一种新型富硒载药微球的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及载药微球技术领域，具体地，涉及一种新型富砸载药微球的制备方法。
【背景技术】
[0002]砸作为一种重要的微量元素，于1817年被瑞典化学家Berzelius发现，以后长达一个多世纪的时间里人们一直认为所有含砸化合物都是有毒物质直到1957年美国营养学家Schwarz和Foltz发现砸可以预防鼠肝坏死和鸡渗出性素质后才提出砸是机体不可缺少的微量元素。20世纪70年代以来砸的生物学功能及其在动物生产中的应用受到人们的普遍关注通过广泛深入的研宄取得了明显成效。砸参与辅酶A、辅酶Q的合成对蛋白质的合成、糖代谢、生物氧化等都有影响。体内砸一般与蛋白质结合存在，例如:砸重要生理作用是参与谷胱甘肽过氧化物酶GSH- PX的组成部分。近来研宄发现砸是谷胱甘肽过氧化物酶砸酶家族活性部位的辅基，该类酶具有清除过氧化物防止细胞损伤延缓细胞衰老的作用。砸缺乏症的临床表现主要为骨骼肌变性、坏死、肝营养不良及心、肝纤维变性等。缺砸饲养的小鼠血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px)活性明显降低脂质过氧化物(LPO)含量升高。因此砸的药理学、生理学和生物化学性质引起了人们的兴趣。
[0003]动物补砸制剂中，常用的砸源有无机砸化合物主要有亚砸酸盐、砸酸盐，有机砸有父系酵母、砸代蛋氨酸，以及纳米砸等新型补砸制剂。大量研宄表明，相对于亚砸酸盐、砸代蛋氨酸、甲基砸代半胱氨酸等砸产品，纳米砸更好的吸收率，低毒性，特有的活性高、生物利用率高和显著提高动物的免疫力等优点。其次，与无机砸相比，有机砸具有显著的高效低毒等优点，所以富砸酵母也是目前机体最有效的补砸源之一。目前，国内仍然使用亚砸酸钠作为商业补砸制剂添加到动物饲料中，欧美国家多采用砸代蛋氨酸作为商业补砸制剂。瑞典要求乳猪料中必须使用有机砸；日本已规定饲料中禁止使用无机砸。砸代蛋氨酸和富砸酵母曾被认为是理想的补砸制剂；然而研宄结果表明，砸代蛋氨酸能够代替蛋氨酸非特异性的融入蛋白质中，砸代蛋氨酸有在组织中积累至毒性水平的危险。目前已有人和畜禽由于过量摄入含砸代蛋氨酸的食物发生砸中毒现象的相关报道。因此，确定有机砸的添加方式等一些列问题有待解决。但有机砸的成本过高，如酵母砸通常为亚砸酸盐的几倍甚至几十倍，因此要考虑到成本等经济问题。目前普遍推荐的无机砸源是亚砸酸钡，主要因为其在动物体内有较长的滞留期，亚砸酸钠为119天，亚砸酸钡能达到140天以上，且毒性相对亚砸酸钠较低，但亚砸酸钡不溶于水，须做成油状悬浮液，如俄罗斯的油乳混悬亚砸酸钡制剂，杰波林和英国的亚砸酸钡乳剂在实验中都能达到较长时间的高血砸水平。随着制剂新工艺的发展与缓释缓控技术的应用，通过微球特殊的释放模式来降低无机砸毒性，从而降低给药量减轻机体负担。
[0004]聚乳酸(polylactic acid or polylactide，P LA)是以速生资源玉米为主要原料，经发酵制得乳酸，再以乳酸为主要原料聚合得到的聚合物。聚乳酸具有良好的热塑性和热固性，同时具有生物相容性和可生物降解性，在人体内最终代谢为水和二氧化碳，是美国食品药品管理局(FDA)已批准可用于人体的生物降解材料。因此采用以聚乳酸及其共聚物为代表的生物可降解聚合物为骨架材料，包裹多肽、蛋白质药物制成缓释微球制剂，成为制剂研宄的热点。且目前欧美日等发达国家在聚乳酸微球的制备方法、外观形态、释放机理等方面已做了大量研宄。国内也出现一批医学上应用的聚乳酸微球，如伊维菌素聚乳酸微球、利福平聚乳酸微球和明教聚乳酸微球等。
[0005]然而，缓释微球在兽药领域的应用并不多，以及在补砸制剂中未见富砸缓释微球的相关研宄报道。传统砸制剂多为油乳剂型，通过肌肉注射方式给药时，由于不能有效控制药物的释放速度引起动物机体局部药物浓度过高，而可能产生炎症反应，引发疾病产生。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种新型富砸载药微球的制备方法。所述富砸载药微球是以亚砸酸钡为主药，采用生物可降解材料聚乳酸作为包覆材料，利用乳化溶液挥发法制备成载药微球，其载药量高，且可通过控制工艺条件控制药物的释放速度，从而减少亚砸酸钡使用量，延长药物的作用时间，降低药物的毒副作用，提高药物的疗效。
[0007]本发明的目的通过以下技术方案予以实现。
[0008]一种新型富砸载药微球的制备方法，包括如下步骤:
51.将1~8份亚砸酸钡粉末微粉化，加入10-25份二氯甲烷中，超声分散，超声波功率为100~200W，分散时间为30min ；
52.将4~12份聚乳酸溶于100~300份二氯甲烷中，混合均匀形成溶液；
53.将SI得到的混合物均匀分散于S2所述溶液中，混合均匀形成乳液；
54.将1~100份聚乙烯醇溶于1000~5000份水中，再加入20~100份NaCl，加热混合均匀形成聚乙烯醇溶液；
55.再将S3形成的乳液加入到S4所述聚乙烯醇溶液中，混合均匀形成S/0/W型乳液；
56.搅拌S5得到的乳液使二氯甲烷挥发，固化成球，再经离心、洗涤、干燥，得到所述富砸载药微球；
其中，亚砸酸钡为主药；所述聚乳酸分子量为100000 ;
所述亚砸酸钡、二氯甲烷、聚乳酸PLA、聚乙烯醇PVA、NaCl和水的份数均为重量份数。
[0009]由于亚砸酸钡几乎不溶于水，现有技术主要是油乳注射液，且剂量较大，而亚砸酸钡具有一定毒性，会对机体造成一系列不良影响，不利于在补砸制剂中应用。本发明通过亚砸酸钡的超声分散预处理，很好的解决亚砸酸钡在溶剂中分散难的问题，亚砸酸钡的溶解性决定分散处理方法，通过大量试验证明使用水溶剂溶解分散效果不佳，为了达到与PLA同步分散效果选用二氯甲烷作为两者的共用溶剂，采用超声分散方式避免在分散过程中二氯甲烷挥发造成的伤害；在聚乙烯醇溶液中加入一定量的NaCl，改变分散体系的渗透压有利于微球迅速形成且表面孔洞较少；并且合理优化制备载药微球的各组分含量，采用S/0/W的包被工艺，S/0/W难点在于所包被物质在溶剂中的分散度及物质颗粒，需微粉化均匀分散后容易形成微球，利用乳化溶液挥发法制备成富砸载药微球，其载药量高，且可通过控制工艺条件控制药物的释放速度，从而减少亚砸酸钡使用量，延长药物的作用时间，降低药物的毒副作用，提高药物的疗效。
[0010]优选地，制备得到的富砸载药微球的平均粒径为3.52-20.34 μ mo
[0011]优选地，制备得到的富砸载药微球的载药量为17.5-25.3%。
[0012]S2、S3、S4、S5所述混合可以采用超声波分散或者机械搅拌分散。
[0013]采用超声波分散时，优选地，S3所述混合采用超声波分散，超声波功率为100W，分散时间为l~3h。优选地，S2、S5所述混合采用超声波分散，超声波功率为100W，分散时间为I?3h0
[0014]采用机械搅拌分散时，优选地，S3所述混合采用机械搅拌，转速为5000~15000r.mirT1，搅拌时间为30s~lmin。优选地，S2所述混合采用机械搅拌，转速为300~500r.HiirT1，搅拌时间为20~40min。优选地，S5所述混合采用机械搅拌，转速为300~500r.min \揽拌时间为6~20h。
[0015]优选地，S6所述洗涤所用的洗涤液为去离子水或/和盐酸，共洗涤3~5次。
[0016]优选地，S6所述洗涤为分别用去离子水洗涤2~3次，用5%盐酸洗涤1~2次。
[0017]优选地，S6所述干燥为常温真空干燥，干燥后将制备得到的载药微球于4°C避光保存。
[0018]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:
(I)本发明所述富砸载药微球以亚砸酸钡为主药，通过亚砸酸钡的超声分散预处理，超声分散通常使用超声探针，本方法采用密闭超声，将所超声分散物质加入密闭容器中进行超声，此法能有效避免超声分散时物质及溶剂挥发造成的不必要伤害；在聚乙烯醇溶液中加入一定量的NaCl，通过改善水相渗透压促进微球形成，减少由于二氯甲烷挥发造成的微球表面孔洞，有利于微球达到更好的缓释效果；并且通过合理优化制备载药微球的各组分含量，采用S/0/W的包被工艺，利用乳化溶液挥发法制备成载药微球，其载药量高，且可通过控制工艺条件控制药物的释放速度，从而减少亚砸酸钡使用量，延长药物的作用时间，降低药物的毒副作用，提高药物的疗效。
[0019](2)本发明制备方法工艺流程简单，制备得到的富砸载药微球的平均粒径为
3.52-20.34 μ m，载药量为17.5-25.3%，载药量大且重复性好。
[0020](3)本发明采用的主药为无机砸亚砸酸钡，成本低廉，毒性较低，且在体内滞留时间长，因此制备成载药微球推广到兽药领域，会有良好的社会效益和经济利益前景。
[0021](4)本发明采用的包裹材料为工业注塑级聚乳酸PLA，原料价格便宜，且制备不需专门昂贵的设备，工艺流程简单，载药微球具有良好的生物相容性。
【附图说明】
[0022]图1为实施例1亚砸酸钡载药微球SEM图。
[0023]图2为实施例2亚砸酸钡载药微球SEM图。
[0024]图3为实施例2亚砸酸钡载药微球体外释放曲线。
[0025]图4为实施例3亚砸酸钡载药微球SEM图。
[0026]图5为实施例3亚砸酸钡载药微球体外释放曲线。
[0027]图6为对比例I亚砸酸钡载药微球SEM图。
[0028]图7为对比例2亚砸酸钡载药微球SEM图。
[0029]图8为对比例3亚砸酸钡载药微球SEM图。
[0030]图9为对比例4亚砸酸钡载药微球SEM图。
[0031]图10为对比例4亚砸酸钡载药微球体外释放曲线。
【具体实施方式】
[0032]下面结合说明书附图和具体实施例来进一步详细阐述本发明。但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
[0033]实施例1
一种新型富砸载药微球的制备方法，包括如下步骤:
51.将Ig亚砸酸钡粉末微粉化，加入2~6mL二氯甲烷中，超声分散，超声波功率为100W，分散时间为30min ；
52.将1.2g聚乳酸PLA溶于20~50mL二氯甲烷中，超声波分散，超声波功率为100W，分散时间为3h，形成溶液；
53.将SI得到的混合物均匀分散于S2所述溶液中，机械搅拌，转速为15000r搅拌30s，形成乳液；
54.将0.6g聚乙烯醇溶于100~300mL水中，再加入1.5~5gNaCl，加热混合均匀形成聚乙烯醇溶液；
55.再将S3形成的乳液加入到S4所述聚乙烯醇溶液中，机械搅拌，转速为15000r.mirT1，搅拌6h，形成S/0/W型乳液；
56.搅拌S5得到的乳液使二氯甲烷挥发，固化成球，再经SOOOrpm离心，去离子水洗涤3次、再用5%盐酸洗涤2次，常温真空干燥，得到所述富砸载药微球，于4°C避光保存；
其中，亚砸酸钡为主药；