一种融合多肽及其在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种融合多肽及其在制备抗肿瘤药物中的应用，属于生物医药技术领 域。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是危害人类健康的头号杀手。恶性肿瘤细胞的快速生长和向周围组织器官的 侵润及远处转移是肿瘤导致病人死亡的主要原因。抑癌基因所编码的蛋白具有抑制肿瘤生 长和抑制肿瘤侵袭转移的功能，成为抗肿瘤药物的候选药物。多肽药物由于分子小、易合 成、构效关系研宄较容易、易被改造以及针对性强和疗效明显等优势，得到了广泛的关注。 近年来，随着生物技术及多肽合成技术的不断改进，多肽药物的纯度高、毒副作用低、几乎 没有免疫原性且合成成本较低，产业化开发优势明显，故多肽药物的适应症广泛且疗效显 著，有广泛的应用市场。目前，世界范围内已有超过60多种多肽药物被批准上市，另外有 大量的多肽药物已进入或是完成临床研宄。多肽药物市场发展迅速，年增长率达20%，为 制药企业带来了丰厚利润，这预示着未来治疗类多肽药物的市场供求会有巨大的提升。
[0003] TIPE2 (tumor necrosis factor-a induced protein 8 like 2)是作为免疫 负调控分子首先在小鼠中被发现的，属于TIPE家族（Sun, H. et al.TIPE2, a negative regulator of innate and adaptive immunity that maintains immune homeostasis. Cell 133, 415-426, doi : 10. 1016/j. cell. 2008. 03. 026 (2008))。然而，我们在研宄发 现人TIPE2的表达谱与小鼠的TIPE2不同，人TIPE2除表达于免疫细胞外，也表达于肝 细胞等非免疫细胞并且人TIPE2在肝细胞肝癌中表达下调或缺失（Zhang，Let al. The unique expression profile of human TIPE2suggests new functions beyond its role in immune regulation. Molecular immunology 48, 1209-1215, doi:10.1016/ j. molimm. 2011. 03. 001 (2011))。临床资料分析发现TIPE2在人肝癌组织中表达降低或缺 失，并与肝细胞肝癌的转移密切相关；体内外实验证明TIPE2在体内外能明显抑制肝细胞 肝癌的生长和侵袭转移；从机制上，我们发现TIPE2可选择性结合并抑制Racl通路抑制 细胞骨架的聚合、MMP9、uPA和VEGF的表达，进而抑制肝癌细胞的迀移，侵袭和血管形成能 力，即TIPE2通过抑制Racl通路发挥抗肿瘤作用（Cao，X.et al. Human tumor necrosis factor(TNF)-alpha-induced protein 8-like 2 suppresses hepatocellular carcinoma metastasis through inhibiting RacL Molecular cancer 12, 149,doi:10. 1186/1476-45 98-12-149(2013))〇
[0004] TIPE2的抗肿瘤作用不仅限于肝癌，在肺癌、胆管癌和中也发挥同样的抗肿瘤 效应。由于TIPE2主要是通过抑制Racl活性发挥抗肿瘤作用，而越来越多的证据表明， 多种人类肿瘤中Racl表达升高或者活性增强，除肝癌、肺癌和胆管癌以外，尚包括胃癌 (ffu, Y. J. et al.Expression and significance of RacI,Pakland Rocklin gastric carcinoma. Asia-Pacific journal of clinical oncology 10,e33_39,doi:10. 1111/ ajco. 12052 (2014))、结肠癌（Jiang, Q.H., Wang, A. X.& Chen, Y. Radixin enhances colon cancer cell invasion by increasing MMP_7production via Racl-ERK pathway. TheScientificWorldJournal 2014, 340271，doi:10. 1155/2014/340271 (2014))、胰 腺癌(Yan, Y. et al.Inhibition of RACl GTPase sensitizes pancreatic cancer cells to gamma-irradiation. Oncotarget 5, 10251-10270(2014))、乳腺癌（Goka，E. T. &Lippman, Μ. E. Loss of the E3 ubiquitin ligase HACEl results in enhanced Racl signaling contributing to breast cancer progression. Oncogene, doi:10. 1038/ one. 2014. 468 (2015))及淋巴瘤（Zhang，B.，Zhang，Y.& Shacter，E. Raclinhibits apoptosis in human lymphoma cells by stimulating Bad phosphorylation on Ser-75.Molecular and cellular biology 24,6205-6214，doi:10.1128/ mcb. 24. 14. 6205-6214. 2004(2004))等，故预示着TIPE2也可以在这些肿瘤中发挥抗肿瘤 效应。
【发明内容】
[0005] 针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种融合多肽，其能选择性结合并抑制 细胞内Racl活性，从而具有抗肿瘤的活性。
[0006] 本发明的另一目的是提供该融合多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
[0008] -种融合多肽，是由多肽I和多肽II构成的融合多肽，其中，多肽I的序列如SEQ ID NO. 1所示，其作用为：跨膜传递；多肽II为选自TIPE2(tumor necrosis factor-a induced protein 8 like 2) N 末端（TNP)(序列如 SEQ ID NO. 9 所;^rO 的长度为 10 ~30 个氨基酸的序列，其作用为：在细胞内可选择性结合并抑制细胞内Racl活性。
[0009] SEQ ID NO. 1 ：
[0010] 三字符缩写：Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg ;
[0011] 单字符缩写：grrrrrrrrr。
[0012] 优选的，所述多肽II的序列选自如SEQ ID NO. 2~11所示的序列之一。
[0013] SEQ ID NO. 2 ：
[0014] 三字符缩写：Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0015] 单字符缩写：kkl I Skmagrcj
[0016] SEQ ID NO. 3 ：
[0017] 三字符缩写：Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0018] 单字符缩写：ekkl Iskmagrcj
[0019] SEQ ID NO. 4 ：
[0020] 三字符缩写：Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0021] 单字符缩写：aekkl lskmagr D
[0022] SEQ ID NO. 5 ：
[0023] 三字符缩写：Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0024] 单字符缩写：qaekkl I skmagr D
[0025] SEQ ID NO. 6 ：
[0026] 三字符缩写：Ieu-Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0027] 单字符缩写：lqaekkl Iskmagr。
[0028] SEQ ID NO. 7 ：
[0029] 三字符缩写：Ala-Ieu-Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-A rg ；
[0030] 单字符缩写：alqaekkl Iskmagr。
[0031] SEQ ID NO. 8 ：
[0032] 三字符缩写：Leu-Ala-Ieu-Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gl y-Arg ；
[0033] 单字符缩写：lalqaekkllsk magr。
[0034] SEQ ID NO. 9 ：
[0035] 三字符缩写：Met-Glu-Ser-Phe-Ser-Ser-Lys-Ser-Leu-Ala-Leu-Gln-Ala-Glu-Ly s-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg-Ser-Val-Ala-His-Leu-Phe ；
[0036] 单字符缩写：mesfsskslalqaekkllskmagrsvahlf。
[0037] SEQ ID NO. 10 ：
[0038] 三字符缩写：Met-Glu-Ser-Phe-Ser-Ser-Lys-Ser-Leu-Ala-Leu-Gln-Ala-Glu-Ly s_Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0039] 单字符缩写：mesfssksla lqaekkllsk magr。
[0040] SEQ ID NO. 11 ：
[0041] 三字符缩写：Leu-Ala-Leu-Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gl y-Arg-Ser-Val-Ala-His-Leu-Phe ；
[0042] 单字符缩写：lalqaekkllsk magrsvahlf。
[0043] 进一步优选的，所述多肽II的序列选自如SEQ ID NO. 2~11所示的序列之一。
[0044] 更优选的，所述多肽II的序列选自如SEQ ID NO. 2~8所示的序列之一。
[0045] 进一步地，所述多肽I和多肽II直接相互偶联。
[0046] 进一步地，所述多肽II具有线性或环状的结构。
[0047] 所述融合多肽，制备时，常规方法通过多肽合成仪自动合成即可。
[0048] 本发明还提供了上述融合多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0049] 所述肿瘤为包括原发的或转移的肺癌、肝癌、胆管癌等。
[0050] 本发明还提供了一种包含上述融合多肽的药物组合物，该药物组合物除含有上述 融合多肽外，还进一步地包括药学上可接受的载体、赋形剂或佐剂。
[0051] 上述融合多肽、药物组合物在制备用于治疗肿瘤疾病的药物中的应用。上述融合 多肽注射到肿瘤局部或通过系统给药到达肿瘤部位后，可发挥抗肿瘤