专利名称：结晶β-内酰胺溶剂化物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种新的β-内酰胺抗菌素溶剂化物，特别是具有异常水合作用的1-卡巴头孢子菌素结晶溶剂化物。
β-内酰胺抗菌素(I)是一种新的口服高效抗菌剂(结构式中星号标明是R型立体构型)。
该抗菌剂在美国专利(U.S.4,335,211)和欧洲专利(E.P.14,476)中常有描述。此外，此化合物在欧洲专利说明书266896中被要求专有权。简便起见，上述化合物的无水物请参照LY228238(Lilly系列号)。
本发明涉及每分子结合有2.5个水分子的Ly228238的溶剂化物。将LY228238这一多分子水合物简写为LY2282382.5水合物(2.5hydrate)，就制药而言，该化合物是母体化合物的优良2.5分子水合物。在相当大的湿度范围内(即大约30％-100％)，此结晶2.5分子水合物是稳定的，特别是在生产和储存含有该化合物的商品所经历的湿度(约30％)条件下更为稳定。此外，结晶2.5分子水合物比无晶型的母体化合物的体积密度大，是填充胶囊的良好形式。
LY228238结晶2.5分子水合物的X线衍射结果列于下表d I/I123.86 .0614.74 .1210.23 .079.461.006.89.096.42.156.30.155.89.215.22.264.88.054.61.124.58.164.40.804.29.844.09.364.01.423.12.10表中结果是用波长(λ)为1.54056的过滤镍铜放射物而获得的。其中“d”表示平面内空白，“I/I1”表示相对强度。LY228238结晶2.5分子水合物是一白色微晶固体。
化合物(I)可制备成两性离子的形式，本发明包括该形式。简便起见，“LY228238”代表化合物(I)，而本发明的化合物则可参称之为“LY228238 2.5分子水合物”，“结晶2.5分子水合物”或“2.5分子水合物”。
本发明的“2.5分子水合物”事实上是一个化合物或称复合物，其中结合的水与母体化合物(LY228238)的摩尔比是2.5∶1。此比率在通常经受的湿度范围几乎是恒定的。就本专利公开而言，具有上表中X射线衍射特征的化合物可简单地称之为2.5分子水合物。
2.5分子水合物是由无水的母体化合物(LY228238)或母体化合物的各种醇或其它溶剂化物制得。较好的起始原料是无水母体化合物或母体化合物的乙醇溶剂化物。
于是，本发明提供一种制备化合物(I)的结晶2.5分子水合物的制备方法，该法包括冰冻干燥含有化合物(I)的水溶液，然后从水中结晶。
将上述起始物先溶于含有少量酸的水中，通常是6N盐酸(或更稀)，最好是醋酸。本发明制备2,5分子水合物的最好方法是用1％醋酸水溶液。将化合物溶解后，过滤，冰冻干燥，干粉在水中结晶，每克干粉用约5-20克水，最好用10克水。结晶最好在30-50℃进行，然后室温(20-30℃)放置至结晶析出完全为止。产品用通常方法收集，如真空过滤或离心。结晶必要时可用少量水洗，然后于干净的烘箱中干燥。
如上所述，本发明的其它方面是一种剂型。该剂型由活性成份，即化合物(I)的结晶2.5分子水合物，及一种或数种制药学上可接受的载体或赋形剂组成。这些药物成份对温血动物的革兰氏阳性和阴性菌感染的控制是有效的。
关于口服制剂(如片剂和胶囊)的成份，“合适的载体或赋形剂”指的是一般的赋形剂如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、蔗糖和淀粉；填充剂和载体如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖微晶纤维素、高岭土、甘露糖醇、磷酸氢二钙、氯化钠和藻酸；崩解剂如羧酸醚纤维素钠、微晶纤维素、玉米淀粉、淀粉乙二醇酸钠、藻酸；以及含量可变的润湿剂如月桂硫酸钠和润滑剂如硬脂酸镁及其它金属盐、硬脂酸、硅酮、滑石、蜡、油和胶体硅。也可应用调味剂，如薄荷油、冬青油、樱桃调味剂及类似物。为了使外观更美观，使人愉快或帮助识别，也可在制剂中加着色剂。片剂也可用制药学上通晓的方法包衣。
本发明的药用组合物也可以是口服液体制剂，该制剂可以是下列情形之一(1)水或油的混悬液、溶液、乳化液或糖浆；(2)使用前用水或其它载体调制后服用的干粉。当采用上述口服液体制剂时，“适当的载体、运送体或赋形剂”指的是通常的添加剂(如混悬剂阿拉伯树胶，甲基纤维素，羧乙基纤维素，羧甲基纤维素，含有羧甲基纤维钠素的纤维素(Avicel)，黄胶或淀粉)；甜味剂(如蔗糖、糖浆、葡萄糖、糖精、山梨糖醇或天冬酰胺)；润湿剂(如月桂硫酸钠，硅酮油，各种Pluromics表面活性剂或甘油)；防腐剂(如对羟基苯甲酸的甲酯、乙酯或丁酯，山梨酸)；以及染料、调味剂、盐(如氯化钠)、柠檬酸冬青油、柠檬酸钠、水、油、脂(如杏仁油、分馏过的椰子油、氢化调味油、卵磷脂、硬脂酸铝及类似物)。
也可用象疏水或亲水性基质类“载体或赋形剂”配制经典的组合物。这些基质包括油膏、软膏或洗剂。
可以动物进食或饮用水的形式给动物服用该抗菌素化合物的兽用组合物。另外，也可用“适当的载体、运送物或赋形剂”(如缓释或快释基质)将该化合物配制成乳汁制剂。
LY228238的结晶2.5分子水合物可制剂呈单元剂量形式，装于消毒小瓶、消毒塑料小袋或消毒密闭的安瓶中。每单元剂量为100mg-10g，最好是200-500mg。
本发明的结晶2.5分子水合物的“治疗有效量”大约是每次每公斤体重2.5-70mg，按此剂量，成人每天共需200mg-7g。
本发明的结晶2.5分子水合物抗菌素在治疗期间，每天的剂量可一次服用，也可分几次服用。治疗需要较长时间给药，如持续几天或2-3周。每次给药剂量和给药总剂量取决于下列因素感染的性质和严重程度，病人的年龄及健康状况，病人和感染微生物对该药的耐受性。
合成化合物(I)的起始原料(LY228238)通过下列途径获得酰化式(II)7β-氨基(“核上”)化合物，然后除去羧基保护基R1。式II为
结结构式(II)中的羧基保护基R1是常用的羧基保护基，最好的是没有空间位阻的基团，如苄基，取代苄基(4-甲氧基苄基，4-硝基苄基，4-甲基苄基，3，5-二甲基苄基，4-氯苄基。)，甲硅烷基(如三烃基甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基)，卤素取代烃基(如2，2，2-三氯代乙基，2，2，2-三溴代乙基，2-碘代乙基)。最好的酯基是苄基或取代苄基酯。
用酰基侧链酰化式(II)7β-氨基化合物的方法与6-氨基盘尼西林酸、7-氨基脱乙酸基头孢子酸和7-氨基头孢子酸的酰化方法是相似的。方法之一是在酸性消除剂存在下，将7β-氨基核直接与酰氯或酰溴作用。酰基氯或酰基溴可直接制备。另一种方法是用缩合剂将7β-氨基核与侧链的游离羧基(或其盐)反应。合适的缩合剂包括N，N′-二取代碳化二亚胺，如N，N′-二环己基碳化二亚胺，N，N′-二乙基碳化二亚胺，N，N′-二正丙基碳化二亚胺，N，N′-二异丙基碳化二亚胺，N，N′-二丙烯基碳化二亚胺，N，N′-双(对二甲氨基苯基)碳化二亚胺，N-乙基-N′-(4-乙基吗啉基)碳化二亚胺及类似物。已由Sheehan在美国专利2,938,892和Hofmann等人在美国专利3,065,224中公开了其它合适的碳化二亚胺缩合剂。氮杂茂类化合物，如N，N′-羰基二亚胺氮杂茂和N，N′-亚硫酰基二亚胺氮杂茂，也可用作缩合剂。脱水剂(如磷酰氯)、烃氧乙炔和2卤代吡啶盐(如2-氯吡啶甲基碘盐，2-氟吡啶甲基碘盐及类似物)可用于偶合游离酸或游离酸与7β-氨基核形成的酸式盐。
另一种酰化方法需先将酰基侧链的游离羧基(或相应的盐)转变成相应的活泼酯，然后用于酰化氨基核。活泼酯可用某些基团(如对-硝基苯酚，2，4-二硝基苯酚，三氯苯酚，五氯苯酚，2-氯-4，6-二甲氧基三氮烯，N-氯琥珀酰亚胺，N-氯马来酰亚胺，1-羟基-1H-苯酰基三氮杂茂或1-羟基-6-氯-1H-苯甲酰三氮杂茂)酯化游离羧基而制得。活泼酯类衍生物也可以是由如下基团形成的混合酸酐甲氧基羰基，乙氧基羰基，异丁氧基羰基，三氯甲基羰基，异丁基羰基和酰基侧链羧酸。酸酐通过酰化酰基侧链的羧酸而制得。
7β-氨基核也可用7酰侧链的N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二羟基喹啉(EEDQ)衍生物酰化。通常，乙酰侧链的游离羧酸和EEDQ在惰性的极性有机溶剂(如四氢呋喃，乙腈和类似物)中反应，生成的EEDQ衍生物直接用于酰化7β-氨基核。
酰化7β-氨基核的另一方法是酶促反应法。此法在1982年6月15日授予Hashimato等人的美国专利4,335,211中有叙述，本文引为对比文献。
最好的酰化方法通常是用如N，N′-双(三甲基硅)脲(BSU)在二甲基甲酰胺(DMF)中先使核硅甲基化。DMF液被冷却至低温(-45℃至-50℃)，然后加入吡啶和氨基保护的间-甲基磺酰氨基苯基甘氨酸的酰氯衍生物盐酸盐。加入浓盐酸(5N或6N)中止酰化，过滤。加碱(如三甲胺)到滤液中，调PH至6左右(最好为6.1)，酰化产品析出，过滤收集结晶。
通过本专业周知的方法除去氨基和羧基上的保护基。除去这两类基团的保护基的例子在这类课题的标准著作中便能找到，如E.Haslam写的《有机化学中的保护基》，(J.G.W.Mco-Mie，Ed.Plenum Press，New York，N.Y，1973)第2和5章；T.W.Greene写的《有机合成中的保护基》，(John Wiley和Sons，New York，N.Y.，1981)，第5和第7章。
除去氨基和羧基保护基的例子也能在实验部分找到。例如，最好的叔丁氧羰基氨基保护基用三氟乙酸除去，对-硝基苄基羧基保护基通过水解除去。
式II的7β-氨基-3-氯-1-卡巴-1-脱硫青霉烯(dethiacephem)可由相应的3-羟基化合物按下述反应式1(Schemel)所示方法合成。反应式1
在上述反应式1中，R1是羧基保护基(如前关于式II所述)，A是氨基保护基或是下式的酰基R-CO-其中R是H；C1至C6烷基；由氰基，羧基，卤素，氨基取代的C1至C6烷基；C1至C4烷氧基；C1-C4烷硫基；或三氟甲硫基；苯基或下式代表的取代苯基
(其中a和a′分别是氢，卤素，保护的羟基，C1至C4烷氧基，C1至C4烷酰氧基，C1至C4烷基，C1至C4烷硫基，保护的氨基，C1至C4烷酰氨基，C1至C4烷基磺酰氨基，保护的羧基，氯甲酰基，保护的羟甲基，保护的氨甲基，或保护的羧甲基)；或下式代表的基团
(其中a和a′的定义同前，Z是氧和硫，m是0或1)；或下式代表的杂芳基甲基R3-CH2-(其中R3是噻吩基，呋喃基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，吲哚基，三唑基，四唑基，噁唑基，噻唑基，噁二唑基，噻二唑基及取代的杂芳基，取代基包括保护的氨基，保护的羟基，卤素，C1-C4烷氧基，C1-C4烷磺酰氨基)；下式代表的取代甲基
(其中R4是环己-1，4-二烯基，苯基或下式代表的取代苯基
其中a和a′的定义同前，R4也可是上面定义的R3，Q是保护的羟基，C1-C4烷酰氧基，保护的羧基，磺酸基或保护的氨基)。
上述反应式I中所示的第一步反应(式III→式IIIa)，即3-羟基的磺化反应于惰性溶剂中，在胺存在下，在约0°-35℃进行。合适的胺包括三乙胺，三-(n-丁基)胺，吡啶，叔丁基二乙基胺，二(-异丙基)乙胺，及类似的胺。最好是有位阻的三烷基胺。酰化试剂是三氟甲基磺酸酐(triflic anhydri-de)，三氟甲基磺酰氯(triflic Chloride)或三氟甲基磺酸的其它合适的酰卤。反应中用的惰性溶剂为卤代烃化合物，如氨仿，二氯甲烷，三氯乙烷和类似物；醚类，如四氢呋喃；酯类如乙酸乙酯；及其它惰性溶剂如乙腈。
通过方便的分离方法(如提取)从反应混合物中分离出三氟甲磺酸酯(式IIIa)。
酰化时，侧链上有可能被酰化的其它反应基团应该保护，例如，用氨基保护基保护氨基取代基，以避免由于生成酰胺而影响生成所希望的磺酰化产物。
上述反应式1中的第二步反应(氯代反应)(式IIIa→式IIa)是用氯化锂于非质子极性溶剂中在60°-95℃进行的。
在氯代反应中用的非质子极性溶剂是二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷酮，乙腈和类似溶液。最好是二甲基甲酰胺。
该反应最好用过量的氯化锂盐在75°-85℃进行。
R2上的最好的羧基保护基是苄基或取代苄基。
氯代反应完成后，用常用的分离方法从反应混合物中分离出3-氯-1-卡巴-3-青霉烯，然后用色谱层析纯化。
象反应式1所示的第一步反应一样，在氯代反应中应该保护反应物中存在的所有氨基。实施例如下将7β-苯氧乙酰氨基-3-三氟甲基磺酸酯基-1-卡巴-1-脱硫青霉烯-4-羧酸苄酯溶于二甲基甲酰胺中，加入过量的氯化锂(如过量3-4摩尔)，搅拌此溶液，并加热至约80℃反应5-6小时。定时地从反应液中取样进行薄层层析，观察氯代反应进展情况。当反应完全时，用与水不混溶的有机溶剂稀释反应混合物，水洗，干燥，蒸发去溶剂，所得粗产品(7β-苯氧乙酰基-3-氯-1-卡巴-1-脱硫青霉烯-4-羧酸苄酯)用色层分离法(如硅胶柱)纯化。
上述反应式1所示的最后一步反应是除去氨基保护基或“A1NH-”所代表的氨基的裂解(化合物IIa→II)，这是本专业领域内周知的反应。氨基保护基的除去方法可参阅前述的关于式II化合物的酰化和脱保护方面的参考资料。
1987年6月16日授予Evans等的美国专利4,673,737号中描述了上面反应式1中所示的3-羟基化合物(式III)转变成3-氯代化合物(式IIA)的反应，本文引作对比文献。
断裂F(氨基)侧链的酰胺键的方法是本专业公知的，这些方法之一是用亚硝酰氯，参见1970年4月21日授予M.Stam-per等的美国专利3,507,862，本文引作对比文献。另一方法是在一种碱(最好是含氮的有机碱)存在下，用五氯化磷进行反应。此反应在1970年12月22日授予R.Chauvette的美国专利3,549,628；1972年10月10日授予B.Fechtig等的美国专利3,697,515；和1975年2月25日授予L.Hatfield的美国专利3,868,368号中均有描述，本文引作对比文献。
上述五氯化磷法的改良方法是用氯化三苯苯亚磷动力学试剂，在1980年7月8日授予L，Hatfield等的美国专利4,211,702号中讨论了该方法。本文引作对比文献。过量(2-3当量)的氯化三苯亚磷既可用于3-烯醇-1-卡巴-1-脱硫青霉烯(如上述式III的化合物)的7-氨基的裂解也可用于氯化3-羟基，其条件相似于1980年10月7日授予L.Hatfield等的美国专利4,226,986号中所给条件，本文引作对比文献。
合成式II的7-氨基化合物的另一方法是T.Hirata等在英国专利申请书2,041,923A和等同专利(如欧洲专利14,475)中所描述的方法，该法是通常将苯硫醇加到7-叠氮基-3-氢-1-卡巴-1-脱硫-4-羧酸酯化合物中，生成的3-硫-3，4-饱合的化合物被氧化成相应的3-亚砜化合物。将3-亚砜化合物氯代，生成的3-亚砜-3-氯代化合物，用碱处理(消除亚砜)，得到3-氯-3-青霉烯化合物。
反应式1所示的3-羟基起始原料(式III)可按1987年5月12日授予D.A.Evans等的美国专利4,665,171中所述方法制备，本文引作对比文献。美国专利4,673,737中同样描述了3-三氟甲基磺酸酯类似物的制备方法，本文引作对比文献。
在下面的制备和实施例中，核磁共振谱，高效液相色谱，场解吸质谱和比旋度分别缩写为n.m.r.，HPLC，f.d.m.s.和o.r.。
在n.m.r中所用的缩写“S”表示单，“d”表示双，“dd”表示二双，“t”表示三，“q”表示四，“m”表于多。“DMSO-d6”表示二甲基亚砜，其中所有的氢质子均被重氢取代。
n.m.r.图谱是用下列仪器测得的Varian Asso-ciates EM-390 90MHz仪，Jeol FX-90QMHz仪，Bruker Corporation 270MHz或500MHz仪，General Electric QE-300 300MHz仪。化学位移用δ值表示(以四甲基硅作标准，单位是PPm)。制备1 间-(甲基磺酰氨基)-苯甲醛将间-氨基苯甲醛聚合物(1210g，10.0M)，THF(12,000ml)和水(495ml)混合，并在室温搅拌过夜，得到的浆状液冷却至约5°-10℃，加入吡啶(1580g20M)。将反应液保持在约10℃，滴加甲磺酰氯(2290g，20M)，然后于冰浴中搅拌过夜，在此期间，冰逐渐熔化，反应温度上升至约15°-20℃。减压除去THF，将1N盐酸(61)加入残留物中，室温搅拌8小时。过滤得桔色粒状物，水洗(约61)，于40℃干燥48小时，重1833g。将其中一部分(940g)于含有碳黑和碳酸钠的乙酸乙酯中重结晶得874g间-(甲基磺酰氨基)-苯甲醛，n.m.r(360MHz，DMSO-d6)δ3.05(S，3)，7.5-7.9(m，4)，9.9(S，1)，10，1(S，1)。制备2 D，L-2-氨基-2-(间-甲磺酰氨基苯基)-乙腈将浓氢氧化铵(43ml)冷至10℃，加入氰化钠(5.4g110mmol)，氯化铵(5.5g，102mmol)和间-(甲基磺酰氨基)-苯甲醛(10.0g，50mmol)，然后在约10°-15℃搅拌4小时。于15℃减压除去过量的氨，用浓盐酸调残留物的PH至7.0，用乙酸乙酯(6X)提取，合并乙酸乙酯提取液，用盐水(2X)洗涤，硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂，得10.6g D，L-2-氨基-2-(间-甲磺酰氨基苯基)-乙腈褐色油(94％)，n.m.r(DMSO-d6，90MHz)δ3.0(S，3)，5.0(S，1)，7.2-7.6(m，4)制备3 2-(R)-2-氨基-2-(间-甲磺酰氨基苯基)乙腈L-酒石酸盐 乙酸溶剂化物将L-(+)-酒石酸(8.25g，55mmol)溶解于乙酸(90％)中，并加热，然后将此热溶液加入D，L-2-氨基-2-(间-甲磺酰氨基苯基)-乙腈(10.6g，47mmol)中，慢慢冷却此混合液，慢慢加入乙酸乙酯(25ml)，室温下搅拌过夜，生成的沉淀滤出，用乙酸和乙酸乙酯洗沉淀，然后于36℃真空干燥，得5g 2-(R)-2-氨基-2-(间-甲磺酰氨苯基)-乙腈 L-酒石酸盐 乙酸溶剂化物(49％)，n.m.r.(D2O/DCl，90MHz)δ2.1(S，1)，3.2(S，3)，4，8(S，1)，5.8(S，1)，7.3-7.7(m，4)；O.r.〔α〕D25＝+27.66°〔1N盐酸，C1〕。制备4 2-(R)-2-氨基-2-(间-甲磺酰氨基苯基)-乙酸盐酸盐将2-(R)-2-氨基-2-(间-甲磺酰氨基苯基)-乙腈L-酒石酸盐 乙酸溶剂化物(18g，48mmol)于6NHCl中加热回流6小时，减压除去过量的盐酸，加入碳黑，过滤，用5N的氢氧化钠液调滤液的PH至5.0，直接用于制备5的反应。制备5 2-(R)-〔N-(t-丁氧基酰氨基)-2-(m甲磺酰氨基苯基〕乙酸用5N氢氧化钠液将上述制备4的溶液PH调至9，加入THF(300ml)二叔丁氧基甲酐(15.7g，72mmol)，再用5N NaOH液调PH至9，室温搅拌48小时，真空除去THF，残留的浓缩液用乙醚(2X)洗涤，用6N HCl液将水层调7PH至2，再用乙酸乙酯(4X)提取经酸化的水层，合并乙酸乙酯提取液，硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂后得11g泡沫状物质，在制备规模的HPLC硅胶柱上色层析，用甲苯与50％乙酸乙酯/甲苯梯度液洗脱，得6.85g 2-(R)-〔N-(t-丁氧基酰基氨基)〕-2-(m-甲磺酰氨基-苯基)-乙酸(R∶S，84∶16)混合物(41％)，n.m.r.(300MHz，CDCl3)，1.3(S，9)，5.1(d，1)，5.3(d，1)，7.1-7.5(m，4)，7.9(d，1)；o.r.〔α〕D25°＝-74.5°(甲醇Cl).制备6 7β-〔2′-(R)-2′(间-甲磺酰氨基苯基)-2′-(N-叔-丁氧基酰氨基)-乙酰氨基〕-3-氯代-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸对硝基苄酯将7β-氨基-3-氯代-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸P-硝基苄酯盐酸盐(194mg，0.5mmol)混悬于二氯甲烷(3.5ml)中，然后加入N-甲基吗啉(55.5μl)，再加入2-(R)-2-(间-甲磺酰氨基苯基)-2-〔N-(t-丁氧基酰基)〕乙酸(172mg，0.5mmol)将溶液冷却至0℃，依次加入吡啶(170μl，2.1mmol)和磷酰氯(79.1μl，0.85mmol)，在约0-5℃搅拌2小时后，加入1N HCl(10ml)，减压除去二氯甲烷，加入乙酸乙酯(50ml)，分别用1N HCl(2X)，盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂，得245mg泡状物，该物于HPLC的硅胶柱上层析，用乙酸乙酯∶环己烷∶异丙醇(48∶48∶4)的混合溶剂作洗脱剂，得165mg 7β-〔2′-(R)-2′-(间-甲磺酰胺基)-2′2(N-叔丁氧酰氨基)乙酰氨基〕-3-氯-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸对硝基苄酯(49％收率)，n.m.r.(300MHzCDCl3)δ1.4(s，9)，1.6-1.9(m，2)，2.5-2.8(m，2)，3.0(s，3)，3.8-4.0(m，1)，5.2(d，1)，5.4(q，2)，5.9(q，1)，7.1-7.4(m，4)7.6(d，2)，8.2(d，2)。制备7 7β-〔2′-(R)-2′-(m-(甲基磺酰氨基)-苯基)-2′-(N-(t-丁氧基酰氨基))-乙酰氨基〕-3-氯-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸将5％的钯-炭(150mg)用乙醇浸湿，加到7β-〔2′-(R)-2′-(m-(甲基磺酰氨基)苯基)-2′-(N-(t-丁氧基酰氨基))乙酰氨基〕-3-氯-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸P-硝基苄酯(300mg，0.44mmol)的乙酸乙酯(最小量)液中，在40Psi的氢气压力下氢化2分钟，过滤，依次用1N HCl(3X)，盐水(2X)洗涤滤液，硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂，残留固体于乙醚中搅拌48小时，过滤出沉淀，真空干燥，在乙醚中重结晶，并于乙醚中研细成粉，过滤，真空干燥后得50mg 7β-〔2′-(R)-2 ′-(m-(甲磺酰氨基)苯基)-2′-N-(t-丁氧基酰氨基)乙酰氨基〕-3-氯-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸(收率62％)f.d.m.s.M++1＝543制备8 7β-〔2′-(R)-2 ′(m-(甲基磺酰氨基)苯基)-2 ′-氨基乙酰氨基〕-3-氯-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸三氟乙酸盐将三氟乙酸(约10ml)冷却至约0℃，加入7β-〔2′-(R)-2′-(m-(甲基磺酰氨基)苯基)-2′-〔N-(t-丁氧基酰氨基)-乙酰氨基〕-3-氯-3-(1-卡巴-1-青霉烯)-4-羧酸(397mg，0.73mmol)，在约0℃搅拌20分钟，温至室温，减压除去溶剂得油状物，加入乙醚混合，生成的固体在乙醚中研磨90分钟，过滤，减压干燥得392mg 7β-〔2′-(R)-2′-(m-(甲磺酰氨基)苯基)-2′-氨基乙酰氨基〕-3-氯-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸三氟乙酸盐(收率96)，n.m.r.(300MHz，DMSO-d6)δ1.4(m，2)，2.3-2.7(m，2)，3.0(s，3)，3.8(m，1)，4.9(s，1)，5.4(s，1)，7.1-7.5(m，4)3.3(s，2)，9.9(宽峰，1)。制备9 7β-〔2′-(R)-2′-m-(甲基磺酰氨基)苯基)-2 ′-氨基乙酰氨基〕-3-氯-3-( 1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸两性离子盐(LY228238)7β-( 2′-(R)-2′-m-甲基磺酰氨基)苯基)-2′-氨基乙酰氨基〕-3-氯-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸三氟乙酸盐于制备规模的HPLC的20μC18反相硅胶柱上层析，用5-15％乙腈/1％乙酸/水进行梯度洗脱，得73.6mg(LY228238，n.m.r.(270MHz，DMSO-d6)δ1.48(m.2)，2.33(m，2)，299(s，3)，3.73(m，1，J＝4.7，5.0，10.0Hz)，4.64(s，1)，5.26(d，1，J＝4.7Hz)，7.1-7.4(m，4)。实施例17β-(2 ′-(R)-2 ′-(m-甲磺酰氨基)苯基)-2′-氨基乙酰氨基〕-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸2.5水合物(LY228238，2.5水合物)将208mg LY228238溶于1％乙酸水溶液中，冰冻干燥此溶液，所得固体溶于2ml 38℃的水中，室温下静置16小时，抽滤收集生成的结晶，用室温水洗结晶后，自然干燥，得LY228238的2.5分子水合物。此产物的X线衍射结果见前述表中。
元素分析结果(C17H19ClN4O6S).2.5H2O计算值C，41.85；H，4.96；N，11.48；测定值C，41.56；H，4.86；N，11.31；以类似方法制备的许多其它产品，用Karl Fischer分析都证明每分子LY228238中有2.5分子的水存在。
下述实施例解释含有本发明的活性物(LY228238的2.5分子水合物)的剂形。实施例2用下述成份制备硬明胶胶囊量(mg/胶囊)LY228238 2.5分子水合物 200淀粉(流动性粉末)186淀粉(含5％硅酮的流动性粉末) 50硬脂酸镁2.5将上述成份混合，填入硬明胶胶囊中，填入量为438.5mg。实施例3用下列成份制备片剂量(mg/片)LY228239 2.5分子水合物 200微晶纤维素 200二氧化硅(重制过) 10硬脂酸 5混合上述成份，压成片，片重415mg。实施例4按下述方法制备含200mg活性成份的栓剂。
LY228238 2.5分子水合物 200mg饱和脂肪酸甘油酯 加至2000mg将活性成份过60目U.S.筛，然后混入用微火熔化的饱和脂肪酸甘油酯中，将混合物注入2g容量的栓剂模具中，放置冷却。实施例5LY228238 2.5分子水合物 210mg羧甲基纤维素钠 95mg蔗糖 1.85mg尼泊金 3mg乳化硅酮 2.5mg复合凝胶 5mg调味剂 2mg色素 0.5mg蒸馏水 加至5ml固体成份均过筛。将尼泊金溶于热蒸馏水中，冷却后，加入其它成份，再补蒸馏水至要求体积。用胶体研磨机或均化器处理混悬液，得均匀混悬液。实施例6LY228238 2.5分子水合物 210mg蔗糖 3mg黄胶 5mg改良淀粉 10mg乳化硅酮 5mg月桂硫酸钠 0.5mg
甲基纤维素 2mg调味剂 0.5mg染 料将上述成份过筛，用合适的混合机混合，使用时，加入适量的蒸馏水，得所需体积的液体。
权利要求
1.一种制备式I化合物的2.5分子水合物的方法，该法包括冰冻干燥含有式I化合物的水溶液，得到的固体于水中结晶。
全文摘要
7β-[2′(R)-2′(m-(甲基磺酰氨基)苯基)-2′-氨基乙酰氨基]-3-氯-3-(1-卡巴-1-脱硫青霉烯)-4-羧酸的2.5分子结晶水合物是一种特别适合于制剂的抗菌素。同时也描述了应利用这种2.5分子结晶水合物制备的药物剂形。
文档编号A61P31/04GK1034929SQ89100760
公开日1989年8月23日 申请日期1989年2月3日 优先权日1988年2月5日
发明者拜伦·韦德·多尔蒂 申请人:伊莱利利公司