一种低分子量肝素缓释制剂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，涉及一种低分子量肝素缓释制剂及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]我国已经步入人口老龄化社会，老年人口数量逐渐增多。在老年人群体中，血栓类疾病是最为常见的疾病之一，发病率高，患者群广，血栓形成的后遗症严重影响病人的工作能力，甚至致残。
[0003]在抗血栓类治疗药物中，肝素类药物因其源自生命体内的生物成分，具有治疗效果好、生物相容性、安全等优点而备受关注。在肝素类药物中，低分子肝素(LMWH)具有抗凝血、抗血栓、调血脂等作用，临床上主要用于治疗和防治深部静脉血栓、肺栓塞、播散性血管内凝血等疾病，已广泛用于心血管疾病防治领域。LMWH是由普通未分级肝素(UFH)经化学或酶解聚的方法得到的低分子量(Mw)的肝素片段，或经分级法得到的低Mw的肝素组分，其Mw范围一般为3000?8000Da，平均Mw为5000Da左右。
[0004]与UHl相比，LMWH具有皮下注射吸收好，半衰期长，生物利用度高，与血浆、血小板亲和力小等优点。但LMWH存在体内半衰期短及其溶液剂静脉注射时大出血副作用较为严重的不足，且需要频繁给药，大大降低了药物的治疗功效、用药的安全性以及患者的顺应性，因此研宄其缓释注射剂具有重要的临床意义。
[0005]CN101024086 A公开了壳聚糖及其衍生物与低分子量肝素形成的复合物及制剂与制备方法，该发明利用壳聚糖及其衍生物与低分子量肝素形成的纳米/微米复合物作为载体来增加细胞对低分子肝素的摄取，利用壳聚糖及其衍生物的生物黏附性和短暂打开细胞间的紧密连接的特性进一步增加低分子肝素透过生物膜的量，通过复合物的形成提高低分子肝素的稳定性，从而提高用药的生物利用度。但壳聚糖只有在强酸性条件下溶解、生理条件下溶解度低，同时壳聚糖具有较高的毒性和较差生物相容性，这些缺陷严重限制其在生物体内的应用。另外，壳聚糖及其衍生物与低分子量肝素形成的复合物及制剂未采用交联手段将纳米颗粒固化，颗粒在生理介质的干预下，容易导致低分子量肝素快速大量释放，容易影响制剂的体内稳定性和治疗效率。
[0006]因此，在本领域，期望得到一种能够缓慢释放LMWH，有效延长LMWH的体内半衰期，降低LMWH使用时大出血的风险，避免血药浓度“峰谷”波动较大，使释药平稳，降低药物的毒副作用，改善患者的顺应性，提高对疾病的治疗效率的低分子量肝素制剂。
【发明内容】
[0007]针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种低分子量肝素缓释制剂及其制备方法和应用。
[0008]为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案:
[0009]一方面，本发明提供了一种低分子量肝素制剂，所述低分子量肝素缓释制剂包含由多肽和低分子量肝素形成的纳米颗粒，所述多肽之间通过化学键进行交联。
[0010]本发明的低分子量肝素缓释制剂包含多肽和低分子量肝素，二者通过静电作用形成纳米颗粒，基于多肽分子之间的交联使低分子量肝素具有缓释功效，有效延长其血液半衰期，避免药物“峰谷波动”，有效平稳释药，降低其溶液剂大剂量使用时大出血的风险，降低药物的毒副作用，改善患者的顺应性，提高对疾病的治疗效率。
[0011]现报道的肝素制剂均未采用交联手段，形成的纳米颗粒仅基于静电力的相互作用，稳定性差，在生理介质(如磷酸盐缓冲液)的干预下容易导致肝素的突释，无法有效保证用药安全。本发明使用的多肽由生物体内的氨基酸构成，具有生物可降解、生物相容性好，生理条件下溶解度高等优势，其安全性更好。同时本发明通过化学键如共价键、离子键、氢键等共同作用将多肽交联，通过多肽的缓慢降解达到缓慢释放肝素的效果，降低肝素的副作用，降低LMWH使用时大出血的风险，减少了给药频率，改善患者的顺应性，制剂的体内稳定性更优，保证临床的用药安全及提高了对疾病的治疗效率。
[0012]在本发明所述的低分子量肝素缓释制剂中，所述多肽与低分子量肝素的质量比为 1:100 ?100:1，例如 1:100、1:90、1:80、1:70、1:60、1:50、1:40、1:30、1:20、1:15、1:10、1:5、1:3、1:1、2:1、5:1、8:1、10:1、15:1、18:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、60:1、70:1、80:1、90:1 或 100: 1，优选 1:20 ?1:100，进一步优选 1:20 ?1:50，在所选的优选比例下，颗粒的粒径更加均匀，更容易控制在10nm以下，而且电位更加可控，工艺的重现性好。
[0013]在本发明所述的低分子量肝素缓释制剂中，所述多肽的分子量为500?50000Da，例如 500Da、lOOODa、1500Da、2000Da、2500Da、3000Da、4000Da、6000Da、8000Da、lOOOODa、15000Da、20000Da、25000Da、30000Da、35000Da、40000Da、45000Da 或 50000Da，优选 1000 ?30000Dao
[0014]优选地，所述多肽为由精氨酸、组氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、丙氨酸或亮氨酸中的任意一种或至少两种形成的多肽。
[0015]优选地，所述化学键为二硫键、离子键或氢键中的任意一种或至少两种。
[0016]在本发明所述的低分子量肝素缓释制剂中，所述低分子量肝素的分子量< 8000Da,例如 7500Da、7000Da、6500Da、6000Da、5500Da、5000Da、4500Da、4000Da、3500Da或 3000Da，优选 3000 ?7000Da。
[0017]优选地，所述低分子量肝素为肝素钠、达肝素钠、那曲肝素钙、磺达肝素钠或依诺肝素钠中的任意一种或至少两种的组合。
[0018]在本发明所述的低分子量肝素缓释制剂中，所述纳米颗粒的平均粒径为50?200nm，例如 50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、llOnm、120nm、130nm、140nm、150nm、160nm、170nm、180nm、190nm 或 200nm，优选 60 ?150nm。
[0019]在本发明所述的低分子量肝素缓释制剂中，所述纳米颗粒的表面电位为-20?20mV，例如-20mV、_18mV、-15mV、_13mV、_10mV、_8mV、-5mV、0mV、5mV、8mV、10mV、13mV、15mV、18mV、20mV，优选-20 ?_5mV。
[0020]在本发明所述的低分子量肝素缓释制剂中，所述低分子量肝素缓释制剂为冻干粉针剂、无菌粉针剂或纳米溶液剂中的任意一种。
[0021]另一方面，本发明提供了如第一方面所述的低分子量肝素缓释制剂的制备方法，所述制备方法采用自组装技术、冷冻干燥技术、均质技术、乳化技术、包埋技术或喷雾干燥技术中的任意一种或至少两种的组合，优选自组装技术、均质技术和冷冻干燥技术的组合。
[0022]自主装技术可有效调控颗粒的粒径大小，具有颗粒粒径可控、工艺稳定、易于生产的优势；通过均质技术可更进一步的有效控制制剂的粒径分布，排除大颗粒对制剂安全性的影响；通过冷冻干燥技术，有效降低药物和辅料的降解速率(如水解和氧化等)，提高制剂的长期稳定性。通过以上多重技术的控制，期待得到粒径均匀、稳定性好、疗效确切的缓释纳米制剂。
[0023]作为优选技术方案，本发明所述的低分子量肝素缓释制剂的制备方法包括以下步骤:
[0024](I)将多肽加入葡萄糖溶液中，形成多肽溶液，而后加入Traut’ s试剂，搅拌反应制得巯基化多肽；
[0025](2)向巯基化多肽中加入葡萄糖