第五组静脉注射给予等体积生理盐水。
给药后24小时，处死各组大鼠，断头，取出脑组织置于4%多聚甲醛中固定，取视交叉部位进行冠状切片，切片厚度150微米，用激光扫描共聚焦显微镜扫描观察，以绿色荧光所占的体积表示血浆容量，以扫描区血浆容量与扫描区总容量的百分比表示脑血流灌注量。
数据以均值±标准差表示。多组间比较采用单因素方差分析进行比较，组间两两比较采用tukey's检验。p＜0.05视为差异有统计学意义。
各组大鼠脑血流灌注量数据见下表：
与生理盐水组相比，*p＜0.01；与巴曲酶组相比，#p＜0.05,##p＜0.01。与对比药物5相比▲p＜0.05,▲▲p＜0.01。
由上表可见，与生理盐水、巴曲酶相比，实施例2的冻干粉均可显著提高急性缺血性脑卒中大鼠的脑血流灌注量（p＜0.01）。与对比药物5相比，实施例2的冻干粉也可显著提高急性缺血性脑卒中大鼠的脑血流灌注量（p＜0.05）。与巴曲酶相比，可显著提高急性缺血性脑卒中大鼠的脑血流灌注量（p＜0.05），说明原卟啉钠对巴曲酶增强脑血流灌注量的效果具有增效作用。而血流灌注量的提高能够降低缺血性脑卒中因缺血而导致的神经损伤，促进神经修复，降低偏瘫的发生。
实施例6体内安全性研究
24只beagle犬，雌雄各半，体重4.3～5.7kg，购自武汉大学生命科学院动物实验中心。将beagle犬随机分为2组，每组12只，雌雄各半。
第一组耳缘静脉滴注巴曲酶水溶液，注射剂量以巴曲酶计算为10mg/kg/天，每日一次，连续滴注14天。
第二组耳缘静脉滴注实施例2的冻干粉水溶液，注射剂量以巴曲酶计算为10mg/kg/天，每日一次，连续滴注14天。
每日给药期间检测动物血压及心电图并观察体表及注射部位出血情况，给药结束后24小时，处死各组动物，取心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、子宫、脑组织，生理盐水冲洗后观察脏器出血。
第一组动物7只出现注射部位出血，3只出现胃肠道出血，未见颅内出血，出血发生率为10/12，其中脏器出血发生率为3/12。
第二组动物2只出现注射部位出血，未见脏器器官出血，未见颅内出血，出血发生率为2/12，其中脏器出血发生率为0。
上述结果表明实施例2的冻干粉出血风险低于巴曲酶。
实施例7复溶稳定性研究
取实施例1、2、3的冻干粉各6瓶，分别采用灭菌注射用水溶解，溶液浓度以巴曲酶计算分别为2mg/ml。
另取实施例1、2、3的冻干粉各6瓶，分别采用灭菌注射用水溶解，溶液浓度以巴曲酶计算分别为10mg/ml。
上述溶液4°c冰箱中静置存放3个月小时，然后取出观察溶液颜色、澄明度及沉淀发生情况。
上述溶液未发生沉淀，溶液颜色及澄明度无异常。结果表明，实施例1、2、3的冻干粉配方复溶后4°c条件下可稳定存放至少3个月。
需要指出的是，上述实施例仅对本发明技术方案的部分组合物及其制备方法进行了描述，应当理解的是，本发明技术方案所要求保护的范围不应当被不适当的限制于上述具体实施方式。事实上，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的前提下，仍可以做出多种变换方式，如药物制剂由静脉注射制剂改为肌内或皮下注射制剂；又如对不同类型的银杏内酯进行组份和含量的变换等，上述改进仍属于本发明技术方案的保护范围。