一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物及其制备方法和应用
【专利说明】一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物及 其制备方法和应用
[0001]
技术领域
[0002] 本发明涉及兽用药领域，具体涉及一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗 体复合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0003] 聚合物材料的研制和开发是各国学者多年来致力开展的热门课题。离子辐照会导 致材料微观结构和宏观性能发生变化，因而被用于改造聚合物材料的研宄工作中。早期主 要使用低电离辐射的粒子（如γ射线、电子等）作辐照源。研宄发现，辐照在聚合物中产 生的效应主要有分子键的断裂和交联、气体分子的释放以及新化学键形成等，分子键的断 裂和交联改变材料的分子量及其分布，从而影响材料的宏观性能。一般来说，分子链的 交联使分子量增加，导致生物材料的可溶性降低，吸收度降低。低电离辐射引发的这些 现象已得到很好的研宄，并有相当广泛的商业应用。重离子在物质中主要以使靶原子的电 子电离和激发的方式损失能量，和低电离辐射粒子不同的是，重离子具有很高的电子阻 止本领（线性能量转移值LET )。这就使得重离子辐照引起电荷转移及能量沉积，从而当 离子穿越介质时，沿其路径就会留下一个连续的柱状电离区域，故就产生交联并且可形成 稳定的复合体，而又不会造成生物的活性损失，这种效应为研宄生物医药中的复合体通过 一种手段。
[0004] 金丝桃素（Hypericin)为藤黄科金丝桃属植物贯叶连翘（Hypericum perforatum L .)的主要活性成分物质，其结构属萘骈二蒽酮类化合物。金丝桃素在体内、体外均有逆转 病毒的作用，具有极强的抗病毒、抗菌、抗炎作用，能激活单核吞噬细胞，增强家禽机体免疫 力。
[0005] 自中国农业科学院兰州畜牧与兽药研宄所通过对金丝桃素进行提取、化学合成与 在兽医临床上的应用进行了研宄，使产品在畜禽疾病应用越来越广泛。通过体内外临床试 验，对大肠杆菌引起的仔猪黄痢、白痢和鸡白痢的治愈率达到95%以上。靶向制剂亦称靶向 给药系统（targeting drug system , TDS ortargeted drug delivery system , TDDS), 是一类能使药物浓集定位于病变组织、器官、细胞或细胞内结构的新型给药系统。靶向治疗 可使治疗部位的药物浓度明显提高，可减少用药量并使治疗费用降低，减少药物对全身 的毒副作用。靶向制剂目前主要应用于人类治疗癌症药物中，在兽医临床尚未见有关报 道。发明人将中药有效成分金丝桃素与抗体及乙二醇，通过重离子辐照进行交联结合，构 建"生物导弹"，对病原菌实施"精确打击"的研宄，本发明的结果表明，低剂量的碳离子辐 照可引起生物分子的交联，并对其结构与活性不受影响，利用重离子交联技术为生物分子 交联提供了新的途径。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种金丝桃素白蛋白纳米 粒-大肠杆菌血清抗体复合物及其制备方法和应用。
[0007] 为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大 肠杆菌血清抗体复合物，是通过以下步骤制备得到的： 1) 将金丝桃素白蛋白纳米粒和兔抗大肠杆菌混合，得到混合液； 2) 将步骤1)得到的混合液加入至乙二醇中，得到乙二醇混液； 3) 将步骤2)得到的乙二醇混液以碳离子进行辐照，辐照后于-2° C -5° C放置2h，得 到辐照后混合液； 4) 将步骤3)得到的辐照后混合液进行低温离心，弃除上清液后，将沉淀冷冻干燥后即 可得到金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物。
[0008] 进一步的，上述的一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物，所述 步骤1)中，金丝桃素白蛋白纳米粒和兔抗大肠杆菌是按照（800-1600)mg :(4-10) yg进行 混合的。
[0009] 进一步的，上述的一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物，所述 步骤2)中，乙二醇的使用量为金丝桃素白蛋白纳米粒：乙二醇为（800-1600)mg :(12-30) g°
[0010] 进一步的，上述的一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物，所述 步骤3)中，碳离子福照剂量为3-10Gy。
[0011] 进一步的，上述的一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物，所述 步骤4)中，低温离心温度为-2〇 C -5° C，离心转速为16500r/min，沉淀冷冻温度为-2-0°C。
[0012] 进一步的，上述的一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物，所述 步骤1)中，金丝桃素白蛋白纳米粒和兔抗大肠杆菌是按照1600mg :4 μ g进行混合的；所述 步骤2)中，乙二醇的使用量为金丝桃素白蛋白纳米粒：乙二醇为1600mg :12g ;所述步骤3) 中，碳离子辐照剂量为5Gy，放置温度为0° C ;所述步骤4)中，低温离心温度为0° C，离心转 速为16500r/min，沉淀冷冻温度为-1°C。
[0013] 本发明的第二个目的是提供了一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体 复合物的制备方法，包括以下步骤： 1) 将金丝桃素白蛋白纳米粒和兔抗大肠杆菌混合，得到混合液； 2) 将步骤1)得到的混合液加入至乙二醇中，得到乙二醇混液； 3) 将步骤2)得到的乙二醇混液以碳离子进行辐照，辐照后于-2° C -5° C放置2h，得 到辐照后混合液； 4) 将步骤3)得到的辐照后混合液进行低温离心，弃除上清液后，将沉淀冷冻干燥后即 可得到金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物。
[0014] 进一步的，上述的一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物的制 备方法，所述步骤1)中，金丝桃素白蛋白纳米粒和兔抗大肠杆菌是按照（800-1600) mg : (4-10) μ g进行混合的；所述步骤2)中，乙二醇的使用量为金丝桃素白蛋白纳米粒：乙二醇 为（800-1600) mg : (12-30) g ;所述步骤3)中，碳离子福照剂量为3-10Gy ;所述步骤4)中， 低温离心温度为_2°C _5°C，离心转速为16500r/min，沉淀冷冻温度为-2-0°C。
[0015] 进一步的，上述的一种金丝桃素白蛋白纳米粒-大肠杆菌血清抗体复合物的制备 方法，所述步骤1)中，金丝桃素白蛋白纳米粒和兔抗大肠杆菌是按照1600mg :4 μ g进行混 合的；所述步骤2)中，乙二醇的使用量为金丝桃素白蛋白纳米粒：乙二醇为1600mg :12g ; 所述步骤3)中，碳离子辐照剂量为5Gy，放置温度为