专利名称：包含2－苯基－吲哚化合物和雌激素制剂的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及与雌激素联合使用的、用作选择性雌激素受体调节剂的3-[4-(2-苯基-吲哚-1-基甲基)-苯基]-丙烯酰胺和2-苯基-1-[4-(氨基-1-基-链-1-炔基)-苄基]-1H-吲哚-5-酚化合物的用途，及其药用组合物和利用这些化合物的治疗方法。
本发明背景采用激素替代疗法预防绝经期后妇女骨质丢失确有许多先例。补充雌激素的常规方案需要采用含有雌酮、雌三醇、乙炔雌二醇、17β-雌二醇、酯化雌激素、或从天然来源中分离的结合雌激素(即Wyeth-Ayerst生产的Premarin复合雌激素)或合成雌激素的制剂。在某些患者中，这种治疗可能是禁忌的，因为未受到拮抗的雌激素(雌激素没有与孕激素联合给药)对子宫组织产生增生作用。该增生作用与子宫内膜异位和/或子宫内膜癌发病危险增加相关。未受到拮抗的雌激素对乳房组织的作用不太清楚，但有某些联系。显然需要在保持雌激素维护骨质作用的同时最大限度地减少其对子宫和乳房的增生作用。在卵巢切除大鼠模型以及人类临床实验中，某些非甾体的抗雌激素药已显示能够保持骨质。例如，他莫昔芬(特拉华州Wilmington的Zeneca Pharmaceuticals出售的Novadex牌枸橼酸他莫昔芬)是有效治疗乳房癌的治标药并且已被证明对人类骨骼具有雌激素激动剂样的作用。然而，它在子宫中也是部分激动剂而这正是引起某种程度关注的原因。雷洛昔芬，一种苯并噻吩类抗雌激素药，已被证明对去除卵巢大鼠子宫生长的刺激程度小于他莫昔芬，同时还保留着维护骨质的效力。组织选择性雌激素的合理综述见文献“雌激素类似物的组织选择性作用”，Bone(骨骼)，17卷，第4期，1995年10月，181S-190S。
采用吲哚类作为雌激素拮抗剂已由Von Angerer，ChemicalAbstract(化学文摘)，99卷，第7期(1983)，摘要号53886u报道。也见于J.Med.Chem.(医用化学杂志)，1990,33,2635-2640；J.Med.Chem.(医用化学杂志)，1987,30,131-136。还见于Ger.OffenDE3821148 Al 891228和WO96/03375。这些先有技术的化合物与本发明化合物具有相似的结构，但功能不同。由于化合物含有碱性胺，因而没有固定侧链的苯基基团。
WO A 9517383(Karo Bio AB)描述具有长的直链的吲哚抗雌激素药。另一篇相关的专利WO A 9310741描述具有各种侧链的5-羟基吲哚类。除了在以下本发明式Ⅰ和Ⅱ中具有以下定义为硫代烷基的称作R3的结构并且所述文献未公开具有来自与本发明提供相同结构的吲哚氮的链的这类化合物以外，WO 93/23374(OtsukaPharmaceuticals，日本)描述与本发明化合物具有结构相似性的化合物。
在其文献“绝经期后雌激素的激素替代疗法中周期性补充抗雌激素药”，Am.J.Obstet.Gynecol.(美国妇产科杂志)，140卷，第7期，1981,787-792页中，Kauppila等描述了他们对七周雌激素疗程后用抗雌激素枸橼酸氯米芬治疗十天的绝经期后雌激素疗法的研究。
在其文献“绝经期后雌激素替代疗法中用醋酸甲地孕酮和枸橼酸氯米芬为补充药物的比较”，Arch.Gynecol.(妇科文献)(1983),234:49-58页中，Kauppila等还描述了雌激素和随机补充醋酸甲地孕酮或枸橼酸氯米芬对绝经期后妇女的联合疗法。
美国专利No.4894373(Young)指出抗雌激素药，包括氯米芬及其异构体、枸橼酸盐和衍生物，在不用雌激素时治疗更年期综合征和治疗或预防骨质疏松症中的用途。美国专利No.5552401(Cullinan等)描述了苯并噻吩化合物在治疗与绝经期后综合征、和子宫纤维样病变、子宫内膜异位症、和主动脉平滑肌细胞增生相关的多种临床适应症中的用途，该化合物被用于任选含有雌激素或孕激素的药用制剂中。美国专利No.5646137和5591753(均由Black等发表)公开了以雷洛昔芬-型芳基苯并噻吩化合物的制剂与选自甲羟孕酮、炔诺酮或异炔诺酮、或其药学上可接受的盐的孕激素联合用药以治疗骨质疏松症的方法。美国专利No.5550107(Labrie)要求保护的发明包括以抗雌激素药合用至少一种选自一组包括雄激素、孕激素的化合物，至少一种甾体类性激素的抑制剂制剂，特别是17β-羟基甾体类脱氢酶和芳族酶(aromatase)活性剂，至少一种催乳素分泌抑制剂，一种生长激素分泌抑制剂和一种ACTH分泌抑制剂治疗乳房或子宫内膜癌。美国专利No.5672609(Bryant等)公开了吡啶类化合物在治疗绝经期后综合征中的用途及其包含雌激素或孕激素的制剂。美国专利No.5534527(Black等)指出了芳基苯并噻吩类和雌激素类在抑制骨质丢失中的用途。
本发明叙述本发明提供包括与雌激素、优选与一种或一种以上的药学上可接受的载体或赋形剂联合使用的下式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物的药用制剂，以及它们的使用方法。本发明制剂的用途之一是减轻妇女绝经期后综合征的症状，包括绝经期前后和绝经期后的症状。本发明的制剂和治疗方法可用于最大限度地减少雌激素处理或治疗中的不良副作用并且可用于最大限度地减少特定治疗方案对雌激素(类)所需用量。
式(Ⅰ)和(Ⅱ)所示结构通式的化合物是雌激素激动剂/拮抗剂其有益于治疗与EP-A-0802184公开的与雌激素缺乏相关的疾病，后者内容作为参考文献结合于本说明书。单独使用时本发明所用化合物显示出强烈结合雌激素受体并能够拮抗17β-雌二醇，同时仅显示出轻微的子宫刺激作用。
本发明包括下列式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物以及它们的药学上可接受的盐 其中R1选自H、OH或C1-C4酯或其烷基醚、或卤素；R2、R3、R4、R5和R6独立地选自H、OH或C1-C4酯或其烷基醚、卤素、氰基、C1-C6烷基、或三氟甲基，条件是，当R1是H时，R2不是OH；X选自H、C1-C6烷基、氰基、硝基、三氟甲基、卤素；Z选自 或-c≡c-(CH2)n-γ；n是2或3；Y选自a)基团 其中R7和R8独立地选自H、C1-C6烷基、苯基或通过-(CH2)p-连接而成为一个环，其中p是2-6的整数，该环任选被多达三个选自羟基、卤代、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONH(C1-C4)烷基、-NH2、C1-C4烷基氨基、双-(C1-C4烷基)氨基、-NHSO2(C1-C4)烷基、-NHCO(C1-C4)烷基和-NO2的取代基取代；b)五、六、或七元饱和、不饱和或部分不饱和的杂环，其含有多达2个选自-O-、-NH-、-N(C1-C4烷基)-、-N=(当该环通过氮连结时)、和-S(O)m-的杂原子，其中m是0-2的整数，并任选被1-3个独立选自以下的取代基取代羟基、卤代、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONHR1、-NH2、(C1-C4)烷基氨基、二-(C1-C4烷基)氨基、-NHSO2R1、-NHCOR1、-NO2和任选被1到3个(C1-C4)烷基基团取代的苯基；(其中R1如前定义或为C1-C4烷基)；c)包括一个五或六元杂环与一个苯环稠合的二环系，所述杂环中含有多达2个选自-O-、-NH-、-N(C1-C4烷基)-、-N=和-S(O)m-的杂原子，其中m是0-2的整数，并任选被1-3个独立选自以下的取代基取代羟基、卤代、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONHR1、-NH2、(C1-C4)烷基氨基、二-(C1-C4烷基)氨基、-NHSO2R1、-NHCOR1、-NO2和任选被1到3个(C1-C4)烷基基团取代的苯基；(其中R1如前定义或为C1-C4烷基)。
本发明优选的制剂和治疗方法是那些在含有一种或一种以上的药用载体或赋形剂的同时，含有或利用a)一种或一种以上的雌激素；和b)一种或一种以上的选自上述结构通式Ⅰ或Ⅱ的化合物，其中R1选自H、OH或C1-C4酯或它们的烷基醚、卤素；R2、R3、R4、R5和R6独立地选自H、OH或C1-C4酯或其烷基醚、卤素、氰基、C1-C6烷基、或三氟甲基，条件是，当R1是H时，R2不是OH；X选自H、C1-C6烷基、氰基、硝基、三氟甲基、卤素；Y是基团 R7和R8独立地选自H、C1-C6烷基、苯基或通过-(CH2)p-连接成为一个环，其中p是2-6的整数，该环任选被多达三个选自羟基、卤代、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONH(C1-C4)、-NH2、C1-C4烷基氨基、C1-C4二烷基氨基、-NHSO2(C1-C4)烷基、-NHCO(C1-C4)烷基和-NO2的取代基取代。
上述由R7和R8连接形成的环可包括，但不限于，氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶或六亚甲基胺环。
进一步优选的是，当R7和R8连接在一起时，这样形成的环任选被1-3个选自C1-C3烷基、三氟甲基、卤素、氢、苯基、硝基、-CN的取代基取代。
式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物是雌激素部分激动剂并对雌激素受体显示出高亲和性。然而与许多雌激素不同，这些化合物不引起子宫湿重的增加，这些化合物在子宫中是抗雌激素的并且能够完全拮抗雌激素激动剂对子宫组织的营养作用。这些化合物有益于治疗或预防因雌激素缺乏引起或与之相关的哺乳动物的疾病状态或综合征。这种组织选择性使得它们在某些组织(如骨骼)中发挥所需的雌激素活性，而在其它组织(如子宫组织)中限制此活性。
用于本发明制剂中的雌激素包括雌酮、雌三醇、马烯雌酮、雌二烯、马萘雌酮、炔雌醇、17β-雌二醇、17α-二氢马萘雌酮、17β-二氢马萘雌酮(U.S.专利2,834,712)、17α-二氢马烯雌酮、17β-二氢马烯雌酮、炔雌甲醚(menstrand)和结合雌激素例如那些在Wyeth-Ayerst实验室的Premarin产物。植物雌激素例如雌马酚或肠内酯(enterolactone)也可用于本发明制剂和方法中。本发明优选实施方案包括使用结合的雌激素例如那些与一种或多种在此列出的式(Ⅰ)或(Ⅲ)化合物一起的Wyeth-Ayerst实验室的Premarin产物的药用组合物和治疗方法。酯化雌激素例如那些由Solvay Pharmaceuticals公司以商品名Estratab销售的雌激素也可用于本发明制剂中。也优选与本发明一起使用的为可应用的雌激素的盐，最优选为钠盐。这些优选盐的实例为硫酸雌酮钠、硫酸马烯雌酮钠、硫酸17α-二氢马烯雌酮钠、硫酸17α-雌二醇钠、硫酸δ8,9-去氢雌酮钠、硫酸马萘雌酮钠、硫酸17β-二氢马烯雌酮钠、硫酸17α-二氢马萘雌酮钠、硫酸17β-雌二醇钠、硫酸17β-二氢马萘雌酮钠、雌酮3-硫酸钠、马烯雌酮3-硫酸钠、17α-二氢马烯雌酮3-硫酸钠、3β-羟基-雌甾-5(10),7-二烯-17-酮3-硫酸钠、5α-孕甾-3β-20R-二醇20-硫酸钠、5α-孕甾-3β,16α-二醇-20-酮3-硫酸钠、δ(8,9)-脱氢雌酮3-硫酸钠、雌甾-3β,17α-二醇3-硫酸钠、3β-羟基-雌甾-5(10)-烯-17-酮3-硫酸钠或5α-孕甾-3β,16α,20R-三醇3-硫酸钠。优选雌酮的盐包括(但不局限于)钠盐和哌嗪盐。
本发明式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物为具有表现像雌激素激动剂例如通过降低胆固醇和预防骨丧失或者像雌激素拮抗剂一样能力的组织选择性化合物。因此，在本发明制剂中这些化合物用于治疗许多病症，包括骨质疏松症、前列腺肥大、不育症、乳腺癌、子宫内膜增生、子宫内膜癌、子宫内膜异位症、胆囊腺性增生、子宫增生、子宫颈增生、良性前列腺增生、心血管疾病、避孕、阿尔茨海默氏病和黑素瘤。本发明制剂也可用于治疗由继发性骨质疏松症导致的骨丧失，治疗包括性质上分类为内分泌的骨丧失，包括由糖皮质激素过多、甲状旁腺功能亢进、甲状腺功能亢进、性腺功能减退、血催乳素过多和糖尿病引起的骨丧失。骨丧失也可由药物诱导，例如由于肝素治疗、酗酒、或者使用烟草、巴比土酸盐或皮质类固醇引起。药物诱导的骨丧失也可来源于促性腺激素释放激素(GnRH或LHRH)或者合成的GnRH拮抗剂或激动剂，例如由TAP Pharmaceuticals公司以商品名LUPRON销售的醋酸亮丙瑞林注射剂或由ZenecaPharmaceuticals公司以商品名Zoladex销售的醋酸戈舍瑞林植入剂。这样的骨丧失也可由个体固定术、慢性肾衰、营养吸收障碍综合征、肝病、慢性阻塞性肺病、类风湿性关节炎或肉样瘤病引起。
另外，这些制剂也可用于绝经后妇女或者其它的其中雌激素补充将是有益的雌激素缺乏状态的激素替代疗法。本发明治疗方法的化合物和雌激素的共生活性特别有利于克服雌激素疗法的不需要的结果，例如突然出血和/或可导致子宫内膜增生或子宫内膜异位的过度子宫内膜刺激。因此，这些制剂可用于治疗或预防哺乳动物过度雌激素子宫刺激的方法中。
雌激素调控多种生理过程。雌激素的主要靶组织包括生殖道(卵巢、子宫、阴道)、乳房组织、骨骼、心血管系统和中枢神经系统(CNS)。在循环的雌激素的减少导致多种变化。与经闭、子宫萎缩和阴道干燥的增加(角质化缺乏)方面有关的生殖功能停止。乳房组织变得相对静止。与在所有超过35岁的个体上可观察到的、正常的0.5-1.0％/年相比较，骨质丧失的速度增加(2-7％)。一般测量到在脂质分布上的变化出现增加低密度脂蛋白(LDL)并减少高低密度脂蛋白(HDL)并且与增加的心血管风险(心脏病发作、中风)相关。在中枢神经系统上的变化包括增加的血管舒缩症状(热潮红)和识别和记忆上潜在的变化。
雌激素替代疗法(ERT)使这些变化的一部分特别是那些与心血管系统(减少LDL、增加HDL、减少心脏病发作的风险)、骨骼(骨质维持、减少骨折风险)和中枢神经系统(减少热潮红的次数和严重性)有关的变化正常化。尽管生殖道有应答，但并非都是正效应。在好的方面，阴道干燥被缓解。然而，负性子宫应答包括肥大和增生以及部分月经样出血。乳腺也受影响并且数据表明外源性雌激素治疗具有增加乳腺癌的风险。
目前，具有完整子宫的妇女一般不单独开雌激素，但是与孕激素联合的雌激素减少子宫刺激。尽管子宫内膜癌的风险被减少至非激素治疗水平，然而孕激素的其它副作用降低了妇女对于激素替代疗法的顺应性。
本发明的组织选择性雌激素(TSE)化合物提供相似于雌激素的正性骨骼和心血管影响，而无与子宫和乳腺有关的负效应。TSEs和雌激素的联合得到雌激素对CNS、骨骼和心血管的正效应，并提供对骨骼和心血管系统的补充或者加合作用。主要的变量是TSEs阻断雌激素对子宫和乳腺影响的能力，该影响为非对应的雌激素的两种主要的负效应。
本发明化合物也可用于骨质丢失的治疗方法中，该病源于个体新骨组织的形成和旧组织溶蚀的不平衡，导致骨质的净丢失。这种骨质耗竭见于一定范围内的个体，尤其是绝经期后的妇女、已进行子宫/卵巢切除切除术的妇女、正在或已经接受大量皮质甾类治疗者、性腺发育不全患者、以及Cushing氏综合征患者。骨折、骨结构不全、以及接受接骨手术和/或移植修复术的个体对骨质更新的特殊需求也适合使用本发明化合物。除上述问题外，这些化合物还可用于治疗骨关节炎、佩吉特氏病、骨软化病、骨钙质缺乏症、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤以及对骨组织产生有害影响的其它形式的癌症。治疗这里所列举的疾病的方法被理解成包括以药用有效量的一种或一种以上的式(Ⅰ)和式(Ⅱ)化合物，或其药学上可接受的盐与治疗需要量的雌激素联合给予有这种治疗需要的个体。本发明还包括采用一种或一种以上的本发明化合物、和/或其药学上可接受的盐，以及一种或一种以上的药学上可接受的载体、赋形剂等的药用组合物。
应当理解这些式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物的给药剂量、方案和方式根据疾病以及接受治疗的个体而变化并遵从医疗专业人员的判断。在以一种或一种以上的化合物的给药时优选从低剂量开始并增加至获得期望的疗效。类似地，应当理解雌激素在本发明制剂中的剂量将根据常规方法选择。最优选的是监控剂量以使最小需要量的雌激素达到所期望的疗效。
这些式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物的有效给药是以约0.01mg/天-约1000mg/天的剂量给药。优选以约1mg/天-约600mg/天的单次剂量或两次或两次以上的分剂量给药。最优选以1mg/天-约150mg/天的每日剂量给药。这些剂量可以任何有益于使本发明化合物直接到达受药者的方式给予，包括口服、胃肠外(包括静脉内、腹腔内和皮下注射，植入剂，等)、阴道内和透皮给药。在本公开的意图中，透皮给药被理解成包括穿过身体表面和皮下的所有躯体通道包括上皮和粘膜组织给药。实现这种给药可以以洗剂、膏剂、泡沫剂、贴剂、混悬液、溶液、和栓剂(直肠内和阴道内)的形式使用本发明化合物，或其药学上可接受的盐。
含有式(Ⅰ)和(Ⅱ)活性化合物的口服制剂可包括任何常规使用的口服剂型，包括片剂、胶囊剂、颊含制剂、糖锭剂、锭剂和口服液、混悬液或溶液。胶囊可含有活性化合物和惰性填料和/或稀释剂如药学上可接受的淀粉(例如，玉米、马铃薯或木薯淀粉)、蔗糖、人造甜味剂、粉末状纤维素，如晶体或微晶纤维素，面粉、明胶、树胶等的混合物。有效的片剂制剂的制备可采用常规压片、湿法制粒或干法制粒方法并利用药学上可接受的稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、悬浮或稳定剂，包括，但不限于，硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、藻酸、阿拉伯胶、黄原胶、柠檬酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露糖醇、氯化钠、滑石粉、干燥淀粉和粉末状糖。本发明的口服制剂可利用标准的延缓或定时释放制剂以改变活性化合物的吸收。栓剂剂型可由传统物质制备，包括可可豆油，加或不加改变栓剂熔点的蜡质，以及甘油。也可以采用水溶性栓剂基质，如各种分子量的聚乙二醇。
可以理解，当雌激素被用于本发明时，将根据受药者的耐受力和预定的特定治疗或维持方案以常规剂量方案给药。本发明的式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物以达到激动或拮抗所述制剂中雌激素活性的预期水平的需要量给药。当使用美国药典(USP)的结合型雌激素时，则优选的日剂量为0.1mg至5.0mg，更优选的是在约0.3至约2.5mg之间，最优选的是在0.3至约1.25mg/天之间。至于美雌醇的日剂量可以从约1μg至约0.15mg/天，而乙炔雌二醇的使用剂量可以从约1μg至约0.3mg/天，乙炔雌二醇优选在约2μg至约15mg/天之间。
本发明化合物可以以纯形式单独或与药用载体配制成制剂给药，其比例取决于化合物的溶解性和化学性质、选择的给药途径以及标准药理学实验。其药用载体可以是固体或液体。
固体载体可包括一种或一种以上的物质，它们也可作为矫味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、辅助压片剂、粘合剂或片剂崩解剂；它们也可以是包囊材料。在粉剂中，载体也可以是与精细粉碎的活性化合物混合的精细粉碎的固体。在片剂中，活性成分与以适当比例混合以形成必要的压片性质的载体混合并压载体制成需要的形状和大小。此粉剂和片剂优选含有高达99％的活性成分。合适的固体载体包括，例如，磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点的蜡和离子交换树脂。
液体载体用于制备溶液、悬液、乳剂、糖浆剂、酏剂和加压组合物。该活性化合物可溶解或悬浮于药学上可接受的液体载体如水、有机溶剂、或这两者的混合物或药学上可接受的油或脂中。此液体载体可含有其它合适的药用添加剂如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、矫味剂、悬浮剂、粘稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。适合口服或胃肠外给药的液体载体的合适的实例包括水(特别是含有上述添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如二元醇)和它们的衍生物、lethicins和油(例如分级椰子油和花生油)。对于胃肠外给药，载体也可以是油性脂如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙基酯。用于加压组合物的液体载体可以是卤代烃或其它药学上可接受的抛射剂。
无菌溶液或悬液形式的液体药用组合物可用于例如，肌内、腹腔或皮下注射。无菌溶液还可以静脉给药。本发明化合物以液体或固体组合物形式口服给药。
本发明化合物可以常规栓剂、乳膏剂、凝胶剂等形式直肠内或阴道内给药。对于鼻内或支气管内吸入或吹入给药，本发明化合物可以配制成水或含水溶液，然后可以气雾形式被利用。本发明化合物也可以通过使用含有活性化合物和载体的透皮贴剂而透皮给药，其载体对活性化合物呈惰性，对皮肤无害，并可释放药物透过皮肤，经系统吸收进入血流。此载体可以采用任何一种形式如乳膏和油膏、糊剂、凝胶、和包封(occlnsive)装置。此乳膏和油膏可以是水包油或油包水的粘稠液体或半固体乳化液。由扩散于石油或亲水性石油中的吸收粉末组成的含有活性成分的糊剂也是适用的。大量的包封装置可以用于释放活性成分进入血流例如半透膜，其覆盖着储藏活性成分(有或无载体)或含有活性成分的基质的药库。其它包封装置见于文献中。
剂量需求根据所采用的特定组合物、给药途径、呈现的症状严重程度以及接受治疗的具体患者而变化。治疗通常从低于化合物最佳剂量的小剂量开始。然后加大剂量直到获得环境条件下的最佳作用；口服、胃肠外、透皮、直肠内或阴道内栓剂、鼻腔、或支气管内以及其它途径的实际给药剂量由主治医师根据治疗个体患者的经验决定。优选单位剂型的药用组合物，例如片剂或胶囊。在这种剂型中，组合物被分成含有合适量的活性成分的单位剂量；该单位剂型可以是包装的组合物，例如，包装的散剂、管制瓶、安瓿，预填充的注射器或含有液体的药囊。单位剂型可以是，例如，胶囊或片剂本身，或者是合适数量的任何这种包装形式的组合物。
本发明的式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物和雌激素可以以分开的单位剂型，如独立的丸剂、片剂、散剂等，或组合成一种制剂给药。当式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物以及雌激素的制剂的最佳剂量确定时，优选将两者混合成为单一制剂以便于给药。还应当理解本发明中的制剂可能包括或不包括其它药用活性成分。
式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物的制备过程包括下列之一a)使下式的化合物 其中R1-R6和X同前定义，与下式的芳基酰胺反应 其中Y同前定义，得到式Ⅰ化合物，其中Z是-CH=CH-COY；或b)使下式的化合物 其中R1-R6和X同前定义，与下式的化合物反应≡-(CH2)n-Y其中n和Y同前定义，得到式Ⅰ化合物，其中Z是-C≡C-(CH)n-Y。
一般根据下面流程1和2可便捷地合成本发明化合物。流程1 流程1中起始吲哚的合成是将适当取代的苯胺(1)与适当取代的α-溴代苯基·乙基酮(bromophenylpropriophenone)(2)在合适的高沸点溶剂如DMF中加热。然后该产物以4-溴苄基溴烷基化给出取代的吲哚(3)。这时，进行苯酚(如果存在的话)的去保护。通常，苯酚被保护成苯甲醚并可以容易地用TMSI裂解。该芳基酰胺采用Heck反应条件在纯Et3N或Et3N/CH3CN中偶合。流程2 进行流程2中起始吲哚的合成是将适当取代的苯胺(1)与适当取代的α-溴苯基烷基酮(2)在合适的高沸点溶剂如DMF中加热。然后将该产物用4-碘苄基溴烷基化给出有取代的吲哚(3)。这时，进行苯酚(如果存在的话)的去保护。通常，苯酚被保护成苯甲醚并可以容易地用TMSI裂解。然后使炔丙基酰胺与苯基碘偶合。该炔丙基胺的典型制备是以合适的胺取代炔基溴或炔基甲苯磺酸酯。所述取代反应现场进行，不用分离炔丙基胺。制备3-位上非烷基的基团取代的化合物首先是制备3-位上由-H取代的吲哚。然后该吲哚被亲电子卤代、甲酰化、等，得到其它3-取代的化合物。
反应所采用溶剂是不经进一步纯化的无水Aldrich Sure SealTM产品。试剂是标准的Aldrich产品并且不经进一步纯化而使用。所有反应均在氮气中进行。采用230-400目的硅胶(MeRk Grade 60,AldrichChemical Company)进行层析。以得自EM Science的硅胶60F254板进行薄层层析。1H NMR图谱是在Bruker AM-400设备上以DMSO获得，以ppm报告化学位移。在未校正的Tomas-Hoover仪器上测定熔点。IR谱图以Perkin-Elmer衍射光栅或Perkin-Elmer 784分光光度计记录。质谱以Kratos MS 50或Finnigan 8230质谱仪记录。元素分析以Perkin-Elmer 2400元素分析仪获得。分析值在理论值的0.4％范围内。
实施例15-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚向烧瓶中加入4-苄氧基苯胺(45g,0.23mol)、4′-苄氧基-2-溴代苯基·乙基酮(21g,0.066mol)、和DMF(50mL)。该反应物加热回流30分钟，然后冷却至室温，然后在EtOAc(250mL)和1N HCl(水溶液)(100mL)间分配。该EtOAc以NaHCO3(水溶液)和盐水洗涤，MgSO4干燥。浓缩该溶液，用CH2Cl2溶解残留物，加入己烷沉淀出25g粗制固体。该固体溶解于CH2Cl2并蒸干吸附于硅胶，采用CH2Cl2/己烷(1∶5)进行层析产得9.2g棕褐色固体(33％):Mpt=150-152℃；1HNMR(DMSO)10.88(s,1H),7.56(d,2H,J=8.8Hz),7.48(d,4H,J=7.9Hz),7.42-7.29(m,6H),7.21(d,1H,J=7.0Hz),7.13(d,2H,J=8.8Hz),7.08(d,1H,J=2.2Hz),6.94(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),5.16(s,2H),5.11(s,2H),2.33(s,3H)；IR(KBr)3470,2880,2820,1620cm-1；MS eI m/z 419。
实施例25-苄氧基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-1H-吲哚与(3)类似制备标题化合物Mp=132℃；1H NMR(DMSO)11.0(s,1H),7.68-7.64(m,2H),7.49-7.47(m,2H),7.41-7.31(m,5H),7.23(d,1H,J=8.8Hz),7.10(d,1H,J=2.4Hz),6.82(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),5.11(s,2H),2.34(s,3H)；MS EI m/z 331；计算C22H18FNO的CHN。
实施例35-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-甲基-1-基甲基-(4-苯基溴)-吲哚将60％的NaH(0.17g,7.1mmol)的DMF(20ml)溶液冷却至0℃并通过滴加苄氧基吲哚1(2.5g,5.94mmol)的DMF(10mL)溶液处理。15分钟后，滴加4′-溴苄基溴(1.63g,6.53mmol)的DMF(10mL)溶液。该反应物在0℃下搅拌5分钟然后在室温下再搅拌20分钟。该反应混合物以醚(300mL)稀释并先后以NH4Cl(2×25mL)、NaOH(1×25mL)、和盐水(25mL)洗涤。有机提取物以MgSO4干燥并浓缩。残留物在THF/己烷中结晶产得2.7g(77％)的2:Mp=144-146℃；1H NMR(CDCl3)7.51-7.36(m,8H),7.34(d,4H,J=8.6Hz),7.20(d,2H,J=8.8Hz),7.15(d,1H,J=2.4Hz),7.03-7.00(m,3H),6.89(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),6.80(d,2H,J=8.6Hz),5.14(s,2H),5.12(s,2H),5.09(s,2H),2.25(s,3H)；IR(KBr)3400,3020,1600cm-1；MS eI m/z 587。
实施例45-苄氧基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-1-基甲基-(4-苯基溴)-吲哚标题化合物的制备与化合物5类似Mp=139-139.5℃；1HNMR(DMSO)7.49-7.46(m,2H),7.41-7.37(m,6H),7.33-7.27(m,4H),7.24(d,1H,J=8.8Hz),7.16(d,1H,J=2.2Hz),6.84(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),6.73(d,1H,J=8.6Hz),5.2(s,2H),5.12(s,2H),2.15(s,3H)；IR(KBr)2920,1630cm-1；MS eI m/z(499/501,Br存在)；计算C29H23BrFNO的CHN。
实施例52-(4-羟苯基)-3-甲基-1-基甲基-(4-苯基溴)-吲哚-5-酚含有5(0.5g,0.85mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液在室温下通过滴加3.5当量的TMSI(0.47mL,3.0mmol)处理。偶合数小时后，反应终止，加入2.2当量的TMSI并将反应物加热回流5小时。将反应物冷却至0℃并缓慢加入甲醇淬灭反应。该反应物以醚(25mL)稀释并以NaHCO3(25mL)、10％Na2SO3(25mL)、以及盐水洗涤。该醚相以MgSO4干燥并浓缩到硅胶上。以EtOAc/己烷(1∶4至1∶1)层析产得0.25g的3(71％):Mp=83-86℃；1HNMR(CDCl3)来自酚的宽带2H(＞10),s7.35(d,2H,J=9.0Hz),7.15(d,2H,J=8.8Hz),7.01(dd,1H,J=2.4,0.4Hz),6.86(d,2H,J=8.8Hz),6.80(d,1H,J=8.6Hz),6.72(dd,1H,J=8.6,2.4Hz),5.10(s,2H),4.88(s,1H),4.50(s,1H),2.21(s,3H)；MS eI m/z(407/409,Br存在)；IR(KBr)3390,2900,1600cm-1；计算C22H18BrNO2+0.25 EtOAc的CHN。
实施例62-(4-氟-苯基)-3-甲基-1-基甲基-(4-苯基溴)-吲哚-5-酚与化合物7类似制备并分离泡沫状标题化合物1H NMR(DMSO)8.79(s,1H)；7.39-7.34(m,4H),7.32-7.30(m,3H),7.11(d,1H,J=8.8Hz),6.85(d,1H,J=2.2Hz),6.74(d,1H,J=2.4Hz),6.63(dd,1H,J=8.6,2.2Hz),5.16(s,2H),2.11(s,3H)；IR(KBr)3400,2900,1630cm-1；MS eI m/z409/411含Br。制备吲哚芳基酰胺的一般步骤实施例3的Et3N溶液用3-邻-甲苯基膦(10mol％)处理，丙烯酰胺(1.25当量)以氮气彻底冲扫并加入Pd(OAc)2(2.5mol％)。该反应物在密封管中于100-110℃下加热直至经TLC分析已经完全消耗。浓缩该粗制反应产物并直接结晶或通过硅胶层析。
实施例7(E)-N,N-二乙基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=160-165℃；1H NMR 9.67(s,1H),8.72(s,1H),7.50(d,2H,J=8.1Hz),7.37(d,1H,J=15.4Hz),7.17(d,2H,J=8.3Hz),7.06(d,1H,J=8.8Hz),6.97(d,2H,J=15.4Hz),6.86-6.82(m,5H),6.58(dd,1H,J=8.6,2.2Hz),5.19(br s,2H),3.47-3.42(m,2H),3.34-3.30(m,2H),2.09(s,3H),1.10(t,3H,J=7.0Hz),1.03(t,3H,J=7.0Hz)；IR(KBr)3300,2950,1660,1580cm-1；MS(eI)m/z 454；计算C29H30N2O3+0.15 CH2Cl2+0.30H2O的CHN。
实施例81(E)-N-2-叔丁基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=168-170℃；1H NMR 9.66(s,1H),8.71(s,1H),7.66(s,1H),7.34(d,2H,J=8.3Hz),7.24(d,1H,J=15.8Hz),7.15(d,2H,J=8.3Hz),7.05(d,1H,J=8.6Hz),6.85-6.82(m,5H),6.59-6.56(m,1H),6.55(d,1H,J=16.0Hz),5.18(s,2H),2.11(s,3H),1.28(s,9H)；IR(KBr)3350,2950,1660,1620；MS(eI)m/z454；计算C29H30N2O3+0.4H2O的CHN.
实施例9(E)-吡咯烷基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=170-175℃；1H NMR 9.67(s,1H),8.71(s,1H),7.49(s,2H,J=8.1Hz),7.35(d,1H,J=15.4Hz),7.16(d,2H,J=8.6Hz),7.05(d,1H,J=8.8Hz),6.88-6.81(m,6H),6.57(dd,1H,J=8.6,2.2Hz),5.19(brs.2H),3.56(t,2H,J=6.6Hz),3.35(m,2H),2.11(s,3H),1.87(p,2H,J=7.0Hz),1.77(p,2H,J=7.0Hz)；MS m/z 452；计算C29H28N2O3+0.1MeOH+1.3H2O的CHN.
实施例10(E)-N,N-二甲基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=278-280℃；1H NMR(DMSO)9.65(s,1H),8.70(s,1H),7.50(d,2H,J=8.1Hz),7.33(d,1H,J=15.4Hz),7.15(d,2H,J=8.6Hz),7.07(d,1H,J=15.6Hz),7.05(d,1H,J=8.8Hz),6.85-6.80(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.6,2.4Hz),5.19(s,2H),3.09(s,3H),2.88(s,3H),2.11(s,3H)；MSeI m/z 426；IR(KBr)3410,3220,1650,1580cm-1；计算C27H26N2O3+0.5H2O的CHN.
实施例11(E)-N,N-二丁基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=126-128℃；1H NMR(DMSO)9.65(s,1H),8.70(s,1H),7.48(d,2H,J=8.3Hz),7.36(d,1H,J=15.2Hz),7.16(d,2H,J=8.6Hz),7.05(d,1H,J=8.6Hz),6.97(d,1H,J=15.2Hz),6.86-6.81(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),5.19(s,2H),3.39(t,2H,J=7.0Hz),3.29(t,2H,J=7.2Hz),2.11(s,3H),1.48-1.43(M,4H),1.29-1.20(M,4H),0.87(t,6H,J=7.2Hz)；MS eI m/z 510；IR(KBr)3300,2920,2900,2850,1650,1625,1580cm-1；计算C33H38N2O3的CHN.
实施例12(E)-N-丁基，N′-甲基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=240-242℃；1H NMR(DMSO)9.66(s,1H),8.70(s,1H),7.50(d,2H,J=8.1Hz),7.38-7.32(m,1H),7.16(d,2H,J=6.8Hz),7.06-7.01(m,2H),6.85-6.81(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.6,2.2Hz),5.19(s,2H),3.44,3.33(2t,2H,J=7.2Hz),3.06,2.87(2s,3H),2.11(s,3H),1.45(m,2H),1.24(p,2H,J=7.5Hz),0.87(t,3H,J=7.2Hz)；MS eI m/z 468；IR(KBr)3300,1660,1590cm-1；计算C30H32N2O3+0.2H2O的CHN。
实施例13(E)-吗啉基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=165-167℃；1H NMR(DMSO)9.66(s,1H),8.71(s,1H),7.52(d,2H,J=8.1Hz),7.39(d,1H,J=15.4Hz),7.15(d,2H,J=8.6Hz),7.12(d,1H,J=15.4Hz),7.06(d,1H,J=8.6Hz),6.85-6.81(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.6,2.2Hz),5.19(s,2H),3.65-3.64(m,2H),3.59-3.53(m,6H),2.11(s,3H)；IR(KBr)3330,1650,1620,1580cm-1；MS(FAB)m/z469(M+H+)；计算C29H28N2O4+0.5H2O的CHN.
实施例14(E)-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=161-163℃；1H NMR(DMSO)9.65(s,1H),8.70(s,1H),7.48(s,1H),7.37(d,2H,J=8.35Hz),7.30(d,1H,J=15.8Hz),7.14(d,2H,J=8.35Hz),7.04(d,2H,J=8.6Hz),6.85-6.81(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),6.48(d,1H,J=15.8Hz),5.18(s,2H),2.10(s,3H)；IR(KBr)3320,3180,1660,1580cm-1；MS(FAB)m/z 399(M+H+)；计算C25H22N2O3+1.3H2O的CHN.
实施例15(E)-N,甲基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=155-158℃；1H NMR(DMSO)9.64(s,1H),8.70(s,1H),7.99(q,1H,J=4.4Hz),7.37(d,2H,J=8.1Hz),7.30(d,1H,J=15.8Hz),7.14(d,2H,J=8.6Hz),7.03(d,1H,J=8.6Hz),6.85-6.81(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.6,2.4Hz),6.48(d,1H,J=15.8Hz),5.18(s,2H),2.66(d,3H,J=4.6Hz),2.10(s,3H)；IR(KBr)3400,1660,1620cm-1；MS eI m/z 412；计算C26H24N2O3+0.4H2O的CHN.
实施例16(E)-N,N-二丁基-3-{4-[5-羟基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=180℃；1H NMR(DMSO)8.77(s,1H),7.48(d,2H,J=8.4Hz),7.41-7.38(m,3H),7.38-7.29(m,3H),7.13(d,1H,J=8.8Hz),6.97(d,1H,J=15.4Hz),6.85(d,1H,J=2.4Hz),6.80(d,2H,J=8.1Hz),5.2(s,2H),3.40-3.36(m,2H),3.30-3.27(m,2H),2.10(s,3H),1.50-1.40(m,4H),1.29-1.21(m,4H),0.86(t,6H,J=7.2Hz)；IR(KBr)3180,2950,2900,2850,1650,1590cm-1；MS eI m/z 512；计算C33H37N2O2的CHN。
实施例17(E)-N-丁基，N′-甲基-3-{4-[5-羟基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺Mp=153-153.5℃；1H NMR(DMSO)8.77(s,1H),7.50(d,2H,J=8.1Hz),7.42-7.36(m,2H),7.35-7.28(m,3H),7.13(d,1H,J=8.8Hz),7.03(dd,1H,J=15.4,2.6Hz),6.84(d,1H,J=2.4Hz),6.80(d,2H,J=8.1Hz),6.62(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),5.21(d,2H),3.44,3.41(2t,2H,J=7.0Hz),3.06,2.87(2s,3H),2.10(s,3H),1.49-1.42(m,2H),1.27-1.20(m,2H),0.86(t,3H)；IR(KBr)3300,2950,2860,1645,1580cm-1；MS eI m/z 470；计算C30H31FN2O2的CHN。
实施例185-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚烧瓶中装入4-苄氧基苯胺(45g,0.23mol)、4′-苄氧基-2-溴代苯基·乙基酮(21g,0.066mol)、和DMF(50ml)。将该反应物加热回流30分钟，然后冷却至室温，再于EtOAc(250ml)和1N HCl(水溶液)(100ml)间分配。以NaHCO3(水溶液)和盐水洗涤EtOAc,MgSO4干燥。浓缩该溶液并将残留物以CH2Cl2溶解，再加入己烷沉淀出25g粗制固体。该固体溶解于CH2Cl2并蒸发吸附于硅胶后，再采用CH2Cl2/己烷(1∶5)层析产得9.2g棕褐色固体(33％):Mpt=150-152℃；1H NMR(DMSO)10.88(s,1H),7.56(d,2H,J=8.8Hz),7.48(d,4H,J=7.9Hz),7.42-7.29(m,6H),7.21(d,1H,J=7.0Hz),7.13(d,2H,J=8.8Hz),7.08(d,1H,J=2.2Hz),6.94(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),5.16(s,2H),5.11(s,2H),2.33(s,3H)；IR(KBr)3470,2880,2820,1620cm-1；MS eI m/z 419.
实施例195-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基碘)-吲哚4(3.0g,7.4mmol)的DMF(25mL)溶液以NaH(60％扩散液，0.21g,8.9mmol)处理并于室温下搅拌15分钟，加入4-碘溴苄基溴(2.2g,7.4mmol)并将反应液搅拌1小时。将该反应混合物倒入水中并以EtOAc抽提，MgSO4干燥并浓缩。用乙醚研磨该粗产物给出2.2g白色固体产物Mpt=153-156℃；1H NMR(DMSO)7.54(d,2H,J=8.6Hz),7.52-7.45(m,4H),7.37-7.29(m,6H),7.27(d,2H,J=8.8Hz),7.17(d,1H,J=9.0Hz),7.13(d,1H,J=2.2Hz),7.10(d,2H,J=8.8Hz),6.81(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),6.60(d,2H,J=8.3Hz),5.18(s,2H),5.12(s,2H),5.11(s,2H),2.15(s,3H)；Ms eI m/z 635。
实施例202-(4-羟基-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基碘)-吲哚-5-酚4(2.2g,3.5mmol)的CHCl3溶液以碘代三甲基硅烷(1.04mL,7.0mmol)处理并将反应物加热回流。2小时后，再次加入3当量的碘代三甲基硅烷并将反应物在室温下搅拌18小时。通过加入MeOH(5ml)淬灭该反应。其有机相以10％的NaSO3水溶液、HCl(1M)洗涤并以MgSO4干燥。浓缩该溶液并以EtOAc/己烷(3∶7)硅胶层析产得泡沫状的4a(1.2g)1:1H NMR9.65(s,1H),8.71(s,1H),7.54(d,2H,J=8.3Hz),7.12(d,2H,J=8.3Hz),7.02(d,1H,J=8.6Hz),6.84-6.80(m,3H),6.61(d,2H,J=8.3Hz),6.57(dd,1H,J=6.4Hz),5.12(s,2H),2.09(s,3H)；Ms eIm/z455。制备吲哚炔丙基胺的一般步骤实施例21-23的标题化合物的制备是将含有10倍摩尔过量的的仲胺的DMF溶液冷却至0℃并以炔丙基溴(3当量，80％的甲苯溶液)处理。0℃下1小时后,任由反应物升至室温下1小时。加入吲哚碘(4a,1当量)随后加入碘化亚铜(Ⅰ)(0.1当量)和Pb(PPh3)2Cl2(0.035当量)。然后将该反应混合物搅拌16-48小时，再倒入水中处理并抽提到EtOAc中。浓缩该EtOAc并采用EtOAc/己烷作为洗脱系统进行硅胶层析。
实施例212-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(3-N,N-二甲基-1-基-丙-1-炔基)-苄基]-1H-吲哚-5-酚Mp=173-176℃；1H NMR(DMSO)9.64(s,1H),8.70(s,1H),7.25(d,2H,J=8.1Hz),7.12(d,2H,J=8.3Hz),7.03(d,1H,J=8.6Hz),6.83-6.78(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.8,2.4Hz),5.17(s,2H),3.39(s,2H),2.19(s,6H),2.10(s,3H)；IR(KBr)3390,1490cm-1；MS esI 411(M+H+)。
实施例222-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(3-哌啶-1-基-丙-1-炔基)-苄基]-1H-吲哚-5-酚Mp=118-123℃；1H NMR(DMSO)9.65(s,1H),8.71(d,1H),7.24(d,2H,J=8.1Hz),7.12(d,2H,J=8.6Hz),7.02(d,1H,J=8.6Hz),6.83-6.80(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.6,2.2Hz),5.17(s,2H),3.39(s,2H),2.41(m,4H),2.10(s,3H),1.48(p,4H,J=5.7Hz),1.36-1.33(m,2H)；IR(KBr)3400,2920,1620,1420cm-1；MS EI m/z 450；计算C30H30N2O2+0.25H2O的CHN。
实施例232-(4-羟基-苯基)-3-甲基-1-[4-(3-吡咯烷-1-基-丙-1-炔基)-苄基]-1H-吲哚-5-酚(5c)Mp=174-176℃；1H NMR(DMSO)9.64(s,1H),8.70(d,1H),7.23(d,2H,J=8.3Hz),7.11(d,2H,J=8.6Hz),7.02(d,1H,J=8.8Hz),6.84(m,5H),6.57(dd,1H,J=8.6,2.2Hz),5.17(s,2H),3.53(s,2H),2.53-2.51(m,4H),2.09(s,3H),1.69-1.66(m,4H)；IR(KBr)3400,2920,2900,1620cm-1；MS eI m/z 436；计算C29H28N2O2+0.7H2O的CHN。生物学模型体外雌激素受体结合检测受体制备雌激素受体过度表达的CHO细胞在150mm2的培养皿中生长于去小牛血清的DMEM+10％活性炭吸附的右旋糖酐中。该培养皿以PBS洗涤两次,以10mM Tris-HCl,pH7.4,1mM EDTA洗涤一次。通过表面刮取收集细胞，然后将细胞悬液置于冰上。以手控组织研磨机采用两次各10秒钟的高速研磨使细胞破裂。该粗制悬液在12000g下离心20分钟，接着在100000g下离心60分钟制备无核糖体的细胞溶胶。然后该细胞溶胶于-80℃下冷冻并贮藏。该细胞溶胶的蛋白质浓度参照标准蛋白采用BCA分析法测定。结合分析条件竞争分析在96-孔板(聚苯乙烯*)中进行，其结合＜2.0％的总投入量的[3H]-17β-雌二醇并且所收集的每个点的数据均重复3次。100uG/100uL的受体制备样品平均分配到每个孔中。在评价100倍和500倍竞争剂时，在初始竞争中加入在50uL体积饱和剂量的2.5nM[3H]17β-雌二醇+竞争剂(或缓冲液)，仅用0.8nM[3H]17β-雌二醇。此培养板在室温下孵育2.5小时。孵育结束后每孔加入150ul冰冷的活性炭吸附的右旋糖酐(5％的活性炭包以0.05％69K右旋糖酐)并立即将该培养板在4℃下以99g离心5分钟。然后取200uL的上清溶液进行闪烁计数。所有样品均计数最初的2％或10分钟。由于聚苯乙烯吸附少量的[3H]17β-雌二醇，具有放射活性，但非活性炭处理的培养孔和细胞溶胶，用于计算可检测的同位素的量。而且，活性炭处理的具有放射活性的培养孔而非细胞溶胶用于测定不能转移的[3H]-17β-雌二醇的DPM。采用Corning#25880-96型96孔培养板，因为已证明它们结合最少量的雌二醇。结果分析Beckman LS 7500闪烁计数器以一套获得各样品H号的淬灭标准，将每分钟计数的放射活性(CPM)自动转换成每分钟解离常数(DPM)。运用下列公式计算100或500倍竞争剂存在下的雌二醇结合百分率(％)((样品DPM-活性炭不能转移的DPM)/(雌二醇DMP-活性炭不能转移的DPM))×100％=雌二醇结合百分率(％)
为获得IC50曲线，以结合百分率(％)对化合物作图。计算在500倍竞争剂浓度下显示出＞30％竞争率的化合物的IC50。关于这些方法的描述，参见Hulme,E.C.，等主编受体-配体的相互作用A PracticalApproach(一种实用方法)，1992。IRL出版社，纽约(特别参见第8章)。Ishikawa细胞碱性磷酸酶试验细胞维持与处理在含有酚红+10％小牛血清的DMEM/F12(50％∶50％)中维持Ishikawa细胞并用2mM Glutamax、1％Pen/Strap和1mM丙酮酸钠补充该培养基。每一个实验(细胞处理)开始前五天将该培养基变为不含酚红的DMEM/F12+10％葡聚糖包被的炭的剥离血清。处理前一天，使用0.5％胰蛋白酶/EDTA收获细胞并在96孔组织培养板上以5×104细胞/孔的密度接种。除了10-6(化合物)+10-9M的17β-雌二醇以外，以10-6、10-7和10-8M给予受试化合物，以评价所述化合物作为抗雌激素功能的能力。试验前处理细胞48小时。每个96孔板含有17β-雌二醇对照。在每一个剂量下的样品数为n=8。碱性磷酸酶试验在48小时结束时，将培养基吸出并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)将细胞洗涤三次。向每一个孔中加入50μL的溶胞缓冲液(0.1MTris-HCl、pH9.8,0.2％Triton X-100)。在-80℃下，将这些板放置最少15分钟。在37℃下将这些板解冻随后向每一个孔中加入150μL含有4mM对硝基苯磷酸酯(pNPP)的0.1 MTris-HCl、pH9.8(最后浓度，3mM pNPP)。
使用KineticCalc应用程序(Bio-Tek Instruments公司，Winooski,VT)进行吸收度和斜率计算。结果作为经动力学反应曲线的线性部分(对30分钟吸收度读数的每5分钟的光密度读数)上平均的酶反应速率(斜率)的平均值+/-S.D.来表达。化合物的结果作为相对于1nM的17β-雌二醇的应答百分比来总结。
通过碱性磷酸酶方法试验多种化合物的雌激素活性并计算相应ED50值(95％C.I.)。列于以下的四个物质被用作参照标准物17β-雌二醇0.03nM17α-雌二醇1.42nM雌三醇 0.13nM雌酮 0.36nM这些方法的介绍由Holinka,C.F.、Hata,H.、Kuramoto,H.和Gurpide,E.(1986)类固醇激素和抗类固醇对人子宫内膜癌细胞(Ishikawa系)的碱性磷酸酶活性的影响，Cancer Research,46:2771-2774和由Littlefield,B.A.、Gurpide,E.、Markiewicz,L.、McKinley,B.和Hochberg,R.B.(1990)基于Ishikawa细胞中刺激碱性磷酸酶的简单的和敏感的微量滴定板雌激素生物试验；D5肾上腺类固醇的雌激素作用。Endocrinology,6:2757-2762描述。2X VIT ERE感染试验细胞维持与处理已用人雌激素受体稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)在DMEM+10％小牛血清(FBS)中维持。处理前48小时，用缺乏酚红的DMEM+10％葡聚糖包被的炭的剥离FBS(处理培养基)替代该生长培养基。以5000细胞/孔的密度将细胞接种在含有200uL的培养基/孔的96孔板上。磷酸钙转染用以下的比例将受体DNA(含有在最小胸腺嘧啶核苷激酶启动子驱动的荧光素酶基因前的两种串联复制的卵黄生成素ERE的Promega质粒pGL2)与B-半乳糖苷酶表达质粒的pCH110(Pharmacia)和载体DNA(pTZ18U)混合10uG的受体DNA5uG的pCH110 DNA5uG的pTZ18U20uG的DNA/1mL的转染溶液将DNA(20uG)溶于500μL的250mM灭菌CaCl2中并将其滴加到500μL的2XHeBS(0.28 M NaCl,50mM HEPES,1.5mMNa2HPO4,pH7.05)中并在室温下孵育20分钟。将20uL该混合物加入到每孔细胞中并在细胞上保留16小时。在孵育结束时除去沉淀，用培养基洗涤细胞。替代新鲜的处理培养基并用溶媒、1nM17β-雌二醇、1uM化合物或1uM化合物+1nM17β-雌二醇(用于雌激素拮抗作用试验)处理细胞。在8个孔(n=8)中进行每一个处理条件，其在荧光素酶试验前孵育24小时。荧光素酶试验在暴露于化合物24小时后，除去培养基并用不含有Mg++和Ca++的125uL的PBS把每孔洗涤两次。除去PBS后，向每孔中加入25uLPromega溶胞缓冲液并使其在室温下放置15分钟，随后在-80℃下放置15分钟，在37℃下放置15分钟。将20uL溶胞产物转移至不透明的96孔板上用于荧光素酶活性的评价并把剩余的溶胞产物(5uL)用于B-半乳糖苷酶活性的评价(使转染正常化)。通过发光计将荧光素(luciferarn)底物(Promega)以100ul等分试样自动加入到每一个孔中并在加入10秒后读取生成的荧光(相对光单位)。B-半乳糖苷酶试验向残留的5uL溶胞产物中加入45uL的PBS。然后加入50uL的Promega B-半乳糖苷酶2X试验缓冲液，充分混合并在37℃下孵育1小时。对每一个试验组设置含有标准曲线(用0.1至1.5毫单位，重复三次)的板。在410nm下，在Molecular Devices分光光度平板读数器上分析这些板。通过来自标准曲线的数学外推法使对未知物的光密度转化为毫单位活性。结果分析作为在10秒内测量累积的相对光单位(RLUs)产生荧光素酶数据并自动转化为JMP(SAS公司)文件，其中背景RLUs被扣除。B-半乳糖苷酶值自动输入该文件并且这些值被分成RUSs以使所述数据标准化。对每一处理组从n=8测定平均值和标准偏差。对每一个板将化合物的活性与17β-雌二醇相比较。使用公式％=((雌二醇-对照)/(化合物的值))×100计算作为与17β-雌二醇相比较的％活性。这些技术由Tzukerman,M.T.、Esty,A.、Santiso-Mere,D.、Danielian,P.、Parker,M.G.、Stein,R.B.、Pike,J.W.和McDonnel,D.P.(1994)描述。人雌激素受体反式激活能力通过细胞和启动子邻近序列来确定并由两个功能不同的分子内区域(参见分子内分泌学，8:21-30)介导。大鼠亲子宫的/抗亲子宫的生物试验在未成熟大鼠亲子宫试验(4天)(如同先前由L.J.Black和R.L.Goode,Life Science,26,1453(1980)描述的那样)中测定化合物的雌激素和抗雌激素性质。未成熟Sprague-Dawley大鼠(雌性，18天大小)以每组6只被试验。每天ip注射含有作为注射溶媒的50％DMSO/50％盐水的10uG化合物、100uG化合物、(100uG化合物+1uG17β-雌二醇)和1uG17β-雌二醇处理动物以检查抗雌激素活性。在第4天通过CO2窒息处死动物并取出它们的子宫且剥离多余的脂类，除去任何流体并测定湿重。提交一小段子宫角用于组织学研究并且剩余部分用于分离总RNA以评价补体成分3基因表达。生物分析结果雌激素受体亲和力(以RBA报告17β-雌二醇=100)化合物 RBA雷洛昔芬200他莫西芬1.8实施例1020实施例7 42实施例8 40实施例9 40实施例12114实施例1180实施例1327实施例1432实施例1553实施例2153实施例2223
转染荧光素酶检测化合物 ％活性相对1nM17β-雌二醇的％活性17β-雌二醇100％ N/A雌二醇 38％ N/A他莫西芬 0％ 10％雷洛昔芬 0％ 0％实施例10 1％ 2％实施例74％ 8％实施例86％ 78％实施例96％ 8％实施例12 13％ 24％实施例11 8％ 12％实施例13 8％ 17％实施例14 19％ 57％实施例15 15％ 31％实施例21 34％ 34％实施例22 17％ 19％
Ishikawa碱性磷酸酶测定化合物 ％活性 ％活性(化合物+1nM17β-雌二醇)雌二醇 100％ N/A他莫西芬0％ 45％雷洛昔芬5％ 5％实施例106％ 19％实施例7 1％ 9％实施例8 10％ 22％实施例9 3％ 11％实施例127％ 16％实施例116％ 11％实施例137％ 9％实施例142％ 14％实施例150％ 5％实施例2134％ 34％实施例2227％ 23％3-天卵巢切除大鼠模型化合物 10μG 100μG他莫西芬69.6mg71.4mg雷洛昔芬47.5mg43.2mg对照=42.7mg 1μG 17β-雌二醇=98.2化合物 10μG 100μG 100μG+1μG17β-雌二醇实施例7 47.8mg64.8mg 75.4mg对照=20.2mg 1μG 17β-雌二醇=80.2mg
化合物 10μG100μG100μG+1μG17β-雌二醇实施例1236.9mg 49.5mg63.1mg对照=31.4mg 1μG 17β-雌二醇=89.0mg化合物 10μG100μG100μG+1μG17β-雌二醇实施例1139.3mg 59.8mg81.0mg对照=24.5mg 1μG17β-雌二醇=90.8mg化合物 10μG100μG100μG+lμG17β-雌二醇实施例1432.5mg 56.4mg79.8mg实施例1540.4mg 56.3mg69.3mg对照=29.1mg lμg17β-雌二醇=95.5mg化合物 10μG100μG100μG+1μG17β-雌二醇实施例2156.0mg 84.0mg77.6mg对照=32.1mg 1μg17β-雌二醇=90.2mg化合物 10μG100μG100μG+1μG17β-雌二醇22 55.6mg 71.3mg66.8mg对照=21.7mg 1μg17β-雌二醇=82.8mg
权利要求
1．药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和下列结构式的化合物或其药学上可接受的盐 其中R1选自H、OH或C1-C4酯或其烷基醚、或卤素；R2、R3、R4、R5和R6独立地选自H、OH或C1-C4酯或其烷基醚、卤素、氰基、C1-C6烷基或三氟甲基，条件是，当R1是H时，R2不是OH；n=2或3；X选自H、C1-C6烷基、氰基、硝基、三氟甲基、卤素；Z选自 或-C≡C-(CH2)n-Y；Y选自a)基团 其中R7和R8独立地选自基团H、C1-C6烷基、苯基或通过-(CH2)p-，其中p是2-6的整数，结合成为一个环，该环任选被多达三个选自羟基、卤代、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONH(C1-C4)烷基、-NH2、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、-NHSO2(C1-C4)烷基、-NHCO(C1-C4)烷基和-NO2的取代基取代；b)五、六、或七元饱和、不饱和或部分不饱和的杂环，其含有多达2个选自-O-、-NH-、-N(C1-C4烷基)-、-N=和-S(O)m-的杂原子，其中m是0-2的整数，并任选被1-3个独立选自下列的取代基取代羟基、卤代、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONHR1、-NH2、(C1-C4)烷基氨基、二-(C1-C4烷基)氨基、-NHSO2R1、-NHCOR1、-NO2和任选被1到3个(C1-C4)烷基基团取代的苯基；c)包括一个五或六元杂环与一个苯环稠合的二环系，所述杂环中含有多达2个选自-O-、-NH-、-N(C1-C4烷基)-、-(O)m-和-S(O)m-的杂原子，其中m是0-2的整数，并任选被1-3个独立选自下列的取代基取代羟基、卤素、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4酰氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONHR1、-NH2、(C1-C4)烷基氨基、双-(C1-C4烷基)氨基、-NHSO2R1、-NHCOR1、-NO2和任选被1到3个(C1-C4)烷基基团取代的苯基。
2．权利要求1的药用组合物，其中R1选自H、OH或C1-C4酯或其烷基醚、卤素；R2、R3、R4、R5和R6独立地选自H、OH或C1-C4酯或其烷基醚、卤素、氰基、C1-C6烷基、或三氟甲基，条件是，当R1是H时，R2不是OH；X选自H、C1-C6烷基、氰基、硝基、三氟甲基、卤素；Y为基团 R7和R8独立地选自H、C1-C6烷基、或通过-(CH2)p-结合成为一个环，其中p是2-6的整数，该环任选被多达三个选自羟基、卤素、C1-C4烷基、三卤代甲基、C1-C4烷氧基、三卤代甲氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚磺酰基、C1-C4烷基磺酰基、羟基(C1-C4)烷基、-CO2H、-CN、-CONH(C1-C4)烷基、-NH2、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、-NHSO2(C1-C4)烷基、-NHCO(C1-C4)烷基和-NO2的取代基取代。
3．权利要求2的药用组合物，其中R7和R8结合在一起为-(CH2)p-以形成一个环，其中p是2-6的整数，该环任选被1-3个选自C1-C3烷基、三氟甲基、卤素、苯基、硝基和-CN的取代基取代。
4．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和5-苄氧基-2-(4-氟苯基)-3-甲基)-1H-吲哚。
5．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和5-苄氧基-2-(4-苄氧基苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴)-吲哚。
6．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和5-苄氧基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴)-吲哚。
7．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素以及权利要求1的包括一种或一种以上的雌激素2-(4-羟基苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴)-吲哚-5-酚。
8．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-N,N-二乙基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
9．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和1(E)-N-叔丁基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
10．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-吡咯烷基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
11．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-N,N-二甲基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
12．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-N,N-二丁基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
13．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-N-丁基，N′-甲基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
14．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-吗啉基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
15．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
16．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-N，甲基-3-{4-[5-羟基-2-(4-羟基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
17．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-N,N-二丁基-3-{4-[5-羟基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
18．权利要求1的药用组合物，包括一种或一种以上的雌激素和(E)-N-丁基，N′-甲基-3-{4-[5-羟基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基]-苯基}-丙烯酰胺。
19．权利要求1的组合物，包括一种或一种以上的雌激素和2-(4-羟基苯基)-3-甲基-1-[4-(3-N,N-二甲基-1-基-1-丙-1-炔基)苄基]-1H-吲哚-5-酚。
20．权利要求1的组合物，包括一种或一种以上的雌激素和2-(4-羟基苯基)-3-甲基-1-[4-(3-哌啶-1-基丙-1-炔基)-苄基]-1H-吲哚-5-酚。
21．权利要求1的组合物，包括一种或一种以上的雌激素和2-(4-羟基苯基)-3-甲基-1-[4-(3-吡咯烷-1-基丙-1-炔基)-苄基]-1H-吲哚-5-酚。
22．药用组合物，其包括一种或一种以上的雌激素和根据权利要求1-22任何一项的化合物，或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体或赋形剂。
23．根据权利要求1-22任何一项的药用组合物，其中一种或一种以上的雌激素选自马烯雌酮、马萘雌酮、雌二烯、乙炔雌二醇、17β-雌二醇、17α-二氢马萘雌酮、17β-二氢马萘雌酮、menstranol、结合型雌激素、雌酮、17α-雌二醇硫酸酯、Δ8,9-脱氢雌酮、雌马酚或肠内酯；或其药学上可接受的盐或酯。
24．根据权利要求23的药用组合物，其中一个或一个以上的雌激素的药学上可接受的盐是钠盐。
25．治疗或预防哺乳动物骨质减少的方法，该方法包括以雌激素和有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐给予有这种需要的哺乳动物。
26．治疗或预防由雌激素缺乏所致或与雌激素缺乏相关的哺乳动物的病状或综合征的方法，该方法包括以雌激素和有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐给予有这种需要的哺乳动物。
27．治疗或预防哺乳动物心血管疾病的方法，该方法包括以雌激素和有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐给予有这种需要的哺乳动物。
28．治疗或预防哺乳动物中由子宫内膜或子宫内膜样组织增殖或异常增生、活动或生长导致的疾病，该方法包括以雌激素和有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐给予有这种需要的哺乳动物。
29．权利要求28的方法其中所述疾病是子宫内膜异位。
30．一种包括权利要求1-21任何一项定义的式(Ⅰ)或(Ⅱ)化合物或其药学上可接受的盐与一种或一种以上的雌激素分别、顺次或同时联合给药的产品。
全文摘要
本发明涉及将3－[4－(2－苯基－吲哚－1－基甲基)－苯基]丙烯酰胺化合物和2－苯基－1－[4－(氨基－1－基－链－1－炔基)－苯基]－1H－吲哚－5－酚化合物用作雌激素能药物,以及药用组合物和利用这些化合物的治疗方法,这些化合物具有通式(Ⅰ)和(Ⅱ)。
文档编号A61P15/00GK1309637SQ99808648
公开日2001年8月22日 申请日期1999年5月11日 优先权日1998年5月15日
发明者J·H·皮卡, B·S·孔 申请人:美国家用产品公司