一种厚朴酚的制备方法及其抗肿瘤应用
【专利摘要】本发明涉及一种厚朴酚的制备方法及其抗肿瘤应用。其制备方法包括以下步骤：（1）取干燥的药材厚朴，粉碎，过20目筛；（2）超声波提取；（3）大孔吸附树脂富集；（4）高速逆流色谱仪分离。本发明具有操作简单、得率高、污染少、耗能小等优点，适合高纯度厚朴酚的生产。经药效学评价，所得厚朴酚具有明显的抗肿瘤效果，为开发应用新一代天然来源的抗肿瘤药物开拓了新径。
【专利说明】
一种厚朴酚的制备方法及其抗肿瘤应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种厚朴酚的制备方法及其抗肿瘤应用。
【背景技术】
[0002] 厚朴，为木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥树皮、枝皮后根皮，是我国重要的传统 中药。其性温，味苦辛，入脾、胃、肺、大肠经，具有燥湿消痰、下气除满的功能，主治湿滞伤 中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。
[0003] 厚朴的主要有效成分之一为厚朴酚。厚朴酚为棕褐色至白色精细粉末，气香，味辛 辣，微苦。单体为无色针状结晶，厚朴酚具有明显的、持久的中枢性肌肉松弛、中枢神经抑制 作用，抗炎、抗菌、抗病原微生物、抗溃疡、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。其中，在抗菌作用方 面，厚朴酚对革兰氏阳性菌、耐酸性菌、丝状真菌有显著的抗菌活性，对变形链球菌有更加 显著的抗菌作用，对葡萄球菌的抑制作用最强。临床上主要用作消除胸腹满闷、镇静中枢神 经、运动员肌肉松弛、抗真菌、抗溃疡等药。
[0004] 通过文献检索，国内尚未见厚朴酚用于制备抗肿瘤药物的报道并不多见。
【发明内容】
[0005] 为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，本发明提供了一种厚朴酚的制 备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。
[0006] 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案： (1) 原料预处理:取干燥的药材厚朴，粉碎，过20目筛； (2) 超声提取:将原料粉末置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料3~5倍的60~70%的 乙醇溶液，于60~70°C提取2~3h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压浓缩，得浓 缩液； (3) 大孔树脂富集:将所得浓缩液加入大孔吸附树脂柱，先用2~3BV的蒸馏水洗脱除杂， 再以4~6BV的60~70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得厚朴酚粗提物。
[0007] (4)将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统， 取上相做固定相、下相为流动相，主机转速800-1000rpm，流速为2-3mL/min，收集目标流分， 回收试剂，真空干燥得产品。
[0008] 步骤(3)中所述的大孔吸附树脂类型为D-101、AB-8、HPD300中的任意一种。
[0009] 步骤(4)中所述的氯仿-甲醇-水体积比为8:13: 9。
[0010] 本发明制得的厚朴酚在抗肿瘤药物中的应用。
[0011] 厚朴酚采用MTT法（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)进行抗肿瘤活性测试。
[0012] 试验用细胞株： HeLa:人子宫颈癌细胞株;HT-1080:人纤维肉瘤细胞株；B16-BL6:黑色素瘤细胞株。 [0013]方法：（1)〇.25%胰酶消化对数生长期细胞，10%_3的1^0 1640调细胞浓度50000 个/ml。96孔板100ul/孔。设溶剂对照，每组3平行孔。37°C，5%C〇2、95%空气的培养箱中预培 养24h，弃上清。
[0014] (2)加药物5个10倍稀释的浓度(溶剂为有二甲亚砜和水），为10 -4 mol/L。
[0015] (3)细胞连续培养48h，每孔加入10μ1 5mg/ml的MTT溶液（以无血清培养基配制）， 继续培养4h。
[0016] (4)吸去上清。加入200μ1 DMS0,轻轻振荡以使甲臜完全溶解。570nm处用酶标仪测 定0D值。
[0017] (5)计算抑制率(％)=(对照0D-药物0D)/对照0D*100% 实验结果:厚朴酚的抑制率以相对于对照(添加 DMS0)的结果如下表1。
[0018] 表1厚朴酚的肿瘤细胞增值抑制率％
由表1的结果可知，厚朴酚具有良好的抑制肿瘤细胞生长的活性，且作用呈浓度依赖 性，其可在制备抗肿瘤药物中得到应用。
[0019] 本发明所述厚朴酚在制备抗肿瘤药物时，可按照常规的制剂方法以厚朴酚为药物 活性成分，添加适宜的药物载体，制成各种药物剂型，如片剂、胶囊、滴丸、注射剂、缓控释剂 等等。
[0020] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
[0021]
【具体实施方式】： 实施例1: 取干燥的药材厚朴，粉碎，过20目筛;将原料粉末置于频率为40KHz的超声装置中，加入 原料3倍的60%的乙醇溶液，于60°C提取2h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压 浓缩，得浓缩液;将所得浓缩液加入D-101大孔吸附树脂柱，先用2BV的蒸馏水洗脱除杂，再 以4BV的60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得厚朴酚粗提物。取氯仿-甲醇-水 按8:13:9体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将 粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相栗入色谱柱中，再以2mL/min流 速栗入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为800r/min，收集目标流分，浓缩，干燥得 产品，经高效液相色谱检测，其纯度为95.6%。
[0022] 实施例2: 取干燥的药材厚朴，粉碎，过20目筛;将原料粉末置于频率为40KHz的超声装置中，加入 原料4倍的65%的乙醇溶液，于70°C提取3h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压 浓缩，得浓缩液;将所得浓缩液加入AB-8大孔吸附树脂柱，先用3BV的蒸馏水洗脱除杂，再以 5BV的65%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得厚朴酚粗提物。取氯仿-甲醇-水按 8:13:9体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将粗 品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相栗入色谱柱中，再以2mL/min流速 栗入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为l〇〇〇r/min，收集目标流分，浓缩，干燥得 产品，经高效液相色谱检测，其纯度为98.3%。
[0023] 实施例3: 取干燥的药材厚朴，粉碎，过20目筛;将原料粉末置于频率为40KHz的超声装置中，加入 原料5倍的70%的乙醇溶液，于65°C提取3h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压 浓缩，得浓缩液;将所得浓缩液加入HPD300大孔吸附树脂柱，先用3BV的蒸馏水洗脱除杂，再 以6BV的70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得厚朴酚粗提物。取氯仿-甲醇-水 按8:13:9体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将 粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相栗入色谱柱中，再以3mL/min流 速栗入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为900r/min，收集目标流分，浓缩，干燥得 产品，经高效液相色谱检测，其纯度为97.5%。
[0024] 实施例4: 本发明药物颗粒剂 将厚朴酚加入乙醇作黏合剂，加入淀粉作填充剂，制成颗粒。
[0025] 实施例5: 本发明药物片剂 将厚朴酚，加入淀粉、糊精、硬脂酸镁等，混合制成湿粒，压片，每片含厚朴酚200mg。
【主权项】
1. 一种厚朴酚的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 原料预处理:取干燥的药材厚朴，粉碎，过20目筛； (2) 超声提取:将原料粉末置于频率为40KHz的超声装置中，加入原料3~5倍的60~70%的 乙醇溶液，于60~70°C提取2~3h，趁热抽滤，滤渣反复提取2次，合并提取液，减压浓缩，得浓 缩液； (3) 大孔树脂富集:将所得浓缩液加入大孔吸附树脂柱，先用2~3BV的蒸馏水洗脱除杂， 再以4~6BV的60~70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得厚朴酚粗提物； (4) 将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，取上 相做固定相、下相为流动相，主机转速800-1 OOOrpm，流速为2-3mL/min，收集目标流分，回收 试剂，真空干燥得产品。2. 根据权利要求1所述的一种厚朴酚的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的大孔 吸附树脂类型为D-101、AB-8、HPD300中的任意一种。3. 根据权利要求1所述的一种厚朴酚的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的氯仿-甲醇-水体积比为8:13:9。4. 根据权利要求1所述方法制得的厚朴酚在制备具有抗肿瘤作用的药物中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK106045821SQ201610307141
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司