一种稠李叶总黄酮的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种稠李叶总黄酮的制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 自由基是人体生命活动中多种生化反应的中间代谢产物。细胞在正常的代谢过程 中，或者受到高能辐射，以及高压氧、药物、香烟烟雾和光化学空气污染等作用，都会产生自 由基。
[0003] 研宄表明，自由基从产生到衰亡的过程就是电子转移的过程。在生命体系中，电 子的转移是一种最基本的运动，而氧的得电子能力很强，因此，生物体内许多化学反应都与 氧有关。研宄发现损害人体健康的自由基几乎都与那些活性较强的含氧物质有关，与这些 物质相结合的自由基叫做活性氧自由基。活性氧自由基对人体的损害实际上是一种氧化过 程。因此，要降低自由基的损害，就要从抗氧化做起。
[0004] 稠李为蔷薇科李属植物，叶片中含有丰富的黄酮类化合物，据现代医学研宄证明， 黄酮类化合物分子中含有多电子的羟基部分，使其具有良好的抗氧化性能，是一种天然抗 氧化剂，具有清除人体中超氧离子自由基、抗衰老和增加机体免疫力的生理活性作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于寻求新型高效的天然抗氧化剂的开发利用，提供了一种稠李叶 总黄酮的制备方法及其应用。
[0006] 本发明是通过如下技术方案完成的，具体内容包括：稠李叶总黄酮的制备方法以 及其在制备具有抗氧化作用的药物中的应用。
[0007] 1.一种稠李叶总黄酮的制备方法，包括以下步骤： a. 原料处理：将稠李叶阴干、粉碎，过40目筛； b. 超声波提取：将原料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料重量3~5倍的 50~70%的乙醇溶液，设置超声温度为60~70°C，时间为60~90min，过滤，滤渣重复提取1~2 次，合并滤液； c. 纯化：将步骤b中所得的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:4~6的大孔吸附树脂 柱，先用2~3倍柱体积的蒸馏水洗脱，后用4~6倍柱体积的60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱 液； d. 洗脱液浓缩，干燥，即得稠李叶总黄酮。
[0008] 步骤c中所述的大孔吸附树脂的类型为AB-8、D-101、XDA-I等。
[0009]2.稠李叶总黄酮在制备具有抗氧化作用的药物中的应用 本发明获得的稠李叶总黄酮，通过对其抗脂质过氧化能力、清除超氧阴离子自由基 (_〇2)2能力和清除DPPH自由基能力等指标的研宄表明：稠李叶总黄酮具有很强的抗脂质过 氧化能力，同时还可以有效清除超氧阴离子自由基和DPPH自由基。因此，稠李叶总黄酮是 开发新型高效的天然抗氧化剂的一个好选择。
[0010] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
[0011]
【具体实施方式】： 实施例1: 将稠李叶阴干、粉碎，过40目筛；将原料置于频率为40KHZ的超声装置中，加入原料重 量3倍的50%的乙醇溶液，设置超声温度为60°C，时间为60min，过滤，滤渣重复提取1次， 合并滤液；将所得的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:4的AB-8大孔吸附树脂柱，先用2 倍柱体积的蒸馏水洗脱，后用4倍柱体积的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液浓缩，干 燥，即得稠李叶总黄酮，以芦丁为对照品，经UV检测，其含量为71. 2%。
[0012] 实施例2: 将稠李叶阴干、粉碎，过40目筛；将原料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料重 量4倍的70%的乙醇溶液，设置超声温度为65°C，时间为60min，过滤，滤渣重复提取2次， 合并滤液；将所得的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:6的D-101大孔吸附树脂柱，先用 2倍柱体积的蒸馏水洗脱，后用5倍柱体积的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液浓缩，干 燥，即得稠李叶总黄酮，以芦丁为对照品，经UV检测，其含量为77. 5%。
[0013] 实施例3: 将稠李叶阴干、粉碎，过40目筛；将原料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料重 量5倍的60%的乙醇溶液，设置超声温度为70°C，时间为80min，过滤，滤渣重复提取2次， 合并滤液；将所得的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:5的XDA-I大孔吸附树脂柱，先用 3倍柱体积的蒸馏水洗脱，后用6倍柱体积的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液浓缩，干 燥，即得稠李叶总黄酮，以芦丁为对照品，经UV检测，其含量为83. 4%。
[0014] 具体药效学研宄实验： 将Ig上述3个实施例中所得的稠李叶总黄酮，分别用30%的乙醇将其溶解定容在50mL容量瓶中，记为A、B、C，备用。
[0015]a?抗脂质过氧化能力的测定 分别于样品管中依次加入ImLlOmg/mL卵磷脂溶液（LLS)UmL0. 4mmol/L硫酸亚铁、ImL上述A、B、C三个样品，混勾，避光于37°C水浴60min，加入2mL三氯乙酸（TCA)-硫代巴 比妥酸（TBA)-HCl混合液，90°C~100°C水浴15min，迅速冷却，以3000r/min离心lOmin，取 上清液在535nm测吸光度（As)，参比管中以ImL蒸馏水代替ImL卵磷脂。抗坏血酸（VC)为 阳性对照。结果见表1。
[0016] 抑制率=[Ac-As/Ac]X100% 式中：Ac为对照品（以蒸馏水代替样品）的吸光度； As为加入A、B、C三个样品时的吸光度。
稠李叶总黄酮对Fe2+引发的卵磷脂脂质体过氧化有明显的抑制作用，抑制率随样品中 总黄酮含量的增加而增大。由表1可以看出，稠李叶总黄酮抗脂质过氧化能力明显优于抗 坏血酸。
[0018] b?清除超氧阴离子自由基ro2)2能力的测定 采用邻苯三酚自氧化法，取50mmol/LTris-HCl缓冲溶液（pH=8. 2)4. 5mL，置于25°C水 浴中预热20min，分别加入ImL样品和0. 4mL25mmol/L邻苯三酷溶液，混勾后于25°C水浴 中反应5min后，加入8mol/LHCl0.8mL终止反应。自氧化管以ImL蒸馏水代替样品管中 样品，操作方法同样品管，在325nm处测定吸光值，以等体积pH值8. 2的Tris-HCl缓冲液 为空白。结果见表2: 超氧阴离子的清除率KAQ-Ai/AjX100% 式中：Atl为自氧化管的吸光度； A1为样品管的吸光度。
稠李叶总黄酮对清除超氧阴离子自由基有较好的清除效果，清除率随样品中总黄酮含 量的增加而增大。由表2可以看出，稠李叶总黄酮对超氧阴离子自由基的清除率尤为显著， 明显强于Vc(在浓度为lmg/mL时，清除率为68. 89%)。
[0020]C.稠李叶总黄酮对DPPH自由基的清除作用 在试管中分别加入2.OOmL各浓度的稠李叶总黄酮溶液，编号为A、B、C，加入 2.OOmLO. 2mml/LDPPH乙醇溶液，摇匀，放置30min，以2.OOmL无水乙醇代替样品和 2. 00mL70%乙醇混合后作为参比，测定517nm波长处的吸光度（AiX空白对照组以2.OOmL 无水乙醇代替样品，测定517nm波长处的吸光度（Atl),同时测定2.OOmL待测液与2.OOmL无 水乙醇在517nm波长处的吸光度（A」）。以Vc为对照品。结果见表3 : DPPH自由基清除率按一下公式计算： 清除率=[A。一（Ai-Aj)]/AciXKKF0 式中：Aci-不加黄酮的吸光值，Ai-测定液的吸光值，Af黄酮的本底吸光值。
从表3中可以看出，随着含量的增加，稠李叶总黄酮清除DPPH自由基的能力随着浓度 的增大而增大，有明显的剂量依赖性，实验结果说明稠李叶总黄酮是良好的质子供体，具有 显著的抗氧化作用。
【主权项】
1. 一种稠李叶总黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： a. 原料处理：将稠李叶阴干、粉碎，过40目筛； b. 超声波提取：将原料置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料重量3~5倍的 50~70%的乙醇溶液，设置超声温度为60~70°C，时间为60~90min，过滤，滤渣重复提取1~2 次，合并滤液； c. 纯化：将步骤b中所得的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:4~6的大孔吸附树脂 柱，先用2~3倍柱体积的蒸馏水洗脱，后用4~6倍柱体积的60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱 液； d. 洗脱液浓缩，干燥，即得稠李叶总黄酮。2. 根据权利要求1所述的一种稠李叶总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤c中所述的 大孔吸附树脂的类型为AB-8、D-101、XDA-I等。3. 根据权利要求1~2所述的稠李叶总黄酮在制备抗氧化药物中的应用。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，具体涉及一种稠李叶总黄酮的制备方法及其应用。其制备方法包括如下步骤：a.将稠李叶阴干、粉碎，过40目筛；b.超声波提取；c.大孔吸附树脂柱纯化，乙醇洗脱，收集洗脱液；d.浓缩，干燥，即得稠李叶总黄酮。经药效学评价，该提取物具有良好的抗氧化作用，可将其用于制备抗氧化的药品中，具有疗效显著、价格低廉、使用方便等优点，是开发新型高效的天然抗氧化剂的一个好选择。
【IPC分类】A61P39/06, A61K36/736
【公开号】CN104906218
【申请号】CN201510270111
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月26日