解释的，"T0"表示在所研究的样品还未经过 可感知的热应力或者储存时间的时间点下的不溶性微粒的评价。Y轴上的值是每毫升的微 粒。在图例中：F02C是实施例4. 2的制剂（不含PS80) ;F03C是实施例3. 5的制剂（不含 PS80) ;R)4C是EN BREL?; F05C是实施例4. 2的制剂（含PS80)以及R)6C是实施例3. 5 的制剂（含PS80)。该图中的数据显示相对于不含有表面活性剂的相同制剂，当PS80存在 于实施例4. 2和3. 5的制剂中时不溶性微粒显著减少。
[0027] 发明详沭
[0028] 现详细说明本发明的各种实施方式。如在本说明书和整个权利要求书中所使用 的，"一（a) "、"一（an) "和"所述（the) "的含义包括复数引用，除非上下文另有明确说明。此 外，如在本说明书和整个权利要求书中所使用的，"在…中（in) "的含义包括"在…中（in) " 和"在…上（on)"，除非上下文另有明确说明。此外，下面更具体地定义在本说明书中使用 的一些术语。
[0029] 定义
[0030] 在使用每个术语的本发明的范围内，以及在在具体的上下文中，本说明书中使用 的术语通常具有其在本领域中的普通的含义。下面或者在说明书的其他处讨论用于描述本 发明的某些术语从而为关注本发明的描述的实践者提供额外指导。提供某些术语的同义 词。一个或多个同义词的独用不排除其它同义词的使用。在本说明书的任何位置处使用的 实施例（包括本文所讨论的任何术语的实施例）仅是说明性的，而决不限制本发明或者任 何示例性术语的范围和含义。本发明并不限于本说明书给出的各种实施例。
[0031] 除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属的技术领域 的普通技术人员所通常理解的相同的含义。在冲突的情况下，以包括定义的本文献为准。
[0032] "大约"、"约"或"近似"一般应当表示在给定值或范围的20 %以内、10%以内、在 5、4、3、2或1%以内。给定的数值的数量是近似的，这意味着如果不明确说明可以推断术语 "大约"、"约"或"近似"。
[0033] 术语"依那西普"或"依那西普单体"或"单体"是Enbrel?的同义词。它是指一种 多肽，其是由连接于人IgGl的Fc部分的人75千道尔顿（P75)肿瘤坏死因子受体（TNFR)的 胞外配体结合部分组成的二聚融合多肽。它由934个氨基酸组成并且具有约150千道尔顿 的表观分子量。为了本申请的目的，术语"依那西普"也包括在氨基酸结构中具有不显著地 影响依那西普的功能、效力、或亲合力的小修改（包括氨基酸的缺失，添加和/或取代）的 依那西普。术语"依那西普"包括Enbrel?的所有形式和制剂，包括但不限于浓缩的制剂、 可注射的即用型制剂、用水、乙醇和/或其他成分再造的制剂。术语依那西普还意图包括用 于商业Enbrel?的依那西普的生物仿制药或生物改进变体。例如，依那西普的生物仿制药 或生物改进变体可以具有与商业Enbrel?略微不同的糖基化分布。另外，在商业Enbrel? 中发现的依那西普的生物仿制药或生物改进变体可以表现出构成活性依那西普成分的聚 集体的量的减少。
[0034] 如本文所用的术语"单体"意图表示上面提及的二聚依那西普融合蛋白。
[0035] 术语"葡甲胺"是指具有化学式H3NHCH2 (CHOH) 4CH20H的化合物，也称为1 -去 氧-1-甲基氨基山梨醇；N-甲基-d-葡糖胺；和1-脱氧-1-甲基氨基-D-葡糖醇。
[0036] 术语"甘露糖基甘油酸酯"、"甘露糖基乳酸酯"、"甘露糖基乙醇酸酯"和"磷酸二 甘油酯"是本领域公知的并具有其通常接受的含义。以下参考文献描述这些化合物的一些 细节：Faria 等人，Carbohydrate Res. 2008, 343:3025-3033 ;Borges 等人，Extremophiles 2002,6:209-216 ；Faria et al.,ChemBioChem 2003,4:734-741 ；Sawangwan et al. , Biotechnol. J. 2010,豆：187-191 ;和 Pais 等人，J. Mol. Biol. 2009, 394:237-250。本申 请通过引用并入包含在这些参考文献中的这些化合物的描述。术语"丝氨酸"指的是密码 子是UCU、UCC、UCA、UCG、A⑶和AGC的氨基酸。
[0037] 术语"脯氨酸"指的是密码子是(XU、CCC、CCA和CCG的α -氨基酸。
[0038] 术语"谷氨酸盐"是指谷氨酸（Glu)的羧酸根阴离子或盐。为了本申请的目的，术 语"谷氨酸盐"还包括谷氨酸本身。
[0039] 术语"糖"是指单糖、二糖和多糖。糖的实例包括但不限于蔗糖、葡萄糖、右旋糖和 其他。
[0040] 术语"多元醇"是指含有多个羟基的醇。多元醇的例子包括但不限于甘露醇、山梨 醇等等。
[0041] 术语"金属离子"是指带有正或负净电荷的金属原子。为了本申请的目的，术语"金 属离子"还包括金属离子的来源，包括但不限于金属盐。
[0042] 术语"长期储存"应理解为是指该药物组合物可以储存三个月或以上，六个月或以 上，以及优选为一年或以上。长期保存也可以理解为是指该药物组合物作为液体在2-8°C下 储存，或冷冻，例如，在_20°C，或者更冷。还预期的是，可以冷冻和解冻该组合物一次以上。 [0043] 关于长期储存的术语"稳定的"或"稳定化的"应理解为是指包含在药物组合物 中的依那西普的活性相对于该组合物在开始储存时的活性，损失不超过20%，或更优选 15 %，或甚至更优选10 %，最优选为5 %。稳定性也表示依那西普制剂在长期储存之后出现 不溶性微粒的趋势降低。
[0044] 术语"哺乳动物"包括但不限于人。
[0045] 术语"药学上可接受的载体"是指无毒的固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、封装 材料、制剂助剂或任何常规类型的赋形剂。药学上可接受的载体在所使用的剂量和浓度上 对于接受者是无毒的并且与制剂的其他成分兼容。
[0046] 术语"组合物"是指通常包含载体（诸如药学上可接受的载体）或者本领域常规 的赋形剂并且适于为了治疗、诊断或预防目的而对受试者给药的混合物。其可以包括其中 多肽或多核苷酸存在于细胞或培养基中的细胞培养物。例如，用于口服给药的组合物可形 成溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、缓释制剂、口服灌洗剂或粉末。
[0047] 术语"药物组合物"和"制剂"可互换使用。
[0048] 术语"治疗"是指用于哺乳动物中的疾病的救济方法的任何施用或应用并且包括 抑制疾病、阻止其发展、缓解疾病，例如，通过引起复原、或者恢复或修复丢失、缺失或有缺 陷的功能；或者刺激低效过程。该术语包括获得所需的药理学和/或生理学效果，覆盖哺乳 动物中的病理状态或病症的任何治疗。该效果就完全或部分地防止病症或其症状方面而言 可以是预防性的和/或就病症的部分或完全治愈和/或导致该病症的不利影响方面而言可 以是治疗性的。其包括：（1)预防可能易患病症但是还没有症状的受试者发生或者复发该 病症，（2)抑制该病症，诸如阻止其发展，（3)停止或终止该病症或至少其相关症状，以使宿 主不再遭受该病症或其症状，如引起病症或其症状的消退，例如通过恢复或修复丢失、缺失 或有缺陷的功能，或刺激低效过程，或（4)减轻、缓解或改善该病症，或与其相关联的症状， 其中广义上的改善是指至少参数量值降低，诸如炎症、疼痛和/或肿瘤大小。
[0049] 术语"疾病"是指需要医疗干预或期望医疗干预的任何病况、感染、病症或综合征。 这种医疗干预可以包括治疗、诊断和/或预防。
[0050] 术语"治疗有效量"是指当对活的受试者施用时，对该活的受试者实现了所希望的 效果的量。例如，用于施用至活的受试者的本发明的多肽的有效量是预防和/或治疗整合 素 ανβ 3-介导的疾病的量。确切的量将取决于治疗的目的，并可由本领域技术人员使用 已知的技术确定。如本领域公知的，对于全身与局部递送、年龄、体重、一般健康状况、性别、 饮食、给药时间、药物相互作用和病症的严重程度的调整可能是必要的，并且可通过本领域 的技术人员用常规实验确定。
[0051] 术语"T1 "是指依那西普制剂已在40°C下储存约一周的时间点。
[0052] 术语"T2"是指依那西普制剂已在40°C下储存约二周的时间点。
[0053] 术语"T4"是指依那西普制剂已在40°C下储存约四周的时间点。
[0054] 本发明的实施方式
[0055] 当以长期的方式储存含有依那西普（Enbrel?)的药物组合物（包括依那西普的 含水制剂和冻干制剂）时，由于依那西普单体的不稳定，依那西普的活性可能通过聚集和/ 或降解（包括形成片段和低聚物）而丢失或减少。此外，该制剂可能随着时间的推移显示 出不溶性微粒。因此，本发明提供了实现依那西普的稳定的长期储存并且不溶性微粒的减 少的依那西普的含水制剂的若干实施方式，从而使依那西普在储存过程中无论是液体还是 冷冻状态都稳定。所提供的制剂包括但不限于不含有精氨酸和不需要任何额外的步骤（如 再水化）的制剂。
[0056] 下面更加详细地说明这些实施方式。
[0057] 依那西普
[0058] 所有本发明的组合物考虑使用依那西普，包括用于商业Enbrel?的依那西普的生 物仿制药或生物改进药（biobetter)变体。如在本申请的【背景技术】部分说明的，依那西普 是由连接于人IgGl的Fc部分的人75千道尔顿（p75)肿瘤坏死因子受体（TNFR)的胞外配 体结合部分组成的二聚融合多肽。依那西普由934个氨基酸组成。依那西普的Fc组分包 含重链恒定结构域2 (CH2)、重链恒定结构域3 (CH3)和人IgGl的铰链区。Fc结构域可以包 含一种或所有的上述结构域。
[0059] 可以由表达依那西普的活的宿主细胞产生适于储存在本发明的药物组合物中的 依那西普，如抗体情况下的杂交瘤，或者在融合多肽或抗体的情况下已经经过基因工程化 以产生多肽的宿主细胞。基因工程化细胞以产生多肽的方法是本领域公知的。参见例 如 Ausubel 等人，eds. (1990) ,Current Protocols in Molecular Biology(Wiley, New York)。这些方法包括将编码和允许多肽表达的核酸引入到活的宿主细胞内。这些宿主细 胞可以是在培养基中生长的细菌细胞、真菌细胞，或优选地，动物细胞。细菌宿主细胞包括 但不限于大肠杆菌细胞。合适的大肠杆菌菌株的实例包括：HB101、DH5.阿尔法、GM2929、 JM109KW251、匪538、匪539和未能切割外源DNA的任何大肠杆菌菌株。可使用的真菌宿主 细胞包括但不限于酿酒酵母、毕赤酵母和曲霉属真菌细胞。可以使用的动物细胞系的一些 实例是CH0、VER0、BHK、HeLa、Cos、MDCK、293、3T3和W138。利用本领域的技术人员公知的 方法可以建立新的动物细胞系（例如，通过转化、病毒感染、和/或选择）。任选地，依那西 普可以由宿主细胞分泌进入培养基。
[0060] 可以通过任何标准方法进行所表达的依那西普的纯化。当依那西普在细胞内产生 时，通过例如离心或超滤去除颗粒碎片。当依那西普分泌到培养基内时，可首先使用标准的 多肽浓缩过滤器浓缩来自这种表达系统的上清液。也可以加入蛋白酶抑制剂以抑制蛋白水 解并且可以包括抗生素以防止微生物的生长。
[0061] 可以使用例如羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析、以及已知的或尚待发 现的纯化技术的任何组合纯化依那西普，包括但不限于蛋白A层析、离子交换柱上的分级、 乙醇沉淀、反相HPLC、硅胶层析、肝素 SEPHAROSET?层析、阴离子或阳离子交换树脂层 析（如聚天冬氨酸柱）、层析聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。
[0062] I.用表面活件剂，加 h丝氨酸、脯氨酸或者谷氨酸盐稳定化的依那西普
[0063] 在一个实施方式中，本发明提供了包括依那西普、聚山梨醇酯或泊洛沙姆表面活 性剂以及抑制依那西普的不稳定性，聚集和/或片段化的稳定剂的稳定的含水药物组合 物，其中，所述稳定剂包括选自丝氨酸、脯氨酸和谷氨酸盐的化合物。在优选的实施方式中， 稳定剂包括谷氨酸盐。
[0064] 不打算束缚于本发明的任何特定的理论，据认为，丝氨酸、脯氨酸和谷氨酸盐充当 稳定剂以减少依那西普以不希望的三元或四元复合物的方式相结合的倾向，并因此减少依 那西普的聚集。据认为，聚集的减少持续很长一段时间，例如两年或超过两年。据认为，丝 氨酸、脯氨酸和谷氨酸盐能稳定包含依那西普的含水药物组合物，因为它们被从该蛋白质 的表面排除，从而导致净构象稳定。丝氨酸、脯氨酸和/或谷氨酸盐的稳定化作用包括但不 限于有利于减少含有依那西普单体的制剂中的依那西普单体的聚集。
[0065] 本发明的药物组合物可以通过组合纯化的依那西普和所述的稳定剂来制备。另 外，根据需要可以添加缓冲液、张力调节剂和额外的赋形剂以及其他常用的非活性成分。为 简单起见，在后面的说明书中更充分地讨论这些。本领域的普通技术人员应该理解可以以 任何适当的顺序组合待纳入组合物的各种组分。例如，可以首先、中间或最后添加缓冲剂， 并且也可以首先、中间或最后添加张力调节剂。本领域的普通技术人员也应该理解一些这 些化学物质在某些组合中可能不相容，因此相应地，很容易用具有类似性质但在相关的混 合物中相容的不同化学物质代替。
[0066] 在优选的实施方式中