一种三萜-多肽缀合物、其药物组合物及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及一种三萜-多肽缀合物、其药物组合物及用途。具 体地，本发明涉及式I所示的缀合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药用盐。本发明还涉 及含有上述的式I缀合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药用盐的药物组合物，以及式I 缀合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药用盐在治疗或预防HIV感染所致相关疾病尤其 是获得性免疫缺陷综合征（AIDS，即艾滋病）的用途。
[0002] XArL1 - P - K (L2-XA2)式 I。
【背景技术】
[0003] 艾滋病主要是由于人免疫缺陷病毒I型（HIV-I)感染导致的致死性传染疾病，在 全球范围流行。目前临床上应用的抗HIV-I药物，辅以高效抗逆转录病毒疗法，可以在一定 程度上延长HIV感染者的生存时间和改善其生活质量。但是，由于HIV疫苗研究进展缓慢以 及耐药性问题日益明显，研发新型抗HIV药物仍是当务之急。HIV融合抑制剂（HIV fusion inhibitors)是干扰病毒进入靶细胞的新型抗HIV药物，其在感染的初始环节切断病毒的 传播，这对于预防及控制HIV-I感染具有特殊意义，因而成为新机制抗HIV药物研究的热 点。
[0004] Gp41是介导HIV-I与靶细胞膜融合的特异性蛋白，是融合抑制剂的作用靶标。 Gp41的胞外区存在着两个与膜融合密切相关的螺旋结构功能区，即N末端重复序列（HR1) 和C末端重复序列（HR2)。在膜融合过程中，HR2与HRl相互作用，形成一个六螺旋体核心 结构（6-HB)。T20是衍生于gp41HR2区域的具有36个氨基酸残基的融合抑制多肽，于2003 年经美国FDA批准上市，是目前唯一上市的HIV-I融合抑制剂。T20能竞争性的和HRl构 成的螺旋三聚体结合，占据HR2的作用位点，进而抑制6-HB的形成，使得膜融合过程不能完 成。
[0005] T20的上市开辟了多肽类药物控制HIV-I的新领域。但是，T20本身存在着一些缺 陷和不足。首先是耐药性问题：由于T20完全衍生于天然HR2序列，对靶标突变的抵抗力 低，容易产生耐药性。HRl第36-45位残基（GIVQQQNNLL)是T20结合的主要部位，单个残基 的突变导致T20敏感度下降5-10倍，两个残基突变则会导致敏感度下降100倍。其次，T20 体内稳定性差，易被蛋白酶降解，生物利用度低。再次，T20具有较高的合成成本。因此，在 保证生物活性的前提下如何解决耐药性、提高酶解稳定性以及降低多肽类HIV-I融合抑制 剂的合成成本是新型HIV-I融合抑制剂研究的主要方向。
[0006] 基于上述问题，目前主要的解决策略是避开T20的靶标结合部位，引入不同于T20 的新的功能序列来克服耐药性；同时，加入螺旋形成及稳定因子，提高序列的螺旋性及稳 定性，提高酶解稳定性及抑制活性。如第二代多肽类融合抑制剂T-1249,在其N端增加了 与N-trimer疏水性口袋结合序列（WQEWEQKI )，使其活性比T20提高了 一个数量级；又如 第三代融合抑制剂T-1144,和T20的靶标作用位点完全不同，主要为HRl的疏水性口袋区 (WEAWERAI)。I期临床研究结果表明，T-1144能够显著抑制T20耐药性毒株，同时比T20显 示了更高的活性及更好的药代动力学性质。此外，5HR系列多肽开创了基于靶标gp41HRl螺 旋三聚体的三维晶体结构应用计算机辅助设计完全非天然α螺旋肽的新思路。以5HR为 先导结构，在其N端引入口袋结合区（WMEWDRE)，C端引入脂膜结合区（WASLWNWF)，使得抑 制融合活性得到了显著提高。
[0007] 萜类化合物是指分子式为异戊二烯单位倍数的烃类及其含氧衍生物。萜类化合物 可以单独存在，也可以以苷元的形式存在于皂苷分子当中。萜类化合物广泛存在于自然界 中，具有多种生理活性。近年研究发现，某些萜类化合物具有一定的抗HIV活性。桦木酸 (betulinicacid, BA)属于五环三廠类化合物。1994年Fujioka等首先发现了 BA的抗HIV 活性，可抑制HI V在H9细胞中复制。随后的研究表明，一些BA的类似物，如熊果酸（Ur so I i c acid, UA)和齐墩果酸（Oleanicacid，0A)同样具有抗HIV活性。在桦木酸的3位羟基上引 入一个3, 3-二甲基琥珀酰基团可显著提高其抗HIV活性。实验表明该类化合物是通过结 合于Gag蛋白，干扰其裂解过程，抑制病毒蛋白的组装。在桦木酸的28位羧基上修饰同样 具有较好的抗HIV活性。有实验表明它的这种抗HIV活性是通过抑制膜融合过程的后融合 阶段实现的。
[0008] 萜类化合物可以单独存在，也可以以苷元的形式存在于皂苷分子当中。皂苷是由 苷元和糖两部分组成的，它在自然界的分布极为广泛。苷元主要包括萜类、留体和留体生 物碱等结构；糖链的结构很多，但是糖基组成比较简单。长期以来，皂苷一直是天然有机化 学和药物化学的重要研究对象，但多数研究仅仅局限在苷元上面，而忽略了糖的作用。近年 来，随着分离技术和结构研究方法的进展，皂苷的构效关系得到了进一步的阐明。初步研究 表明，皂苷中的糖链与其生物活性有着密切的关系。另外，许多皂苷化合物都具有广谱的抗 病毒活性，但是活性都较弱。这主要和皂苷与病毒中特异性靶标的结合能力不强有关。
[0009] 目前尚需要新的思路来开发新的HIV融合抑制剂。
【发明内容】
[0010] 本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，将衍生于gp41HR2的肽类药效团与三 萜类药效团缀合，设计全新结构HIV融合抑制剂，探索抑制耐药性，得到了一种化合物(如 式I所示）即三萜-多肽缀合物。本发明人惊奇地发现，本发明的化合物具有良好的抑制 HIV融合活性。由此提供了下述发明：
[0011] 本发明的一个方面涉及式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药用 盐，
[0012] XAfL1_ P-K (L2_XA2)式 I
[0013] 其中，
[0014] XA1和XA2为相互独立的三萜类化合物，并且XA1和XA2至少存在其中一个；
[0015] L1为连接多肽P与XA1间的连接臂，或者L1缺失，并且L1缺失时XA 1也同时缺失；
[0016] P 是氨基酸序列为 NNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL (SEQID NO :1)或者 INNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL (SEQ ID NO :2)的多肽；
[0017] K为赖氨酸，其侧链与L2-XA2连接，或者K缺失，并且K缺失时L2-XA 2也同时缺失；
[0018] L2为连接赖氨酸K与XA2分子间的连接臂；
[0019] L2与L1相同或不同。
[0020] 所述IA1和XA2为相互独立的"表示XA1和XA 2可以相同或不同。
[0021] 所述"XAi和XA2至少存在其中一个"包括如下情况：仅存在XA1，仅存在XA 2，或者 XA1和XA2同时存在。
[0022] 不拘于理论的限制，L1或L2为使得小分子能够保持空间灵活性而与靶标结合的连 接臂。
[0023] 不拘于理论的限制，在多肽P的羧基端引入K的目的是为了引入（L2-XA 2X
[0024] 根据权利要求1本发明任一项所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构 体、或其可药用盐，其中，L 1的一端与多肽P通过酰胺键连接，另一端通过1，2, 3-三氮唑基 团与XA1连接；具体地，所述1，2, 3-三氮唑基团为L1上的叠氮基与XA1上的炔基通过"click 反应"形成；和/或
[0025] L2的一端与赖氨酸K的侧链氨基通过酰胺键连接，另一端通过1，2, 3-三氮唑基团 与XA2连接；具体地，所述1，2, 3-三氮唑基团为L2上的叠氮基与XA2上的炔基通过"click 反应"形成。
[0026] 根据本发明任一项所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药 用盐，其中，所述三萜类化合物为五环三萜类化合物或四环三萜类化合物，优选为五环三萜 类化合物。
[0027] 根据本发明任一项所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药 用盐，其中：
[0028] XA1和XA2独立地选自如下的12个结构式中的任意一个：
[0029]
【主权项】
1. 式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药用盐， XA1-L1_ P-K (L2-XA2)式 I 其中， XA1和XA2为相互独立的三萜类化合物，并且XA1和XA2至少存在其中一个； L1为连接多肽P与XA1间的连接臂，或者L1缺失，并且L1缺失时XA 1也同时缺失； P是氨基酸序列为NNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL(SEQID N0:1)或者 INNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL (SEQ ID NO :2)的多肽； K为赖氨酸，其侧链与L2-XA2连接，或者K缺失，并且K缺失时L2-XA 2也同时缺失； L2为连接赖氨酸K与XA2分子间的连接臂； L2与L1相同或不同。
2. 根据权利要求1所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药用 盐，其中，L1的一端与多肽P通过酰胺键连接，另一端通过1，2, 3-三氮唑基团与XA1连接； 具体地，所述1，2, 3-三氮唑基团为L1上的叠氮基与XA1上的炔基通过"click反应"形成； 和/或 L2的一端与赖氨酸K的侧链氨基通过酰胺键连接，另一端通过1，2, 3-三氮唑基团与 XA2连接；具体地，所述1，2, 3-三氮唑基团为L2上的叠氮基与XA2上的炔基通过"click反 应"形成。
3. 根据权利要求1所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药用 盐，其中： XA1和XA2独立地选自五环三萜类化合物； 具体地， XA1和XA2独立地选自如下的12个结构式中的任意一个：
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构体、 或其可药用盐，其中： L1与L2独立地为叠氮乙酸与天然或非天然氨基酸缩合形成的化合物，或者叠氮乙酸与 一端为氨基，一端为羧基的聚乙二醇缩合形成的化合物。
5. 根据权利要求4所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立体异构体、或其可药用 盐，其中， 所述天然或非天然氨基酸选自： L型或D型的甘氨酸（Gly)，丙氨酸（Ala)，亮氨酸（Leu),异亮氨酸（lie),谷氨酸 (Glu)，谷酰胺（Gln)，天冬氨酸(Asp)，天冬酰胺（Asn)，缬氨酸（Val)，赖氨酸（Lys)，丝 氨酸（Ser)，苏氨酸（Thr)，精氨酸(Arg)，组氨酸（His)，色氨酸（Trp)，苯丙氨酸（Phe)， 酪氨酸（Tyr)，半胱氨酸（Cys)，甲硫氨酸（Met); β _丙氨酸（β Ala); Y-氨基丁酸（GABA); 6-氨基己酸（Aca); 乙二酸，丙二酸，丁二酸，戊二酸，己二酸； 乙二胺，丙二胺，丁二胺，戊二胺，己二胺； 乙二醇，丙二醇，丁二醇，戊二醇，己二醇； Nh2-Ch2Ch2-O-Ch2Ch2-COoh(PEG 1)； NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH 2CH2_C00H (PEG2);和 NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH 2CH2-0-CH2CH2-C00H (PEG3)。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的式I化合物、其衍生物、其立体异构体、或其可 药用盐，其选自如下的化合物： (1) BAc-β Ala-NNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL ； (2) UAc-β Ala-NNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL ； (3) OAc-β Ala-NNYTSLIH