@MIL-101。
[0039]实施例3 PEG@MIL-101 以及 AuNPs@PEG@MIL_101 的制备
[0040]将20mg MIL-101 (实施例1中制备得到)溶解在2mL 5mg/mL PEG- 二胺(分子量为2000)水溶液中，37°C搅拌3h。离心，蒸馏水洗涤3遍，干燥得到PEG麵IL-101。
[0041 ] 将0.5mg/mL的AuNPs (实施例1中制备得到)水溶液加入到5mg/mL的PEGiMIL-101水溶液中，其中AuNPs和PEG麵IL-101的质量比为3:1，并搅拌lh，离心，蒸馏水洗涤 3 遍，干燥得到 AuNPs@PEG@MIL-101。
[0042]实施例4 PEG@MIL-101与AuNPs@PEG@MIL_101对A β 40多肽聚集及其形态的影响
[0043]A β 4(|多肽聚集成纤维的程度通过ThT染料检测，在JASCO FP6500荧光分光光度计上检测ThT的荧光强度，ThT的激发波长为440nm，发射波长为490nm。实验重复三次并计算标准偏差。Αβ4(ι溶液(30 μ Μ)同 10、15、20 及 25yg/mL PEG@MIL_101 与 AuNPsOPEGOMIL-101 (实施例1制备得到)在37°C中孵育O到5天。实验结果如图2A所示，随着PEGOMIL-101浓度的增加，ThT的荧光随之下降，Aβ4(ι多肽聚集迟滞期也随之延长，说明PEGOMIL-101是一个有效的Αβ4(ι多肽聚集的抑制剂而且可以在聚集的早期就开始抑制多肽的聚集。当浓度达到20 μ g/mL及25 μ g/mL时，两组ThT的荧光值基本一致，说明20 μ g/mLPEG@MIL-101对30μM A β 4(|多肽聚集已到达完全抑制。AuNPs@PEG@MIL_101对A β 4(|多肽聚集的抑制作用也是随着浓度的增加而增加，相同浓度的情况下，AuNPsOPEG麵IL-101对多肽聚集的抑制作用优于PEG@MIL-101 (图2B)，说明AuNPs促进PEG@MIL_101对多肽聚集的抑制作用。同样，AuNPsiPEGiMIL-1Ol在20 μ g/mL完全抑制A β 4(|多肽聚集。因此，PEGiMIL-101 以及AuNPs(gPEG麵IL-101可以作为Aβ聚集抑制剂，用于治疗阿尔兹海默症。
[0044]为了进一步检测纳米粒子是否对已聚集的Αβ4(ι纤维有破坏作用，首先将Αβ 4(|多肽孵育3天后形成A β 4(|纤维，随后加入20 μ g/mL的纳米粒子并孵育5天并检测ThT荧光的变化。实验结果如图2C所示，PEG麵IL-101对聚集的A β 4(|纤维结构有一定的破坏，在第5天ThT荧光下降到78%，而AuNPs促进PEG麵IL-101对聚集的A β 4(|纤维有显著的破坏作用，第5天ThT荧光只有原来的13%。
[0045]实施例5 PEG@MIL-101 与 AuNPs@PEG@MIL_101 对 A β 4(|多肽毒性的影响
[0046]PEG@MIL-101 与 AuNPs@PEG@MIL_101 对 A β 4(|多肽毒性的影响通过 MTT 及 AO-EB 染色实验检测。
[0047]MTT法:将PC12细胞接种到96孔板上，每孔5 X 13个细胞，培养24h等细胞贴壁。为了检测聚集的Αβ 4(|纤维的毒性，Αβ 4(|多肽或已聚集的Αβ 4(|纤维(30μΜ)同20yg/mLPEG麵IL-101与AuNPsOPEG^IL-lOl (实施例1制备得到)在细胞培养基中孵育3天。随后细胞在这些孵育溶液中继续培养72h。为了检测PEG@MIL-101与AuNPs@PEG@MIL-101 (实施例I制备得到)的毒性，贴壁的PC12细胞(5 X 13/孔)同相应浓度多孔金属有机骨架一起培养48h。在培养结束的前4h加入10 μ L/孔MTT溶液。4h后吸弃培养液，加入100 μ LDMS0，振荡15min。酶标仪测定OD值，吸收峰为450nm。按以下公式计算细胞的存活率:
[0048]细胞存活率(％ )=(加药孔平均OD值/对照组平均OD值)X 100 %。
[0049]MTT结果如图3A所示，Αβ4(ι纤维显著减少PC12细胞的活力，细胞活力< 60%，而加入PEG@MIL-101与AuNPs@PEG@MIL-101后，细胞活力分别增加至91及97%。Αβ 4(|纤维加入PEG@MIL-101与AuNPs@PEG@MIL-101后，细胞活力分别为63 %及89 %。图3B显示，PEG@MIL-101与AuNPs@PEG@MIL-101对PC12细胞的活力没有影响，无毒性。
[0050]AO-EB染色:PC12细胞按3 X 14/孔的密度接种于六孔板上，培养24h等细胞贴壁。Αβ4(ι 多肽或已聚集的 Αβ 4Q 纤维(30μΜ)同 20yg/mL PEG@MIL_101 与 AuNPs@PEG@MIL-101 (实施例1制备得到)在细胞培养基中孵育3天。随后细胞在这些孵育溶液中继续培养72h。培养结束后，吸弃培养基，PBS洗涤3次，加入200 μ L Α0/ΕΒ染液(5 μ L/mL)，37°C避光孵育3-5min，PBS洗涤3次，荧光显微镜下观察并拍照。
[0051]AO-EB实验结果同MTT结果一致(图3C)，加入A β 4(|纤维后，死亡细胞数量增加(发橙色荧光)，Αβ 4(|单体或Αβ 4(|纤维加入AuNPsOPEG^IL-lOl后活细胞数量恢复到正常水平，说明PEG@MIL-101与AuNPs@PEG@MIL-101均可减少A β 4(|多肽的神经毒性，AuNPsiPEG麵IL-101对已聚集A β 4(|纤维的神经毒性的抑制作用强于PEG麵IL-101。
[0052]实施例4 PEG麵IL-1OI负载药物在体外释放
[0053]本实施例研宄了 AuNPs@PEG@MIL-101及PEG@MIL_101 (实施例1制备得到)作为药物载体时对药物的释放，我们选用罗丹明B为被负载药物。如图4所示，MIL-101负载的罗丹明B随着时间延长而逐渐释放，并未出现纳米微胶囊负载药物时所出现的药物在短时间内(5min左右)的突然释放，说明MIL-101所负载的药物主要是从MIL-101上的孔中释放和/或药物-基质相互作用的扩散，而不是由MIL-101降解所导致的药物释放。因此，MIL-101可以作为一个稳定的载体。经PEG修饰MIL-101后的PEG麵IL-101，罗丹明B释放的时间延长，表明PEG对MIL-101所负载的罗丹明B的释放有缓释作用，这可避免所负载的药物在血液循环中的提前释放。然而在AuNPs(gPEG麵IL-101中，罗丹明B的释放非常缓慢，1h后的释放量不到30%，这可能是由于修饰在MIL-101表面的AuNPs无法释放从而阻碍了介孔里的药物释放。
【主权项】
1.一种金属有机框架负载药物，其特征在于，在MIL-1Ol表面包覆PEG修饰剂而成，得PEG@MIL-101。2.根据权利要求1所述的金属有机框架负载药物，其特征在于，MIL-1Ol上还负载有AuNPs，得 AuNPs@PEG@MIL-101。3.根据权利要求1所述的金属有机框架负载药物，其特征在于，所述的PEG修饰剂为PEG-二胺。4.权利要求1所述的金属有机框架负载药物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤:将MIL-101加入到PEG- 二胺溶液中，搅拌、离心、洗涤、干燥后即得PEG麵IL-101。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的MIL-101和PEG-二胺的质量比为2?5:1 ;PEG-NH2溶液中PEG- 二胺的浓度为5?10mg/mL ;所述的搅拌是在30?40°C下搅拌I?4h。6.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包含如下步骤:将AuNPs溶液加入到PEGOMIL-1Ol溶液中并搅拌I?3h，离心、洗涤、干燥得到AuNPs@PEG@MIL-101。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，AuNPs和PEG麵IL-1Ol的质量比为3 ?8:1 ；AuNPs 溶液中 AuNPs 的浓度为 0.5 ?1.5mg/mL，PEG@MIL_101 溶液中 PEG@MIL_101的浓度是5?15mg/mL。8.权利要求1?4任一项所述的金属有机框架负载药物PEG麵IL-101或AuNPs@PEG@MIL-101在制备治疗阿尔兹海默症的药物中的应用。9.权利要求1?4任一项所述的金属有机框架负载药物PEG麵IL-101或AuNPs@PEG@MIL-101作为Αβ聚集抑制剂的应用。10.权利要求1?4任一项所述的金属有机框架负载药物PEG麵IL-101或AuNPs@PEG@MIL-101作为药物载体的应用。
【专利摘要】本发明涉及金属有机材料制备领域，具体公开了一种金属有机框架负载药物及其制备方法和应用。所述金属有机框架负载药物，是在MIL-101表面包覆PEG修饰剂而成，得PEGMIL-101，还可进一步负载AuNPs，得AuNPsPEGMIL-101。所述的PEGMIL-101对Aβ多肽聚集有很好的抑制作用；尤其是负载AuNPs合成AuNPsPEGMIL-101后，其对Aβ多肽聚集的抑制作用及破坏纤维结构的能力显著增强。
【IPC分类】A61K33/24, A61K47/34, A61P25/28, A61K33/00, A61K47/02
【公开号】CN104922673
【申请号】CN201510279930
【发明人】刘杰, 杨丽聪, 尹田田, 周艳晖
【申请人】暨南大学
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年5月27日...