一种化合物在制备抑制肿瘤侵袭转移药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种抗肿瘤的物质：如式（I )所示的（3S，6S)-3,6-二丁基哌 嗪-2, 5-二酮化合物在制备抑制肿瘤侵袭转移药物中应用，尤其是在抗胃癌或乳腺癌中的 应用。
(二）
【背景技术】
[0003]肿瘤的侵袭性与转移能力是恶性肿瘤的重要生物学特征，也是导致患者肿瘤复 发、病情恶化而最终死亡的病理基础。大多数癌症患者是死于肿瘤转移引起的多器官继发 性癌症，而非死于原发性癌症。在过去的20年间，以手术、化疗和放疗等为主的结合治疗显 著的降低了癌症的死亡率，仍然解决不了向内脏器官及骨骼的远端转移，细胞迀移和侵袭 成为癌症治疗的一大瓶颈。
[0004]目前，抗肿瘤药物主要针对癌细胞增殖过程，通过抑制DNA复制、细胞信号转导以 及血管生成等过程抑制癌细胞增殖。然而这种细胞毒类药物大多具有较强的细胞毒性，在 抑制癌细胞增殖的同时，也对正常细胞具有很强的杀伤作用，且不能有效抑制肿瘤细胞转 移。
[0005]临床上目前仍缺少高效低毒的抗肿瘤药物，其中抑制肿瘤转移的更少。
[0006] 因此寻找针对肿瘤细胞侵袭迀移，且具有较低细胞毒性的抗肿瘤药物对癌症治疗 具有十分重要的意义。 (三）
【发明内容】
[0007] 本发明目的是提供一种化合物，（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮在制备抑制 肿瘤侵袭转移药物中的应用。
[0008] 本发明采用的技术方案是：
[0009] 一种如式（I)所示的（3S, 6S)-3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮化合物。
[0010] 上述应用中，所述肿瘤为胃癌或乳腺癌。
[0011] 上述应用中，所述肿瘤具体为人胃癌细胞株HGC-27或人乳腺癌细胞株 MDA-MB-435。
[0012] 上述应用中，所述（35,65)-3,6-二丁基哌嗪-2,5-二酮的浓度为1臟〇1/1~ 1ymol/L，处理时间为24~48小时。
[0013] 本发明的有益效果主要体现在：（1) (3S，6S)-3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮能够抑 制人肿瘤细胞株的侵袭和转移；（2) (3S，6S)-3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮对肿瘤细胞的抑 制作用有较好的选择性，对正常细胞安全、无毒；特别是对胃癌或乳腺癌，如对胃癌细胞株 HGC-27或人乳腺癌细胞株MDA-MB-435抑制作用较为明显。（3) (3S，6S)-3, 6-二丁基哌 嗪-2, 5-二酮可能成为一种新型癌症治疗药物。 (四）【附图说明】
[0014] 图1为实施例1中制备化合物的1H-NMR谱图。
[0015] 图2为实施例2中不同剂量的（3S，6S)-3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮对胃癌细胞 HGC-27和胃正常细胞GES-1增殖能力的影响的结果图。图2A为实施例2中MTS法检测 (3S，6S)-3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮对人胃癌细胞HGC-27增殖能力影响的结果图；图2B 为实施例2中MTS法检测（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮对人胃正常细胞GES-1影 响的结果图。
[0016] 图3为实施例3中不同剂量的（3S，6S) - 3, 6 -二丁基哌嗪-2, 5 -二酮对乳腺癌 细胞MDA-MB- 435及乳腺正常细胞MCF- 10A增殖能力的影响的结果图。图3A为实施例 3中MTS法检测（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮对人乳腺癌细胞MDA-MB-435增殖能 力影响的结果图；图3B为实施例3中MTS法检测（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮对 人乳腺正常细胞MCF-10A增殖能力影响的结果图。
[0017] 图4和5分别为实施例4和5中Transwell细胞迀移实验检测人胃癌细胞HGC-27 和人乳腺癌细胞MDA-MB-435经不同剂量的（3S，6S)-3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮处理后对 细胞迀移性影响的结果图。图6为实施例6中细胞划痕实验检测的人胃癌细胞HGC- 27经 不同剂量的（3S，6S)-3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮处理后对细胞迀移性影响的结果。图6A 为（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮处理24h对人胃癌细胞HGC-27迀移性影响的结果 图；图6B为实施例6中细胞划痕实验检测显示（3S，6S)-3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮处理 48h对人胃癌细胞HGC-27迀移性影响的结果图。
[0018] 图7为实施例7中细胞划痕实验检测的人乳腺癌细胞MDA-MB-435 (3S，6S)-3, 6-二 丁基哌嗪-2, 5-二酮处理24h和48h的结果图。图7A为（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二 酮处理24h对人胃癌细胞HGC-27迀移性影响的结果图；图7B为实施例7中细胞划痕实验 检测显示（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮处理48h对人胃癌细胞HGC-27迀移性影响 的结果图。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此：
[0020]实施例 1 :制备（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮
[0021]
[0022] a.将50mg的L-正亮氨酸溶解于5ml的二氯甲烷溶液得到白色悬浮溶液，在冰浴 下滴加乙酰氯和三乙胺制得反应液。
[0023]b.将步骤a中反应液在室温下反应2h，用冰水淬灭，制得反应初产物。
[0024]c.将反应步骤b中反应初产物用饱和的乙酸乙酯萃取，将有机相依次用水，饱和 碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，浓缩至原体积的1/5,制得反应初产物浓缩液。
[0025]d.将步骤c中反应初产物浓缩液在高效液相色谱中用等度25%的甲醇，流速 10ml/min进行制备，冷冻干燥制得反应终产物，即为所述化合物。
[0026] 利用1H-NMR确认终产物的化学结构式，其图谱如图1所示。结构单元中C-l、C-2、 C-3对应H的化学位移值分别为0. 90、1. 33、1. 33ppm，积分值分别为3H、2H、2H，C-4对应H 额化学位移值为L68和1. 86ppm，积分值为1H和1H，C-5对应H的化学位移值为4. 45ppm， 积分值为1H，N-6对应H的化学位移值为6. 65ppm，积分值为1H。
[0027] 实施例2 :MTS法检测（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮对胃癌细胞HGC-27及 胃正常细胞GES-1增殖能力的影响
[0028] 使用的细胞株有：人胃癌细胞株HGC-27,购自中科院上海细胞库；人胃正常细胞 株GES-1，购自上海拜力生物科技有限公司。
[0029] 将对数生长期的胃癌细胞HGC-27以0. 25 %胰酶消化，细胞计数，用MEM-EBSS 培养基稀释单细胞悬液至所需细胞浓度5X104/ml，每孔100y1，接种于96孔细胞板中， 37°C，5%C02培养过夜；每孔加入无血清MEM-EBSS培养基稀释的样品100y1，终浓度分别 为lmmol/L、100、50、10和1ymol/L，同时设空白对照组、溶剂对照组和调零孔，每组设6个 复孔，37°C，5% 0)2继续培养，分别于24h、48h、72h后，小心去除培养基，每孔加入无血清 MEM-EBSS培养基 80y1 和MTS溶液 20y1，37°C，5%C02培养 2h，振荡lOmin,酶标仪 490nm 检测各孔吸光度0D值，实验重复3次。分别计算（3S，6S) -3, 6-二丁基哌嗪-2, 5-二酮对 HGC-27细胞的24h、48h和72h增殖抑制率。增殖抑制率计算方法为（1-实验组平均0D值 /对照组平均0D值）X100% ;胃正常细胞GES-1培养条件为RPMI-1640培养基，37°C，5% C02，实验方法同HGC-27细胞。
[0030] 实验结果见图2。结果显示，分别以lmmol/L、100、50、10和