奥氮平在制备预防和/或治疗脂肪性肝病的药物中的应用的制作方法

本发明涉及医药领域，涉及一种奥氮平的医药新用途，特别涉及奥氮平在制备预防和/或治疗脂肪性肝病的药物中的应用。

背景技术：

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholfattyliverdisease，nafld)是一种以弥漫性肝细胞大泡性脂肪病变为主要特征的临床综合征疾病，并且无过量饮酒史和其他明确的损肝因素，是代谢综合征在肝脏的主要表现形式。本病可进行性发展，从单纯性脂肪肝，非酒精性脂肪性肝炎，到肝纤维化，肝硬化，最终进展为肝细胞癌。nafld的发病机制仍未完全阐明，但其存在与心包脂肪增加，颈动脉狭窄，心血管死亡率增加有关。该病已成为严重影响我国人民身心健康和国民经济的主要疾病之一。目前世界范围内尚无疗效确切,安全稳定的治疗nafld的特效药物。

奥氮平是临床上使用最广泛的第二代抗精神病药物，可用于治疗精神分裂症、躁狂症及双相情感障碍等。临床回顾性研究发现奥氮平有诱导患者体重增加的不良反应，可增加患者的代谢综合征风险。但也有研究报道发现在非精神病的健康人体上发现奥氮平引起的体重增加主要是由于肌肉质量的增加，而非内脏脂肪的累积(elsadaurignac,kennethe.leonardandstevenl.dubovsky,increasedleanbodymassasanearlyindicatorofolanzapine-inducedweightgaininhealthymen[j].intclinpsychopharmacol,2014,30:23-8)。

五羟色胺(5-ht)被发现除具有神经递质作用外，还具有能量调控的作用。最新研究发现，中枢与外周五羟色胺系统具有相反的作用。对中枢的五羟色胺系统的抑制可导致精神抑郁，食欲增加。但对外周五羟色胺系统的抑制可减重和改善胰岛素抵抗(justindcrane1,rengasamypalanivel1,emiliopmottilloetal.inhibitingperipheralserotoninsynthesisreducesobesityandmetabolicdysfunctionbypromotingbrownadiposetissuethermogenesis[j].naturemedicine,2015,20:161-172)。奥氮平对5-ht2a/2c受体具有较强的抑制作用，且在精神正常的健康人上未见有明显的食欲增加的不良反应，提示奥氮平具有潜在改善肥胖及胰岛素抵抗的作用。目前，未见有关奥氮平改善肥胖模型下nafld的报道。

技术实现要素：

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供奥氮平在制备预防和/或治疗脂肪性肝病的药物中的应用。本发明首次发现奥氮平在预防和/或治疗脂肪性肝病方面的显著效果，因此，奥氮平作为有效成分，在制备预防和/或治疗脂肪性肝病方面中具有重要的社会意义和经济意义。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述奥氮平在制备预防和/或治疗脂肪性肝病的药物中的应用。

其中，所述脂肪性肝病为非酒精性脂肪性肝病。

进一步地，所述非酒精性脂肪性肝病为非酒精性脂肪性肝炎。

更进一步地，所述非酒精性脂肪性肝病为糖尿病相关或者肥胖相关的非酒精性脂肪性肝病。

其中，所述奥氮平在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎或者肝硬化的药物中的应用。

其中，所述奥氮平可以为其药学上可接受的盐。奥氮平可以以其药学上可接受的盐以前药形式存在。

作为优选，所述药学上可接受的盐选自双羟萘酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐或苯磺酸盐中的一种。

进一步地，所述奥氮平或其药学上可接受的盐为水合物。

更进一步地，所述水合物为一水合物或二水合物。

本发明通过研究发现：奥氮平对高脂诱导肥胖小鼠的nafld具有显著改善作用。因此，奥氮平有望开发为一种预防和治疗nafld的药物。进而，本发明的第一方面是提供了奥氮平及在制备预防和治疗nafld的药物中的应用。同时提供奥氮平的可药用盐，前药作为唯一活性成分应用于nafld的预防及治疗药物制备中，其中，所述的nafld由高脂饮食所诱导。

本发明的第二方面是还提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的所述奥氮平的可药用盐、前药和可药用载体。“治疗有效量”是指能够达到治疗效果的提取物的量。本领域的专业人员能够理解，“治疗有效量”可以随着给药的方式、载体的使用以及可能和其他治疗剂合用等而有所不同。

本发明所用奥氮平的结构式如下式：

本发明的奥氮平可从商业途径购买，其纯度均符合药用要求。

本发明中奥氮平可改善非酒精性脂肪肝的作用机制是主要是利用奥氮平通过修复脂肪组织自噬流中溶酶体的功能来改善wat的代谢，从而减少脂肪组织炎症状态，改善全身脂质代谢情况，降低脂质在肝脏的堆积，从而达到治疗非酒精性脂肪肝的作用。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明首次发现奥氮平在预防和/或治疗脂肪性肝病方面的显著效果，奥氮平可显著降低高脂饮食诱导的体重增加，该作用主要表现为各白色脂肪重量的显著降低，进而改善白色脂肪组织以及全身脂质代谢环境，主要是甘油三脂、血清游离脂肪酸和瘦素的降低。病理切片结果显示，奥氮平可减少脂肪组织向肝脏输出脂肪，降低脂质在肝脏的堆积。此外，奥氮平可转归血清谷丙转氨酶水平，保护肝脏功能，因此奥氮平或者其药学上可接受的盐可对非酒精性脂肪肝起到治疗作用。

附图说明

图1为奥氮平对高脂饮食诱导肥胖的小鼠体重的影响关系图；(scd：正常饮食组；hfd：高脂饮食组；hfd+ola奥氮平给药组，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001hfe+olavshfd；##p<0.01，###p<0.001hfdvsscd)；

图2为奥氮平对各部分脂肪的影响关系图；(scd：正常饮食组；hfd：高脂饮食组；hfd+ola奥氮平给药组；iwat：腹股沟白色脂肪；ewat：附睾白色脂肪；pwat：肾周白色脂肪；bat：棕色脂肪。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)；

图3为各组小鼠肝脏h&e染色和油红o染色关系图；(scd：正常饮食组；hfd:高脂饮食组；hfd+ola奥氮平给药组；标尺：50μm)；

图4为各组小鼠血清alt，ast水平关系图；(alt：谷丙转氨酶；ast：草转氨酶；scd：正常饮食组；hfd：高脂饮食组；hfd+ola奥氮平给药组；*p<0.05)

图5为奥氮平对各组小鼠血清tg，nefa和瘦素水平关系图；(tg：甘油三脂；nefa：游离脂肪酸；leptin：瘦素；scd：正常饮食组；hfd：高脂饮食组；hfd+ola奥氮平给药组；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。

具体实施方式

以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

奥氮平对非酒精性脂肪肝的作用研究，观察奥氮平对饮食因素诱导的非酒精性脂肪肝的保护作用。

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一、材料与方法

1、药物：奥氮平，纯度98％，上海源叶生物科技公司。取ola粉末4mg，加入盛有10ml去离子水的容器中再加入60μl盐酸(1m)，充分振荡，超声10分钟，-4℃冰箱保存，供小鼠灌胃用。

2、实验动物及模型建立：雄性c57bl/6j小鼠(5周龄)，体重20±2g，在特定的饲养条件下(恒温恒湿、12小时昼夜更替周期、自由饮食饮水)适应7天，之后将所有小鼠随机分为3组：对照组(standardchowdiet,scd,n＝8)使用普通饲料(10％kcalfat)，模型组(highfatdiet,hfd)使用高脂饲料(45％kcalfat)，ola给药组(hfd+ola)使用高脂饲料的同时每天固定时间给予ola(2mg/kg)灌胃干预。高脂饲料造模持续12周，在最后的4周对ola组进行干预。每两天进行体重与摄食量测定。

3、生化指标测定：小鼠血清alt和ast、甘油三脂，nefa分别由谷丙转氨酶测试盒(微板法)、谷草转氨酶测试盒(微板法)、甘油三酯测定试剂盒(单试剂gpo-pap法)、游离脂肪酸测试盒(酶法，双试剂)直接测定，均购自南京建成试剂公司。将小鼠血清按照alt/ast测定说明书操作步骤表加入相应试剂并恒温孵育20min。再根据alt/ast标准曲线操作步骤表绘制标准曲线。利用公式计算样本中的alt/ast酶活性。(1卡门氏单位＝0.482iu/l，25℃)；小鼠血清甘油三脂测定按说明书步骤加入96孔板中，混匀，37℃孵育10分钟，波长510nm，酶标仪测定各孔吸光度值。再按照下述计算公式计算tg含量。

按照nefa测试盒说明书步骤将血清样本与试剂加入96孔板中，在主波长546nm、辅助波长600nm下读取吸光度值。根据下述公式计算nefa浓度。

4、h&e染色：将肝脏组织常规梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，烤片(60℃，15分钟)，脱蜡，水化，苏木素染色(5分钟)，盐酸分化，伊红染色(2分钟)，最后进行常规脱水、透明、封固、镜检。

5、油红o染色：从肝脏边缘剪取少量样本，立刻置于干冰中冻存待染色。油红o染色前，用异丙醇100ml+0.5g油红o干粉充分溶解过滤后配置染色液，4℃避光保存。肝脏组织进行冰冻切片，蒸馏水浸洗，60％异丙醇浸洗2分钟，油红o工作液染色15分钟。

6、瘦素测定：1)从密封铝箔纸中拿出已在室温下平衡的微孔板，每孔加入300μl洗液洗涤两次，移除孔中洗液并反向拍干。2)每个孔依次加入45μl样本稀释液、50μl豚鼠抗瘦素血清以及5μl血清样本，4℃条件下孵育过夜(16-20小时)。3)移除孔中溶液，并用300μl洗液充分清洗酶标板5次，反向拍干。每孔加入100μl抗瘦素igg酶结合物，4℃条件下孵育4小时。4)移除孔中溶液，并用300μl洗液充分清洗酶标板7次，反向拍干。此后立即加入100μl酶基质溶液，室温避光反应30分钟。此后，每孔加入100μl终止液，在主波长450nm、辅助波长630nm下读取吸光度值。5)根据瘦素酶联免疫试剂盒说明书(购自crystalchem)标准曲线操作步骤操作并绘制标准曲线，由标准曲线计算得出血清胰岛素浓度。

实验结果

1、奥氮平可以减轻hfd诱导的小鼠体重增加

hfd组小鼠体重较scd组小鼠体重明显升高，开始给予ola之后的4周，hfd+ola组小鼠的体重较hfd组有明显的减轻，如图1所示，奥氮平可以显著减轻hfd诱导的小鼠体重增加。解剖后的各脂肪组织称重的结果显示，奥氮平的这种体重减轻的作用主要是由于脂肪组织的减少，包括腹股沟白色脂肪(iwat)、附睾白色脂肪(ewat)以及肾周白色脂肪(pwat)和棕色脂肪(bat)，如图2所示。

2、奥氮平对hfd诱导的小鼠肝脏损伤有保护作用

肝脏h&e染色和油红o染色的结果表明ola可以明显减轻hfd小鼠肝脏的脂质积累和损伤，如图3所示。同时可以显著减少hfd诱导的血清alt水平的升高，减少了脂质累积对肝功能的影响，如图4结果所示。

3、奥氮平可改善hfd诱导的小鼠血脂紊乱

尽管ola被认为可以诱导正常小鼠代谢紊乱，但是在为期12周的hfd诱导的肥胖小鼠的研究中发现，ola的干预可以明显的减少血清nefa的水平，而tg也有降低的趋势。此外，ola的干预还可以明显减少血清瘦素水平。图5结果表明，ola可显著降低血清nefa和瘦素水平，同时有降低tg的趋势。以上结果说明，ola可以显著改善hfd诱导的肝脏的脂质累积，并减少由此带来的肝功能损害及血脂升高。由于hfd诱导的小鼠模型可表现为糖尿病和肥胖的双重特症，因此，奥氮平可以用于治疗糖尿病相关或者肥胖相关的非酒精性脂肪性肝炎。此外，奥氮平其药学上可接受的盐形式，一水合物或二水合物盐，如双羟萘酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐或苯磺酸盐等可以也用于治疗糖尿病相关或者肥胖相关的非酒精性脂肪性肝炎。