一种多肽在制备治疗或预防类风湿性关节炎药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种多肽及其衍生物在制备治疗和/或预防类风湿性关节炎的药物 中的应用。
【背景技术】
[0002] 类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA)是一种以慢性侵蚀性关节炎为特征的 全身性自身免疫病。类风湿关节炎的病变特点为滑膜炎，以及由此造成的关节软骨和骨质 破坏，最终导致关节畸形。如果不经过正规治疗，约75%的患者在3年内出现残废。类风湿 关节炎分布于世界各地，在不同人群中的患病率为〇. 18%~1. 07%，其发病具有一定的种族 差异，印地安人高于白种人，白种人高于亚洲黄种人。在我国的总患病人数逾500万。类风 湿关节炎在各年龄中皆可发病，高峰年龄在30~50岁左右，一般女性发病多于男性。类风 湿关节炎的发病原因尚不明确，一般认为与遗传、环境、感染等因素密切相关。
[0003] 类风湿关节炎的主要病理改变为滑膜炎，表现为滑膜增生和炎性细胞浸润。类风 湿关节炎的滑膜改变可分为炎症期、血管翳形成期和纤维化期。血管翳形成是类风湿关节 炎滑膜的重要病理特征，在类风湿关节炎软骨和骨破坏过程中发挥重要作用。关节外表现 的主要病理基础为血管炎。类风湿结节是其特征性表现，结节中心为类纤维素样坏死组织， 周围有"栅状"排列的组织细胞，成纤维细胞及巨噬细胞等。
[0004] 在类风湿关节炎疾病中，炎症由免疫系统细胞因子和响应这些因子的T细胞介 导。目前的药物治疗主要采用：1)非留体类抗炎药（NSAID)通过抑制环氧合酶（COX)活性， 减少前列腺素合成而具有抗炎、止痛、退热及减轻关节肿胀；2)免疫抑制剂改善病情抗风湿 药（DMARDs)，如甲氨蝶呤等；3)生物制剂如肿瘤坏死因子（TNF) - a拮抗剂、白细胞介素 (IL) -1和IL-6拮抗剂、抗CD20单抗以及T细胞共刺激信号抑制剂，该类药物是目前积极有 效控制炎症的主要药物，减少骨破坏，减少激素的用量和骨质疏松，是开发治疗类风湿关节 炎疾病药物的热点领域。
[0005]自噬是生物进化过程中产生的一种细胞蛋白和细胞器的循环利用机制，参与多种 疾病如神经退行性疾病、癌症及心脏疾病等的病理过程。自噬过程广泛存在于正常的生理 过程中，作为细胞对不良环境的一种防御机制，参与内质网应激引起的异常蛋白和受损细 胞器的降解、炎症和氧自由基的清除以维持正常细胞稳态；但是自噬过度往往会导致胞内 重要组分被降解，细胞发生死亡，因此自噬也被认为是另一种形式的程序性细胞死亡。无论 是自噬过度还是自噬不足都可能导致疾病发生。最近研究表明自噬在类风湿性关节炎关节 损伤过程中发挥着重要作用，如在炎症过程中出现的一些前炎性细胞因子包括白介素-1、 白介素-6,白介素-23以及TLR配体等促进自噬的发生。同时自噬也控制炎性细胞因子的 释放，调控着与自身免疫性疾病有牵连的细胞。自噬可能是新的抗炎疗法作用靶标。
[0006] TRB3 (Tribbles Homologue3)是Tribbles同源蛋白家族成员之一，最早在果蝇中 被鉴定到，并发现该蛋白能抑制有丝分裂，调节发育过程中细胞的增殖、迁移及形态形成。 在哺乳动物中，有三种Tribbles同源蛋白：TRB1，TRB2和TRB3,它们都是假激酶蛋白家族 成员。这三种蛋白都含有Ser/Thr蛋白激酶样结构域（Kinaselikedomain,KD)，但却缺乏ATP的结合位点和催化残基，因此没有激酶活性。尽管如此，Tribbles蛋白却具有接头蛋 白样的功能，参与多种蛋白复合体的组装。在哺乳动物Tribbles家族成员中，TRB3的研究 最为深入，其相互作用蛋白包括转录因子、泛素连接酶、细胞膜上II型BMP受体以及MAPK、 PI3K信号通路成员。通过与这些蛋白相互作用，TRB3参与了糖脂代谢、脂肪细胞分化、凋 亡、应激和胶原表达等的调控。
[0007] 近来研究证据表明，TRB3在关节炎的发生发展过程中都具有重要的调节作用，在 正常的人软骨细胞可以检测到TRB3信使RNA。TRB3蛋白水平低，在正常软骨细胞中TRB3 低表达而在关节炎的软骨中高表达。过表达TRB3可以抑制Akt磷酸化，减少软骨细胞的生 存和蛋白多糖的合成。Tang等人发现终末糖基化产物（AGEs)激活TRB3/MAPK信号通路介 导的I型和III型胶原表达。Cravero等人发现TRB3可以抑制Akt活性，TRB3高表达将促 进细胞死亡以及减少软骨细胞对胰岛素样生长因子I (IGF-I)的反应。因此，研究和开发 TRB3蛋白的抑制剂，或者阻断其与P62蛋白结合的物质，将为类风湿性关节炎的临床治疗 提供有效且崭新的手段。
【发明内容】
[0008] 本发明所要解决的技术问题是针对目前缺乏能有效利用的TRB3蛋白抑制剂的现 状，而提供一种能特异性结合TRB3的多肽及其在制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药 物中的应用。
[0009] 本发明的发明人在研究的过程中发现，肿瘤细胞内TRB3的过度表达能降低自噬 关键性抑制因子mTOR蛋白水平，并抑制多个自噬相关蛋白，例如II型LC3、Becline-1、 PI3K3C表达增多，进而造成自噬相关货车蛋白P62产生堆积，证明肿瘤细胞内TRB3表达 能诱导自噬受到抑制。P62是反映自噬动态过程的重要指标，作为"货车蛋白"，P62蛋 白结构域中的泛素相关结构域（Ubiquitinassociateddomain，UBA)能与泛素化蛋白 (Ubiquitin，Ub)结合，并把它们募集到自噬体膜上与LC3结合，这个过程主要通过P62蛋 白的LIR(LC3-InteractingRegion，LIR)结构域与LC3结合，介导泛素化蛋白的降解，P62 的表达水平也随之降低。自噬受到抑制时，P62与其结合的泛素化蛋白不能及时降解，在胞 浆内堆积而表达升高。发明人还进一步发现肿瘤细胞内的TRB3主要与P62蛋白发生相互 作用，进而阻断其他泛素化蛋白与P62蛋白的结合，造成自噬通路被抑制，诱导肿瘤细胞的 发生和转移。基于发明人的研究工作，本发明提供下述技术方案。
[0010] 本发明提供的技术方案是：一种可特异性结合TRB3的多肽或所述多肽的衍生物 在制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物中的应用；
[0011] 所述的多肽的氨基酸序列为如SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2和SEQ ID NO :3所示 序列中的任一种；
[0012] 所述多肽的衍生物为所述多肽与细胞穿膜肽接连所形成的嵌合肽。
[0013] 本发明中，所述的如SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2和SEQ ID NO :3所示的氨基酸 序列中，可适当引入氨基酸替换，缺失或添加，只要改变后的氨基酸序列仍然能够形成能与 TRB3特异性结合的多肽且该多肽仍然保持改变前的活性即可。
[0014] 本发明中，所述的细胞穿膜肽为本领域常规所述的细胞穿膜肽，只要其能辅助将 所述多肽送入细胞以发挥作用即可，一般而言，所述的细胞穿膜肽为由10~30个氨基酸组 成的短肽分子。所述的细胞穿膜肽较佳地为P印2多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO :4所示； 即在本发明中，所述的多肽衍生物较佳地为以P印2多肽连接如SEQ ID NO :1、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO :3所示序列中的任一种多肽后所形成的嵌合多肽。所述的细胞穿膜肽还可 以为HIV-I病毒反转录激活因子（Trans-activator transcription, Tat)蛋白的TAT肽 (YGRKKRRQRRR，其氨基酸序列如SEQ ID :5所示)、果蝇触角同源异型蛋白的转录因子Antp 肽（RQIKIWFQNRRMKWKK，其氨基酸序列如 SEQ ID :6 所示）、P印-1 肽（KETffffETffffTEWSQPKKK RKV，其氨基酸序列如 SEQ ID :7 所示)、MPG 肽（GALFLGFLGAAGS TMGAWSQPKSKRKV，其氨基酸 序列如SEQ ID :8所示)和R⑶肽（Ar g-Gly-Asp，其氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示）中的 任一种或多种。所述细胞穿膜肽较佳地连接在所述多肽的N端或者C端，更佳的是N端。
[0015] 本发明所述的多肽及其衍生物可以作为活性成分用于制备预防或治疗类风湿性 关节炎的药物。所述的"活性成分"是指具有预防和/或治疗类风湿性关节炎功能的化合 物，即所述多肽或所述多肽的衍生物用于制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物。在 该药物中，所述多肽或所述多肽的衍生物可以单独作为活性成分，也可以和其他化合物一 起作为活性成分。
[0016] 本发明中，所述的药物可以包含生理学或药学上可接受的载体，所述的载体可以 为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料，较佳地选自壳聚糖及其衍生物、卡波姆 和脂质体中的一种或多种。因此，在本发明中，所述的多肽或所述多肽的衍生物较佳地与所 述药物辅料组成药物组合物。所述的药物组合物可以为本领域常规所述的各种剂型，较佳 地是固体、半固体或液体的形式，可以是水溶液、非水溶液或混悬液，更佳地是片剂、胶囊、 颗粒剂、注射剂或输注剂等。所述药物组合物的给药途径较佳地为注射给药或口服给药，所 述注射给药较佳地包括：静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射途径给药。
[0017] 本发明所述的药物组合物在治疗时的使用剂量根据患者的年龄和病情而定，使用 剂量较佳地为0. 1~15mg/kg，更佳地为5~10mg/kg，最优选为5mg/kg，给药次数较佳地为 一天一次或数次。
[0018] 本发明中，所述的类风湿性关节炎能够引发多种病症，本发明所述的多肽或所述 多肽的衍生物能够针对性地治疗该些病症，所述病症可以为类风湿性关节炎引起的滑膜 炎，滑膜炎主要表现为滑膜增生和炎性细胞浸润，或者可以为类风湿性关节炎引起的足趾 肿胀，或者可以为类风湿性关节炎引起的血管炎，或者可以为类风湿性关节炎引起的纤维 组织增生。
[0019] 在预防或治疗糖尿病性心肌病时，本发明所述的药物组合物可以单独使用或者和 其他药物联合使用。
[0020] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件可任意组合，即得本发明各较佳实 例。
[0021] 本发明所用试剂和原料除特别说明之外，均市售可得。