本发明涉及物质的新用途，特别涉及氨基氧乙酸（aminooxyaceticacid，aoa）在制备药物中的应用。
背景技术：
肝癌是最常见的恶性消化道肿瘤之一，其中肝细胞肝癌（hcc）约占全世界肝癌的90%，并且通常在晚期被诊断出来，目前治疗的选择仍然有限，造成90%患者死亡的原因是癌细胞发生了转移。虽然肝癌的传统治疗方法较多，如手术、介入、化疗、放疗、肝移植等，但是只有不到30%的患者能够接受手术或者肝移植等治愈性疗法，且术后复发和转移率很高，剩下大部分患者则多为晚期患者，失去了手术或者肝移植的机会，系统性化疗药物治疗可能是其唯一有效的治疗方法。因此，全球均需要加强有关肝细胞肝癌医药领域的研究。
氨基氧乙酸是氨基丁酸转氨酶的抑制剂，参与氨基酸和聚胺代谢，抑制谷氨酸草酰乙酸氨基转移酶的活性。其能降低神经胶质瘤细胞中atp的含量，影响细胞周期和细胞凋亡，也能降低细胞糖酵解速率及胞外的乳酸和丙酮酸水平，而不影响细胞线粒体的膜电位。目前有研究报道氨基氧乙酸可以选择性抑制神经胶质瘤和乳腺癌细胞的生长，但迄今为止尚未见氨基氧乙酸治疗肝细胞肝癌方面的研究报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于考察氨基氧乙酸在治疗肝细胞肝癌方面的活性，以期能够开发新的治疗肝细胞肝癌的药物。
氧连-n-乙酰葡萄糖胺（o-linkedn-acetylglucosamine，o-glcnac）修饰是指单个n-乙酰葡萄糖胺（glcnac）以o-糖苷键与蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的羟基相连接的一种蛋白质修饰方式。o-glcnac修饰主要存在于细胞质和细胞核，由于其能快速、可逆的添加及移除，调节蛋白质的活性，几乎参与了各种细胞代谢途径和信号转导通路，在肿瘤等多种疾病中起着非常重要的调节作用。文献报道，多种肿瘤组织中o-glcnac修饰水平较癌旁组织升高，高水平的o-glcnac修饰与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。
本发明研究发现，氨基氧乙酸能够显著降低肝癌细胞氧连n-乙酰葡萄糖胺修饰水平；能够显著抑制人肝癌细胞系plc/prf/5细胞的增殖、侵袭及转移；能够明显抑制小鼠肝细胞肝癌的生长。
因此，本发明提供如下技术方案：
氨基氧乙酸在制备治疗肝细胞肝癌的药物中的应用。
进一步，所述治疗肝细胞肝癌的药物为抑制肝癌细胞增殖、侵袭和/或转移的药物。
更进一步，所述治疗肝细胞肝癌的药物为通过降低肝癌细胞氧连n-乙酰葡萄糖胺修饰水平来治疗肝细胞肝癌的药物。
本发明的有益效果在于：本发明考察了氨基氧乙酸在治疗肝细胞肝癌方面的活性，研究结果表明氨基氧乙酸能够显著降低肝癌细胞氧连n-乙酰葡萄糖胺修饰水平，并显示出良好的肝癌细胞增殖、侵袭、转移抑制效果，能够用于开发新的治疗肝细胞肝癌的药物，具有推向临床治疗的潜力。
附图说明
图1示出了氨基氧乙酸对人肝癌细胞氧连n-乙酰葡萄糖胺修饰的抑制作用。
图2示出了氨基氧乙酸对人肝癌细胞体外增殖能力的抑制作用。
图3示出了氨基氧乙酸对人肝癌细胞体外侵袭能力的抑制作用。
图4示出了氨基氧乙酸对人肝癌细胞体外迁移能力的抑制作用。
图5示出了氨基氧乙酸对小鼠肝细胞肝癌生长的抑制作用。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对氨基氧乙酸在治疗肝细胞肝癌方面的活性研究进行详细的描述。
一、氨基氧乙酸对人肝癌细胞氧连n-乙酰葡萄糖胺修饰的抑制作用
将处于对数生长期的人肝癌细胞系plc/prf/5细胞以70%密度铺6cm培养皿，待细胞贴壁后，分成plc/prf/5组和aoa组，aoa组加入0.5mmaoa，孵育24h，然后收集两组细胞，提取细胞总蛋白，利用广谱anti-o-glcnac抗体和westernblot方法检测细胞的氧连n-乙酰葡萄糖胺修饰水平。
结果如图1所示，aoa组细胞的氧连n-乙酰葡萄糖胺修饰水平明显降低，表明氨基氧乙酸有效抑制了人肝癌细胞的氧连n-乙酰葡萄糖胺修饰。
二、氨基氧乙酸对人肝癌细胞体外增殖能力的抑制作用
将处于对数生长期的人肝癌细胞系plc/prf/5细胞以70%密度铺6cm培养皿，24h后弃去培养基，加入500μl胰酶，置37℃孵箱中消化1分钟，待细胞漂浮后，加入1ml培养基终止消化，移入15ml离心管中，室温条件下700rpm/min离心3分钟，弃上清液，细胞沉淀加入2ml含血清25mm葡萄糖培养基重悬，取10μl细胞悬液与10μl台酚蓝混匀，加入计数板中计数。取96孔板，每孔加入2×103个plc/prf/5细胞，用25mm葡萄糖培养基补齐到100μl，分成plc/prf/5组和+aoa组，+aoa组加入0.5mmaoa，待细胞贴壁后，将96孔板放入incucytezoom活细胞成像系统，连续培养5天，每3天更换培养基并处理同前，分别于0h、24h、48h、72h、96h、120h拍照，通过incucytezoom软件生成量化的生长曲线，观察细胞增殖情况。
结果如图2所示，+aoa组的细胞生长速度明显变慢，表明氨基氧乙酸有效抑制了人肝癌细胞的增殖。
三、氨基氧乙酸对人肝癌细胞体外侵袭能力的抑制作用
将处于对数生长期的人肝癌细胞系plc/prf/5细胞以70%密度铺6cm培养皿，24h后弃去培养基，加入500μl胰酶，置37℃孵箱中消化1分钟，待细胞漂浮后，加入1ml培养基终止消化，移入15ml离心管中，室温条件下700rpm/min离心3分钟，弃上清液，细胞沉淀加入2ml无血清25mm葡萄糖培养基重悬，取10μl细胞悬液与10μl台酚蓝混匀，加入计数板中计数；取两个transwell小室，每室加入4×104个plc/prf/5细胞，用无血清25mm葡萄糖培养基补齐到200μl，分成plc/prf/5组和aoa组，aoa组加入0.5mmaoa；将两个transwell小室置于24孔板中，小室外加入含血清25mm葡萄糖培养基800μl，aoa组还加入0.5mmaoa；将24孔板置37℃孵箱中培养48h后，取出小室，弃去培养基，pbs清洗2遍，4%多聚甲醛固定20分钟，pbs清洗2遍，结晶紫染色5分钟，pbs清洗2遍，用棉球擦去小室内壁细胞，通风处自然吹干，拍摄小室外壁细胞图片，观察细胞侵袭情况。
结果如图3所示，aoa组小室外壁的细胞数量明显更少，表明氨基氧乙酸有效抑制了人肝癌细胞的侵袭。
四、氨基氧乙酸对人肝癌细胞体外迁移能力的抑制作用
将处于对数生长期的人肝癌细胞系plc/prf/5细胞以70%密度铺6cm培养皿，24h后弃去培养基，加入500μl胰酶，置37℃孵箱中消化1分钟，待细胞漂浮后，加入1ml培养基终止消化，移入15ml离心管中，室温条件下700rpm/min离心3分钟，弃上清液，细胞沉淀加入2ml含血清25mm葡萄糖培养基重悬，取10μl细胞悬液与10μl台酚蓝混匀，加入计数板中计数；取lmagelock96孔板，每孔加入2×104个plc/prf/5细胞，用25mm葡萄糖培养基补齐到100μl，分成plc/prf/5组和aoa组，aoa组加入0.5mmaoa，待细胞长满后，使用essenbioscience公司划痕器划痕，更换培养基并处理同前，将96孔板放入incucytezoom活细胞成像系统，连续培养2天，分别于0h、36h拍照，观察划痕愈合情况。
结果如图4所示，aoa组划痕愈合明显更少，表明氨基氧乙酸有效抑制了人肝癌细胞的迁移。
五、氨基氧乙酸对小鼠肝细胞肝癌生长的抑制作用
取出生2周的c57野生型小鼠12只，分成wt组和wt+aoa组，每组6只，按照75mg/kg腹腔注射den一次；第3周开始每周按照2ml/kg腹腔注射4%四氯化碳两次，持续注射16周；第26周开始wt+aoa组每隔一天按照5mg/kg腹腔注射aoa，持续注射6周；第32周时收取wt组和wt+aoa组小鼠的肝脏组织，拍照，计数肿瘤结节数。
结果如图5所示，wt+aoa组小鼠的肿瘤结节数明显减少，表明氨基氧乙酸有效抑制了小鼠肝细胞肝癌的生长。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。